专利名称：苯并咪唑衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及苯并咪唑衍生物，更具体地说涉及用作人食糜酶活性抑制剂的苯并咪唑衍生物。
背景技术：
食糜酶(chymase)是存在于肥大细胞颗粒体内的中性蛋白酶并且直接涉及许多由肥大细胞参与的生物反应。例如，已报道食糜酶具有许多活性，包括促使从肥大细胞中脱粒、激活白细胞介素-1β(1L-1β)、激活基质蛋白酶、分解纤连蛋白和IV型胶原蛋白、促使释放转化生长因子-β(TGF-β)、激活P物质和血管活性肠肽(VIP)、将血管紧张素I(Ang I)转化为血管紧张素II(Ang II)和内皮素的转化。
根据以上所述，认为所述食糜酶活性抑制剂有希望成为以下疾病的预防和/或治疗剂呼吸疾病如支气管哮喘、炎性和变应性疾病如变应性鼻炎、特应性皮炎和荨麻疹、心血管疾病如动脉硬化损害、血管收缩、外周循环紊乱、肾功能不全和心功能不全以及骨和软骨代谢性疾病如类风湿性关节炎和骨关节炎。
虽然本领域已知的食糜酶活性抑制剂的实例包括三嗪衍生物(日本未审查专利公布号8-208654)、乙内酰脲衍生物(日本未审查专利公布号9-31061)、咪唑烷衍生物(国际公布号WO 96/04248)、喹唑啉衍生物(国际公布号WO 97/11941)、杂环酰胺衍生物(国际公布号WO 96/33974)、cefam化合物(日本未审查专利公布号10-087493)、酚衍生物(日本未审查专利公布号10-087567)、杂环酰胺化合物(国际公布号WO 98/18794)、乙酰胺衍生物(国际公布号WO 98/09949)、杂环酰胺化合物(日本未审查专利公布号10-007661)、酸酐衍生物(日本未审查专利公布号11-049739)、杂环酰胺化合物(国际公布号WO 99/32459)和乙酰胺衍生物(国际公布号WO 99/41277)，但是这些化合物与本发明的化合物在结构上完全不同。
由于具有不充分的活性或者是结构不稳定，因此，所公开的食糜酶抑制剂化合物远远缺乏有效性。然而，本发明的化合物具有非常高的活性并且显示出优越的血液动力学性质，使其成为非常有效的药物。
另一方面，在美国专利第5124336号的说明书中叙述了与本发明化合物有关技术的实施例。在该说明书中将苯并咪唑衍生物描述为一种具有血栓烷受体拮抗活性的化合物。然而，没有公开在该说明书中介绍的化合物在苯并咪唑骨架中具有取代的杂芳基，并且也没有介绍所述化合物的人食糜酶活性。另外，尽管在日本未审查专利公布号01-265089中也叙述了苯并咪唑化合物作为一种抗肿瘤药，但没有提到人食糜酶抑制活性。
本发明的公开本发明的目的是提供新的、可以在临床使用的人食糜酶活性抑制剂的化合物。
作为达到以上目的的反复和认真的研究结果，本发明的发明人发现由下式(1)代表的苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐具有与已知的化合物完全不同的结构，从而完成了本发明 其中R1和R2可以是相同或不同并且各自独立代表氢原子、卤原子、三卤代甲基、氰基、羟基、具有1-4个碳原子的烷基、具有1-4个碳原子的烷氧基，或者R1和R2一起代表-O-CH2-O-、-O-CH2CH2-O-或-CH2CH2CH2-(这些基团可以由一个或更多个具有1-4个碳原子的烷基取代)；A代表取代或未取代、直链、环状或支链的具有1-7个碳原子的亚烷基或亚链烯基，所述基团可以被一个或更多个-O-、-S-、-SO2-和-NR3-(其中R3代表氢原子或具有1-6个碳原子的直链或支链烷基)间断；这些基团可以具有的取代基选自卤原子、羟基、硝基、氰基、直链或支链的具有1-6个碳原子的烷基、直链或支链的具有1-6个碳原子的烷氧基(包括其中两个相邻基团形成缩醛键的情况，即包括其中偕位的两个烷氧基的烷基部分连接形成环的情况)、具有1-6个碳原子的直链或支链的烷硫基、具有1-6个碳原子的直链或支链烷基磺酰基、具有1-6个碳原子的直链或支链酰基、具有1-6个碳原子的直链或支链酰氨基、三卤代甲基、三卤代甲氧基、苯基、氧代基及可以由一个或更多个卤原子取代的苯氧基；并且这些取代基中的一个或更多个可以各自独立地结合到所述亚烷基或亚链烯基的任选位置上；E代表-COOR3、-SO3R3、-CONHR3、-SO2NHR3、四唑-5-基、5-氧代-1，2，4-噁二唑-3-基或5-氧代-1，2，4-噻二唑-3-基(其中R3如上所定义)；G代表取代或未取代、直链或支链的具有1-6个碳原子的亚烷基，所述基团可以由一个或更多个-O-、-S-、-SO2-和-NR3-(其中R3如上所定义。当这些原子或原子基团存在时，它们不直接结合到苯并咪唑环上)间断；并且所述亚烷基可以具有的取代基选自卤原子、羟基、硝基、氰基、具有1-6个碳原子的直链或支链烷基、具有1-6个碳原子的直链或支链烷氧基(包括其中两个相邻基团形成缩醛键的情况)、三卤代甲基、三卤代甲氧基、苯基和氧代基团；M代表单键或-S(O)m-，其中m是0-2的整数；J代表取代或未取代的杂环，该杂环具有4-10个碳原子并且在它的环上含有一个或更多个选自氧原子、氮原子和硫原子的杂原子，前提是不包括咪唑环；所述芳族杂环基可以具有的取代基选自卤原子、羟基、硝基、氰基、具有1-6个碳原子的直链或支链烷基、具有1-6个碳原子的直链或支链烷氧基(包括其中两个相邻基团形成缩醛键的情况)、具有1-6个碳原子的直链或支链烷硫基、具有1-6个碳原子的直链或支链烷基磺酰基、具有1-6个碳原子的直链或支链酰基、具有1-6个碳原子的直链或支链酰氨基、取代或未取代的N-酰苯胺基、三卤代甲基、三卤代甲氧基、苯基、氧代基、COOR3和可以由一个或更多个卤原子取代的苯氧基；并且这些取代基中的一个或多个可以在所述环的任选位置取代；和X代表次甲基(-CH＝)或氮原子。实施本发明的最佳方式由以上式(1)代表的本发明化合物中的取代基表示如下。
R1和R2可以是相同或不同并且各自独立代表氢原子、卤原子、三卤代甲基、氰基、羟基、具有1-4个碳原子的烷基、具有1-4个碳原子的烷氧基。或者，R1和R2一起代表-O-CH2-O-、-O-CH2CH2-O-或-CH2CH2CH2-，在这种情况下，这些基团可以由一个或更多个具有1-4个碳原子的烷基取代。
作为R1和R2的具有1-4个碳原子的烷基的特定实例包括甲基、乙基、正-或异-丙基和正-、异-、仲-或叔-丁基。优选的实例是甲基。具有1-4个碳原子的烷氧基的特定实例包括甲氧基、乙氧基、正-或异-丙氧基和正-、异-、仲-或叔-丁氧基。
R1和R2优选的实例包括氢原子、卤原子、三卤代甲基、氰基、羟基、具有1-4个碳原子的烷基和具有1-4个碳原子的烷氧基。更优选的实例包括氢原子、卤原子、三卤代甲基、氰基、具有1-4个碳原子的烷基和具有1-4个碳原子的烷氧基，更加优选的实例包括氢原子、氯原子、氟原子、三氟代甲基、甲基、甲氧基和乙氧基，而特别优选的实例包括氢原子、甲基和甲氧基。
A代表取代或未取代的直链、环状或支链的具有1-7个碳原子的亚烷基或亚链烯基。未取代、直链、环状或支链的具有1-7个碳原子的亚烷基的实例包括亚甲基、亚乙基、正-或异-亚丙基、2，2-二甲基亚丙基、正-、异-或叔-亚丁基、1，1-二甲基亚丁基、正-亚戊基和亚环己基。更优选的实例包括亚乙基、正-亚丙基、2，2-二甲基亚丙基和正-或叔-亚丁基。更加优选的实例包括正-亚丙基和2，2-二甲基亚丙基。特别优选的实例是正-亚丙基。未取代的直链或支链的具有1-7个碳原子的亚链烯基包括1，2-亚乙烯基、1，3-亚丙烯基、亚丁烯基和亚戊烯基。
虽然所述亚烷基或亚链烯基可以被一个或更多个-O-、-S-、-SO2-和-NR3-(其中R3代表氢原子或具有1-6个碳原子的直链或支链烷基)间断，但是这些原子或原子基团不直接连接在M上。特定的实例包括间断的亚乙基、正-亚丙基或正-或叔-亚丁基。更特定的实例包括-CH2OCH2-、-CH2OCH2CH2-、-CH2SCH2-、-CH2SCH2CH2-、-CH2SO2CH2-、-CH2SO2CH2CH2-、-CH2NR4CH2-和-CH2NR4CH2CH2-。优选的实例包括-CH2OCH2-、-CH2SCH2-和-CH2SO2CH2-。
所述亚烷基可以具有的取代基选自卤原子、羟基、硝基、氰基、具有1-6个碳原子的直链或支链烷基、具有1-6个碳原子的直链或支链烷氧基(包括其中两个相邻基团形成缩醛键的情况)、具有1-6个碳原子的直链或支链烷硫基、具有1-6个碳原子的直链或支链烷基磺酰基、具有1-6个碳原子的直链或支链酰基、具有1-6个碳原子的直链或支链酰氨基、三卤代甲基、三卤代甲氧基、苯基、氧代基和可以由一个或更多个卤原子取代的苯氧基。这些取代基中的一个或更多个可以各自独立地结合到亚烷基或亚链烯基的任选位置上。
卤原子的实例包括氟原子、氯原子、溴原子和碘原子。优选的实例是氟原子和氯原子。
具有1-6个碳原子的直链或支链烷基的特定实例包括甲基、乙基、正-或异-丙基和正-、异-、仲-或叔-丁基，而优选的实例是甲基和乙基。更优选的实例是甲基。
具有1-6个碳原子的直链或支链烷氧基的特定实例包括甲氧基、乙氧基、正-或异-丙氧基和正-、异-、仲-或叔-丁氧基，而优选的实例是甲氧基和乙氧基。更优选的实例是甲氧基。
具有1-6个碳原子的直链或支链烷硫基的特定实例包括甲硫基、乙硫基、正-或异-丙硫基和正-、异-、仲-或叔-丁硫基，优选的实例是甲硫基和乙硫基。更优选的实例是甲硫基。
具有1-6个碳原子的直链或支链烷基磺酰基的特定实例包括甲基磺酰基、乙基磺酰基、正-或异-丙基磺酰基和正-、异-、仲-或叔-丁基磺酰基，优选的实例是甲基磺酰基和乙基磺酰基。更优选的实例是甲基磺酰基。
具有1-6个碳原子的直链或支链酰基的实例包括乙酰基、乙基羰基、正-或异-丙基羰基和正-、异-、仲-或叔-丁基羰基，优选的实例是乙酰基和乙基羰基。更优选的实例是乙酰基。
具有1-6个碳原子的直链或支链酰氨基的特定实例包括乙酰基氨基、乙基羰基氨基、正-或异-丙基羰基氨基和正-、异-、仲-或叔-丁基羰基氨基，优选的实例是乙酰基氮基和乙基羰基氨基。更优选的实例是乙酰基氨基。
三卤代甲基的特定实例是三氟代甲基、三溴代甲基和三氯代甲基。优选的实例是三氟代甲基。
尤其，A优选是取代或未取代、具有1-7个碳原子的直链、环状或支链亚烷基{虽然它可以由一个或更多个-O-、-S-、-SO2-和-NR3-(其中NR3如上所定义)间断，但是这些原子或原子基团不直接结合到M上}。优选的实例包括-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2C(＝O)CH2-、-CH2OCH2-、-CH2SCH2-、-CH2S(＝O)CH2-、-CH2CF2CH2-、-CH2SO2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-、-CH2C(CH3)2CH2-、-CH2SO2CH2CH2-、-CH2C(＝O)CH2CH2-、-CH2C(＝O)(CH3)2CH2-和-CH2C(＝O)C(＝O)CH2-。更优选的实例是-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH2C(＝O)CH2-、-CH2OCH2-、-CH2SCH2-、-CH2S(＝O)CH2-、-CH2CF2CH2-、-CH2SO2CH2-和-CH2C(CH3)2CH2-。更加优选的实例是-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-和-CH2C(CH3)2CH2-。特别优选的实例是-CH2CH2CH2-。
