本发明涉及饲用微生态领域，具体涉及一种微生态制剂及其应用。
背景技术：
随着生活水平的提高，人们对畜禽产品的安全需求更高了。但是抗生素，如金霉素大量长期使用和滥用，造成动物体内残留，对人体健康造成了威胁，其排泄物中也有金霉素残留。欧盟立法全面禁止在饲料中使用抗生素。因此，需找抗生素替代品势在必行。
抗生素本身是由微生物或高等动植物在生活过程中所产生的具有抗病原体或其它活性的一类次级代谢产物，能干扰其它活细胞发育功能的化学物质。在畜禽养殖业中，尤其是炎热天气、高温引起的热应激环境下，金霉素作为保健用药和预防疾病用药的比例越来越大，但是过多的使用抗生素会引起以下几个方面的副作用：一、使病菌产生抗药性，形成耐药病菌，如葡萄球菌长期接触青霉素后，产生抗青霉素的水解霉，破坏青霉素，从而形成一种耐药金黄色葡萄球菌，给畜禽临床治疗增加了困难。二、引起双重感染，正常动物机体的消化道、呼吸道及生殖泌尿系统内寄生着多种细菌，这些细菌之间相互制约，维持平衡共生状态。如果长期、大量乱用抗生素，会使敏感的细菌生长繁殖受到抑制，而不敏感的细菌大量繁衍，产生新的感染，即双重感染，这种感染一般多是由于滥用广谱抗生素药引起的，而且治疗比较困难。三、产生毒性反应，抗生素应用剂量过大可引起畜禽神经肌肉冲动传导阻滞，诱发呼吸肌肉麻痹，呼吸抑制，肢体瘫痪，甚至死亡。如使用四环素治疗家禽的肝、肾疾病，长期大剂量使用四环素可以引起家禽肝的损伤，甚至引起肝脏急性中毒造成鸡的死亡，四环素还可引起肾小管损伤、尿酸盐沉积造成肾功能不全代谢障碍。
目前国内外关于利用微生态制剂作为饲料添加剂的报道很多，如利用枯草芽孢杆菌、酿酒酵母和植物乳杆菌组成的微生态制剂可以有效地改善肉鸡的生产性能(cn201310368671)，利用干酪乳杆菌、植物乳杆菌和地衣芽孢杆菌组成的可以提高蛋鸡产蛋率和增加肉鸡的体重(cn201310093656)。以上技术主要是为了提高畜禽的肉质品质和生长性能，采用的多为常规微生态菌株，对抗生素的替代作用未涉及。目前尚未见有替代饲用抗生素的制剂，且能进一步提升肉制品安全性能的相关报道。
技术实现要素：
本发明目的在于提供一种微生态制剂，用于在热应激饲养条件下部分替代金霉素的使用，减少金霉素的使用量；以解决现有技术中在热应激环境下畜禽养殖避免使用大量抗生素，并提高肉品质量的技术问题。
一种微生态制剂，用于在热应激饲养条件下部分替代金霉素的使用，其活性成分包括枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、包被型植物乳杆菌和丁酸梭菌；其中，所述枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌的菌落总数≥140亿cfu/g，所述包被型植物乳杆菌和丁酸梭菌的菌落总数≥20亿cfu/g。
如上所述的微生态制剂，优选地，所述枯草芽孢杆菌的菌落总数为80～200亿cfu/g，所述地衣芽孢杆菌的菌落总数为50～200亿cfu/g，所述凝结芽孢杆菌的菌落总数为10～50亿cfu/g，所述包被型植物乳杆菌的菌落总数为10～50亿cfu/g，所述丁酸梭菌的菌落总数为10～20亿cfu/g。
如上所述的微生态制剂，优选地，所述微生态制剂为粉剂，其制备方法为：将每种菌，分别从保藏菌种中分离出单菌落，接种摇瓶培养，再逐级接到大发酵罐中扩培生产获得发酵液，放罐后，发酵液用板框压滤机、膜过滤机和离心机进行浓缩，浓缩3～10倍，获得浓缩菌液，在所述的浓缩菌液添加包被材料，采用喷雾干燥或冷冻干燥工艺进行干燥，制成颗粒状或粉状制剂。
