专利名称：发酵大豆萃取液的利用方法
技术领域：
本发明涉及一种发酵大豆(学名Glycine max)萃取液(fermented soybeanextract，简称FSE)的利用方法，尤其是指一种可增加动物及人类自然杀手细胞活性，且可对γ-氨基丁酸(GABA)受体及谷氨酸(glutamate)受体结合配体的能力具有抑制性的萃取液的制造方法。
背景技术：
一般而言，单一氨基酸GABA及谷氨酸，分别为主要的抑制性及兴奋性神经传导物质，在人脑中，大部分脑中的神经细胞，具有结合胞外GABA及谷氨酸的细胞膜受体；具有高专一性的蛋白质，能维持这些氨基酸于细胞外的低浓度，且这些蛋白质也能移除由突触所释放的GABA及谷氨酸，因此能快速的终止GABA及谷氨酸于突触的活性。
所述GABA可活化三种不同类型的受体，其分别为GABAA、GABAB和GABAC受体，其中，GABAA受体为一种配基门控的氯离子通道，这些受体受到GABA、蝇蕈醇(muscimol)及四氢吡啶甲酸(isoguvacine)的活化，并受到biscuculline、gabazine及(+)-β-白毛莨碱((+)-β-hydrastine)的抑制；该GABAA受体具有高度重要性，因它是调节脑部刺激反应的中枢角色，且许多重要的药物如苯二氮卓类(benzodiazepines)、巴比妥类(barbiturates)、酒精、神经性类固醇(neurosteroids)及一些抗痉挛剂(anticonvulsants)及一般的麻醉剂都会与这些受体结合。
所述谷氨酸可与两种型态的专一性受体结合，造成相关离子通道(离子性受体)打开，使阳离子Na+及Ca2+通过而进入细胞。至目前为止，有三种离子性受体被确认，分别为N-methyl-D-aspartate(NMDA)、kainate及α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole roprionate(AMPA)，谷氨酸传递作用的改变与许多CNS病理症状有关，包含中风、大脑渐进式退化、慢性疼痛、忧郁症、药物依赖性、癫痫、帕金森氏症及精神分裂症。
发明内容
本发明的主要目的在于提供一种发酵大豆萃取液的利用方法，藉由萃取液对GABA受体及谷氨酸受体产生抑制性，延长巴比妥所引起的睡眠时间，以及降低癌症病人于化疗期所产生的疲劳感。
为达到上述目的，本发明所述的利用方法，包含乳酸菌及酵母菌共同培养和发酵而成，将该乳酸菌及酵母菌驯化培养以及经由浓缩制成浓缩液等步骤。
具体而言，本发明提供的一种发酵大豆萃取液的利用方法，包含以下步骤a、混合天然营养物及培养液，以产生特殊的培养基；b、将前述的培养基于控制环境下，分别恒温培养不同种类的乳酸菌及酵母菌；c、将乳酸菌及酵母菌所产生的培养菌液分别移植至大豆培养液中，于控制的环境下恒温培养；d、藉由分组将乳酸菌及酵母菌分别接入有机培养液中，分组驯化培养；e、将步骤中所有分组培养液加入所制备的大豆培养液中，开始共生发酵培养；f、给予个人一定数量的上述萃取液，以增加自然杀手细胞活性，并对γ-氨基丁酸(GABA)及谷氨酸(glutamate)受体结合配体的能力具有抑制性，进而延长巴比妥(pentobarbital)所引起的睡眠时间，且可降低癌症病人在化疗期间所产生的疲劳感。
其中，最少有一种乳酸菌及酵母菌移送至上述培养基。
根据本发明所述的利用方法，其工艺中所使用的微生物包含Lactobacillusparacasei，Lactobacillus burglarious，Saccharomyces cerivisiae等。
根据本发明所述的利用方法，所产生的萃取液，可制成胶囊、片剂或粉末。
本发明中所制成的萃取液产品可抑制神经细胞谷氨酸受体及NMDA及kainate兴奋剂的结合、延长巴比妥(pentobarbital)所引起的睡眠时间，以及降低癌症病人于化疗期间所产生的疲劳感。
图1为本发明对ICR老鼠活动力的影响图表。
图2为本发明对巴比妥诱导的睡眠时间的影响图表。
具体实施例方式
本发明的利用方法，主要包含以下的步骤1、混合天然营养物及培养液，产生特殊的培养基；2、将前述步骤1的培养基于控制环境下，分别恒温培养不同种类的乳酸菌及酵母菌；3、去除大豆中的脂肪，加入蒸馏水经由约两小时的煮沸以产生液体，将液体过滤后成为有机的大豆培养液；4、将乳酸菌及酵母菌与步骤2所产生的培养菌液，分别移植至步骤3的大豆培养液中，于控制的环境下恒温培养；5、藉由分组将乳酸菌及酵母菌分别接入步骤3的有机培养液中，分组驯化培养；6、将步骤5中所有分组培养液加入步骤3所制备的大豆培养液中，开始共生发酵培养；7、将步骤6的微生物培养液加热，以高温终止微生物的生长，移去培养液中的微生物，并浓缩过滤液至原体积的十五分之一(去除约93％-96％的水分)；8、将步骤7中所制备的浓缩液置于室温至少两个月，以分离浓缩液，收集上层液体至容器中，并予以加热获得萃取液产品。