E代表-COOR3、-SO3R3、-CONHR3、-SO2NHR3、四唑-5-基、5-氧代-1，2，4-噁二唑-3-基或5-氧代-1，2，4-噻二唑-3-基(其中R3代表氢原子或具有1-6个碳原子的直链或支链烷基)。
R3的实例包括氢原子、甲基、乙基、正-或异-丙基和正-、异-、仲-或叔-丁基。优选的实例是氢原子、甲基和乙基。特别优选的实例是氢原子。
尤其，E优选的实例是-COOR3、-SO3R3和四唑-5-基。更优选的实例是-COOR3基团。特别优选的实例是-COOH基团。
G代表取代或未取代、具有1-6个碳原子(可以被一个或更多个-O-、-S-、-SO2-和-NR3-间断)的直链或支链亚烷基。这里R3如上所定义。另外，在含有这些杂原子或原子基团的情况下，它们不直接结合到苯并咪唑环上。所述亚烷基可以具有的取代基选自卤原子、羟基、硝基、氰基、具有1-6个碳原子的直链或支链烷基、具有1-6个碳原子的直链或支链烷氧基(包括其中两个相邻基团形成缩醛键的情况)、三卤代甲基、三卤代甲氧基、苯基和氧代基。G的特定实例包括-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CO-、-CH2CH2O-、-CH2CONH-、-CO-、-SO2-、-CH2SO2-、-CH2S-和-CH2CH2S-，而优选的实例是-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CO-和-CH2CH2O-。更优选的实例是-CH2-和-CH2CH2-并且特别优选的实例是-CH2-。这些基团在左侧结合到苯并咪唑环的1位(N原子)上，而在右侧结合到J上。
M代表一个单键或-S(O)m-，其中m代表0-2的整数。M优选的实例是-S-和-SO2-。特别优选的实例是-S-。
J代表取代或未取代的具有4-10个碳原子的杂环基团并且在它的环上含有一个或更多个选自氧原子、氮原子和硫原子的杂原子。然而，不包括咪唑环。另外，J限于可以化学合成的基团。
具有4-10个碳原子并且在它的环上含有一个或更多个选自氧原子、氮原子和硫原子的杂原子的未取代杂环基的特定实例包括吡啶基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、嘧啶基、噁唑基、异噁唑基、苯并呋喃基、苯并咪唑基、喹啉基、异喹啉基、喹喔啉基、苯并噁二唑基、苯并噻二唑基、吲哚基、苯并噻唑基、苯并噻吩基和苯并异噁唑基。优选的实例是双环杂环。更优选的实例是苯并呋喃基、苯并咪唑基、喹啉基、异喹啉基、喹喔啉基、苯并噁二唑基、苯并噻二唑基、吲哚基、苯并噻唑基、苯并噻吩基和苯并异噁唑基，而特别优选的实例是苯并噻吩基或吲哚基。
芳族杂环基可以具有的取代基选自卤原子、羟基、硝基、氰基、具有1-6个碳原子的直链或支链烷基、具有1-6个碳原子的直链或支链烷氧基(包括其中两个相邻基团形成缩醛键的情况)、具有1-6个碳原子的直链或支链烷硫基、具有1-6个碳原子的直链或支链烷基磺酰基、具有1-6个碳原子的直链或支链酰基、具有1-6个碳原子的直链或支链酰氨基、取代或未取代的N-酰苯胺基、三卤代甲基、三卤代甲氧基、苯基和可以由一个或更多个卤原子取代的苯氧基。这些取代基中的一个或更多个可以独立结合到所述环的任选位置上。
所述卤原子的实例是氟原子、氯原子、溴原子和碘原子。优选的实例是氟原子和氯原子。
具有1-6个碳原子的直链或支链烷基的特定实例包括甲基、乙基、正-或异-丙基和正-、异-、仲-或叔-丁基，优选的实例是甲基和乙基。更优选的实例是甲基。
具有1-6个碳原子的直链或支链烷氧基的特定实例包括甲氧基、乙氧基、正-或异-丙氧基、正-、异-、仲-或叔-丁氧基和亚甲基二氧基，优选的实例是甲氧基和乙氧基。更优选的实例是甲氧基。
具有1-6个碳原子的直链或支链烷硫基的特定实例包括甲硫基、乙硫基、正-或异-丙硫基和正-、异-、仲-或叔-丁硫基，优选的实例是甲硫基和乙硫基。更优选的实例是甲硫基。
具有1-6个碳原子的直链或支链烷基磺酰基的特定实例包括甲基磺酰基、乙基磺酰基、正-或异-丙基磺酰基和正-、异-、仲-或叔-丁基磺酰基，优选的实例是甲基磺酰基和乙基磺酰基。更优选的实例是甲基磺酰基。
具有1-6个碳原子的直链或支链酰基的特定实例包括乙酰基、乙基羰基、正-或异-丙基羰基和正-、异-、仲-或叔-丁基羰基，优选的实例是乙酰基和乙基羰基。更优选的实例是乙酰基。
具有1-6个碳原子的直链或支链酰基氨基的特定实例包括乙酰基氨基、乙基羰基氨基、正-或异-丙基羰基氨基和正-、异-、仲-或叔-丁基羰基氨基，优选的实例是乙酰基氨基和乙基羰基氨基。更优选的实例是乙酰基氨基。
三卤代甲基的特定实例包括三氟代甲基、三溴代甲基和三氯代甲基。
X代表-CH＝基团或氮原子，优选的实例是-CH＝基团。
由以上式(1)代表的化合物的优选实例包括多组由先前作为优选实例所述每一基团的组合形成的化合物。虽然不打算限制这些基团，但那些在以下表中所述的基团是特别优选的。尤其，表中的那些化合物的优选实例包括第34、38、39、41、42、52、54、56、58、59、63、135、137、148、152、154、244、340、436、514、519、521、532、534、536、538、615、628、1112和1114号化合物。
另外，在以下表中A1-A3和J1-J32是由下式代表的基团。在所述式中，虽然E、G、M、m和X如上所定义，但以下用代表性实例介绍它们，即E是COOH，G是CH2，M是S(m是0)或单键(在表中用“-”表示)和X是-CH＝。然而这并不意味着本发明受限于这些化合物。
可以通过以下所示的合成方法(A)或合成方法(B)制备本发明的苯并咪唑衍生物(1)，其中E是COOR3和M是S
合成方法(A) 其中Z代表卤素或铵基，并且R1、R2、R3、A、G、J和X如上所定义。
也就是说，通过还原2-硝基苯胺衍生物(a1)的硝基得到邻-苯二胺化合物(a2)。与CS2反应并得到化合物(a3)后，它与卤化酯衍生物(a4)反应得到(a5)，随后进一步与卤化衍生物或铵盐(a6)反应可以得到本发明的化合物(a7)。另外，如果需要可以通过将其水解得到其中R3是氢原子的苯并咪唑衍生物(a8)。
根据常规催化还原的条件，通过与氢气在室温到100℃温度之间，在催化剂如Pd-C存在下，在酸性、中性或碳性条件下可以进行硝基的还原。另外，它也可以通过在酸性条件下用锌或锡进行处理的方法，或通过在中性或碱性条件下用锌粉的方法进行。
邻-苯二胺衍生物(a2)与CS2之间的反应可以根据例如在The Journalof Organic Chemistry(J.Org.Chem.)，1954，第19卷，第631-637页(吡啶溶液)或在Journal of Medical Chemistry(J.Med.Chem.)，1993，第36卷，第1175-1187页中所述的方法(乙醇溶液)进行。
硫代苯并咪唑化合物(a3)与卤代酯(a4)之间的反应可以根据常规S-烷基化反应条件，在0℃-200℃之间的温度下，在碱如NaH、Et3N、NaOH或K2CO3存在下搅拌进行。
硫代苯并咪唑化合物(a5)与卤化衍生物或铵盐(a6)之间的反应可以根据常规N-烷基化或N-酰基化反应条件，通过在0℃-200℃之间的温度下，在碱如NaH、Et3N、NaOH、K2CO3或Cs2CO3存在下搅拌进行。
使用碱如氢氧化锂或酸如盐酸或三氟乙酸的水解方法优选用于羧基保护基团R3的消除反应。
合成方法(B) 也就是说，通过用合适的保护基团L保护2-硝基苯胺衍生物(a1)的氨基得到(b1)。然后它与卤化衍生物或铵盐(a6)反应得到(b2)，并且通过除去保护基团L得到(b3)。通过将(b3)的硝基还原得到邻-苯二胺衍生物(b4)。使其与CS2或KSC(＝S)OEt反应并得到化合物(b5)后，使其与卤化酯衍生物(a4)反应可以得到本发明的苯并咪唑衍生物(a7)。另外，根据需要可以将其水解得到其中R3是氢原子的本发明的苯并咪唑衍生物。
也可以通过未保护的卤化衍生物、铵盐(a6)或醛衍生物(b6)与2-硝基苯胺衍生物(a1)反应直接得到化合物(b3)。保护基团L的实例包括三氟乙酰基、乙酰基、叔-丁氧基羰基和苄基。2-硝基苯胺衍生物(a1)与醛衍生物(b6)之间的反应可以在0℃-200℃温度下，在溶剂如乙醇、甲醇或二氯甲烷中，使用多氢化合物如LiAlH4、NaBH4、NaBH3CN或NABH(OAc)3或还原剂如乙硼烷，通过常规还原氨基化进行。另外，邻-苯二胺衍生物(b4)与CS2之间的反应可以以与合成方法(A)相同的方式进行，而与KSC(＝S)OEt的反应可以根据例如在Organic Synthesis(OS)，1963，第4卷，第569-570页中所述方法进行。其它反应可以以与合成方法(A)相同的方式进行。
可以根据以下合成方法(C)制备本发明的苯并咪唑衍生物(1)，在这种情况下，E是COOR3，M是S和G是酰胺键合成方法(C) 其中，Q代表亚甲基、亚苯基等，Z代表卤素，R1、R2、R3、A、J和X如上所定义，前提是在酸性条件下R3是不活泼的保护基团如甲基或乙基。
也就是说，通过硫代苯并咪唑化合物(a5)与叔-丁基酯卤化衍生物(c1)反应得到化合物(c2)。然后在酸性条件下将其水解得到(c3)。然后使其与胺衍生物(c4)缩合可以得到本发明的化合物(c5)。另外，根据需要可以将其水解得到其中R3是氢原子的本发明的苯并咪唑衍生物。
使用缩合剂的一般方法用于缩合酰胺化的情况。缩合剂的实例包括DCC、DIPC、EDC＝WSCI、WSCI·HCl、BOP和DPPA，它们可以单独或与HONSu、HOBt或HOOBt混合使用。所述反应在0℃-200℃的温度条件下，在合适的溶剂如THF、氯仿或叔-丁醇中进行。其它的反应可以以与合成方法(A)相同的方式进行。
可以根据以下合成方法(D)制备本发明的苯并咪唑衍生物(1)，在这种情况下E是COOR3，M是S和G具有一个醚键
合成方法(D) 其中，Z代表卤素，R1、R2、R3、A、J和X如上所定义。
也就是说，通过例如卤化醇衍生物(d1)与硫代苯并咪唑化合物(a5)反应得到化合物(d2)。然后它与酚衍生物(d3)反应可以得到本发明的化合物(d4)。另外，根据需要可以将其水解得到其中R3是氢原子的苯并咪唑衍生物。
通过Mitsunobu反应和相似的反应，在0℃-200℃温度条件下，在合适的溶剂如N-甲基吗啉或THF中，使用膦化合物如三苯基膦或三丁基膦以及偶氮化合物如DEAD或TMAD进行醚化反应。其它的反应可以以与合成方法(A)相同的方式进行。
可以根据以下合成方法(E)制备本发明的苯并咪唑化合物(1)，在这种情况下E是四唑-5-基和M是S合成方法(E) 其中，R1、R2、A、G、J和X如上所定义。
通过与多种叠氮化合物反应，将腈形式(e1)转化为四唑形式(e2)。叠氮化合物的实例包括三烷基锡叠氮化合物如叠氮化三甲基锡、叠氮酸和其铵盐。当使用有机锡叠氮化合物时，应该使用相对化合物(e1)约1-4摩尔的量。另外，当使用叠氮酸或其铵盐时，应该使用相对化合物(e1)1-5摩尔量的叠氮化钠和氯化铵或叔胺如三乙胺。每一个反应在0℃-200℃温度下，通过使用溶剂如甲苯、苯或DMF进行。
