专利名称：一种抗肝纤维化的药物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种治疗肝病的药物，尤其是一种抗肝纤维化的药物(商品名可博利-2号)。
目前国内有许多治疗肝纤维化的中药复方。在动物实验中都有一定的抗肝纤维化作用，然而在临床研究中却缺乏双盲对照，另一方面对中药抗肝纤维化的机理研究较少，应从基因水平甚至后基因水平研究，可能对实践会有更大的指导作用。
脂质体是1967年英国首先发现，但真正用于临床是1971年，70年代沈阳药科大学在国内首次研制成功。脂质体主要由磷脂和胆固醇组成双层包膜应为。水溶性物质通过适当的技术可包裹在包膜内，脂溶性物质则包裹在双层之间。
脂质体的作用特点(1)靶向性，以抗癌药物为例，脂质体包封药物后，在组织内的分布情况改变很大，组织对药物摄取量大大增加。如阿糖胞苷脂质体静脉注射后16小时，包封药物在组织中的浓度比游离药物大68倍。邱德凯等人用脂质体包封冬虫夏草多糖治疗慢性肝炎患者发现，经过脂质体包封冬虫夏草多糖治疗慢性肝炎可以大大提高患者的NK细胞活性，INF-r(干扰素)，外周血淋巴细胞膜的细胞介素2受体(MIL-2R)表达的细胞介素2(IL-2)水平与治疗前相比P＜0.05或P＜0.01。而且证明脂质体包封冬虫夏草多糖提高上述免疫指标比不包封的冬虫夏草多糖疗效明显好。经统计学处理，P＜0.05。邓英杰等研究了黄芪多糖脂质体的制备和稳定性，用均匀设计方法进一步证明了黄芪多糖脂质体比黄芪多糖普通制剂和空白脂质体具有更加显著的免疫效果。文献还报道，脂质体包封药物可以提高药物活性5～10倍。(2)包在脂质体内药物被体内网状内皮系统的吞噬细胞作为外来异物的吞噬。有的是融合作用(Fusion)，即脂质体的膜材与细胞膜构成物相似而融合进入细胞内。凡带电荷和中性液体的脂质体主要通过细胞内吞作用进入溶酶体，然后裂解释放药物。由于溶酶体的通透性有限，故分子较大的药物就不能释放到细胞的其它部位，而融合作用往往不受这种限制，因此脂质体的释放药物是具有选择性的。(3)延缓释药，药物包封在脂质体后在体内延缓释放后，延长作用时间。(4)控制药物在组织内分布和在血液内清除率。通过改变脂质体的面积大小，表面电荷和组成成份，可以改变脂质体在给药部位消除速度及进入靶区的速度。
制备脂质体的材料，脂质体的膜材主要由磷脂与胆固醇构成，这两种成份不但是形成脂质体双分子的基础物质，而且本身也具有极重要的生理功能，由它们形成的“人工生物膜”易被机体消化分解，不像合成微囊(如人工尼龙微囊)那样往往在机体中难以排除。脂质体包封中药，目前多以包封单味中药为主，如包封冬虫夏草多糖、包封黄芪多糖、包封丹参等，对于包封复方中药较少。
发明内容
本发明的目的是研制出一种治疗肝纤维化的中药复方，能改善肝功能、增高白蛋白，降低球蛋白，使肝纤维化得以改善。
本发明采取的技术方案是选取以下中药复方制得冬虫夏草菌丝体2～2.5重量份、黄芪12～15重量份、丹参12～15重量份、首乌4～5重量份、枸杞5～6重量份、太子参5～6重量份。采用大豆卵磷脂∶蛋黄卵磷脂＝7∶3比例制的脂质体包封上方提取液。