如上所述的微生态制剂，优选地，所述包被材料为米糠粉、麸皮粉、豆粕粉为、元明粉、蔗糖、甘油、沸石粉；所述包被材料的添加量为所述浓缩菌液重量的10％～80％。
如上所述的微生态制剂，优选地，所述喷雾干燥出风温度60～90℃，所述冷冻干燥温度-20℃～-80℃。
如上所述的微生态制剂，优选地，所述米糠粉为20％、所述麸皮粉为25％、所述豆粕粉为20％、所述元明粉为10％、所述蔗糖为5％、所述甘油为10％、所述沸石粉为10％。
本发明的制备条件中，采用了米糠粉、麸皮粉、豆粕粉、元明粉、蔗糖、甘油、沸石粉作为保护性载体，通过调节干燥塔进料频率、引风速率、塔内负压，使物料在塔内形成直径为0.1～0.5mm的颗粒。
本发明的另一目的在于提供如上所述微生态制剂的应用，用于饲养肉鸡的日粮中替换金霉素的使用。
如上所述的应用，所述微生态制剂的用量为100-200克/吨全价料。
如上所述的应用，所述肉鸡为1～21日龄的日粮中添加所述微生态制剂100克/吨，减少250克/吨所述金霉素的使用量，与添加500克/吨金霉素的效果相当。
如上所述的应用，所述肉鸡为22-42日龄和1～42日龄，日粮中添加所述微生态制剂200克/吨，减少250克/吨所述金霉素的使用量，与添加500克/吨金霉素的效果相当。
本发明制备的微生态制剂具有无毒副作用、无耐药性、无残留的优点，能减少环境污染和对资源的浪费。本发明的微生态制剂与抗生素同时使用有协同作用，即通过添加微生态制剂减少抗生素的使用量而不会使畜禽生产性能降低，本发明的微生态制剂是可替代抗生素，其的使用补充肠道内减少或缺乏的正常微生物，调整并维持肠道内正常的微生态平衡，促进动物的消化吸收，增强机体免疫功能，减少抗生素的使用。
具体实施方式
本发明的微生态制剂是通过对上百种的微生物进行了筛选，最终确定选用枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、包被型植物乳杆菌、丁酸梭菌这5种微生物，证明本发明研制的微生态制剂具有无毒副作用、无耐药性、无残留的优点，能够促进消化吸收、增进肠道健康、提高机体免疫、减少保健用药、改善养殖环境、提高生产性能等功能。各种菌种的用量配比是通过了大量实验进行验证，其中，枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌的菌落总数≥140亿cfu/g，所述包被型植物乳杆菌和丁酸梭菌的菌落总数≥20亿cfu/g；进一步地，枯草芽孢杆菌的菌落总数为80～200亿cfu/g、地衣芽孢杆菌的菌落总数为50～200亿cfu/g、凝结芽孢杆菌的菌落总数为10～50亿cfu/g、包被型植物乳杆菌的菌落总数为10～50亿cfu/g、丁酸梭菌的菌落总数为10～20亿cfu/g。这样配比的微生态制剂是可以部分替代抗生素，通过分泌淀粉酶等消化酶促进消化；补充肠道有益菌群，形成生物保护膜，促进小肠绒毛生长发育，增强机体免疫功能，减少抗生素的使用，抑制病原菌、寄生虫的滋生。
下面采用具体实施例来说明本发明，其他未具体说明均采用本领域所用常规方法。
实施例1微生态制剂的制备
本实施例中采用的各种菌种的来源为：凝结芽孢杆菌(bacilluscoagulanshy2a)m2014536于2014.11.05购于中国典型培养物保藏中心(武汉大学保藏中心)；
枯草芽孢杆菌(bacillussubtilis)accc10243于2013.11.20购于中国典型培养物保藏中心(武汉大学保藏中心)；
地衣芽孢杆菌(bacilluslicheniformis)accc06149于2014.09.10购于中国典型培养物保藏中心(武汉大学保藏中心)；