根据以下合成方法(F)可以制备本发明的苯并咪唑衍生物(1)，在这种情况下M是SO或SO2合成方法(F) 其中，R1、R2、R3、A、G、J和X如上所定义。
也就是说，通过苯并咪唑衍生物(a7)与过氧化物在合适的溶剂中反应得到亚砜衍生物(a7)和/或砜衍生物(f2)。所使用的过氧化物的实例包括过苯甲酸、间-氯代过苯甲酸、过乙酸和过氧化氢，而所使用的溶剂的实例包括氯仿和二氯甲烷。对于化合物(a7)和过氧化物的使用比例没有具体的限制，尽管所述比例应在大范围内适当地选择，但一般优选使用约1.2-5摩尔。每一个反应一般在0-50℃，优选0℃到室温下进行并且每一个反应通常在约4-20小时内完成。
可以根据以下合成方法(G)制备本发明的苯并咪唑衍生物(1)，在这种情况下M是单键合成方法(G) 其中，X、A、G、J和R3如上所定义。
也就是说，可以通过已知的酰氯衍生物(g1)与二胺化合物(b4)反应得到本发明的苯并咪唑衍生物(g2)。另外，根据需要可以水解(g2)的-COOR3以得到其中R3是氢原子的苯并咪唑衍生物(g3)。
此外，在Journal of Medical Chemistry(J，Med.Chem.)，1993，第36卷，第1175-1187页中叙述了环化反应。
另外，通过参考大量的出版物，可以合成在合成方法(A)到(F)中所述的Z-G-J。
例如，通过参考以下文献和专利说明书，可以合成苯并噻吩卤化衍生物。
J.Chem.Soc.(1965)，774J.Chem.Soc.Perkin Trans 1，(1972)，3011 JACS，74，664，(1951)；美国专利4282227这些化合物也可以通过参考以下文献和专利说明书合成。也就是说，这些化合物不仅可以通过以下文献所述的反应合成，也可以通过一般反应如氧化还原或OH卤化作用的组合来合成。
J.Chem Soc，(1965)，774；Bull Chem Soc Jpn(1968)，41，2215；日本未审查专利公布号10-298180；Sulfur Reports，(1999)，第22卷，1-47；J ChemSoc comm.，(1988)，888J.Heterocyclic Chem.，19，859，(1982)；SyntheticCommunication，(1991)，21，959；Tetrahedron Letters，(1992)，第33卷，第49期，7499；Synthetic Communications，(1993)，23(6)，743；日本未审查专利公布号2000-239270；J.Med Chem.，(1985)，28，1896； Arch Pharm，(1975)，308，7，513；Khim Gerotsikl Soedin，(1973)，8，1026；Bull.Chem.Soc.Jpn.，(1997)，70，891；J.Chem.Soc.Perkin 1，(1973)，750；J.Chem.Soc.Chem.Comm.，(1974)，849；J.Chem.Soc.Comm.(1972)，83。
尤其是，在苯并噻吩3位上的羟甲基形式可以通过参考J.Chem.Soc.Chem.Comm.，(1974)，849容易地合成。
关于碘化物，Cl和Br形式可以通过卤素与NaI等交换得到。
另外，通过合适的胺如二甲基胺与前面提到的苯并噻吩卤化衍生物反应，可以合成苯并噻吩的季胺盐衍生物。另外它也可用以下方法合成合成方法(H) 其中，R代表一个或更多个在以上所提及的J中的取代基，取代基的数量为任选，所述取代基可以是独立的取代基。
也就是说，通过将2-硝基苯胺衍生物(h1)的氨基转变为氰基形式(h2)并与2-巯基乙酸乙酯反应得到环状苯并噻吩衍生物(h3)。此外，通过将氨基氰化为氰基形式(h4)，随后酯水解得到羧酸(h5)。然后将所述羧酸脱羧基得到(h6)。接着，将氰基还原转化为氨基形式(h7)，随后N-二甲基化得到(h8)，然后通过N-甲基化作用可以得到季胺盐(h9)。
通过使用如盐酸或亚硫酸钠将所述氨基转变为重氮基，然后进一步与氯化铜(I)和氰化钾反应转变为氰基形式，进行2-硝基苯胺衍生物(h1)的氨基的氰化作用。
通过参考例如在Synthetic Communications，23(6)，743-748(1993)；或Farmaco，Ed.Sci.，43，1165(1988)中所述的方法，通过与2-巯基乙酸乙酯在合适的溶剂如DMF中，在合适的碱性试剂存在下加热，可以进行从氰基形式(h2)到苯并噻吩衍生物(h3)的反应，得到环状苯并噻吩衍生物(h3)。
对于(h3)的氰化作用而言，通过氰化铜和亚硫酸叔-丁基酯在合适的溶剂如DMSO中，在合适的温度条件下反应，可以将(h3)转变为氰基形式(h4)。
通过常规使用的方法可以进行酯水解。例如，在合适的溶剂如THF-MeOH中，在合适的碱性试剂如氢氧化钠存在下，通过酯水解可以得到羧酸(h5)。
通过在合适的溶剂如喹啉溶剂中，在铜催化剂存在下加热，可以进行所述羧酸的脱羧反应。
通过例如在合适的溶剂如Et2O-THF中，在合适的温度条件下，使用合适的还原剂如氢化铝锂，可以将氰基还原为氨基得到氨基形式。
通过例如在甲酸或甲醛水溶液中加热，可以进行所述氨基的甲基化。
通过例如与甲基碘在乙醇溶剂中反应，可以将所述氨基转变为季铵盐。
根据例如以下方法可以合成吲哚季铵盐衍生物合成方法(K) 其中，R代表一个或更多个在以上所提及的J中的取代基，取代基的数量为任选，所述取代基可以是独立的取代基。
也就是说，通过烯胺化作用将硝基形式(k1)转化为烯胺(k2)，随后根据Reissert的方法，通过吲哚的环化转化为吲哚形式(k3)。此外，根据N-二甲基化后的Mannich反应得到3位的二甲基氨基甲基形式(k5)，随后通过N-甲基化作用可以得到季铵盐(k6)。
通过例如将间-硝基甲苯衍生物(k1)与N，N-二甲基甲酰胺缩二甲醇和吡咯烷在合适的溶剂如DMF中一起加热，可以进行所述烯胺化反应。
通过在室温下，用氢气在Raney镍存在下、在合适的溶剂如甲苯中反应，可以进行吲哚环化反应。
通过例如在DMF溶剂中加热，使用叔丁醇钾或草酸二甲酯，可以进行N-甲基化。
通过例如使用Mannich反应并在室温下、在二噁烷-乙酸溶剂中，使用甲醛水溶液或二甲基胺水溶液反应，可以进行3位的二甲基氨基甲基化。
另外，通过参考Heterocycles，第22卷，第1期，195，(1984)的文献可以合成吲哚衍生物。
此外，通过参考文献如Heterocychc Compound Chemistry，(Kondansha Scientific，H.Yamanaka等)中的其它参考文章，可以合成苯并噻吩、吲哚和其它杂环卤化物和季胺盐。
根据需要，也可以将本发明的苯并咪唑衍生物转化为医学上可接受的、无毒的阳离子盐。这些盐的实例包括碱金属离子如Na+和K+，碱土金属离子如Mg2+和Ca2+和金属离子如Al3+和Zn2+，以及有机碱如氨、三乙胺、1，2-乙二胺、丙二胺、吡咯烷、哌啶、哌嗪、吡啶、赖氨酸、胆碱、乙醇胺、N，N-二甲基乙醇胺、4-羟基哌啶、葡糖胺和N-甲基葡糖胺。尤其优选Na+、K+、Ca2+、赖氨酸、胆碱、N，N-二甲基乙醇胺和N-甲基葡糖胺。
本发明的苯并咪唑衍生物强烈抑制人食糜酶活性。更准确地说，IC50为1000nM或更低，优选0.01nM或者大约1000nM，更优选0.05nM或者大约500nM。具有如此优越的人食糜酶抑制活性的本发明的苯并咪唑衍生物可以用作临床适用于多种疾病的预防药物和/或治疗药物。
本发明的苯并咪唑衍生物可以作为与药学上可接受的载体一起的药用组合物(通过使所述药用组合物成为各种药物形式)口服或非口服给予。非口服给药的实例包括静脉内、皮下、肌内、经皮、直肠、鼻和眼内给药。
在口服制剂的情况下，所述药用组合物的药物形式的实例包括片剂、丸剂、颗粒剂、散剂、液体、悬浮液、糖浆和胶囊。
在此，对于制备片剂的方法而言，通过常规方法，使用药学上可接受的载体如溶媒、粘合剂或崩解剂可以制备片剂。通过常规方法，使用溶煤等，以与片剂相同的方式可以制备丸剂、颗粒剂和散剂。根据常规方法，使用甘油酯、醇、水或植物油可以制备液体剂、悬浮液和糖浆。通过将颗粒、粉末或液体等填充到由明胶等制成的胶囊中可以制备胶囊剂。
非口服制剂可以以注射剂的形式给药，在这种情况下通过静脉内、皮下或肌内给药。注射剂的实例包括其中将苯甲酸衍生物溶于水溶性液体剂如生理盐水中的情况，或者其中将其溶于由有机酯如植物油组成的非水性液体剂中的情况。
在经皮给药的情况下，可以使用如软膏或乳膏的药物形式。可以通过将苯甲酸衍生物与油或凡士林等混合制备软膏，可以将苯甲酸衍生物与乳化剂混合制备乳膏。
在直肠给药的情况下，可以使用明胶软胶囊等以栓剂形式给药。
在经鼻给药的情况下，可以使用由液体或粉末组合物组成的制剂。所使用的液体制剂的基质的实例包括水、盐水、磷酸盐缓冲液和乙酸盐缓冲液，并且也可以含有表面活性剂、抗氧化剂、稳定剂、防腐剂或增稠剂。粉末制剂的基质实例包括吸湿性基质如水溶性聚丙烯酸酯、纤维素低级烷基醚、聚乙二醇聚乙烯基吡咯烷酮、直链淀粉和plurane，或水不溶性基质如纤维素、淀粉、蛋白质、橡胶和交联乙烯基聚合物，但是优选水溶性基质。另外，它们也可以作为混合物使用。此外，可以将抗氧化剂、着色剂、防腐剂、antiseptic或防污水生物剂加入到粉末制剂中。所述液体制剂和粉末制剂可以通过使用喷雾器等给药。
在眼内给药的情况下，可以使用水性或非水性洗眼剂。水性洗眼剂可以使用无菌纯水或生理盐水作为溶剂。在仅使用无菌纯水作为溶剂的情况下，可以通过加入表面活性剂、聚合物增稠剂等，以水性悬浮洗眼剂的形式使用。另外，也可以通过加入增溶剂如非离子表面活性剂，以可溶性洗眼剂的形式使用。非水性洗眼剂可以使用用于注射的非水性溶剂作为溶剂，并且也可以以非水性悬浮洗眼剂的形式使用。
在以非洗眼剂的形式眼部给药的情况下，药物形式的实例包括眼用软膏、敷用液体、喷雾剂和附着剂。
另外，在由鼻或嘴吸入的情况下，通过与常规使用的药用溶媒混合，以溶液或悬浮液的形式作为例如气雾剂吸入本发明的苯并咪唑衍生物。另外，本发明的苯并咪唑衍生物可以以干粉的形式，使用吸入器以直接与肺接触的形式给药。
根据需要，可以将药学上容许的载体如等渗剂、防腐剂、antiseptics、保湿剂、缓冲剂、乳化剂、分散剂和稳定剂加入到这些不同的制剂中。
另外，根据需要，通过进行处理例如与消毒剂混合，用截留细菌滤器过滤、加热或辐照，可将这些不同的制剂灭菌。或者，可以制备无菌固体制剂并在临用前溶于或悬浮在合适的无菌液体中后使用。
虽然本发明的苯并咪唑衍生物的剂量根据疾病的类型、给药途径和症状、病人的年龄、性别和体重等而变化，但是在口服给药的情况下，常规剂量为1-500mg/天/人，优选10-300mg/天/人，在非口服给药如静脉内、皮下、肌内、经皮、直肠、鼻、眼内或吸入给药的情况下，常规剂量为0.1-100mg/天/人，优选0.3-30mg/天/人。
另外，在作为预防药使用本发明的苯并咪唑衍生物的情况下，它可以根据以前熟知的方法，根据每个症状给药。
本发明的预防药和/或治疗药的目标疾病的实例包括呼吸性疾病如支气管哮喘、炎性和变应性疾病如变应性鼻炎、特应性皮炎和荨麻疹、心血管疾病如动脉硬化损害、血管收缩、外周循环紊乱、肾功能不全和心功能不全以及骨和软骨代谢性疾病如类风湿性关节炎和骨关节炎。
