本发明属于乳制品
技术领域：
，具体为一种发酵乳饮料及其制备方法。
背景技术：
：现有技术中的发酵乳饮料是指含奶的饮料，这种发酵乳饮料中通常会含有大量的糖，所以高血糖的患者不能饮用，因而制约着发酵乳饮料市场的开拓及功能性的丰富，现有市场中未有能够使糖尿病人引用的发酵乳饮料面市，这是本领域技术人员亟待解决的问题。技术实现要素：为解决现有技术中的发酵乳饮料广适性不强的缺陷，本发明提供了一种发酵乳饮料的方法及其制备方法，实现的目的为弥补治疗功能性发酵乳饮料在市场上的空白，丰富发酵乳饮料的功能性，使之适合更广受众群体。为了实现上述目的，本发明提供以下技术方案：一种发酵乳饮料，原材料包括多粘类芽孢杆菌、脱脂乳、甜味剂和/或酸味剂，所述多粘类芽孢杆菌的保藏编号为CGMCCNo.10062，分类命名为Paenibacilluspolymyxa,保藏日期为2014年11月26日，该菌种保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心(ChinaGeneralMicrobiologicalCultureCollectionCenter,CGMCC),地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101，多粘类芽孢杆菌在发酵乳饮料的终浓度为2x106～2x107cfu/mL。。进一步的，所述发酵乳饮料的甜度折合成蔗糖甜度为9％～13％。进一步的，所述发酵乳饮料的滴定酸度为65°T～75°T。进一步的，所述发酵乳饮料对二肽基肽酶-IV的抑制率≥75％。进一步的，所述脱脂乳包括脱脂乳粉和水，脱脂乳粉占脱脂乳的质量百分比5％～10％。本发明还公开了制备上述发酵乳饮料的方法，包括如下步骤：(a)将保藏编号为CGMCCNo.10062的多粘类芽孢杆菌接种于脱脂乳中进行发酵，发酵后得到发酵乳；(b)利用甜味剂和/或酸味剂勾兑形成勾兑液，将勾兑液与步骤(a)制得的发酵乳混匀，均质，灭菌，得到发酵乳饮料。进一步的，所述步骤(a)中发酵的温度为25℃～35℃，发酵的时间为3d～7d。进一步的，步骤(a)中，所述发酵为振荡培养，振荡速度为125rpm～220rpm。进一步的，步骤(b)中，所述发酵乳与勾兑液的混合体积比例为1:1～1:4。进一步的，步骤(b)中均质的压力为15～30MPa。进一步的，步骤(b)中灭菌的温度为95℃～125℃，灭菌的时间为5min～20min。本发明采用上述技术方案，包括以下有益效果：经本发明方法得到的发酵乳饮料，能够延长人体内GLP-1半衰期，增强葡萄糖诱导的胰岛素分泌，调节血糖浓度，与现有技术相比，上述技术方案中的制备方法，首次采用多粘类芽孢杆菌CGMCCNo.10062，以脱脂乳作为培养基进行发酵，制备得到具有二肽基肽酶-IV抑制活性发酵乳饮料，与其他常规发酵脱脂乳的菌株相比，多粘类芽孢杆菌CGMCCNo.10062所制备的发酵乳对二肽基肽酶-IV的抑制活性更显著，并且稳定性较好。此外，上述技术方案中的制备方法极大简化了生产步骤，节省了生产成本，同时降低了非连续性操作中带来的污染风险；制备所采用的发酵培养基来源广泛、成本低廉、天然安全，在降低物料成本的同时，提高了食品的安全性。具体实施方式下面通过具体的实施例对本发明做进一步的详细描述。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。实施例中所使用的试剂若未加说明，均为分析纯试剂，购买自国药集团。其他试验仪器、试剂、菌种，如未做特别说明，均可通过商业途径直接购得。