专利名称：用于治疗肾癌的缩酚肽的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种治疗肾癌的方法和一种肾癌治疗剂。
背景技术：
已有人指出仅基于体外数据而被报道为具有抗肿瘤活性的物质和化合物，通常无法预期其在体内的抗肿瘤效果。换言之，在体外表现出抗肿瘤活性的物质并不必然在体内也表现出抗肿瘤活性，因此，在体外表现出抗肿瘤活性的物质直接作为抗癌试剂应用是成问题的。
例如，已经报道了式(I)的化合物(序列表SEQ ID No.1) 通过选择性抑制组蛋白脱乙酰基酶而诱导强抗肿瘤活性。还有报道指出这种物质在用该物质治疗时会导致细胞组蛋白的高乙酰化，结果，诱导了多种基因的转录控制活性，细胞循环抑制活性和细胞凋亡抑制活性(JP-B-7-64872，H.Nakajima等，Exp.Cell Res.241，126-133(1998))。然而，就目前情况而言，仍有许多问题需要解决，例如体外导致体内应用的有效性，体内抗任何肿瘤的功效等。在体外抗肾癌的抗肿瘤活性已有报道，但是在体内抗肾癌的抗肿瘤活性还未有过报道。
组蛋白脱乙酰基酶是一种在活性中心由锌配位的金属脱乙酰基酶(M.S.Finnin等，Nature，401，188-193(1999))。该酶被认为改变了不同的乙酰化组蛋白对DNA的亲和力。因此提供的直接生物学现象是染色质结构的改变。染色质结构的最小单位是核小体，其中一段146bp的DNA以逆时针方向环绕一个组蛋白八聚体(H2A，H2B，H3和H4，各2分子，组蛋白核心)1.8圈。由于每个组蛋白蛋白质N-端的正电荷与DNA发生相互作用，核心组蛋白稳定了核小体结构。组蛋白乙酰化作用受到涉及组蛋白乙酰转移酶的乙酰化反应和涉及组蛋白脱乙酰基酶的脱乙酰反应间的平衡关系调控。组蛋白的乙酰化作用发生于组蛋白N端中一个在进化上相当保守的细胞溶解酶残基上，由此，认为组蛋白核心丢失N端电荷，与DNA的相互作用减少，核小体结构变得不稳定。因此，相反地，认为组蛋白脱乙酰作用能稳定核小体结构。然而，由乙酰化作用引起的染色质结构改变的程度是不清楚的，其如何与转录的次级诱导调控相关联也不清楚。
发明公开本发明的发明人进行了进一步的研究试图解决上述问题，并发现一种肾癌治疗剂，其能证实在体内，特别是肾癌患者体内的抗肿瘤作用，从而完成了本发明。
因此，本发明提供了如下述内容。
(1)一种治疗哺乳动物肾癌的方法，包括对哺乳动物施用有效量的式(I)的化合物
或其盐。
(2)根据上述(1)的肾癌治疗方法，其中式(I)的化合物是式(II)的化合物 (3)根据上述(1)的肾癌治疗方法，其中哺乳动物是人类。
(4)一种抑制哺乳动物的肾癌性肿瘤生长的方法，包括对哺乳动物施用有效量的式(I)的化合物 或其盐。
(5)根据上述(4)的抑制肾癌性肿瘤生长的方法，其中式(I)的化合物是式(II)的化合物。
(6)在体内抑制肾癌性肿瘤生长的上述(4)的方法。
(7)上述(6)的方法，其中在体内是指在人体内。
(8)一种肾癌治疗剂，包括作为有效成分的式(I)的化合物 或其盐。
(9)根据上述(8)的治疗剂，其中式(I)的化合物是式(II)的化合物。
(10)根据上述(8)的治疗剂，其具有体内抗肿瘤活性。
(11)根据上述(8)的治疗剂，其用于人类。
(12)式(I)的化合物 或其盐用于制备肾癌治疗剂的用途。
(13)根据上述(12)的用途，其中式(I)的化合物是式(II)的化合物。
(14)根据上述(12)的用途，其中上述肾癌治疗剂具有体内抗肿瘤活性。
(15)根据上述(12)的用途，其中上述肾癌治疗剂用于人类。
(16)一种用于治疗肾癌的药物组合物，包括式(I)的化合物 或其盐和药学上可接受的载体。
(17)上述(16)的药物组合物，其中式(I)的化合物是式(II)的化合物。
(18)上述(16)的药物组合物，其具有体内抗肿瘤活性。
(19)上述(16)的药物组合物，其用于人类。
(20)包含上述(16)-(19)任一项的药物组合物和与其相关的书面内容的商业包装，所述书面内容声明该药物组合物能够或应当用于治疗肾癌。