实施例以下根据本发明的制备实例、实施例和试验实施例提供对本发明的详细说明。但是，在任何意义上本发明的范围都不受限于这些实施例。[参考实施例1]5，6-二甲基苯并咪唑-2-硫醇的制备 将40ml(0.66mmol)二硫化碳加入到4.5g(33mmol)5，6-二甲基邻苯二胺的吡啶溶液(40ml)中。将得到的溶液搅拌18小时(同时在加热下回流)后，加入水随后用乙酸乙酯萃取。用无水硫酸镁干燥乙酸乙酯层后，在减压下浓缩并在80℃、减压下干燥6小时，得到4.1g目标化合物(产率70％)。1H-NMR(270MHz，DMSO-d6)(ppm)12.30(br，1H)，6.91(s，2H)，2.21(s，6H)[参考实施例2]4-(5，6-二甲基苯并咪唑-2-基硫基)丁酸乙酯的制备 将35μl(0.25mmol)三乙胺和36μl(0.25mmol)4-溴代丁酸乙酯加入到36mg(0.20mmol)得到的5，6-二甲基苯并咪唑-2-硫醇中。将得到的溶液在80℃下搅拌12小时后，加入水随后用乙醚萃取。用无水硫酸镁干燥乙醚层后，将所述物质浓缩并将残余物经硅胶柱层析(己烷∶乙酸乙酯＝4∶1)纯化，得到54mg目标化合物(产率92％)。通过使用LC-MS所得分子量鉴定化合物进行所述化合物的确认。计算值M＝292.12，实测值(M+H)+＝293.40[参考实施例3]根据与参考实施例2相同的方法合成以下化合物。通过使用LC-MS所得分子量鉴定化合物进行所述化合物的确认。4-(苯并咪唑-2-基硫基)丁酸乙酯计算值M＝264.09，实测值(M+H)+＝293.404-(5，6-二氟代苯并咪唑-2-基硫基)丁酸乙酯计算值M＝300.07，实测值(M+H)+＝301.3[参考实施例4]3-溴代甲基-5-甲基苯并[b]噻吩的制备步骤13-羟基甲基-对-硝基甲苯的制备 将5.02g(27.7mmol)5-甲基-2-硝基苯甲酸溶于20ml THF中，随后滴加11.1ml 10.2 M硼烷二甲硫复合物并在80℃下加热。1.5小时后，将30ml 1M的盐酸滴加入到所述反应体系中，同时用冰冷却并搅拌。然后将所述体系在减压下浓缩，得到100ml含水相，随后用乙酸乙酯(100ml×2)萃取。用饱和盐水洗涤乙酸乙酯层后，经硫酸镁干燥有机层，随后在减压下浓缩并干燥，得到3.91g目标化合物(产率85％)。步骤23-甲酰基-对-硝基甲苯的制备 将5.5ml(63.2mmol)草酰氯加入到50ml二氯甲烷中并冷却至-60℃。20分钟后，加入9.13ml(138.6mmol)DMSO并在-60℃下搅拌，15分钟后在-60℃下加入在步骤1中得到的3.91g(23.3mmol)3-羟基甲基-对-硝基甲苯并搅拌。30分钟后，在-60℃下滴加入45ml三乙胺，然后恢复到室温。在减压下浓缩后，将0.1M盐酸加入到残余物中随后用乙酸乙酯(150ml×2)萃取。然后，用硫酸镁干燥有机层并在减压下浓缩，得到5.02g目标化合物(粗品产率130％)。步骤32-羧基乙基-5-甲基苯并[b]噻吩的制备 将在步骤2中得到的5.02g(63.2mmol)3-甲酰基-对-硝基甲苯溶于50ml DMF中，随后加入3.06ml(28.1mmol)巯基乙酸乙酯和4.85g(35.1mmol)碳酸钾并在50℃下搅拌。9.5小时后，将温度升至80℃随后再加热100分钟。反应完成后，将250ml水加入到所述反应溶液中，随后用乙酸乙酯(100ml×3)萃取并用硫酸镁干燥。在减压下浓缩溶剂后，将残余物经硅胶柱层析(己烷∶乙酸乙酯＝8∶1)纯化，随后再经硅胶柱层析(己烷∶乙酸乙酯＝10∶1)纯化，得到2.48g(11.2mmol)目标化合物(产率48％)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)(ppm)7.98(s，1H)，7.73(d，1H，J＝8.28Hz)，7.65(s，1H)，7.27(d，1H，J＝8.32Hz)，4.39(q，2H)，2.47(s，3H)，1.41(s，3H)步骤42-羧基-5-甲基苯并[b]噻吩的制备 将30ml甲醇、THF和2M氢氧化钠水溶液(1∶1∶1)的溶液加入到在步骤3中得到的2.17g(9.87mmol)2-羧基乙基-5-甲基苯并[b]噻吩中并回流。20分钟后，将所述溶液用酸中和，随后在减压下浓缩并回收沉淀物。然后将该沉淀物用50ml水洗涤并干燥，得到2.03g(10.5mmol)目标化合物(粗品产率107％)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)(ppm)7.94(s，1H)，7.74(d，1H，J＝8.56Hz)，7.69(s，1H)，7.27(d，1H，J＝8.30Hz)，2.47(s，3H)步骤55-甲基苯并[b]噻吩的制备 将在步骤4中得到的2.03g(9.87mmol)2-羧基-5-甲基苯并[b]噻吩溶于10ml喹啉中，随后加入799.2mg铜粉并加热至190℃。100分钟后，将所述溶液冷却，随后加入40ml 0.5M的盐酸并用乙酸乙酯(40ml×2)萃取。用40ml水洗涤有机层，然后经硫酸镁干燥。在减压下浓缩溶剂后，经硅胶柱层析(己烷∶乙酸乙酯＝20∶1)纯化，得到1.41g(9.51mmol)目标化合物(从步骤4的两步产率96％)。1H-NMR(270MHz，CDCl3)(ppm)7.76(d，1H，J＝8.24Hz)，7.62(s，1H)，7.40(d，1H，J＝5.44Hz)，7.24(m，1H)，7.17(d，1H，J＝8.24Hz)，2.47(s，3H)步骤63-氯代甲基羰基-5-甲基苯并[b]噻吩的制备 将10ml二氯甲烷加入到1.33g(9.97mmol)三氯化铝中，随后用干冰和丙酮冷却至-65℃。10分钟后，滴加入1.12ml(10.0mmol)三氯代乙酰氯。再过20分钟后，滴加10ml含有在步骤5中得到的1.41g(9.51mmol)5-甲基苯并[b]噻吩的二氯甲烷溶液，然后在约-65℃下搅拌。1小时40分钟后，将温度升至-40℃。再经过1小时10分钟后，将温度升至0℃。再经1小时40分钟后，加入10ml 1M盐酸并搅拌。将20ml水加入所述反应体系中后，经液体分离方法除去二氯甲烷层，然后再用乙酸乙酯萃取含水层，将含水层与二氯甲烷层合并，然后在减压下浓缩。将得到的3.2g残余物经硅胶柱层析(硅胶120g，己烷)纯化，得到686.7mg(2.34mmol)目标化合物(产率24％)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)(ppm)8.89(s，1H)，8.51(s，1H)，7.78(d，1H，J＝8.28Hz)，7.30(d，1H，J＝8.32Hz)，2.53(s，3H)步骤73-羧基-5-甲基苯并[b]噻吩的制备 将在步骤6中得到的686.7mg(2.34mmol)3-氯代甲基羰基5-甲基苯并[b]噻吩溶于2.0ml THF和3.0ml MeOH中，随后加入2ml 2M氢氧化钠水溶液并在室温下搅拌。2小时45分钟后，加入5ml 2M氢氧化钠水溶液，随后加热至60℃。冷却30分钟后加入10ml 2M盐酸和30ml水，将该溶液用乙酸乙酯萃取，然后在减压下浓缩并干燥，得到438.9mg(2.28mmol)目标化合物(产率97％)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)(ppm)8.44(s，1H)，8.36(s，1H)，7.74(d，1H，J＝8.04Hz)，7.22(d，1H，J＝8.28Hz)，2.50(s，3H)步骤83-羟基甲基-5-甲基苯并[b]噻吩的制备 将在步骤7中得到的438.9mg(2.28mmol)3-羧基-5-甲基苯并[b]噻吩溶于5ml THF中，随后加入BH3.THF复合物溶液并在室温下搅拌。1小时15分钟后，加入4ml 2M盐酸并搅拌，随后加入50ml乙酸乙酯。将有机层用30ml水洗涤并经硫酸镁干燥，然后在减压下浓缩。将得到的残余物用Biotage(己烷∶乙酸乙酯＝4∶1)纯化，得到347.6mg(1.95mmol)目标化合物(产率86％)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)(ppm)7.74(d，1H，J＝8.04Hz)，7.65(s，1H)，7.34(s，1H)，7.19(d，1H，J＝8.28Hz)，4.89(s，2H)，2.48(s，3H)步骤93-溴代甲基-5-甲基苯并[b]噻吩的制备 将在步骤8中得到的326mg(1.83mmol)3-羟基甲基-5-甲基苯并[b]噻吩溶于10ml二氯甲烷中，随后加入0.262ml三溴化磷并在室温下搅拌。30分钟后，加入30ml水，然后搅拌10分钟并用二氯甲烷(30ml×2)萃取。然后在减压下浓缩有机层并干燥，得到397.5mg(1.65mmol)目标化合物(产率90％)。1H-NMR(270MHz，CDCl3)(ppm)7.74-7.67(m，2H)，7.46(s，1H)，7.22(d，1H，J＝8.24Hz)，4.74(s，2H)，2.51(s，3H)[参考实施例5]碘化((4-甲基苯并[b]噻吩-3-基)甲基)三甲基铵的制备步骤12-氰基-3-硝基甲苯的制备 将76.07g(500mmol)2-氨基-3-硝基甲苯加入到100g(990mmol)的36％盐酸和500g冰中，随后在0℃下剧烈搅拌。然后，缓慢滴加80ml含有37.95g(550mmol)亚硝酸钠的水溶液，同时保持温度在0-5℃之间。滴加完成后，加入100ml甲苯，然后在0℃下搅拌30分钟。将该反应溶液放置在冰-NaCl浴中，随后缓慢加入碳酸氢钠，同时剧烈搅拌以便中和pH为约6(重氮盐溶液(1))。
在0℃下，将含有260.5g(4000mmol)氰化钾的水溶液(550ml)缓慢加入到含有99.0g(1000mmol)氯化铜(I)的水溶液(650ml)中，搅拌90分钟，然后加入200ml乙酸乙酯。然后，在30分钟内将以上所制备的重氮盐溶液(1)滴加到所述溶液中，同时保持温度在0-5℃之间。然后将所述溶液在冰浴中搅拌12小时，然后加温至室温。用乙酸乙酯萃取反应溶液并用水洗涤有机层后，经硫酸镁干燥，随后在减压下浓缩溶剂。然后将残余物经硅胶柱层析(己烷∶乙酸乙酯＝20∶1→10∶1→7∶1→5∶1→3∶1)纯化，得到58.63g(362mmol)目标化合物(产率72％)。1H-NMR(270MHz，CDCl3)(ppm)7.68(2H，m)，8.13(1H，m)，2.715(3H，s)步骤23-氨基-2-乙氧基羰基-4-甲基苯并[b]噻吩的制备 将含有在步骤1中得到的58.63g(362mmol)2-氰基-3-硝基甲苯、47.5g(395mmol)2-巯基乙酸乙酯和57.5g(416mmol)碳酸钾的DMF溶液(250ml)在100℃下搅拌12小时。然后将该反应溶液在减压下浓缩以除去DMF到一定程度。加入水以溶解无机物，随后用乙酸乙酯萃取。用水洗涤有机层后，用硫酸镁干燥，然后在减压下浓缩溶剂。然后将残余物经硅胶柱层析(己烷∶乙酸乙酯＝10∶1)纯化，得到62.86g(267mmol)的目标化合物(产率74％)。1H-NMR(270MHz，CDCl3)(ppm)7.54(d，1H)，7.29(t，1H)，7.03(d，1H)，6.28(s，2H)，4.35(q，2H)，2.82(s，3H)，1.39(t，3H)步骤33-氰基-2-乙氧基羰基-4-甲基苯并[b]噻吩的制备 用氮置换了所述反应体系后，将82.0g(795mmol)亚硝酸叔丁酯和30.9g(345mmol)氰化铜加入到250ml DMSO中并通过在55℃下搅拌30分钟使其溶解。