实施例一：本发明提供的一种发酵乳饮料，该饮料的原材料包括多粘类芽孢杆菌、脱脂乳、甜味剂和/或酸味剂，所述多粘类芽孢杆菌的保藏编号为CGMCCNo.10062，多粘类芽孢杆菌在发酵乳饮料的终浓度为2x106cfu/mL。所述发酵乳饮料的甜度折合成蔗糖甜度为9％。所述甜味剂为本领域常规的甜味剂，优选的为木糖醇、阿斯巴甜、甜蜜素和安赛蜜中的一种或多种。所述发酵乳饮料的滴定酸度为65°T，酸味剂为本领域常规的酸味剂，优选的为柠檬酸、苹果酸、酒石酸、乳酸和醋酸中的一种或多种。所述发酵乳饮料对二肽基肽酶-IV的抑制率≥75％。所述脱脂乳包括脱脂乳粉和水，脱脂乳粉占脱脂乳的质量百分比5％。制备上述发酵乳饮料的方法，包括如下步骤：(a)将保藏编号为CGMCCNo.10062的多粘类芽孢杆菌接种于脱脂乳中进行发酵，发酵后得到发酵乳；(b)利用甜味剂和/或酸味剂勾兑形成勾兑液，将勾兑液与步骤(a)制得的发酵乳混匀，均质，灭菌，得到发酵乳饮料。步骤(a)中，所述发酵为振荡培养，振荡速度为125rpm。骤(b)中，所述发酵乳与勾兑液的混合体积比例为1:1。步骤(b)中均质的压力为15MPa。步骤(b)中灭菌的温度为95℃，灭菌的时间为5min。实施例二：本发明提供的一种发酵乳饮料，该饮料的原材料包括多粘类芽孢杆菌、脱脂乳、甜味剂和/或酸味剂，所述多粘类芽孢杆菌的保藏编号为CGMCCNo.10062，多粘类芽孢杆菌在发酵乳饮料的终浓度为2x107cfu/mL。所述发酵乳饮料的甜度折合成蔗糖甜度为13％。所述甜味剂为本领域常规的甜味剂，优选的为木糖醇、阿斯巴甜、甜蜜素和安赛蜜中的一种或多种。所述发酵乳饮料的滴定酸度为75°T，酸味剂为本领域常规的酸味剂，优选的为柠檬酸、苹果酸、酒石酸、乳酸和醋酸中的一种或多种。所述发酵乳饮料对二肽基肽酶-IV的抑制率≥75％。所述脱脂乳包括脱脂乳粉和水，脱脂乳粉占脱脂乳的质量百分比10％。制备上述发酵乳饮料的方法，包括如下步骤：(a)将保藏编号为CGMCCNo.10062的多粘类芽孢杆菌接种于脱脂乳中进行发酵，发酵后得到发酵乳；(b)利用甜味剂和/或酸味剂勾兑形成勾兑液，将勾兑液与步骤(a)制得的发酵乳混匀，均质，灭菌，得到发酵乳饮料。步骤(a)中，所述发酵为振荡培养，振荡速度为220rpm。骤(b)中，所述发酵乳与勾兑液的混合体积比例为1:4。步骤(b)中均质的压力为30MPa。步骤(b)中灭菌的温度为125℃，灭菌的时间为20min。实施例三：本发明提供的一种发酵乳饮料，该饮料的原材料包括多粘类芽孢杆菌、脱脂乳、甜味剂和/或酸味剂，所述多粘类芽孢杆菌的保藏编号为CGMCCNo.10062，多粘类芽孢杆菌在发酵乳饮料的终浓度为6x106cfu/mL。所述发酵乳饮料的甜度折合成蔗糖甜度为11％。所述甜味剂为本领域常规的甜味剂，优选的为木糖醇、阿斯巴甜、甜蜜素和安赛蜜中的一种或多种。所述发酵乳饮料的滴定酸度为80°T，酸味剂为本领域常规的酸味剂，优选的为柠檬酸、苹果酸、酒石酸、乳酸和醋酸中的一种或多种。所述发酵乳饮料对二肽基肽酶-IV的抑制率≥75％。所述脱脂乳包括脱脂乳粉和水，脱脂乳粉占脱脂乳的质量百分比7％。制备上述发酵乳饮料的方法，包括如下步骤：(a)将保藏编号为CGMCCNo.10062的多粘类芽孢杆菌接种于脱脂乳中进行发酵，发酵后得到发酵乳；(b)利用甜味剂和/或酸味剂勾兑形成勾兑液，将勾兑液与步骤(a)制得的发酵乳混匀，均质，灭菌，得到发酵乳饮料。步骤(a)中，所述发酵为振荡培养，振荡速度为185rpm。骤(b)中，所述发酵乳与勾兑液的混合体积比例为1:3。步骤(b)中均质的压力为20MPa。步骤(b)中灭菌的温度为110℃，灭菌的时间为10min。经上述制备出的发酵乳饮料，对二肽基肽酶-IV的抑制率≥75％，可帮助II型糖尿病患者降糖。