附图简述
图1显示了FR901228抗移植至小鼠的人类肾肿瘤(RXF-631L)的抗肿瘤活性。
发明详述本发明的肾癌治疗剂包含作为活性组分的式(I)的化合物(下文中也称为FK228)或其盐。本发明治疗肾癌的方法包括对包括人类在内的哺乳动物施以有效量FK228。式(I)的化合物中优选的是式(II)的化合物，它是一种立体异构体(下文中也称为FR901228)。这些化合物具有强效的组蛋白脱乙酰基酶的抑制活性(Nakajima，H.等；ibid(1998))，特别是FR901228，具有甚至更强的组蛋白脱乙酰基酶的抑制活性。因此，其适于包含在本发明的肾癌治疗剂中，而且可适用于本发明的肾癌治疗方法。
除非另有所指，在本说明书中FK228是指一组化合物，不考虑立体异构并包括式(II)的化合物。
FK228及其盐是已知的物质并是可获得的。例如，FR901228(FK228的一种立体异构体)可以通过在需氧的条件下培养能够产生FR901228的Cromobacterium属的菌株并从培养液中回收物质而得到。以Cromobacteriumviolaceum WB968(FERM BP-1968)为例，该菌株属于Cromobacterium属，并能够产生FR901228。FR901228物质可从根据JP-B-7-64872公开的该制备细胞中获得。优选从能够产生FR901228的Cromobacterium属的菌株中获得FR901228，因为能更容易地获得FR901228。不过，合成或半合成FR901228也是有利的，因为不需要或可简化附加的纯化步骤。同样，FR901228以外的FK228可用公众已知的常规方法合成或半合成。具体而言，其可根据Khan W.Li等报道的方法进行制备(J.Am.Chem.Soc.，Vol.118，7237-7238(1996))。
FK228的盐一般是无毒的，是生物学上可接受的盐，例如其碱盐或酸加成盐，包括无机碱盐例如碱性金属盐(例如，钠盐、钾盐等)、碱土金属盐(例如，钙盐、镁盐等)、铵盐、有机碱盐例如有机胺盐(例如，三乙胺盐、二异丙基乙胺盐、吡啶盐、甲基吡啶盐、乙醇胺盐、三乙醇胺盐、二环己基胺盐、N，N’-二苄乙二胺盐等)、无机酸加成盐(例如，盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐等)、有机羧基磺酸基酸加成盐(例如，甲酸盐、醋酸盐、三氟醋酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、延胡索酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐等)、碱性或酸性氨基酸盐(例如，精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸等)、及类似的盐。
FK228有基于不对称碳原子和双键的立体异构体，例如光学异构体，几何异构体等，上述所有立体异构体和其混合物均包括在本发明之内。
而且，本发明也包括FK228、FR901228及其盐的溶剂化化合物(例如，包合物例如水合物等)。
在本发明中，体内和体外同在本领域中使用的这些术语意思一致。即，“体内”是指在体内表达靶生物学功能和应答，如在下述多种哺乳动物体内，优选在人体内。术语“体外”是指在包括组织培养系统，细胞培养系统，无细胞系统等的试管中表达所述功能和应答。
FK228，一种组蛋白脱乙酰基酶抑制剂，表现出抗多种肿瘤的抗肿瘤活性。其中，它表现出在体内和在人体内抗肾癌的显著效果。
本发明的肾癌治疗剂能用于哺乳动物，例如人，狗，牛，马，大鼠，豚鼠等。
本发明的肾癌治疗剂可以以包含FK228或其盐作为活性成分与适合口服或胃肠道外应用的有机或无机载体或赋形剂混合的固体，半固体或液体的药物制剂形式而使用。活性成分可以与典型的，适于如粉末，片剂，小糖丸，胶囊，栓剂，液体制剂，乳剂，悬浮液，气雾剂，喷雾剂和其它应用于剂型的无毒的药学上可接受的载体混合。当需要时，可使用辅助剂，稳定剂，粘合剂等。当需要时，这些载体和赋形剂可以是灭菌的，或可在配制为制剂后进行消毒处理。FK228及其盐以足以产生对肾癌的治疗效果例如抑制向外围组织扩散、向远端转移和癌生长的量而包含于肾癌治疗剂中。
