本发明涉及饲料添加剂，尤其涉及猪用抗霉菌毒素饲料添加剂，本发明还涉及所述猪用抗霉菌毒素饲料添加剂的制备方法及其在脱除猪用饲料中霉菌毒素的应用，属于猪用抗霉菌毒素饲料添加剂的制备领域。
背景技术：
在世界范围内，谷物和饲料都存在着严重的霉菌毒素污染。霉菌毒素是由霉菌或者真菌产生的有毒有害物质，在谷物的生长过程、饲料的制造、贮存及运输过程中都可以产生。霉菌毒素不仅会导致畜禽的免疫能力下降、繁殖性能障碍、采食量降低及疾病发生率上升，甚至可能造成畜禽动物的死亡，还会通过食物链从动物转移到人体中，给畜牧业带来巨大的经济损失。
目前，控制饲料中霉菌毒素的方法有很多，包括采用一些物理脱毒方法、化学脱毒方法及吸附剂吸附法，其中最常用的方法是使用霉菌毒素吸附剂。在畜禽的消化道内，通过霉菌毒素吸附剂来降低霉菌毒素浓度而减少其进入血液和靶器官的机会，从而起到有效防止霉菌毒素产生毒害作用。
但是，现有的多种霉菌毒素吸附剂存在吸附作用的选择性强，仅对单一的霉菌毒素有吸附作用等缺陷。因此，开发一种高效、安全的、对多种霉菌毒素均具有吸附作用的猪用抗霉菌毒素饲料添加剂，对养猪业和食品安全具有非常重要的意义和应用价值。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是提供一种猪用抗霉菌毒素饲料添加剂，该猪用抗霉菌毒素饲料添加剂能够有效吸附饲料中的多种霉菌毒素，防止猪只因食用霉菌毒素污染的饲料而引发的各种疾病。
为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：
本发明首先公开了一种猪用抗霉菌毒素饲料添加剂，包括以下各组分：鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)菌剂、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)菌剂和沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)菌剂；各组分的重量份为：鼠李糖乳杆菌菌剂1-20份、嗜酸乳杆菌菌剂1-10份、沼泽红假单胞菌菌剂1-5份；优选的，各组分的重量份为：鼠李糖乳杆菌菌剂5份、嗜酸乳杆菌菌剂3份、沼泽红假单胞菌菌剂1份。
本发明所述鼠李糖乳杆菌的保藏编号为ATCC 53103；所述嗜酸乳杆菌的保藏编号为ACCC11073；所述沼泽红假单胞菌的保藏编号为CGMCC1.8929。本发明对鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌或沼泽红假单胞菌的具体菌株没有特殊限制，所述的鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌和沼泽红假单胞菌可以是市售商品，也可以通过培养获得，不影响本发明猪用抗霉菌毒素饲料添加剂的实施；但为更好的达到本发明的效果，所述鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌或沼泽红假单胞菌的活菌数均要求在200亿个/克以上。
本发明进一步公开了一种所述的猪用抗霉菌毒素饲料添加剂的制备方法，包括以下步骤：将鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌和沼泽红假单胞菌混合均匀，即得。
本发明所述的猪用抗霉菌毒素饲料添加剂能够应用于脱除猪饲料中的霉菌毒素。其中，所述猪用抗霉菌毒素饲料添加剂的添加量为猪饲料质量的0.1-1％，优选为0.3％。
本发明所述霉菌毒素包括但不限于：玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、黄曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A、烟曲霉毒素、伏马毒素B1或T-2毒素中的任意一种或多种。
本发明通过将鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌等多种不同的益生菌进行组合，制备猪用抗霉菌毒素饲料添加剂，考察不同菌种组成的添加剂对玉米赤霉烯酮、黄曲霉毒素B1(AFB1)、呕吐毒素等霉菌毒素的脱毒效果，结果表明由鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌和沼泽红假单胞菌制备的猪用抗霉菌毒素饲料添加剂对玉米赤霉烯酮、伏马毒素B1、AFB1、呕吐毒素和T-2毒素的吸附率显著优于其他菌种组合，不同霉菌毒素的吸附率提高了15个百分点以上，而且与毒素结合紧密，能够很好的吸附霉菌毒素，解吸效果显著低于其他菌种组合。