各个实施例制备得到的发酵乳饮料，可采用下述方法得到待检测液：将DPP-IV抑制剂溶于浓度为100mmol/L，pH8.0的Tris-HCl缓冲溶液中，在室温下，10,000g离心10min，取上清，即可用于发酵乳饮料中含有的二肽基肽酶-IV抑制活性的检测。二肽基肽酶-IV抑制剂的筛选模型：取25μL待测样品于1.0mLEP(Eppendorf)管，接着加入50μL，浓度为10mU/mL二肽基肽酶-IV(Sigma，美国)，混匀，37℃温育15min，再加入25μL中含有0.8mmol/L的甘氨酰-脯氨酰-对硝基苯胺盐酸盐(Sigma，美国)，混匀，37℃反应30min，最后加入100μL，1mol/L，pH4.0醋酸钠缓冲溶液终止反应。在4℃、10,000rpm离心2min，取200μL上清于96孔微孔板(Greinerbio-one，德国)，SpectraMaxM5多功能酶标仪(MolecularDevices,美国)在405nm波长下，测定吸光度值。待测样品对二肽基肽酶-IV的抑制活性，如以下公式所示：其中：阴性对照组为空白脱脂乳替代待测样品；阴性空白组：浓度100mmol/L的三(羟基甲基)氨基甲烷盐酸缓冲液(Tris-HCl，pH＝8.0)替代阴性对照组中的二肽基肽酶-IV；样品空白组为Tris-HCl替代待测样品组中的二肽基肽酶-IV。将实施例1中的接种量，脱脂乳浓度，发酵时间、发酵振荡的速度逐一进行调整，获得了以下一组不同方法制备出的发酵乳饮料产品，采用上述方法测得的各组所得发酵乳饮料对二肽基肽酶-IV的抑制效果如表1所示。表1.不同方法制备所得发酵乳饮料的抑制效果从表1所示的结果中可以得出，将制备所述发酵乳饮料产品的制备方法中接种量，脱脂乳浓度，培养温度，发酵时间、发酵振荡的速度调整到优选范围之外的时候，多粘类芽孢杆菌CGMCCNo.10062依然可以发酵脱脂乳产生二肽基肽酶-IV抑制剂，但是产物的二肽基肽酶-IV抑制效果明显下降。采用上述方法可重复数次平行试验，最终得到在本发明优选的发酵参数的范围之外时，多粘类芽孢杆菌CGMCCNo.10062发酵脱脂乳，得到的二肽基肽酶-IV抑制剂的抑制效果明显下降。例如，在接种量过少时，菌种繁殖速度慢，使得最终获得的二肽基肽酶-IV抑制剂的活性低于优选的接种量范围；当接种量过多时，一定时间后菌种个体因生存空间及营养的限制而死亡或停滞生长，不利于代谢物的积累，也使得最终获得的二肽基肽酶-IV抑制剂的活性低于优选的接种量范围。又例如，当发酵温度低于优选范围值时，菌种代谢缓慢，会导致二肽基肽酶-IV抑制剂的活性有所降低。还例如，发酵的振荡速度低于优选范围时，菌种发酵的溶氧量不够，生长和代谢受到限制，导致二肽基肽酶-IV抑制剂的活性降低。本发明得到的发酵乳饮料对二肽基肽酶-IV抑制率的测定：以倍半稀释的方法将待测样品溶液进行稀释，获得不同浓度的待测样品组，利用上述检测方法测定不同浓度的待测样品对二肽基肽酶-IV的抑制率，根据浓度与二肽基肽酶-IV抑制率构成的线性关系，计算得出样品对二肽基肽酶-IV的抑制率。进过数次平行试验检测，得到本发明的发酵乳饮料对DPP-IV的抑制率≥75％。效果实施例1：产品口味与喜好程度测试取上述实施例1-3所制备的发酵乳饮料产品A、B、C溶解于温水中，得到浓度为100mg/mL的发酵乳饮料溶液，以此为实验对象，进行产品的口味测试。测试人数50人。品尝方式：采用不记名打分的方式进行品尝；分别对上述发酵乳饮料产品A、B、C的色泽、风味、口感、营养项进行单独打分，每一项满分是25分，计算平均分及其总分，统计结果记录于表2。同时，根据对产品的整体喜好程度给出的意见，统计对每个单品的喜好人数，统计结果记录于表3。表2.