本发明的优点或积极效果发明人从1997年开始研制可博利-2号口服液，治疗乙型肝炎后肝硬化失代偿期至今已有5年，治疗200余例肝炎后肝硬化及400多例慢性乙型肝炎后病人。治疗结果显示(1)经过口服三个月能使丙二醛(MDA)由治疗前32.19±7.74下降至19.23±4.75(μmol/L)；透明质酸从治疗前546.12±77.97下降至398.39±84.81(mg/mL)；丙二醛(MDA)治疗前与治疗后相比，P＜0.05；与对照组相比，P＜0.05；透明质酸(HA)治疗前与治疗后相比，P＜0.05。乙肝病毒侵入人体后引起肝损害的机理很多，其中之一是自由基增多；另一方面慢性肝炎病人肠道内毒素吸收增加都可以使自由基增多。自由基一方面损害肝细胞，使肝细胞破坏，另一方面引起炎症，释放出多种细胞因子，从而贮脂细胞转化成为纤维细胞，加重肝纤维化。本制剂可以减少自由基则减少肝纤维化沉积，有利于慢性肝炎恢复，有利于抑制肝纤维化的发展；(2)有利于白蛋白的合成，服用可博利-2号口服液三个月后使患者白蛋白从28±4.32增至32.69±4.64(g/L)，P＜0.01，与对照组相比，P＜0.05，说明可博利-2号口服液能促进肝细胞的功能，促进白蛋白的合成。(3)增强机体免疫功能。治疗前可溶性白介素2受体(SIL-2R)明显高于正常人，治疗后明显下降，与治疗前相比较，P＜0.01；与对照组相比较，P＜0.05。IL-2是细胞免疫关键性的细胞因子之一，IL-2增高反映细胞免疫功能增强，IL-2与可溶性受体结合后丧失一定活性，因此SIL-2R增高则使细胞免疫功能下降；相反，SIL-2R下降则反映免疫功能的增强，本方治疗3个月测定患者SIL-2R普遍下降。因本院条件限制，无法测定IL-2。(4)提高垂体-性腺轴功能。慢性肝炎患者常常存在垂体-性腺轴功能障碍，表现为男性睾丸酮(T)下降，女性雌二醇(E2)增加，垂体促卵泡生成素的下降，经治疗后可明显增高，尚在统计之中。
采用CCL4诱导的肝硬化模型，然后用可博利-2号口服液和干扰素注射作为对照观察组，结果表明(1)大剂量可博利-2号口服液和干扰素可显著降低肝羟脯氨基酸含量(P＜0.05＝。羟脯氨基酸是胶原纤维特有的氨基酸，测定羟脯氨基酸可一定程序上反映肝纤维化程度，羟脯氨基酸愈高说明肝纤维化愈重，反之愈然。(2)肝脏病理学检查，与空白组比较，模型组纤维化程度明显增高(P＜0.01＝。与模型组比较，可博利-2号口服液和干扰素均能降低肝纤维化程度(P＜0.01或P＜0.05＝。
该口服液还做了毒理试验，按卫生部《中药新药研究指南)》中药三类毒理有关的要求观察可博利-2号口服液长期给药的毒性反应，剂量设置相当于临床用量80、40、20倍，给药三个月。结果，血液生化学指标检查表明，可博利-2号口服液无论小、中、大剂量虽能引起一些变化，如大剂量组白蛋白比空白对照组低，其中小剂量组血清总蛋白和大剂量组球蛋白升高，可博利-2号口服液中剂量组的尿素氮(BUN)降低无临近病理意义。其它指标如谷草转氨酶(AST)、总胆固醇(THO)、血糖(GLU)、肌肝无明显变化，与空白对照组均无显著性差异。病理组织学检查发现，空白对照组1例(1/12)灶性脂肪变，2例(2/12)脑有淀粉样小体；可博利-2号口服液中剂量组3例(3/12)有灶性脂肪变，1例(1/12)脑有淀粉样小体；大剂量有3例(3/12)肝有灶性脂肪变，2例(2/12)脑有淀粉样小体。上述病理改变正常动物都可能出现，给药组与空白对照组无明显差别。其它器官如心脏、脾、肾、肾上腺、胸腺、胃、小肠、膀胱、睾丸、卵巢等脏器病理组织学检查无异常发现。连续给药三个月及停药半个月，脏器系数检查亦无异常。长期毒性试验表明，可博利-2号口服液无明显毒性作用，因而认为按拟用临床剂量、给药途径和使用疗程应用可博利-2号口服液是安全的。