本发明进一步对鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌和沼泽红假单胞菌的用量进行优化，结果表明，鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌和沼泽红假单胞菌按照质量比5:3:1制备的添加剂对霉菌毒素的脱除效果明显优于其他比例，不同霉菌毒素的吸附率提高了8个百分点以上，而且与毒素结合更紧密，解吸率显著降低，脱毒更为彻底。
本发明所述猪用抗霉菌毒素饲料添加剂能够用于受霉菌毒素污染的玉米、谷物等原料及配合饲料等的脱毒，防止畜禽因食霉菌毒素污染饲料引起的各种疾病的发生。另外，本发明所述猪用抗霉菌毒素饲料添加剂不吸附营养元素，不影响猪只的正常生长，而且能够调节肠道内微生态的菌群平衡。
本发明在添加玉米赤霉烯酮的基础日粮中，添加本发明猪用抗霉菌毒素饲料添加剂饲喂仔猪，腹泻率仅2.5％，仔猪的平均日增重、料重比与空白对照组差异不显著，证明本发明猪用抗霉菌毒素饲料添加剂能够有效脱除饲料中的玉米赤霉烯酮，从而有效降低其对仔猪生长性能的危害。而仅饲喂添加玉米赤霉烯酮的基础日粮，仔猪腹泻率达52.5％，而且仔猪的生长性能指标显著低于空白对照组，料重比显著高于空白对照组。
本发明所用到的微生物菌种均可从市场购买得到，也可购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心等保藏机构。
本发明技术方案与现有技术相比，具有以下有益效果：
本发明猪用抗霉菌毒素饲料添加剂采用鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌和沼泽红假单胞菌及合理的比例，能够有效地吸附饲料中的霉菌毒素如黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、T-2毒素、烟曲霉毒素和赫曲霉毒素等，同时还能抑制霉菌的生长，防止霉菌毒素的产生，消除霉菌毒素对动物生理的影响，提高饲料报酬。另外，本发明猪用抗霉菌毒素饲料添加剂的制备方法简单，无毒副作用，符合畜牧业发展的需要，具有良好的应用前景。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但是应理解所述实施例仅是范例性的，不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改或替换均落入本发明的保护范围。
1、菌种
鼠李糖乳杆菌，菌株保藏编号为ATCC 53103；
嗜酸乳杆菌，菌株保藏编号为ACCC11073；
沼泽红假单胞菌，菌株保藏编号为CGMCC 1.8929；
产朊假丝酵母(Candida utilis)，保藏编号为CGMCC 2.1641；
凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)，保藏编号为CGMCC 1.3220；
热带假丝酵母(Candida tropicalis)，保藏编号为ACCC20004；
地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)，菌株保藏编号为ACCC01198；
枯草芽孢杆菌(产品规格：200亿个/克)，购自北海群林生物工程有限公司；粪肠球菌(200亿个/g)，购自无锡拜弗德生物科技有限公司。
实施例1猪用抗霉菌毒素饲料添加剂
分别按照购买菌种所给出的培养方法培养制备鼠李糖乳杆菌菌剂、嗜酸乳杆菌菌剂和沼泽红假单胞菌菌剂，要求活菌数均在200亿个/克或以上。
按照以下比例称取各组分(Kg)：鼠李糖乳杆菌菌剂1、嗜酸乳杆菌菌剂1、沼泽红假单胞菌菌剂1，混合均匀，即得。
实施例2猪用抗霉菌毒素饲料添加剂
分别按照购买菌种所给出的培养方法培养制备鼠李糖乳杆菌菌剂、嗜酸乳杆菌菌剂和沼泽红假单胞菌菌剂，要求活菌数均在200亿个/克或以上。
按照以下比例称取各组分(Kg)：鼠李糖乳杆菌菌剂20、嗜酸乳杆菌菌剂10、沼泽红假单胞菌菌剂5，混合均匀，即得。
实施例3猪用抗霉菌毒素饲料添加剂
分别按照购买菌种所给出的培养方法培养制备鼠李糖乳杆菌菌剂、嗜酸乳杆菌菌剂和沼泽红假单胞菌菌剂，要求活菌数均在200亿个/克或以上。
按照以下比例称取各组分(Kg)：鼠李糖乳杆菌菌剂5、嗜酸乳杆菌菌剂3、沼泽红假单胞菌菌剂1，混合均匀，即得。
试验例1猪用抗霉菌毒素饲料添加剂脱除霉菌毒素的效果观察
1、菌种筛选
1.1实验方法
分别培养以下添加剂1-10中的各菌，或者购买各菌的市售商品，要求各菌的活菌数均在200亿个/克或以上。
按照以下组合分别制备猪用抗霉菌毒素饲料添加剂(质量比)：
添加剂1，鼠李糖乳杆菌：嗜酸乳杆菌：酿酒酵母＝2:1:1；
添加剂2，鼠李糖乳杆菌：嗜酸乳杆菌：粪肠球菌＝2:1:1；
添加剂3，鼠李糖乳杆菌：嗜酸乳杆菌：枯草芽孢杆菌＝2:1:1；
添加剂4，鼠李糖乳杆菌：嗜酸乳杆菌：沼泽红假单胞菌＝2:1:1；
添加剂5，鼠李糖乳杆菌：沼泽红假单胞菌：热带假丝酵母＝2:1:1；
添加剂6，鼠李糖乳杆菌：沼泽红假单胞菌：植物乳杆菌＝2:1:1；