本发明的肾癌治疗剂的施用方法不受任何特别限制只要其能提供上述肾癌治疗效果。特别地，使用本发明肾癌治疗剂时，优选胃肠道外给药，即，静脉内给药，肌内给药，直接给药到组织，鼻腔内给药，皮内给药，脑脊液内给药，胆管内给药，叶鞘内给药等。另外，优选使用脂质体等方法。当将该治疗剂应用于人类时，优选使用静脉内给药，肌内给药或口服。活性成分FK228或其盐的治疗有效量，根据要治疗的患者个体的年龄和状况以及癌的类型而不同。在静脉内给药的情况下，FK228的每日剂量通常是0.1～100mg，优选1～50mg，更优选5～30mg，以每m2人体表面积计，其采用输注方式连续给药以治疗肿瘤。连续输注给药的时间根据剂量而改变。优选3～6小时，更优选3.5～4.5小时，最优选4小时。给药频率以18～30日间隔内施用1～4次为一个周期，优选应用2～7个所述周期。另外，优选FK228和维甲酸(优选全反式维甲酸ATRA)联合治疗。
以下通过实施例更详细地描述本发明。这些实施例不以任何方式限制本发明。
实施例1FK228对人肾肿瘤异种移植物的抗肿瘤效果(1)药品制备称出推荐量的FR901228，加入溶剂(10％HCO-60(Nihon Surfactant KogyoK.K./生理盐水)然后用超声处理该混合物使之溶解。在试验前，将阳性对照物质，紫杉醇，溶解于聚氧乙烯蓖麻油(SIGMA/乙醇(1∶1))至浓度为24mg/mL然后保存在冰箱中。使用时，加入9倍量生理盐水稀释该物质至2.4mg/mL(溶剂成分5％聚氧乙烯蓖麻油-5％乙醇-90％生理盐水)。
(2)动物为测试药物抗肿瘤活性，从Charles River Japan(横滨，日本)购买BALB/cANnNCrj-nu/nu小鼠(雌性，6周龄)，然后在其适应环境超过一周后进行试验。将小鼠饲养在无致病菌的环境中，其能自由获得水和饲料。
(3)肿瘤将2-3×107人肾肿瘤(RXF-631L癌症化学疗法中心，日本癌症研究基金会，东京，日本)通过皮下系列继代移植维持于BALB/cANnNCrj-nu/nu小鼠皮下。
(4)试验性植入和分组将RXF-631L肿瘤碎片(3×3×3mm)经皮下植入至BALB/CANnNCrj-nu/nu小鼠的右肋腹。在肿瘤植入后当肿瘤体积达到100-300mm3时，将小鼠分组(每组6只)，以避免肿瘤体积的分散。肿瘤体积计算公式肿瘤体积(mm3)＝1/2×L×W2，其中L和W分别表示肿瘤块的长度和宽度。
(5)给药从小鼠分组起(第0日)开始给药。将FR901228(3.2和1.8mg/kg)每4日3次(q4d×3)经静脉内施用于FR901228给药组。将阳性对照物质，紫杉醇，连续5日(qd×5)经静脉内施用于紫杉醇给药组(24mg/kg)。将溶剂(10％HCO-60/盐水)单独施用于对照组(q4d×3)。根据在给药日检测的体重计算给药的液体量(0.1mL/10g体重)。FR901228和紫杉醇的MTD(最大耐受剂量)分别是3.2mg/kg/日(q4d×3)和24mg/kg/日(qd×5)。
(6)肿瘤大小和体重的测量从第0日开始每周两次测量肿瘤的大小(长度，宽度)和体重。
结果示于图1中，其中-●-表示对照组肿瘤大小的变化，-■-表示以1.8mg/kg施用FR901228的变化，-▲-表示以3.2mg/kg施用FR901228的变化，-◆-表示以24mg/kg施用紫杉醇的变化。
FR901228抑制人体内肾癌生长。
实施例2抗肿瘤应答一位患者(患者编号31-00-83-2)证明产生了部分应答。这位患者是一名在1996年被诊断出的有透明细胞肾癌病史的38岁女性。该患者接受总计10剂的FR901228在第1周期(21日)的第1日和第5日以9.10mg/m2，第2周期(21日)的第1日以9.10mg/m2，第3周期(28日)的第1日和第5日以9.10mg/m2，第4周期(22日)的第1日以9.10mg/m2，第5周期(20日)的第1日以12.70mg/m2，在第6周期(23日)的第1日以17.8mg/m2，第7周期(23日)的第1日以17.8mg/m2和第8周期(21日)的第1日以17.8mg/m2，4小时连续输注FR901228。根据RECIST标准评价治疗效果。