此外，在2小时内缓慢滴加含有在步骤2中得到的62.2g(265mmol)3-氨基-2-乙氧基羰基-4-甲基苯并[b]噻吩的DMSO溶液(100ml)，同时保持温度在55℃。将该反应溶液加温至60℃并搅拌140分钟后，将其冷却至0℃，随后在0℃下缓慢加入水并搅拌1小时。然后将该反应溶液用硅藻土过滤以除去杂质，用二氯甲烷萃取并用水洗涤有机层后，用硫酸镁干燥，随后在减压下浓缩溶剂。然后，将残余物经硅胶柱层析(己烷∶乙酸乙酯＝20∶1→15∶1→10∶1)纯化，得到15.59g(63.6mmol)的目标化合物(产率24％)。1H-NMR(270MHz，CDCl3)(ppm)7.73(d，1H)，7.44(t，1H)，7.30(d，1H)，4.50(q，2H)，2.95(s，3H)，1.47(t，3H)步骤43-氰基-4-甲基苯并[b]噻吩的制备 将在步骤3中得到的15.59g(63.6mmol)3-氰基-2-乙氧基羰基-4-甲基苯并[b]噻吩溶于甲醇(150ml)、THF(150ml)和水(150ml)的混合物中，然后加入30ml 5M氢氧化钠水溶液并在室温下搅拌2小时。在减压下浓缩溶剂后，通过加入1M盐酸使pH下降为4，用乙酸乙酯萃取并用水洗涤有机层后，用硫酸镁干燥。然后在减压下浓缩溶剂得到3-氰基-2-羧基-4-甲基苯并[b]噻吩。将它和1.27g(20mmol)铜粉加入到18ml喹啉中，然后在150℃下搅拌2小时。所述反应溶液冷却后，将其用硅藻土过滤并通过加入盐酸使滤液的pH值低于3以便将作为溶剂的喹啉转移到含水层中，然后用乙酸乙酯萃取。用水洗涤有机层后，用硫酸镁干燥并在减压下浓缩溶剂。然后将残余物经硅胶柱层析(己烷∶乙酸乙酯＝20∶1)纯化，得到9.10g(52.6mmol)的目标化合物(两步的产率83％)。1H-NMR(270MHz，CDCl3)(ppm)8.15(s，1H)，7.74(d，1H)，7.36(t，1H)，7.25(d，1H)，2.91(s，3H)步骤53-((N，N-二甲基氨基)甲基)-4-甲基苯并[b]噻吩的制备
在0℃下，于15分钟内，将含有在步骤4中得到的9.10g(52.6mmol)3-氰基-4-甲基苯并[b]噻吩的乙醚(20ml)和THF(20ml)溶液滴加到50ml的2.0g(53mmol)氢化铝锂的乙醚悬浮液中后，将该溶液在室温下搅拌30分钟。当所述反应完成后，用盐酸处理在反应溶液中多余的LAH，然后加入氢氧化钠水溶液使成碱性。用碳酸钾饱和含水层后，用二氯甲烷萃取并用水洗涤有机层，用硫酸镁干燥。然后在减压下浓缩溶剂，得到3-氨基甲基-4-甲基苯并[b]噻吩。顺序将11.5(250mmol)甲酸和10.0g(123mmol)的37％甲醛水溶液加入到所述溶液中，然后在80℃下搅拌5小时。当所述反应完成后，将盐酸水溶液加入到该反应溶液中，在减压下浓缩以除去甲酸和甲醛。然后加入氢氧化钠水溶液以使溶液碱化，随后用二氯甲烷萃取。用水洗涤有机层后，用硫酸镁干燥并在减压下浓缩溶剂。然后将残余物经硅胶柱层析(己烷∶乙酸乙酯＝10∶1)纯化，得到2.61g(12.8mmol)的目标化合物(两步的产率24％)。通过1H-NMR鉴定进行化合物的确认。1H-NMR(270MHz，CDCl3)(ppm)7.66(s，1H)，7.26-7.09(m，3H)，3.65(s，2H)，2.85(s，3H)，2.27(s，6H)步骤6碘化((4-甲基苯并[b]噻吩-3-基)甲基)三甲基铵的制备 将3.69g(26mmol)甲基碘加入到20ml含有在步骤5中得到的2.61g(12.8mmol)3-((N，N-二甲基氨基)甲基)-4-甲基苯并[b]噻吩的乙醇溶液中，然后在室温下搅拌18小时。由于形成白色悬浮液，将过量的甲基碘和溶剂滤出后，用乙醇(10ml×2)和乙醚(10ml×3)洗涤，得到3.08g(8.88mmol)的目标化合物，为白色固体形式(产率69％)。1H-NMR(270MHz，DMSO)(ppm)8.19(s，1H)，7.93(d，1H)，7.36-7.25(m，2H)，4.91(s，2H)，3.05(s，9H)，2.77(s，3H)[参考实施例6]碘化((1，4-二甲基吲哚-3-基)甲基)甲基铵的制备步骤14-甲基吲哚的制备 将30.5g(256mmol)N，N-二甲基甲酰胺缩二甲醇和10.9g(153mmol)吡咯烷加入到150ml含有19.4g(128mmol)的2，3-二甲基硝基苯的N，N-二甲基甲酰胺溶液中。将得到的溶液在120℃下搅拌72小时后，将其浓缩。将100ml甲苯加入得到的棕色油状物中，然后加入11g阮内镍(50％，水性淤浆，pH＞9)并搅拌。将反应容器内部用氢气置换，随后在室温、氢气氛下搅拌20小时。经硅藻土过滤所述反应溶液后，浓缩滤液，得到30g黑色溶液。然后将其经硅胶柱层析(己烷∶乙酸乙酯＝10∶1)纯化，得到11.33g(86mmol)目标化合物(两步骤的产率67％)。用1H-NMR鉴定进行所述化合物的确认。1H-NMR(270MHz，CDCl3)(ppm)7.28-7.07(m，3H)，6.93(m，1H)，6.57(m，1H)，2.57(s，3H)步骤21，4-二甲基吲哚的制备
将12.7g(134mmol)叔丁醇钾和80mlN，N-二甲基甲酰胺加入到预干燥的反应容器中。加入在步骤1中得到的8.9g(67.9mmol)4-甲基吲哚，然后在室温下搅拌35分钟。将15.8g(134mmol)草酸二甲酯加入其中，然后在120℃下搅拌5小时30分钟。在减压下浓缩后，加入200ml水，然后用1M盐酸处理将其酸化(pH＝3)，然后用乙酸乙酯(200ml×2)萃取并用无水硫酸镁干燥。在减压下蒸馏出溶剂后，将其经硅胶柱层析(己烷∶乙酸乙酯＝5∶1)纯化，得到9.24g(53mmol)目标化合物(产率94％)。用1H-NMR鉴定进行所述化合物的确认。1H-NMR(270MHz，CDCl3)(ppm)7.25-7.09(m，2H)，7.03(m，1H)，6.90(m，1H)，6.49(m，1H)，3.78(s，3H)，2.55(s，3H)步骤31，4-二甲基-3-(N，N-二甲基氨基甲基)吲哚的制备 将5.9ml(72.0mmol)的37％甲醛水溶液和7.08ml(78mmol)50％二甲胺水溶液顺序加入到含有各25ml的1，4-二噁烷和乙酸的混合体系中。由于所述反应产生热，冷却至室温后，加入10ml含有在步骤2中得到的9.24g(63.6mmol)1，4-二甲基吲哚的1，4-二噁烷溶液，然后在室温下搅拌2小时。将该反应溶液浓缩。然后，将5M氢氧化钠水溶液加入到残余物中使其碱化(pH＝12)并使总容量为100ml，然后用乙酸乙酯(100ml×2)萃取。用无水硫酸镁干燥有机层并在减压下浓缩，得到12.93g(63.9mmol)目标化合物(粗品产率100.4％)。用1H-NMR鉴定进行所述化合物的确认。1H-NMR(270MHz，CDCl3)(ppm)7.15-7.06(m，2H)，6.91(m，1H)，6.85(m，1H)，3.71(s，3H)，3.59(s，2H)，2.74(s，3H)，2.27(s，6H)步骤4碘化((1，4-二甲基吲哚-3-基)甲基)三甲基铵的制备 将在步骤3中得到的12.93g(63.6mmol)1，4-二甲基-3-(N，N-二甲基氨基甲基)吲哚溶于60ml乙醇中，然后加入4.36ml(70mmol)甲基碘。在室温下搅拌2小时后形成白色沉淀。然后将其过滤，用10ml乙醇洗涤两次并在真空中干燥，得到16.66g(48.4mmol)目标化合物(两步产率76％)。通过使用1H-NMR鉴定进行所述化合物的确认。1H-NMR(270MHz，DMSO)(ppm)7.65(s，1H)，7.36(d，1H)，7.13(t，1H)，6.91(d，1H)，4.74(s，2H)，3.82(s，3H)，3.01(s，9H)，2.65(s，3H)[参考实施例7]4-(5-甲氧基苯并咪唑-2-基硫基)丁酸酯氢溴酸盐的制备 将6.48g(33.2mmol)4-溴代丁酸乙酯加入10ml含有5.0g(27.7mmol)5-甲氧基苯并咪唑-2-硫醇的乙醇溶液中，然后在80℃下搅拌1小时并加入90ml乙酸乙酯。将该反应溶液恢复至室温并滤出所形成的结晶，然后干燥得到9.34g目标化合物(产率90％)。1H-NMR(270MHz，CDCl3)(ppm)7.65(d，1H，J＝8.91Hz)，7.24(s，1H)，7.00(dd，1H，J＝2.43，8.91Hz)，4.21(q，2H，J＝7.29Hz)，3.83(s，3H)，3.74(m，2H)，2.61(m，2H)，2.10(m，2H)，1.30(t，3H，J＝7.29Hz)[实施例1]第39号化合物的制备 将480 mg(2.49mmol)和10ml四氢呋喃加入到预干燥的反应容器中。加入在参考实施例3中得到的505mg(1.91mmol)4-(苯并咪唑-2-基硫基)丁酸乙酯和724mg(2.10mmol)碘化((1，4-二甲基吲哚-3-基)甲基)三甲基铵，随后在80℃下搅拌6小时。将该溶液通过硅藻土过滤后，在减压下浓缩。然后，将残余物经硅胶柱层析(二氯甲烷∶乙酸乙酯＝8∶1)纯化，得到540mg(1.28mmol)4-(1-((1，4-二甲基吲哚-3-基)甲基)苯并咪唑-2-基硫基)丁酸乙酯(产率67％)。
然后将2.0ml 2M氢氧化钠水溶液加入到6ml含有得到的540mg(1.28mmol)4-(1-((1，4-二甲基吲哚-3-基)甲基)苯并咪唑-2-基硫基)丁酸乙酯的甲醇溶液中。在室温下搅拌16小时后，加入6M盐酸以中止所述反应。经在减压下浓缩将溶剂除去到一定程度，随后用乙酸乙酯萃取。用饱和盐水洗涤乙酸乙酯层后，用无水硫酸镁干燥。在减压下蒸馏出溶剂后，将其经硅胶柱层析(二氯甲烷∶甲醇＝8∶1)纯化，得到502mg(1.28mmol)目标化合物(产率100％)。通过使用LC-MS所得分子量鉴定化合物进行所述化合物的确认。计算值M＝393.15，实测值(M+H)+＝394.2[实施例2]根据与实施例1相同的方法，使用在参考实施例2或3中所述的化合物以及不同的季铵盐或通过参照参考实施例4-6和本文所述其它文献合成的卤化衍生物合成以下化合物和以下表中的化合物。通过使用LC-MS所得分子量鉴定化合物进行所述化合物的确认。但是，所述化合物中的一些使用与实施例1多少有点不同的条件来合成，这些条件包括如使用DMF等作为溶剂并在偶合中使用碳酸钾作为碱，在水解中使用THF和EtOH作为溶剂并且使用室温到50℃的温度。
