专利名称：重组人干扰素α2b含片及其制法的制作方法
技术领域：
本发明涉及具有药用抗病毒、调节免疫功能的作用的干扰素，尤其涉及重组人干扰素α2b含片及其制法。
背景技术：
干扰素有抑制病毒复制，抗细胞增殖和调节免疫应答等多种生物学效应。广泛应用于治疗和预防病毒感染性、免疫功能失调性等疾病。干扰素包括α、β、γ三大类型，最近又发现了ω和Γ两类干扰素。α干扰素可分为许多亚型，分别命名为α1、α2、α3……，其中α2又包括α2a和α2b两种亚型。
从其生产制备方法上来分，干扰素可分为天然干扰素和重组干扰素。天然干扰素是通过培养人的白细胞并利用适当的刺激原(如鸡瘟病毒、仙台病毒)对其进行刺激诱导，使其产生干扰素，再利用生化方法进行纯化而得到。重组干扰素则是通过基因重组的方法，将干扰素基因整合到适当的表达系统中(如大肠杆菌)，在通过发酵或细胞培养的方法使干扰素得到大量表达，然后通过分离纯化而得到。重组人干扰素α2b就是利用此方法，将人的干扰素α2b基因整合到大肠杆菌中，通过发酵，纯化而得到高纯度、高产量的重组人干扰素α2b。重组人干扰素与天然干扰素相比，具有纯度高、产量大、成本低等优点，其氨基酸序列与天然干扰素略有差别。
现有的α干扰素研究均采用天然干扰素，如中国专利申请98105384.x公开了一种复方干扰素含片及其制备方法，但采用的是天然α干扰素与白细胞介素2的混合物。中国专利申请95111433.6公开了一种人白细胞干扰素口含片及其制法，但采用的人白细胞干扰素，系由健康人白细胞通过仙台病毒诱导、提纯，并经特殊灭活病毒处理制成。中国专利申请98105383.1公开了一种β干扰素含片及其制备方法，但采用的是β干扰素。这些天然α干扰素含片具有抗病毒、调节免疫功能的作用，如抗流感病毒、抗SARS冠状病毒、乙肝、丙肝病毒、使用的剂量为小剂量，在10000IU以下，以100IU～500IU较多。
重组人干扰素α2b目前有注射剂、滴眼剂、栓剂、凝胶剂、软膏剂等。常用的注射剂具有增加病人痛苦、副作用大、价格昂贵的不足。尚无重组人干扰素含片剂型的研究报道。因此，研究和开发含片剂型，充分发挥该剂型服药方便、病人耐受性好、价格低廉等优点，成为人们期盼。
发明内容
本发明的目的在于提供一种安全有效剂量、疗效好、副作用小、服用方便的重组人干扰素α2b含片及其制造方法。
为了达到以上目的，本发明提供了一种重组人干扰素α2b含片，其中包含作为有效成份的重组人干扰素α2b，以及药学上认可的辅料，包括乳糖、糖粉、淀粉、羟丙甲纤维素、微粉硅胶等。
上述小剂量含片的重组人干扰素α2b含量为每片100IU～1000IU，优选400IU～750IU，上述大剂量含片的重组人干扰素α2b含量为每片10000IU～100000IU，优选40000IU～75000IU。上述辅料的重量配比是乳糖40％～75％，糖粉10％～40％，羟丙甲纤维素2％～15％，淀粉2％～12％，微粉硅胶2％～10％。
乳糖和糖粉为主要填充剂，能改变含片的味觉性能，增加含片的硬度，羟丙甲纤维素和微粉硅胶为粘合剂，使含片能更好的压缩成型，延长崩解时限，确保干扰素在口腔粘膜处有充分的作用时间，淀粉以淀粉浆的形式加入，它既是粘合剂，又是崩解剂。
本发明的制备工艺是，先将乳糖、糖粉、淀粉、羟丙甲纤维素、微粉硅胶充分混合，过筛、将淀粉制成淀粉浆加入上述混合辅料中，干扰素加入淀粉浆中一起加入或配成溶液单独加入，然后制成湿颗粒，干燥，压片。
本发明也可以使用其它适宜的添加剂如防腐剂和矫味剂。
本发明的重组人干扰素α2b含片经一系列实验研究表明安全有效，具有抗病毒，调节免疫功能等功效。可用于治疗和预防严重急性呼吸道综合症流感、乙肝、丙肝、病毒性心肌炎、多发性硬化症等疾病的作用。