植物乳杆菌(lactobacillusplantarum)accc11016于2013.11.20购于中国典型培养物保藏中心(武汉大学保藏中心)；
丁酸梭菌(clostridumbutyricumhy1a)m2014537于2014.11.05购于中国典型培养物保藏中心(武汉大学保藏中心)。制备微生态制剂的制备方法是：将上述每种菌，分别从保藏菌种中分离出单菌落，接到500ml三角瓶中摇瓶培养，再逐级接到500升发酵罐、10吨发酵罐中扩培生产获得发酵液，放罐后，发酵液用板框压滤机、膜过滤机或离心机进行浓缩，浓缩3～10倍，获得浓缩菌液。浓缩菌液添加包被材料，采用喷雾干燥或冷冻干燥工艺进行干燥，制成颗粒状或粉状制剂。其中，所述喷雾干燥出风温度60～90℃，所述冷冻干燥温度-20℃～-80℃；
包被材料包括但不限于以下成分：脱脂奶粉、甘油、海藻糖、麸皮粉、米糠粉、元明粉、蔗糖、豆粕粉沸、沸石粉和淀粉等中的几种的组合；包被材料的添加量为浓缩菌液重量的10％～80％。喷雾干燥出风温度为60～90℃或冷冻干燥温度为-20℃～-80℃。
具体的，配制枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌发酵培养基1：豆粕粉4％、玉米粉6.5％、麸皮粉5.5％、磷酸氢二钠0.78％、磷酸二氢钾0.03％，ph自然，在0.1mpa、121℃灭菌30min
配制凝结芽孢杆菌、植物乳杆菌发酵培养基2：酵母浸粉0.5％，胰蛋白胨1％，牛肉粉1％，葡萄糖2％，硫酸镁0.01％，三水乙酸钠0.5％，柠檬酸铵0.2％，硫酸锰0.005％，三水磷酸氢二钾0.2％，吐温-800.1％，ph自然，在0.1mpa、115℃灭菌30min。
配制丁酸梭菌发酵培养基rcm培养基：酵母膏0.3％，牛肉膏1％，胰蛋白胨1％，葡萄糖0.5％，可溶性淀粉0.1％，氯化钠0.5％，三水和乙酸钠0.3％，半胱胺盐酸盐0.05％，ph调至7.0，用石蜡油液封，在0.1mpa、115℃灭菌30min。
(1)枯草、地衣芽孢杆菌菌粉制备：在发酵培养基1中，以4％接种量、37℃恒温、转速220rpm培养30h获得培养液，培养液芽孢数达到158亿cfu/ml，然后用离心机进行浓缩，浓缩液芽孢数达到1000亿cfu/ml以上，添加米糠粉20％、麸皮粉25％、豆粕粉20％、元明粉10％、蔗糖5％、甘油10％、沸石粉10％(按浓缩液的重量比添加)，用喷雾干燥塔烘干制成枯草、地衣芽孢杆菌菌粉(活菌量不低于(500亿cfu/g)。
(2)凝结芽孢杆菌菌粉制备：在发酵培养基2中，以5％接种量、45℃恒温、转速220rpm培养40h获得培养液，培养液芽孢数达到15亿/ml，然后用离心机进行浓缩，浓缩液芽孢数达到100亿/ml以上，添加米糠粉20％、麸皮粉25％、豆粕粉20％、元明粉10％、蔗糖5％、甘油10％、沸石粉10％(按浓缩液的重量比添加)，用喷雾干燥塔烘干制成凝结芽孢杆菌菌粉(活菌量不低于(200亿cfu/g)；
(3)包被型植物乳杆菌菌粉制备：在发酵培养基2中，以5％接种量、30℃恒温、转速220rpm培养30h获得培养液，培养液芽孢数达到20亿/ml，然后用离心机进行浓缩，浓缩液芽孢数达到100亿/ml以上，加入米糠粉20％、麸皮粉25％、豆粕粉20％、元明粉10％、蔗糖5％、甘油10％、沸石粉10％(按浓缩液的重量比添加)，在配料搅拌罐中混合1～300min，混合均匀，然后干燥制成包被型植物乳杆菌菌粉(活菌量不低于(100亿cfu/g)；