添加剂7，鼠李糖乳杆菌：沼泽红假单胞菌：地衣芽孢杆菌＝2:1:1；
添加剂8，鼠李糖乳杆菌：凝结芽孢杆菌：枯草芽孢杆菌＝2:1:1；
添加剂9，枯草芽孢杆菌：地衣芽孢杆菌：乳酸乳杆菌＝2:1:1；
添加剂10，嗜酸乳杆菌：产肮假丝酵母：植物乳杆菌＝2:1:1。
各添加剂的制备方法同实施例3。对以上10组添加剂分别进行霉菌毒素的脱毒效果试验。霉菌毒素分别为玉米赤霉烯酮、黄曲霉毒素B1(AFB1)、呕吐毒素、T-2毒素、伏马毒素B1，取离心管加入l0ml上述霉菌毒素标准溶液(具体见表1)，再在离心管中分别加入上述10组添加剂样品25mg，使添加剂样品在溶液中的浓度为2.5mg/ml。同时设置空白组(未添加任何脱毒剂)，所有样品设2个重复。所有样品于37℃恒温水浴振荡器中以150r/min振荡吸附2h。而后，以3000r/min离心l0min，收集上清液，测定上清液中各霉菌毒素的含量并计算各霉菌毒素的吸附率Y(％)，Y＝100×(C0-C1)/C0；
然后在离心后的沉淀中加入l0ml pH 7.0的PBS缓冲溶液，于37℃，150r/min的恒温振荡水浴锅中振荡解吸30min，3000r/min离心l0min，收集上清液，同上法测定上清液中各霉菌毒素的含量并计算解吸率R(％)，R＝C2/(C0-C1)×100％；
其中，C0为吸附前各霉菌毒素的浓度(ng/ml)；C1为吸附后各霉菌毒素的浓度(ng/ml)；C2为解吸后各霉菌毒素的浓度(ng/ml)。
1.2实验结果
不同菌种组合的添加剂对霉菌毒素的脱毒效果见表1。
表1不同添加剂对霉菌毒素的脱毒效果
结果表明，由鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌和沼泽红假单胞菌制备的猪用抗霉菌毒素饲料添加剂对玉米赤霉烯酮、伏马毒素B1、AFB1、呕吐毒素和T-2毒素的吸附率分别达到88.35％、87.90％、95.70％、89.74％和88.55％，显著优于其他菌种组合的添加剂，不同霉菌毒素的吸附率提高了15个百分点以上，而且与毒素结合紧密，能够很好的吸附霉菌毒素，解吸效果显著低于其他菌种组合的添加剂。
2、菌种用量筛选
2.1实验方法
在筛选出由鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌和沼泽红假单胞菌制备猪用抗霉菌毒素饲料添加剂的基础上，进一步对鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌和沼泽红假单胞菌的用量进行优化。
分别按照以下比例制备猪用抗霉菌毒素饲料添加剂(质量比)：鼠李糖乳杆菌：嗜酸乳杆菌：沼泽红假单胞菌分别为5:1:1、1:5:1、1:1:5、5:2:1、1:5:2、2:1:5、5:3:1、1:5:3、3:1:5和5:4:1；各添加剂的制备方法同实施例3。
对不同比例制备的添加剂进行霉菌毒素的脱毒效果试验，具体操作同1.1实验方法，比较不同比例制备的添加剂对霉菌毒素的脱除效果。
2.2实验结果
鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌和沼泽红假单胞菌按照不同比例制备的添加剂对霉菌毒素的脱毒效果见表2。
表2不同比例的添加剂对霉菌毒素的脱毒效果
结果表明，鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌和沼泽红假单胞菌按照质量比5:3:1制备的添加剂对霉菌毒素的脱除效果明显优于其他比例，对玉米赤霉烯酮、伏马毒素B1、AFB1、呕吐毒素和T-2毒素的吸附率分别达到98.55％、97.30％、98.95％、97.44％和98.05％，不同霉菌毒素的吸附率提高了8个百分点以上，而且与毒素结合更紧密，解吸率显著降低，脱毒更为彻底。
试验例2猪用抗霉菌毒素饲料添加剂对仔猪增重的影响
选择40日龄、体重相近的健康仔猪120头，均随机分成3组(空白对照组、实验1和2组)，空白对照组饲喂基础日粮，不添加任何添加剂；实验1组在基础日粮中添加玉米赤霉烯酮700mg/t(sigma公司购买)；实验2组在基础日粮中添加玉米赤霉烯酮700mg/t，并添加本发明实施例3制备的猪用抗霉菌毒素饲料添加剂，添加量为0.3％(质量比)；各组的其他饲养条件均相同，连续饲喂20天，对实验猪进行日常观察和检测。实验结果见表3。
表3猪用抗霉菌毒素饲料添加剂对仔猪生长性能的影响
注：同列数据肩标不同小写字母表示差异显著(p＜0.05)。
结果表明，空白对照组仔猪无腹泻；实验1组仔猪腹泻率最高，达52.5％，而且实验1组仔猪的生长性能指标显著低于空白对照组，料重比显著高于空白对照组，说明玉米赤霉烯酮对仔猪生长性能有害。而实验2组添加本发明猪用抗霉菌毒素饲料添加剂，仔猪腹泻率仅2.5％，仔猪的平均日增重、料重比与空白对照组差异不显著，证明本发明猪用抗霉菌毒素饲料添加剂能够有效脱除饲料中的玉米赤霉烯酮，从而有效降低其对仔猪生长性能的危害。