生产工艺流程参见附图
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实施例以制备30000mL可博利-2号口服液为例。
分别称取黄芪14kg，丹参14kg，枸杞5.5kg，首乌5kg，太子参5kg，冬虫夏草菌丝体2.5kg，卵磷脂210g，蛋黄卵磷脂90g，胆固醇100g，维生素E 500mg。
1、中药有效成份提取将太子参用渗漉法提取，溶剂为95％乙醇10000mL，渗漉液回收乙醇制得药液(1)备用，药渣另具保存；取丹参加入95％25000mL回流提取两次，每次2小时，提取液回收乙醇制得药液(2)备用，药渣另具保存；取枸杞、首乌、黄芪与太子参药渣、丹参药渣加水300000mL煎煮3次，每次2小时，合并煎液，浓缩约3小时至稠膏状(相对密度约1.30)，加入95％乙醇使含醇量达60％，放置24小时，取上清液回收乙醇，得药液(3)备用。
2、冬虫夏草多糖提取取冬虫夏草菌丝体加水15000mL煎煮3次，每次2小时，合并煎液，浓缩至15000mL，备用。
3、脂质体膜材制备取卵磷脂、蛋黄卵磷脂、胆固醇置于玻璃瓶中，加入400mL氯仿溶解后，加入维生素E，旋转玻璃瓶，使氯仿安全挥发，制成脂质体膜材。
4、可博利-2号口服液制备将冬虫夏草多糖溶液、药液(1)、药液(2)和药液(3)加入脂质体膜材中，放置2小时后，搅拌10小时，超声20分钟，加磷酸盐缓冲液至30000mL，灌封，灭菌，检验，包装即得。
可博利-2号口服液包封情况可博利-2号口服液经广西农业大学实验中心电子显微镜检验，证实脂质体包封药物，粒径100～200mm，且分布均匀。
包封率测定采用透析测定包封率，经广西玉林市红十字会医院药剂科检验，脂质体对冬虫夏草多糖的包封率为40％～0％之间。
采用超声处理后，能使大多数多室脂质体变为单室脂质体。
我们采用脂质体包封冬虫夏草多糖、丹参、黄芪等，商品名可博利-2号(CPL-2)治疗肝炎后肝硬化30例，结果证明该药在改善肝功能，增高白蛋白，降低球蛋白，同时可通过清除氧自由基，使体内MDA降低，从而使肝纤维化(HA)得以改善。动物实验也证明这一点。
权利要求
1.一种抗肝纤维化的药物，其特征是选取以下中药复方制得冬虫夏草菌丝体2～2.5重量份、黄芪12～15重量份、丹参12～15重量份、首乌4～5重量份、枸杞5～6重量份、太子参5～6重量份。
2.根据权利要求1所述的抗肝纤维化药物，其特征是采用大豆卵磷脂∶蛋黄卵磷脂＝7∶3比例制的脂质体包封上方提取液。
全文摘要
本发明公开了一种抗肝纤维化的药物，采用中药复方冬虫夏草菌丝体、黄芪、丹参、首乌、枸杞、太子参制得，用脂质体包封复方中药提取液。本制剂可以减少自由基则减少肝纤维化沉积，有利于慢性肝炎恢复，改善肝功能，通过清除氧自由基，使体内MDA降低，从而使肝纤维化得以改善。有利于抑制肝纤维化的发展；促进肝细胞的功能，促进白蛋白的合成。增强机体免疫功能及提高垂体－性腺轴功能。且使用安全。
文档编号A61P1/00GK1456220SQ0311851
公开日2003年11月19日 申请日期2003年1月21日 优先权日2003年1月21日
发明者赵胜利 申请人:赵胜利