(4)丁酸梭菌菌粉制备：在rcm发酵培养基中，以5％接种量、37℃恒温、静置培养40h获得培养液，培养液芽孢数达到5亿/ml，然后用离心机进行浓缩，浓缩液芽孢数达到20亿/ml以上，加入米糠粉20％、麸皮粉25％、豆粕粉20％、元明粉10％、蔗糖5％、甘油10％、沸石粉10％(按浓缩液的重量比添加)用喷雾干燥塔制成丁酸梭菌菌粉(活菌量不低于(40亿cfu/g)。
其中对各种菌种进行了计数检测，采用方法如下：枯草芽孢杆菌采用《ny/t2131-2012饲料添加剂枯草芽孢杆菌》检测，地衣芽孢杆菌采用《ny/t1461-2007饲料微生物添加剂地衣芽孢杆菌》检测，凝结芽孢杆菌和丁酸梭菌采用《q/xhy67－2015混合型饲料添加剂微生物》检测。
实施例2微生态制剂的应用
1材料与方法
1.1试验动物与试验设计
选用720只艾拔益加肉鸡，随机分成4个处理组，每组6个重复，每重复30羽。试验为期42天，试验时间为6月30号到8月1号。试验设计见表1，试验分组及日粮见表2。其中微生态制剂为实施例1的方法制备。具体地，枯草芽孢杆菌200亿cfu/g、地衣芽孢杆菌180亿cfu/g、凝结芽孢杆菌30亿cfu/g、包被型植物乳杆菌30亿cfu/g、丁酸梭菌10亿cfu/g。
表1试验分组
1.2试验日粮与饲养管理
基础日粮的组成及营养含量见表2。
表2饲料组成与营养水平(干物质基础)
其中，预混料可为每千克饲料提供：铜10.0mg，铁90.0mg，锌60.0mg，锰70.0mg，硒0.2mg，碘0.38mg，维生素a8000iu，维生素d33000iu，维生素e30.0mg，维生素k30.6mg，维生素b15mg，维生素b28mg，微生物b65mg，维生素b120.012mg，泛酸钙20.0mg，烟酸40.0mg，叶酸0.6mg，生物素0.25mg，胆碱100mg，耐高温植酸酶500iu。
饲养前做好设备和鸡舍的清洗和消毒工作，鸡舍彻底清洁，待干燥后，用高锰酸钾和甲醛熏蒸。肉仔鸡在不锈钢代谢笼中饲养，自由采食饮水。免疫程序和驱虫程序按照鸡场常规同步进行。保持固定的饲喂时间，每天3次，保证水源的充足、干净。随时观察、记载鸡只的采食和健康状况。
1.3样品采集
于试验第21、42日龄晚上21:00停止供料，22、43天早上7:00停水1h后，9:00每个处理组的前4个重复于以重复为单位称取体重；每个处理组的最后一个重复中取5只鸡称活体重，静脉采血，分离血清并于4℃冰箱中保存，并在2日内测完。
然后屠宰，打开腹腔，迅速分离选取的十二指肠、空肠、回肠、盲肠段，从距回盲瓣1cm处向前取至卵黄憩室的残存处，扎紧。收集的食糜(除盲肠内容物外)按重复放入洁净的带盖培养皿中，迅速置于-20℃冰箱。收集到的样品立即置于65-70℃的烘箱中烘至发脆，取出在空气中回潮24h后，用样品粉碎机粉碎并过40目筛，装入样品瓶中密封保存、备测。
1.4检测指标及方法
1.4.1生长性能指标
记录每日的投料量及剩余料量、鸡死亡淘汰情况。计算平均初只重、采食量、平均日增重、料肉比。
日采食量/(g/d·羽)＝σ[(每天投料量一每天余料量)/当天饲养量]/饲养天数；
平均日增重/(kg/d·羽)＝(平均末重一平均初重)/饲养天数；
料肉比＝试验期总耗料/试验期总增重。
1.4.2对各组肉鸡血清中尿酸、总蛋白、白蛋白和球蛋白、白/球蛋白比值、血糖、总胆固醇、甘油三脂含量检测，其中尿酸(sua)采用尿酸酶反应终点比色法；总蛋白(tp)采用双缩脲比色法；白蛋白(alb)采用溴甲酚绿比色法；球蛋白(glb)：计算值即总蛋白-白蛋白。
1.4.3屠宰性能指标