在上述工艺中，同时完成不同的化学、制造及控制组的分析，包括genistein及daidzein的含量、HPLC图谱、pH值及物理性质(气味、外表、颜色、透明度、味觉及沉淀物)。
GABA受体及谷氨酸受体结合力的体外试验进行放射线配体-结合分析，藉由测量[3H]Muscimol结合GABAA受体的能力，研究本发明对于GABA受体的影响。首先，将雄性Wistar老鼠的整个小脑膜(重量为175±25克)，根据实验步骤，置于Tris-HCl，pH7.4的缓冲液中，然后将10mg的脑膜及1nM[3H]Muscimol于4℃中培养10min，并计算在100nMmuscimol环境下的非专一性吸附量；将脑膜印于过滤膜上，并以缓冲液清洗3次，计数过滤膜上的放射线量，以决定[3H]Muscimol的专一性结合力。
在前述的放射线标定-结合实验中，以不同稀释浓度的本发明萃取液进行实验，测得本发明萃取液的IC50为0.00075％(见表1)，显示其在GABA受体兴奋性配体结合区上，具有强烈的结合活性。
表1本发明对GABAA受体结合的影响列表
估算FSE对GABAA的IC50为0.00075％的稀释浓度另，藉由测量CGP-39653(一种选择性的抑制性配体)结合NMDA受体的能力，研究本发明对于谷氨酸受体的影响，依据标准实验步骤，分离雄性老鼠脑皮层的细胞膜，将20mg的脑膜及2.0nM[3H]CGP-39653于4℃中培养20min；并计算在1000mM L-glutamate环境下的非专一性吸附量；将脑膜印于过滤膜上，并用缓冲液清洗3次，计数过滤膜上的放射线量，以决定[3H]CGP-39653的专一性结合力，以类似的实验步骤，同样利用5.0nM[3H]kainite作为配体，测量与glutamate及kainite受体的结合能力，以不同稀释浓度的本发明萃取液进行实验，对于NMDA及kainite两个受体，本发明的IC50分别为0.069％及0.096％(如表2所示)。
表2本发明对谷氨酸受体结合的影响列表
估算FSE对NMDA和kainate受体兴奋剂的IC50分别为0.069％和0.096％的稀释浓度又，利用ICR老鼠研究本发明的摄取对于动物活动力以及由巴比妥引起睡眠行为的影响，老鼠口服剂量相当于人类摄取13mL的量，显示本发明大幅降低了老鼠的活动力，并延长了巴比妥引起的睡眠时间(如图1、图2所示)。
再者，本发明于人体的临床实验，采用测量10-cm视觉类比评分表(visualanalog scale)，显示在服用本发明的萃取液经14至28天后，癌症病人的疲劳感明显的降低，且食欲明显的变好(如表3所示)。
表3本发明对癌症患者于化疗期间所引起的食欲不振及疲劳的影响列表
10-cm视觉类比评分分数越高表示越疲劳，食欲越差经由重复测量分析所得到的p值*表示与未服用组比较显著差异在0.05的范围**表示与未服用组比较显著差异在0.01的范围
权利要求
1.一种发酵大豆萃取液的利用方法，包含以下的步骤a、混合天然营养物及培养液，以产生特殊的培养基；b、将前述的培养基于控制环境下，分别恒温培养不同种类的乳酸菌及酵母菌；c、将乳酸菌及酵母菌所产生的培养菌液分别移植至大豆培养液中，于控制的环境下恒温培养；d、藉由分组将乳酸菌及酵母菌分别接入有机培养液中，分组驯化培养；e、将步骤中所有分组培养液加入所制备的大豆培养液中，开始共生发酵培养；f、给予个人一定数量的上述萃取液，以增加自然杀手细胞活性，并对γ-氨基丁酸及谷氨酸受体结合配体的能力具有抑制性，进而延长巴比妥所引起的睡眠时间，且可降低癌症病人在化疗期间所产生的疲劳感。
2.如权利要求1所述的发酵大豆萃取液的利用方法，其中最少有一种乳酸菌及酵母菌移送至上述培养基。
3.如权利要求1所述的发酵大豆萃取液的利用方法，其中该萃取液可增加γ-氨基丁酸及谷氨酸受体结合配体的能力具有抑制性。
4.如权利要求1所述的发酵大豆萃取液的利用方法，其中该萃取液可延长睡眠时间。
5.如权利要求1所述的发酵大豆萃取液的利用方法，其中该萃取液可降低癌症病人在化疗期间所产生的疲劳感。
6.如权利要求1所述的发酵大豆萃取液的利用方法，其中该萃取液可制成胶囊、片剂或粉末。
全文摘要
本发明涉及一种发酵大豆(学名Glycine max)萃取液(fermented soybean extract，简称FSE)的利用方法，主要是由乳酸菌及酵母菌共同培养及发酵而成，其中所述乳酸菌、酵母菌经由驯化、发酵培养以及经由浓缩制成浓缩液等步骤，所制成的萃取液产品具有抑制神经细胞谷氨酸受体及NMDA及kainate兴奋剂的结合、延长巴比妥(pentobarbital)所引起的睡眠时间，以及降低癌症病人于化疗期间所产生的疲劳感。
文档编号A61P25/00GK1720954SQ200410058419
公开日2006年1月18日 申请日期2004年8月11日 优先权日2004年7月15日
发明者路孔明 申请人:中天生物科技股份有限公司