这位患者在头2个周期后产生部分应答，在第8个周期后疾病显著改善。
工业适用性本发明的肾癌治疗剂包含具有组蛋白脱乙酰基酶抑制活性、不仅在体外而且在体内表现出较高的抗肿瘤活性的活性成分FK228(特别是FR901228)或其盐。本发明的肾癌治疗剂在人肾癌患者中表现出优异的抗肿瘤活性。
所以，本发明适合应用于肾癌治疗。
序列表的独立文本SEQ ID NO1Xaa是由式NH2C(CHCH3)COOH表示的氨基酸。在式COOHCH2CH(CHCHC2H4SH)OH中，羧基与第1个氨基酸Val的氨基键合，羟基与第4个氨基酸Val的羧基键合，SH基经由二硫键与第2个氨基酸Cys的SH基键合。
本申请基于在美国递交的专利申请No.60/369,868，在此将其内容引入作为参考。
序列表<110>藤泽药品工业株式会社<110>美国政府(由卫生及人群服务部部长代表)<120>肾癌的治疗方法和治疗剂<130>09537<150>US60/369,868<151>2002-04-05<160>1<210>1<211>4<212>PRT<213>色素杆菌属<220>
<223>发明者Yoshinari Naoe<223>发明者Susan E. Bates<220>
<221>位点<222>(3)<223>Xaa是由式NH2C(CHCH3)COOH表示的氨基酸
<220>
<221>位点<222>(1)，(2)，(4)<223>在式COOHCH2CH(CHCHC2H4SH)OH中，羧基与第1个氨基酸Val的氨基键合，羟基与第4个氨基酸Val的羧基键合，SH基经由二硫键与第2个氨基酸Cys的SH基键合。
<400>1Val Cys Xaa Val
权利要求
1.一种治疗哺乳动物肾癌的方法，包括对哺乳动物施用有效量的式(I)的化合物 或其盐。
2.根据权利要求1的肾癌治疗方法，其中式(I)的化合物是式(II)的化合物
3.根据权利要求1的肾癌治疗方法，其中哺乳动物是人类。
4.一种抑制哺乳动物的肾癌性肿瘤生长的方法，包括对哺乳动物施用有效量的式(I)的化合物 或其盐。
5.根据权利要求4的抑制肾癌性肿瘤生长的方法，其中式(I)的化合物是式(II)的化合物
6.权利要求4的方法，该方法用于在体内抑制肾癌性肿瘤生长。
7.权利要求6的方法，其中在体内是指在人体内。
8.一种肾癌治疗剂，包括作为活性成分的式(I)的化合物 或其盐。
9.根据权利要求8的治疗剂，其中式(I)的化合物是式(II)的化合物
10.根据权利要求8的治疗剂，其具有体内抗肿瘤活性。
11.根据权利要求8的治疗剂，其用于人类。
12.式(I)的化合物 或其盐用于制备肾癌治疗剂的用途。
13.根据权利要求12的用途，其中式(I)的化合物是式(II)的化合物
14.根据权利要求12的用途，其中上述肾癌治疗剂具有体内抗肿瘤活性。
15.根据权利要求12的用途，其中上述肾癌治疗剂用于人类。
16.一种用于治疗肾癌的药物组合物，包括式(I)的化合物或其盐， 和药学上可接受的载体。
17.权利要求16的药物组合物，其中式(I)的化合物是式(II)的化合物
18.权利要求16的药物组合物，其具有体内抗肿瘤活性。
19.权利要求16的药物组合物，其用于人类。
20.包含权利要求16-19任一项的药物组合物和与其相关的书面内容的商业包装，所述书面内容说明该药物组合物能够或应当用于治疗肾癌。
全文摘要
本发明提供一种包含式(I)的FK228或其盐的肾癌治疗剂。FK228或其盐是本发明中的活性成分，其在体内表现出抗肾癌的优良抗肿瘤活性。
文档编号A61P35/00GK1649645SQ0380759
公开日2005年8月3日 申请日期2003年3月27日 优先权日2002年4月5日
发明者直江吉则, S·E·巴特斯 申请人:藤泽药品工业株式会社, 美国政府卫生与公众服务部