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。
(2)将淀粉制成20％的淀粉浆，加入上述混合粉中。
(3)将重组人干扰素α2b制成一定浓度的溶液，喷雾的方式加入上述粉末中。
(4)充分混合，过14目筛，制成湿颗粒。
(5)30～50℃的温度烘干3～8小时。
(6)干颗粒中再加入少量硬脂酸镁，混合均匀。
(7)压片，得干扰素含片。实施例6本实例为实施例1～4的另一种制造工艺过程(1)乳糖、糖粉、羟丙甲纤维素、按倍比稀释法进行混合，过80目筛。
(2)将淀粉制成20％的淀粉浆。
(3)将重组人干扰素α2b加入淀粉浆中，然后将淀粉浆加入上述混合粉中。
(4)充分混合，过14目筛，制成湿颗粒。
(5)30～50℃的温度烘干3～8小时。
(6)干颗粒中再加入少量硬脂酸镁，混合均匀。
(7)压片，得干扰素含片。
试验实施例1 药效学试验实验目的观察重组人干扰素α2b含片对流感病毒的抑制作用，为临床用药效性提供依据。
实验材料1、药品重组人干扰素α2b含片，5000IU/片，由深圳海王英特龙生物公司提供。
2、病毒流感病毒A/FM/1/47(H1N1)。
3、稀释液普通马丁肉汤，0.85％生理盐水。
4、动物昆明小鼠雌雄各半，体重18-22g，由长春生物制品所动物室提供，9日龄鸡胚。
实验方法一、鸡胚培养法抗病毒试验1、病毒原液(100EID50)1ml马丁肉汤稀释液，稀释成10EID50浓度备用。
2、取5片重组人干扰素α2b含片溶入2.5ml生理盐水中，取1ml上清液备用。
3、取1ml病毒稀释液，加1ml重组人干扰素α2b含片溶液，混匀，置4℃冰箱过夜备用。
4、接种取9日龄鸡胚10只，均分成对照组和重组人干扰素α2b含片组。含片组接种上述混合液0.1ml，置35℃培养箱培养3天，收取鸡胚尿囊液，测定血凝效价。对照组鸡胚接种0.1ml生理盐水，同法培养及取尿囊液。
5、测定鸡胚尿囊液稀释倍数，原液1ml加29ml生理盐水，倍比稀释成30、60、120、240、480、960、1920倍，向每管中加1滴鸡红血球，室温下放置30分钟，判定标准如下
终点以5号管++为阳性判定各样本出现阳性结果的最高稀释倍数，进行组间tr检验。
二、抗小鼠流感肺炎试验1、分组、给药将15只小鼠均分三组，分别为模型组、感染前给药组、感染后给药组。感染前给药组口腔粘膜给药，每日2次，连续三天。第4天，各组均滴鼻感染10LD50量的流感病毒，2小时后感染前给药组、感染后给药组继续给药3天。末次给药后12小时处死小鼠，取肺加生理盐水匀浆，制成10％悬液做病毒滴定。
2、病毒滴定将给药组肺悬液稀释10-1～10-5，模型组肺悬液稀释10-4～10-7，每个稀释度接种4个鸡胚，每胚0.2ml，用石蜡封口，放37℃培养72小时，做血凝判定。
实验结果一、鸡胚培养法抗病毒试验结果表1 α2b含片对流感病毒的抑制作用(x±s，n＝5)
与对照组比较***P＜0.001由表1可知，对照组血凝效价为1∶456，α2b含片组血凝效价为1∶174，说明α2b含片对流感病毒有明显的抑制作用。
二、抗小鼠流感肺炎试验表2 α2b含片抗小鼠流感肺炎试验EID50测定结果(x±s，n＝5)
与对照组比较***P＜0.001由表2可知，α2b含片感染前给药组及感染后给药组与模型组比较均有明显的抗病毒作用。
结论重组人干扰素α2b含片对体内、体外病毒均有明显的抑制作用。