另外，类似地合成以下化合物。4-(1-(2-(1-甲基吲哚-3-基)乙基)苯并咪唑-2-基硫基)丁酸(第1153号化合物)但是在这种情况下，用2-(1-甲基吲哚-3-基)乙醇的甲磺酸酯代替季铵盐和卤化衍生物。使用LC-MS进行所述化合物的鉴定。产率为19％(N-烷基化和酯水解两步)。计算值M＝393.15，实测值(M+H)+＝394.04-(1-(4-甲基-7-氯代苯并[b]噻吩-3-基)甲基)苯并咪唑-2-基硫基)丁酸(第1154号化合物)产率15％(N-烷基化和酯水解两步)计算值M＝430.06，实测值(M+H)+＝431.21H-NMR(270MHz，DMSO-d6)(ppm)12.17(br，1H)，7.63(d，1H，J＝7.83Hz)，7.47-7.40(m，2H)，7.26(d，1H，J＝8.10Hz)，7.22-7.11(m，2H)，6.46(s，1H)，5.86(s，2H)，3.34(t，2H，J＝7.29Hz)，2.84(s，3H)，2.34(t，2H，J＝7.29Hz)，1.94(m，2H)4-(1-(4-甲基-7-溴代苯并[b]噻吩-3-基)甲基)苯并咪唑-2-基硫基)丁酸(第1155号化合物)产率56％(N-烷基化和酯水解两步)计算值M＝474.01，实测值(M+H)+＝477.01H-NMR(270MHz，DMSO-d6)(ppm)12.18(br，1H)，7.63(d，1H，J＝7.56Hz)，7.53(d，1H，J＝7.56Hz)，7.46(d，1H，J＝7.56Hz)，7.22-7.11(m，3H)，6.46(s，1H)，5.85(s，2H)，3.34(t，2H，J＝7.29Hz)，2.83(s，3H)，2.34(t，2H，J＝7.29Hz)，1.97(m，2H)
第148号化合物的制备步骤1((苯并噻吩-3-基)甲基)(4-甲氧基-2-硝基苯基)胺的制备 将740mg(2.8mmol)4-甲氧基-2-硝基三氟代乙酰苯胺溶于5ml二甲基甲酰胺中，随后顺序加入503mg(3.64mmol)碳酸钾和773mg(3.4mmol)3-溴代甲基苯并噻吩并加热至100℃。12小时后，加入5ml 5M氢氧化钠水溶液并回流1小时。15分钟后，将所述溶液冷却至室温，随后加入10ml水并用氯仿萃取。用25ml饱和盐水洗涤有机层两次并且用硫酸镁干燥后，在减压下浓缩并干燥。然后，将残余物经硅胶柱层析(己烷∶乙酸乙酯＝60∶1)纯化，得到400mg((苯并噻吩-3-基)甲基)(4-甲氧基-2-硝基苯基)胺，为橙色粉末(产率44％)。步骤21-((苯并噻吩-3-基)甲基)-5-甲氧基苯并咪唑-2-硫醇的制备 将4ml乙醇和4ml 1，4-二噁烷加入到400mg(1.23mmol)((苯并噻吩-3-基)甲基)(4-甲氧基-2-硝基苯基)胺中，随后加入0.34ml 5M氢氧化钠水溶液并加热回流。15分钟后，将该反应溶液从油浴中移出，然后分次加入320mg(4.9mmol)锌粉。将该反应溶液再加热回流1小时。冷却至室温后，滤出锌粉并在减压下浓缩滤液，随后用氯仿萃取。用5ml饱和盐水洗涤有机层两次，然后用硫酸镁干燥，在减压下浓缩并干燥。得到309mg棕色油状物。
接着，将得到的棕色油状物溶于10ml乙醇中，随后加入2.5ml(42mmol)二硫化碳并回流。12小时后，使该反应溶液恢复至室温并在减压下浓缩，然后加入2ml乙醇并用超声波辐照使其破碎成细小的碎片，然后过滤。将得到的粉末用2ml乙醇洗涤两次，然后干燥得到120mg(0.37mmol)1-((苯并噻吩-3-基)甲基)-5-甲氧基苯并咪唑-2-硫醇(两步的产率30％)。步骤34-(1-((苯并噻吩-3-基)甲基)-5-甲氧基苯并咪唑-2-基硫基)丁酸乙酯的制备 将101mg(0.30mmol)1-((苯并噻吩-3-基)甲基)-5-甲氧基苯并咪唑-2-硫醇溶于2ml二甲基甲酰胺中，随后加入62mg(0.45mmol)碳酸钾和53mg(0.40mmol)4-溴代丁酸乙酯并加热至80℃。12小时后，将该反应溶液在减压下浓缩并用乙醚萃取，随后用10ml饱和盐水洗涤有机层两次并且用硫酸镁干燥。然后在减压下浓缩溶剂并将残余物经硅胶柱层析(己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)纯化，得到60mg(0.136mmol)4-(1-((苯并噻吩-3-基)甲基)-5-甲氧基苯并咪唑-2-基硫基)丁酸乙酯(产率45％)。步骤44-(1-((苯并噻吩-3-基)甲基)-5-甲氧基苯并咪唑-2-基硫基)丁酸的制备 将60mg(0.136mmol)4-(1-((苯并噻吩-3-基)甲基)-5-甲氧基苯并咪唑-2-基硫基)丁酸乙酯溶于2ml甲醇中，随后加入0.5ml4M氢氧化钠水溶液。在50℃下搅拌3小时后，加入6M盐酸以使该反应停止，随后减压下浓缩并用氯仿萃取。用饱和盐水洗涤有机层后，用无水硫酸镁干燥。在减压下浓缩溶剂并将残余物经硅胶柱层析(乙酸乙酯)纯化，得到20mg(0.048mmol)目标化合物(产率36％)。由用LC-MS所得分子量鉴定化合物进行所述化合物的确认。计算值M＝412.09，实测值(M+H)+＝413.1[实施例4]第135号化合物的制备根据与实施例3相同的方法得到所述目标化合物。
但是，在所述相应步骤1的反应中使用碘化((1，4-二甲基吲哚-3-基)甲基)三甲基铵。
用LC-MS所得分子量鉴定化合物进行所述化合物的确认。计算值M＝423.16，实测值(M+H)+＝424.3第137号化合物的制备根据与实施例3相同的方法得到所述目标化合物。
但是，在所述相应步骤1的反应中使用碘化((1-甲基-4-氯代吲哚-3-基)甲基)三甲基铵。
使用LC-MS所得分子量鉴定化合物进行所述化合物的确认。计算值M＝443.11，实测值(M+H)+＝444.3[实施例5]第244号化合物的制备用与实施例3相同的方法得到目标化合物。但是，使用4-氰基-2-硝基三氟乙腈作为相应于步骤1的试剂。另外，将2-硝基苯胺衍生物还原为邻-苯二胺衍生物的步骤及将其环化为苯并咪唑-2-硫醇衍生物的步骤使用以下所述的方法进行。 将10ml乙醇加入到1.1g(3.56mmol)((3-苯并噻吩基)甲基)(4-氰基-2-硝基苯基)胺中，然后加入2.4g(17.8mmol)碳酸钾。用氮气置换所述反应体系后，加入220mg 10％披钯碳，随后用氢气置换该反应体系并加热至60℃。
4小时30分钟后，加入附加量的220mg 10％披钯碳，然后用氢气置换该反应体系并加热至60℃。所述反应开始5小时10分钟后，将该反应体系冷却至室温。然后将该反应溶液经硅藻土过滤并在减压下浓缩，得到0.93g液体残余物。接着将0.93g(2.63mmol)((2-苯并噻吩基)甲基)(2-氨基-4-甲基苯基)胺溶于10ml乙醇和2ml水中，随后在加入2.1g(13.3mmol)乙基黄原酸钾后回流。11小时后，滴加12.5ml 40％乙酸水溶液。冷却至室温并在减压下浓缩后，将残余物经硅胶柱层析(己烷∶丙酮＝2∶1)纯化，得到491.7mg 1-((2-苯并噻吩基)甲基)-6-氰基苯并咪唑-2-硫醇(两步产率43％)。通过使用1H-NMR和LC-MS所得分子量鉴定化合物进行第244号化合物的确认。计算值M＝407.08，实测值(M+H)+＝408.21H-NMR(400MHz，CDCl3)(ppm)7.94(s，1H)，7.76(dd，1H)，7.52(dd，1H)，7.42(m，3H)，7.31(d，1H)，7.00(s，1H)，5.56(s，2H)，3.35(t，2H)，2.47(t，2H)2.15(p，2H)[实施例6]使用与实施例5相同的方法得到以下目标化合物。第340号化合物的制备使用4-甲基-2-硝基三氟代乙酰苯胺作为相对于步骤1的试剂。
通过使用LC-MS所得分子量鉴定化合物进行第340号化合物的确认。计算值M＝396.10，实测值(M+H)+＝397.0第436号化合物的制备使用5-甲基-2-硝基三氟代乙酰苯胺作为相对于步骤1的试剂。
通过使用LC-MS所得分子量鉴定化合物进行第436号化合物的确认。计算值M＝396.10，实测值(M+H)+＝397.0[实施例7]第34号化合物的制备步骤1((1-甲基吲哚-3-基)甲基)(2-氨基苯基)胺的制备 将829mg(6mmol)2-硝基苯胺和1242mg(7.8mmol)1-甲基吲哚甲醛溶于20ml四氢呋喃中，随后顺序加入200μl乙酸和5087mg(24mmol)NaBH(OAc)3并在室温下搅拌过夜。加入饱和碳酸氢钠水溶液后，用乙酸乙酯萃取并用无水硫酸镁干燥，蒸馏出溶剂并将残余物经硅胶柱层析(己烷∶乙酸乙酯＝95∶5)纯化，得到264mg((1-甲基吲哚-3-基)甲基)(2-硝基苯基)胺(产率18％)。将264mg(0.939mmol)((1-甲基吲哚-3-基)甲基)(2-硝基苯基)胺溶于10ml乙醇中，随后加入50mg(0.047mmol)10％Pd-C并在室温、氢气氛下搅拌6小时。所述反应完成后，滤出Pd-C并在减压下蒸馏出溶剂，得到212mg((1-甲基吲哚-3-基)甲基)(2-氨基苯基)胺(产率90％)。步骤21-((1-甲基吲哚-3-基)甲基)苯并咪唑-2-硫醇的制备 将212mg(0.845mmol)((1-甲基吲哚-3-基)甲基)(2-氨基苯基)胺溶于1ml吡啶中，随后加入1ml(16.9mmol)二硫化碳并在氮气氛下回流1小时。蒸馏出溶剂，随后经硅胶柱层析(己烷∶乙酸乙酯＝2∶1)纯化，得到96mg 1-((1-甲基吲哚-3-基)甲基)苯并咪唑-2-硫醇(产率39％)。步骤34-(1-((1-甲基吲哚-3-基)甲基)苯并咪唑-2-基硫基)丁酸的制备 将12mg(0.342mmol)氢化钠和2ml四氢呋喃加入到预先干燥的反应容器中。将后将50mg(0.171mmol)1-((1-甲基吲哚-3-基)甲基)苯并咪唑-2-硫醇和34μl(0.23mmol)4-溴代丁酸乙酯加入到该反应容器中，随后在60℃下搅拌40分钟。然后加入水，随后用乙酸乙酯萃取。用无水硫酸镁干燥乙酸乙酯层后，在减压下浓缩反应溶液并将得到的残余物经硅胶柱层析(己烷∶乙酸乙酯＝3∶1)纯化，得到4-(1-((1-甲基吲哚-3-基)甲基)(苯并咪唑-2-基硫基)丁酸乙酯。接着，将0.25ml 4M氢氧化锂水溶液加入到1ml的含该4-(1-((1-甲基吲哚-3-基)甲基)(苯并咪唑-2-基硫基)丁酸乙酯和0.5ml甲醇的四氢呋喃中。在室温下搅拌过夜后，加入6M盐酸以停止反应，随后用乙酸乙酯萃取。用饱和盐水洗涤乙酸乙酯层后，将其用无水硫酸镁干燥。然后在减压下蒸馏出溶剂，得到16mg(0.042mmol)目标化合物(产率25％)。