禁食12h后称活体重，颈静脉放血屠宰，湿法拔羽。并分离左部胸肌、左部腿肌、肝脏、腺胃、肌胃等称重。半净膛，屠体去除气管、食道、嗉囊、肠、脾、胰、胆和生殖器官、肌胃内容物及角质膜后的重量。全净膛，半净膛重减去心、肝、腺胃、肌胃、肺、腹脂和头脚。腹脂：腹部板油、肌胃周围和近肛门处的脂肪。
计算公式如下：
屠体重＝活体重-血重-羽毛重；
屠宰率(％)＝(屠体重/活重)×100％；
半净膛率(％)＝(半净膛重/活重)×100％；
全净膛率(％)＝(全净膛重/活重)×100％；
腹脂率＝腹脂重/(全净膛重+腹脂重)×100％。
腹脂率：剥离腹部板油和肌胃周围的脂肪，称重。
1.4.4免疫器官指数
试验结束进行屠宰试验时，取胰腺、脾脏、法氏囊(42日龄不取)、胸腺，吸干血液，剔除脂肪后称鲜重，计算免疫器官指数。
免疫器官指数＝(疫器官鲜重，g)/(活重，kg)。
2结果
2.1本发明的微生态制剂与金霉素对肉鸡生长性能的影响
2.1.1本发明的微生态制剂与金霉素对0-21日龄肉鸡生长性能的影响，结果见表3。
表3本发明的微生态制剂与金霉素对0-21日龄肉鸡生长性能的影响
同行数据的上标无字母或相同字母表示差异不显著(p＞0.05)，不同字母表示差异显著(p＜0.05)，下表同。
从表3中，可以看出，与添加500g/t金霉素相比，250g/t金霉素+微生态制剂100、200g/t采食量分别提高4.76％和2.89％。
与添加500g/t金霉素相比，250g/t金霉素+微生态制剂100g/t日增重提高5.56％。与玉米豆粕日粮组相比，250g/t金霉素+微生态制剂100g/t日增重显著提高18.05％(p＜0.05)。
2.1.2本发明的微生态制剂与金霉素对22-42日龄肉鸡生长性能的影响
表4微生态制剂与金霉素对22-42日龄肉鸡生长性能的影响
由表4可见，与添加500g/t金霉素相比，250g/t金霉素+微生态制剂100、200g/t采食量分别提高3.32％和2.44％。
与添加500g/t金霉素相比，250g/t金霉素+微生态制剂100g/t、200g/t日增重分别提高3.64％、4.55％。与玉米豆粕日粮组相比，250g/t金霉素+微生态制剂100g/t、200g/t日增重分别显著提高10.47％(p＜0.05)、11.44％(p＜0.05)。
与添加500g/t金霉素相比，250g/t金霉素+微生态制剂200g/t料肉比降低1.68％。
2.1.3微生态制剂与金霉素对0-42日龄肉鸡生长性能的影响，结果见表5。
表5微生态制剂与金霉素对0-42日龄肉鸡生长性能的影响
由表5可知，与添加500g/t金霉素相比，250g/t金霉素+微生态制剂100、200g/t采食量分别提高2.72％和2.58％。
与添加500g/t金霉素相比，250g/t金霉素+微生态制剂100g/t、200g/t日增重分别提高1.76％、2.79％。
2.2微生态制剂与金素对肉鸡血液指标的影响
2.2.1微生态制剂与金霉素对21日龄肉鸡血液指标的影响，结果见表6。
表6微生态制剂与金霉素对21日龄肉鸡血液指标的影响
由表可见，与添加500g/t金霉素相比，250g/t金霉素+微生态制剂100g/t、200g/t总蛋白提高12.93％和7.12％。
与添加500g/t金霉素相比，250g/t金霉素+微生态制剂100g/t、200g/t白蛋白提高14.96％和9.08％。
与添加500g/t金霉素相比，250g/t金霉素+微生态制剂100g/t、200g/t球蛋白提高10.67％和4.94％。
与添加500g/t金霉素相比，250g/t金霉素+微生态制剂100g/t、200g/t白球比提高了3.16％和2.62％。