试验实施例2 重组人干扰素α2b含片急性毒性试验实验目的观察重组人干扰素α2b含片一次性于口腔粘膜给药后，由于粘膜吸收所产生的毒性反应和死亡情况。
实验材料1、药品重组人干扰素α2b含片，1500000IU/片，由深圳海王英特龙生物公司提供。
2动物Wistar大鼠20只雌雄各半，体重250-300g，由吉林省药品检验所动物室提供，合格证编号10--1009。
实验方法1、剂量选择重组人干扰素α2b含片临床每日拟用剂量为15000IU/人，在预试的基础上，选高于临床剂量100倍量。
2、分组、给药及观察上述大鼠均分为赋形剂组和重组人干扰素α2b含片组。用纱布条将药片包好缝紧，吊系在口腔中，1片/只，1次给药，即刻观察动物状态、毛发、食欲、四肢活动、精神状态、死亡情况及体重变化，连续14日。
实验结果1、给药7日之内，赋形剂组及重组人干扰素α2b含片组动物毛发、食欲、四肢活动、精神状态均无异常，无一死亡，体重亦无明显差别，见下表。
表重组人干扰素α2b含片及赋形剂组急毒试验体重变化(x±s，n＝10)
2、重组人干扰素α2b含片临床拟用量为每日150000IU/人，若人体重按60kg计算，即2500IU/kg；而急毒试验证明，给药量1500000IU/只，未出现毒性反应，若大鼠体重按0.27kg计算，即5600000IU/kg相当于临床剂量的22000倍，所以临床用药非常安全。
权利要求
1.一种重组人干扰素α2b含片，其中包含作为有效成份的重组人干扰素α2b，以及药学上认可的辅料，包括乳糖、糖粉、淀粉、羟丙甲纤维素、微粉硅胶。
2.根据权利要求1所述的一种重组人干扰素α2b含片，含片的重组人干扰素α2b含量为每片100IU～1000IU。
3.根据权利要求1所述的一种重组人干扰素α2b含片，含片的重组人干扰素α2b含量为每片10000IU～100000IU。
4.根据权利要求1、2、3所述的一种重组人干扰素α2b含片，所述辅料的重量配比是乳糖40％～75％，糖粉10％～40％，羟丙甲纤维素2％～15％，淀粉2％～12％，微粉硅胶2％～10％。
5.根据权利要求1的一种重组人干扰素α2b含片的制法，它包括(1)将乳糖、糖粉、羟丙甲纤维素、按倍比稀释法进行混合，过80目筛；(2)将淀粉制成20％的淀粉浆，加入上述混合粉中；(3)将重组人干扰素α2b制成一定浓度的溶液，喷雾的方式加入上述粉末中；(4)充分混合，过14目筛，制成湿颗粒；(5)30～50℃的温度烘干3～8小时；(6)干颗粒中再加入少量硬脂酸镁，混合均匀；(7)压片，得干扰素含片。
6.根据权利要求1的一种重组人干扰素α2b含片的制法，它包括(1)乳糖、糖粉、羟丙甲纤维素、按倍比稀释法进行混合，过80目筛；(2)将淀粉制成20％的淀粉浆；(3)将重组人干扰素α2b加入淀粉浆中，然后将淀粉浆加入上述混合粉中；(4)充分混合，过14目筛，制成湿颗粒；(5)30～50℃的温度烘干3～8小时；(6)干颗粒中再加入少量硬脂酸镁，混合均匀；(7)压片，得干扰素含片。
全文摘要
本发明涉及重组人干扰素α2b含片及其制法，其中药用重组人干扰素α2b含量在100－10万IU/片，赋形剂包括乳糖、糖粉、羟丙甲纤维素、淀粉、微粉硅胶等，上述组份经充分混合、过筛、制成湿颗粒后，再干燥、压片成形。该含片具有更有效的治疗和预防严重急性呼吸道综合症(SARS)、流感、乙肝、丙肝、病毒性心肌炎、多发性硬化症等疾病的作用。
文档编号A61K38/21GK1443572SQ03114320
公开日2003年9月24日 申请日期2003年4月28日 优先权日2003年4月28日
发明者王妍, 柴向东, 蒋为民, 李云富 申请人:深圳市海王英特龙生物技术股份有限公司