产品口味测试结果数据统计表发酵乳饮料产品ABC色泽232224风味232421口感212223营养242224总分919092表3.产品喜好程度测试结果数据统计表喜好程度ABC喜欢443847良好472一般241不喜欢—1—从产品口味测试和喜好程度统计结果可以看出，总体而言，通过本发明技术方案中的方法所制得的具有二肽基肽酶-IV抑制活性的发酵乳饮料在产品风味、口感、营养方面可被大部分消费者所接受。效果实施例1：冷藏条件下二肽基肽酶-IV抑制剂抑制效果的稳定性将实施例1-3制备的产品A、B、C分别装入密封袋后，置于冷藏条件(8℃)保存0、10、20和30d后取出，分别测定各样品对二肽基肽酶-IV的半抑制浓度IC50值，结果如表4所示。表4.冷藏条件下产品抑制效果的稳定性由表4可知，所有测试的二肽基肽酶-IV抑制剂产品在冷藏(8℃)保存30d后，对二肽基肽酶-IV抑制活性保持在同一水平，即稳定性较好。效果实施例2：参考实施例1所述方法，比较由多粘类芽孢杆菌CGMCCNo.10062、干酪乳杆菌(L.casei)ATCC393(购买自ATCC)、保加利亚乳杆菌(L.bulgaricus)LB340(由丹尼斯科公司提供)、嗜热链球菌(S.thermophilus)ST-BODY-3(由科汉森公司提供)制备的发酵乳饮料对二肽基肽酶-IV的抑制效果，具体操作如下：1、材料与方法(a)种子(发酵菌种)的制备：干酪乳杆菌和保加利亚乳杆菌种子的制备：将干酪乳杆菌ATCC393和保加利亚乳杆菌LB340的冻干粉分别用少量无菌蒸馏水溶解，各自用接种环取一环划线于MRS固体培养基(Merck，德国)上，37℃厌氧培养24h取出，用接种环挑取单菌落放入1mLMRS液体(Merck，德国)，运用涡旋震荡器将菌落均匀分散于液体培养基内，37℃厌氧培养24h取出，以2％(v/v)接种量接种于50mLMRS液体，37℃培养24h后，培养物9,000rpm离心10分钟，弃去上清，菌体用无菌蒸馏水洗涤2次后，用原培养体积的无菌蒸馏水悬浮，得到相应的发酵用的种子。嗜热链球菌种子的制备：将嗜热链球菌ST-BODY-3的冻干粉用少量无菌蒸馏水溶解，用接种环取一环划线于M17固体培养基(Merck，德国)上，40℃厌氧培养24h取出，用接种环挑取单菌落放入1mLM17液体(Merck，德国)，运用涡旋震荡器将菌落均匀分散于液体培养基内，40℃厌氧培养24h取出，以2％(v/v)接种量接种于50mLM17液体，40℃培养24h后，培养物9,000rpm离心10min，弃去上清，菌体用无菌蒸馏水洗涤2次后，用原培养体积的无菌蒸馏水悬浮，得到发酵用的种子。(b)脱脂乳的制备：同实施例1。(c)待测样品制备：同实施例1。2、发酵乳饮料的制备将各菌株以终浓度为8.0x106cfu/ml接种量无菌接种于8％(w/w)脱脂乳，分别培养(保加利亚乳杆菌和干酪乳杆菌37℃厌氧培养，嗜热链球菌40℃厌氧培养，多粘类芽孢杆菌30℃、220rpm振荡培养)4d，获得相应的发酵乳饮料。3、二肽基肽酶-IV抑制活性的测定上述不同菌株制备的发酵乳饮料对二肽基肽酶-IV的半抑制浓度IC50如表5所示：表5不同菌株制备的发酵乳饮料对二肽基肽酶-IV的半抑制浓度IC50由表5可知，其他常规脱脂乳发酵菌株发酵脱脂乳的产物不具有二肽基肽酶-IV的抑制活性，而多粘类芽孢杆菌CGMCCNo.10062制备的发酵乳饮料对二肽基肽酶-IV的抑制活性非常显著。以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。当前第1页1 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