与添加500g/t金霉素相比，250g/t金霉素+微生态制剂100g/t、200g/t总胆固醇降低了5.99％和0.89％。
与添加500g/t金霉素相比，250g/t金霉素+微生态制剂100g/t、200g/t甘油三酯提高了11.65％和5.23％。
与添加500g/t金霉素相比，250g/t金霉素+微生态制剂100g/t、200g/t血糖提高了0.94％和1.34％。
2.2.2微生态制剂与金霉素对42日龄肉鸡血液指标的影响，结果见表7。
表7微生态制剂与金霉素对42日龄肉鸡血液指标的影响
由表7可见，与添加500g/t金霉素相比，250g/t金霉素+微生态制剂100g/t、200g/t球蛋白降低了1.53％和8.75％。
与添加500g/t金霉素相比，250g/t金霉素+微生态制剂200g/t白球比提高了2.55％。
与添加500g/t金霉素相比，250g/t金霉素+微生态制剂100g/t、200g/t总胆固醇提高了6.63％和14.18％，甘油三酯分别提高了26.10％(p＜0.05)和14.34％。
与添加500g/t金霉素相比，250g/t金霉素+微生态制剂100g/t、200g/t血糖分别降低了3.20％和2.48％
2.3微生态制剂与金酶素对肉鸡屠宰性能的影响
2.3.1微生态制剂与金霉素对21日龄肉鸡屠宰性能的影响，见表8。
表8微生态制剂与金霉素对21日龄肉鸡屠宰性能的影响
由表8可见，与添加500g/t金霉素相比，250g/t金霉素+微生态制剂100、200g/t屠体重分别提高1.53％和0.06％。
与添加500g/t金霉素相比，250g/t金霉素+微生态制剂100屠体率提高0.10％。
2.3.2微生态制剂与金霉素对42日龄肉鸡屠宰性能的影响，结果i安表9。
表9微生态制剂与金霉素对42日龄肉鸡屠宰性能的影响
2.4免疫器官指数
2.4.1微生态制剂与金霉素对21日龄肉鸡免疫器官指数的影响，结果见表10。
表10微生态制剂与金霉素对21日龄肉鸡免疫器官指数的影响
结果表明，与添加500g/t金霉素相比，250g/t金霉素+微生态制剂100、200g/t脾脏指数提高10.58、9.94％。
2.4.2微生态制剂与金霉素对42日龄肉鸡免疫器官指数的影响，结果见表11。
表11微生态制剂与金霉素对42日龄肉鸡免疫器官指数的影响，
与添加500g/t金霉素相比，250g/t金霉素+微生态制剂100、200g/t胰腺指数提高26.89、22.24％。
3结论在本实施例的试验条件下：
生长性能
1)0-21日龄肉鸡，250g/t金霉素+微生态制剂100g/t料肉比与添加500g/t金霉素效果相当。
2)22-42日龄，250g/t金霉素+微生态制剂200g/t效果最佳。微生态制剂100g/t添加时，采食量和日增重均最大。
3)0-42日龄，250g/t金霉素+微生态制剂200g/t效果最佳。250g/t金霉素+微生态制剂100g/t料肉比与添加500g/t金霉素效果相当。
血液指标
250g/t金霉素+微生态制剂100g/t可以促进生长和提高饲料转化率。微生态制剂和金霉素配合使用，可以提高机体免疫力。玉米豆粕日粮中添加不同剂量微生态制剂可改善机体脂类代谢。不同剂量微生态制剂可提高饲料中蛋白质利用率和淀粉及非淀粉多糖的消化率。
屠宰性能
21日龄时，250g/t金霉素+微生态制剂100g/t效果相对较佳。添加不同剂量的微生态制剂对屠宰性能均有一定程度的改善。
42日龄，玉米豆粕日粮中添加不同剂量微生态制剂对肉鸡屠宰性能有改善作用。