通过使用LC-MS所得分子量鉴定化合物进行所述化合物的确认。计算值M＝379.14，实测值(M+H)+＝380.2[实施例8]第743号化合物的制备步骤15-(苯并咪唑-2-基)戊酸乙酯的制备 将696μl(5.0mmol)三乙胺和893mg(5.0mmol)的methyladipochloride滴加到10ml含有540mg(5.0mmol)邻-苯二胺的氯仿溶液中，随后在室温下搅拌12小时。然后加入20ml乙醇和4ml浓盐酸，随后搅拌10小时同时加热回流。然后，将该反应溶液用5M氢氧化钠水溶液中和，随后用乙酸乙酯萃取。用水洗涤并在减压下浓缩后，将残余物经硅胶柱层析(仅乙酸乙酯)纯化，得到359mg 5-(苯并咪唑-2-基)戊酸乙酯(产率30％)。步骤25-(1-((1，4-二甲基吲哚-3-基)甲基)苯并咪唑-2-基)戊酸的制备 将42mg(0.3mmol)碳酸钾和103mg(0.3mmol)碘化((1，4-二甲基吲哚-3-基)甲基)三甲基铵加入到2ml含有50mg(0.2mmol)所得到的5-(苯并咪唑-2-基)戊酸乙酯的DMF溶液中，随后在120℃下搅拌2小时。将得到的溶液用二氯甲烷萃取，用水洗涤并浓缩，随后将残余物经柱层析(己烷∶乙酸乙酯＝1∶2)纯化。然后将5ml乙醇和0.5ml 4M氢氧化钠水溶液加入到其中，随后在50℃下搅拌10小时，然后加入6M盐酸以停止所述反应。用氯仿萃取该溶液，用水洗涤并在减压下浓缩后，将残余物经硅胶柱层析(氯仿∶甲醇＝10∶1)纯化，得到35mg目标化合物(两步产率47％)。通过使用LC-MS所得分子量鉴定化合物进行所述化合物的确认。计算值M＝375.19，实测值(M+H)+＝376.5[实施例9]第519号化合物钠盐的制备 将11.9ml(1.19mmol)的0.1M氢氧化钠水溶液加入到100ml含有503mg(1.19mmol)以上第519号化合物的水溶液中，随后在室温下搅拌。接着将该反应溶液冻干，得到470mg(1.05mmol)所述钠盐(产率89％)。1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)(ppm)7.37(s，1H)，7.19(d，1H，J＝8.24Hz)，7.09-7.01(m，2H)，6.80(d，1H，J＝7.09Hz)，6.32(s，1H)，5.66(s，2H)，3.59(s，3H)，3.26(m，2H)，2.66(s，3H)，2.27(s，3H)，2.21(s，3H)，1.95(m，2H)，1.81(m，2H)[实施例10]根据与实施例9相同的方法，用各自相应的底物合成以下所述的化合物。第39号化合物的钠盐1H-NMR(270MHz，DMSO-d6)(ppm)7.57(d，1H，J＝Hz)，7.28(d，1H，J＝7Hz)，7.20(d，1H，J＝8Hz)，7.15-7.00(m，3H)，6.77(d，1H，J＝7Hz)，6.47(s，1H)，5.69(s，2H)，3.60(s，3H)，3.31(t，2H，J＝7Hz)，2.61(s，3H)，1.99(t，2H，J＝7Hz)，1.84(p，2H，J＝7Hz)第52号化合物的钠盐1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)(ppm)7.97(d，1H)，7.91(d，1H，J＝6.76Hz)，7.57(d，1H，J＝7.75Hz)，7.44-7.38(m，3H)，7.30(s，1H)，7.12(m，2H)，5.63(s，2H)，3.33(m，2H)，2.03(m，2H)，1.87(m，2H)第135号化合物的钠盐1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)(ppm)7.21-7.00(m，4H)，6.79(d，1H，J＝7.29Hz)，6.67(dd，1H，J＝2.43，8.91Hz)，6.51(s，1H)，5.65(s，2H)，3.75(s，3H)，3.62(s，3H)，3.31(m，2H)，2.59(s，3H)，1.95(m，2H)，1.82(m，2H)第532号化合物的钠盐1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)(ppm)7.98(d，1H，J＝7.42Hz)，7.90(d，1H，J＝6.43Hz)，7.44-7.39(m，2H)，7.35(s，1H)，7.18(m，2H)，5.57(s，2H)，3.28(m，2H)，2.26(s，3H)，2.23(s，3H)，1.99(m，2H)，1.84(m，2H)[实施例10]4-(1-((4-甲基苯并噻吩-3-基)甲基)-5-甲氧基苯并咪唑-2-基硫基)丁酸乙酯和4-(1-((4-甲基苯并噻吩-3-基)甲基)-6-甲氧基苯并咪唑-2-基硫基)丁酸乙酯的制备 将539mg(1.44mmol)4-(5-甲氧基苯并咪唑-2-基硫基)丁酸乙酯悬浮在4ml甲苯中，随后加入616μl(3.60mmol)二异丙基乙胺和384mg(1.59mmol)4-甲基-3-(溴代甲基)苯并[b]噻吩并在100℃下加热。反应过夜后，加入饱和碳酸氢钠，随后用乙酸乙酯萃取。用水洗涤有机层，随后用硫酸镁干燥并在减压下浓缩溶剂。将得到的残余物经硅胶柱层析(己烷∶乙酸乙酯＝4∶1)纯化，得到114mg 4-(1-((4-甲基苯并噻吩-3-基)甲基)-5-甲氧基苯并咪唑-2-基硫基)丁酸乙酯(产率17％)和68mg 4-(1-((4-甲基苯并噻吩-3-基)甲基)-6-甲氧基苯并咪唑-2-基硫基)丁酸乙酯(产率10％)。4-(1-((4-甲基苯并噻吩-3-基)甲基)-5-甲氧基苯并咪唑-2-基硫基)丁酸乙酯1H-NMR(270MHz，CDCl3)(ppm)7.71(d，1H，J＝7.56Hz)，7.62(d，1H，J＝8.64Hz)，7.30-7.18(m，2H)，6.87(dd，1H，J＝2.43，8.64Hz)，6.61(d，1H，J＝2.43Hz)，6.42(s，1H)，5.74(s，2H)，4.10(q，2H，J＝7.29Hz)，3.75(s，3H)，3.38(t，2H，J＝7.29Hz)，2.89(s，3H)，2.45(t，2H，J＝7.29Hz)，2.11(m，2H)，1.23(t，3H，J＝7.29Hz)4-(1-((4-甲基苯并噻吩-3-基)甲基)-6-甲氧基苯并咪唑-2-基硫基)丁酸乙酯1H-NMR(270MHz，CDCl3)(ppm)7.70(d，1H，J＝8.10Hz)，7.29-7.17(m，3H)，7.02(d，1H，J＝8.91Hz)，6.80(dd，1H，J＝2.43，8.91Hz)，6.40(s，1H)，5.74(s，2H)，4.11(q，2H，J＝7.29Hz)，3.87(s，3H)，3.42(t，2H，J＝7.02Hz)，2.88(s，3H)，2.46(t，2H，J＝7.29Hz)，2.10(m，2H)，1.23(t，3H，J＝7.29Hz)[实施例11]根据与实施例10相同的方法，得到以下化合物。4-(1-((5-甲基苯并噻吩-3-基)甲基)-5-甲氧基苯并咪唑-2-基硫基)丁酸乙酯(产率24％)1H-NMR(270MHz，CDCl3)(ppm)7.76(d，1H，J＝8.10Hz)，7.62(s，1H)，7.58(d，1H，J＝8.64Hz)，7.25(1H)，6.84(dd，1H，J＝2.43，8.91Hz)，6.81(s，1H)，6.65(d，1H，J＝2.16Hz)，5.47(s，2H)，4.11(q，2H，J＝7.02Hz)，3.74(s，3H)，3.39(t，2H，J＝7.02Hz)，2.51(s，3H)，2.47(t，2H，J＝7.56Hz)，2.11(m，2H)，1.24(t，3H，J＝7.02Hz)4-(1-((5-甲基苯并噻吩-3-基)甲基)-6-甲氧基苯并咪唑-2-基硫基)丁酸乙酯(产率18％)1H-NMR(270MHz，CDCl3)(ppm)7.75(d，1H，J＝8.10Hz)，7.60(s，1H)，7.26-7.22(m，2H)，7.04(d，1H，J＝8.91Hz)，6.83(s，1H)，6.78(dd，1H，J＝2.43，8.91Hz)，5.47(s，2H)，4.12(q，2H，J＝7.02Hz)，3.84(s，3H)，3.43(t，2H，J＝7.29Hz)，2.50(s，3H)，2.48(t，2H，J＝7.29Hz)，2.12(m，2H)，1.24(t，3H，J＝7.02Hz)[实施例12]4-(1-((4-甲基苯并噻吩-3-基)甲基)-5-甲氧基苯并咪唑-2-基硫基)丁酸(第154号化合物) 将在实施例10中得到的84.7mg(0.186mmol)4-(1-((4-甲基苯并噻吩-3-基)甲基)-5-甲氧基苯并咪唑-2-基硫基)丁酸乙酯溶于1ml THF和1ml乙醇的混合溶剂中，随后加入1ml 1M氢氧化钠水溶液并在40℃下搅拌1小时。所述反应完成后，加入1.5ml 1M盐酸，随后在室温下搅拌30分钟。过滤得到的沉淀物，用水洗涤，用乙醇洗涤，然后干燥得到54.9mg目标化合物(产率69％)。LC-MS计算值M＝426.11，实测值(M+H)+＝427.21H-NMR(270MHz，DMSO-d6)(ppm)7.80(d，1H，J＝7.29Hz)，7.60(d，1H，J＝8.91Hz)，7.31-7.20(m，3H)，6.95(dd，1H，J＝2.16，8.91Hz)，6.53(s，1H)，5.94(s，2H)，3.73(s，3H)，3.37(t，2H，J＝7.29Hz)，2.86(s，3H)，2.34(t，2H，J＝7.29Hz)，1.90(m，2H)[实施例13]根据与实施例12相同的方法，合成以下化合物。4-(1-((4-甲基苯并噻吩-3-基)甲基)-6-甲氧基苯并咪唑-2-基硫基)丁酸(第1114号化合物)产率60％LC-MS计算值M＝426.11，实测值(M+H)+＝427.21H-NMR(270MHz，DMSO-d6)(ppm)7.78(d，1H，J＝7.83Hz)，7.52(d，1H，J＝8.91Hz)，7.34-7.17(m，3H)，6.77(dd，1H，J＝2.34，8.91Hz)，6.37(s，1H)，5.83(s，2H)，3.78(s，3H)，3.32(t，2H，J＝7.29Hz)，2.82(s，3H)，2.34(t，2H，J＝7.56Hz)，1.93(m，2H)但是在该情况下，所述反应完成后加入1M盐酸，随后用氯仿萃取并且用水洗涤。然后用硫酸镁干燥，随后在减压下浓缩溶剂并干燥，得到目标化合物。4-(1-((5-甲基苯并噻吩-3-基)甲基)-5-甲氧基苯并咪唑-2-基硫基)丁酸(第152号化合物)产率63％LC-MS计算值M＝426.11，实测值(M+H)+＝426.81H-NMR(270MHz，DMSO-d6)(ppm)7.88(d，1H，J＝8.64Hz)，7.76(s，1H)，7.58(d，1H，J＝8.64Hz)，7.28-7.24(m，3H)，6.94(dd，1H，J＝2.16，8.64Hz)，5.72(s，2H)，3.74(s，3H)，3.40(t，2H，J＝7.29Hz)，2.42(s，3H)，2.36(t，2H，J＝7.29Hz)，1.92(m，2H)4-(1-((5-甲基苯并噻吩-3-基)甲基)-6-甲氧基苯并咪唑-2-基硫基)丁酸(第1112号化合物)产率79％LC-MS计算值M＝426.11，实测值(M+H)+＝427.01H-NMR(270MHz，DMSO-d6)(ppm)7.87(d，1H，J＝8.10Hz)，7.71(s，1H)，7.47(d，1H，J＝8.91Hz)，7.24(m，2H)，7.17(d，1H，J＝2.16Hz)，6.84(dd，1H)，5.64(s，2H)，3.77(s，3H)，3.38(t，2H，J＝7.02Hz)，2.41(s，3H)，2.37(t，2H，J＝7.56Hz)，1.95(m，2H)[实施例14]第532号化合物的HCl盐的制备 将1.5ml4M盐酸/二噁烷溶液加入到50mg(0.122mmol)第532号化合物中，随后在100℃下搅拌。所述反应完成后，在减压下浓缩反应溶液，得到53mg(1.05mmol)目标化合物(产率97％)。1H-NMR(270MHz，DMSO-d6)(ppm)8.00(m，1H)，7.89(m，1H)，7.52(m，2H)，7.45-7.42(m，2H)，7.32(s，1H)，5.78(s，2H)，3.48(t，2H，J＝7.42Hz)，2.37(m，2H)，2.34(s，3H)，2.30(s，3H)，1.92(t，2H，J＝7.09Hz)[实施例15]第56号化合物的HCl盐的制备根据与实施例14相同的方法，得到所述目标化合物。1H-NMR(270MHz，DMSO-d6)(ppm)7.87(d，1H，J＝8.08Hz)，7.74(s，1H)，7.66(d，1H，J＝6.76Hz)，7.58(d，1H，J＝8.74Hz)，7.26(m，4H)，5.70(s，2H)，3.45(t，2H，J＝7.26Hz)，2.42(s，3H)，2.39(t，2H，J＝7.26Hz)，1.98(m，2H)[实施例16]重组人肥大细胞食糜酶的制备根据Urata等(Journal of Biological Chemistry，第266卷，第17173页(1991))的报告制备重组人肥大细胞食糜酶。也就是说，通过肝素琼脂糖(Pharmacia)由用含有编码人肥大细胞食糜酶的cDNA的重组杆状病毒感染的昆虫细胞(Th5)的培养上清液纯化人肥大细胞食糜酶。另外，根据Murakami等(Journal of Biological Chemistry，第270卷，第2218页(1995))的报告激活后，用肝素琼脂糖纯化该人肥大细胞食糜酶，得到活性人肥大细胞食糜酶。[实施例17]对重组人肥大细胞食糜酶的酶活性抑制的测定将含有本发明化合物的2μlDMSO溶液加入到50μl含有在实施例16中得到的1-5ng活性人肥大细胞食糜酶的缓冲液A(0.5-3.0M NaCl，50mM Tris-HCl，pH8.0)中后，加入作为底物的50μl含有0.5mM琥珀酰-丙氨酰-组氨酰-脯氨酰-苯基丙氨酰对硝基苯胺(Bacchem)的缓冲液A并且在室温下反应5分钟。测定在此期间在405nm处吸光度的变化以便研究抑制活性。
结果，观测第39、56、58、59、63、148、154、519、532、534、536、538、615、1112和1114号化合物显示IC50为1nM到低于10nM的抑制活性，而观测第34、38、41、42、52、54、135、137、152、244、340、436、514、521和628号化合物显示IC50为10nM到100nM的抑制活性。
正如以上所示，本发明的苯并咪唑衍生物显示出有效的食糜酶抑制活性。因此，已清楚地证实本发明的苯并咪唑衍生物是人食糜酶活性抑制剂，可以临床上用来预防和/或治疗许多涉及人食糜酶的疾病。[实施例18]片剂的制备制备具有如下单片组成的片剂。
第39号化合物 50mg乳糖 230mg马铃薯淀粉 80mg聚乙烯基吡咯烷酮 11mg硬脂酸镁 5mg将本发明的化合物(实施例的化合物)、乳糖和马铃薯淀粉混合，随后用20％聚乙烯基吡咯烷酮的乙醇溶液均匀地润湿，通过20目筛，在45℃下干燥并再通过15目筛。然后将以此种方法得到的颗粒与硬脂酸镁混合并压制成片剂。[实施例19]在经胃内强迫喂饲给大鼠服药期间血浓度的测定以30mg/kg的剂量经胃内强迫喂饲给予禁食的雄性SD大鼠上述第39、52和244号化合物，给药后立即以及在给药后30分钟及1、2和4小时收集血样。收集血样后，立即将该血样分离成血清成分，通过常规固相萃取技术萃取本发明的化合物，将得到的样品使用ODS柱(用32％乙腈-水-0.05％TFA作为第52和244号化合物的流动相，而47％乙腈-水-10mM乙酸铵缓冲液(pH4.0)作为第39号化合物的流动相)，经HPLC分析，随后测定未变化形式的量。这些结果在以下表中列出。
根据以上的结果，本发明的化合物给药后迅速吸收，30分钟后，测定表中显示的未变化形式的血浓度。此外，虽然直到给药后4小时血浓度逐渐降低，但甚至在给药4小时后仍然证实有相当量的未变化形式。因此，确定本发明的化合物是一组具有优越的药物动力学特性的化合物。其中A是-CH2CH2CH2-的一组化合物的药物动力学特性特别优越。[实施例20]用肝微粒体(Ms)的体外代谢试验测定方法*反应溶液组成和反应条件
*MR计算方法从每一个反应时间未变化形式的量的减少测定代谢速度并且所述反应时间基于指定在初浓度(反应时间0分钟)时未变化形式的量为100％的值，并且评平定代谢速度达到最大值的时间下的代谢速度作为MR值。MR＝(反应时间0分钟下的底物浓度-反应后的底物浓度)÷反应时间÷蛋白浓度(nmol/min./mg蛋白)使用这些方法得到以下列出的测定结果。
根据以上结果，本发明的化合物是一组代谢上稳定的化合物。确定其中A是-CH2CH2CH2-的一组化合物是一组代谢上特别稳定的化合物。
工业可应用性本发明的苯并咪唑衍生物或其医学上许可的盐显示有效的人食糜酶抑制活性，因此，所述苯并咪唑衍生物或其医学上许可的盐可以用作预防和/或治疗药物，所述药物可以临床作为人食糜酶抑制剂使用，用于炎性疾病、变应性疾病、呼吸性疾病、心血管疾病或骨和软骨代谢性疾病。
权利要求
1.一种由下式(1)代表的苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐 其中，R1和R2可以是相同或不同并且各自独立代表氢原子、卤原子、三卤代甲基、氰基、羟基、具有1-4个碳原子的烷基、具有1-4个碳原子的烷氧基，或者R1和R2一起代表-O-CH2-O-、-O-CH2CH2-O-或-CH2CH2CH2-(这些基团可以由一个或更多个具有1-4个碳原子的烷基取代)；A代表取代或未取代、直链、环状或支链的具有1-7个碳原子的亚烷基或亚链烯基，所述基团可以被一个或更多个-O-、-S-、-SO2-和-NR3-(其中R3代表氢原子或具有1-6个碳原子的直链或支链烷基)间断；这些基团可以具有的取代基选自卤原子、羟基、硝基、氰基、直链或支链的具有1-6个碳原子的烷基、直链或支链的具有1-6个碳原子的烷氧基(包括其中两个相邻基团形成缩醛键的情况，即包括其中偕位的两个烷氧基的烷基部分连接形成环的情况)、具有1-6个碳原子的直链或支链的烷硫基、具有1-6个碳原子的直链或支链烷基磺酰基、具有1-6个碳原子的直链或支链酰基、具有1-6个碳原子的直链或支链酰氨基、三卤代甲基、三卤代甲氧基、苯基、氧代基及可以由一个或更多个卤原子取代的苯氧基；和这些取代基中的一个或更多个可以各自独立地结合到所述亚烷基或亚链烯基的任选位置上；E代表-COOR3、-SO3R3、-CONHR3、-SO2NHR3、四唑-5-基、5-氧代-1，2，4-噁二唑-3-基或5-氧代-1，2，4-噻二唑-3-基(其中R3如上所定义)；G代表取代或未取代、直链或支链的具有1-6个碳原子的亚烷基，所述基团可以由一个或更多个-O-、-S-、-SO2-和-NR3-(其中R3如上所定义，当这些原子或原子基团存在时，它们不直接结合到苯并咪唑环上)间断；并且所述亚烷基可以具有的取代基选自卤原子、羟基、硝基、氰基、具有1-6个碳原子的直链或支链烷基、具有1-6个碳原子的直链或支链烷氧基(包括其中两个相邻基团形成缩醛键的情况)、三卤代甲基、三卤代甲氧基、苯基和氧代基团；M代表单键或-S(O)m-，其中m是0-2的整数；J代表取代或未取代的杂环，该杂环具有4-10个碳原子并且在它的环上含有一个或更多个选自氧原子、氮原子和硫原子的杂原子，前提是不包括咪唑环；所述杂芳基可以具有的取代基选自卤原子、羟基、硝基、氰基、具有1-6个碳原子的直链或支链烷基、具有1-6个碳原子的直链或支链烷氧基(包括其中两个相邻基团形成缩醛键的情况)、具有1-6个碳原子的直链或支链烷硫基、具有1-6个碳原子的直链或支链烷基磺酰基、具有1-6个碳原子的直链或支链酰基、具有1-6个碳原子的直链或支链酰氨基、取代或未取代的N-酰苯胺基、三卤代甲基、三卤代甲氧基、苯基、氧代基、COOR3基团和可以由一个或更多个卤原子取代的苯氧基；并且这些取代基中的一个或更多个可以在所述环的任选位置取代；和X代表次甲基(-CH＝)或氮原子。
2.一种权利要求1的苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐，其中在所述式(1)中，A代表取代或未取代的直链、环状或支链的具有1-7个碳原子(并可以被一个或更多个-O-、-S-、-SO2-和-NR3-间断)的亚烷基。
3.一种权利要求1或2的苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐，其中在所述式(1)中，M代表S。
4.一种权利要求1或2的苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐，其中在所述式(1)中，M代表SO2。
5.一种权利要求1或2的苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐，其中在所述式(1)中，M代表SO。
6.一种权利要求1或2的苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐，其中在所述式(1)中，M代表单键。
7.一种权利要求1-6中任一项的苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐，其中在所述式(1)中，J代表取代或未取代的杂环基团，所述杂环基团具有7-10个碳原子并且在它的环上含有一个或更多个选自氧原子、氮原子和硫原子的杂原子。
8.一种权利要求1-7中任一项的苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐，其中在所述式(1)中，G代表-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CO-、-CH2CH2O-、-CH2CONH-、-CO-、-SO2-、-CH2SO2-、-CH2S-或-CH2CH2S-(并且这些二价基团在左侧结合到苯并咪唑环的1位上，而在右侧结合在J上)。
9.一种权利要求1-8中任一项的苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐，其中在所述式(1)中，R1和R2可以是相同或不同并且各自独立代表氢原子、卤原子、具有1-4个碳原子的烷基、具有1-4个碳原子的烷氧基，三卤代甲基、氰基或羟基。
10.一种权利要求1-9中任一项的苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐，其中在所述式(1)中，E代表-COOH或四唑-5-基。
11.一种权利要求1-10中任一项的苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐，其中在所述式(1)中，X代表-CH＝。
12.一种人食糜酶抑制剂，它含有作为它的活性成分的至少一种权利要求1的苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐。
13.一种用于主要由人食糜酶活性引起的疾病的治疗药物，所述药物含有作为它的活性成分的至少一种权利要求1的苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐。
14.一种药用组合物，所述组合物含有至少一种权利要求1的苯并咪唑或其医学上可接受的盐以及药学上可接受的载体。
15.一种权利要求14的药用组合物，所述组合物是用于疾病的预防药和/或治疗药。
16.一种权利要求15的药用组合物，其中所述疾病是炎性疾病、变应性疾病、呼吸性疾病、心血管疾病或者骨或软骨代谢性疾病。
全文摘要
一种通式(1)的苯并咪唑衍生物或其医学上可接受的盐，它可以用作临床上使用的人食糜酶抑制剂，其中R
文档编号A61P3/14GK1418211SQ01806662
公开日2003年5月14日 申请日期2001年1月17日 优先权日2000年1月17日
发明者土屋直树, 松本由之, 齐藤博, 水野刚志 申请人:帝人株式会社