18元环大环化合物及其类似物的制作方法

专利名称：18元环大环化合物及其类似物的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的抗菌组合物及其与已有药物合用治疗革兰氏阳性厌氧菌引起的感染的应用，该组合物包含R-Tiacumicins，特别是R-TiacumicinB(在C-19位有R-羟基)。
此外，本发明涉及其中含约70-100％、优选90％(相对全部抗菌物质，用HPLC定量分析)R-Tiacumicin B的新的OPT-80制剂。剩余部分基本上由少量Tiacumicin B相关化合物(包括但不限于闰年霉素A4和C-19酮)组成。该类型制剂在PCT专利申请PCT/USO3/21977中有详细描述，国际公开号为WO 2004/014295A2。然而，在给非人类专用时，可以用包含少于70％的光学纯R-Tiacumicin B(相对全部抗菌物质，用HPLC定量分析)的粗OPT-80。
根据本发明，提供了式VII结构的化合物
式VII 其中， X选自低级烷基，其中此处所用术语“低级烷基”指包括一至两个碳原子的支链或直链烷基，其包括甲基、乙基、正丙基、异丙基等； Y选自OH或酮(＝O)；并且 Z选自H或低级烷基，其中此处所用术语“低级烷基”指包括一至五个碳原子的支链或直链烷基，其包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基等。
本发明的优选化合物是其中X为甲基或乙基、Y为酮(＝O)或OH并且Z为异丙基的式VII化合物。
本发明的更优选化合物是其中X为乙基、Y为酮(＝O)或OH并且Z为异丙基的式VII化合物。
本发明的最优选化合物是其中X为乙基、Y为OH并且Z为异丙基的式VII化合物。
本发明的一个实施方案是发现Tiacumicin B的C-19位手性中心对生物活性有重要影响。目前已发现在19位有R羟基的R-Tiacumicin B的活性显著高于S-Tiacumicin B和其它Tiacumicin B相关化合物(闰年霉素A4和C-19酮)。MIC值越低表示活性越高，见下面关于艰难梭菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌(E.faecalis)和屎肠球菌(E.faecium)菌株的实施例3、表3和表4。C-19位手性中心对生物活性的影响是出乎意料的新发现。
在本发明的另一个实施方案中，OPT-80(其几乎完全由R-Tiamicin B组成)有显著长的抗生素后效应(PAE)。这在下面的实施例4进行讨论，其中OPT-80有多于24小时的PAE。该PAE出乎意料地长于通常的抗生素的1-5小时的PAE。
本发明也涉及药物组合物，该药物组合物包括本发明的化合物及药学上可接受的载体。
本发明的另一方面公开一种抑制或治疗人类细菌感染的方法，该方法包括对患者给予单独的本发明化合物或结合其它抗细菌或抗真菌物质。
生产 18元环大环化合物和其类似物通过发酵的方法生产。在含有碳源、无机盐和其它带有一种或多种吸收剂的有机营养物质的培养基中，在适当的通气条件和无菌环境混合情况下，对用于产Tiacumicins的橙色指孢囊菌hamdenensis亚种AB 718C-41 NRRL 18085进行培养。
经鉴定，用于产活性抗菌剂的微生物属于放线菌科，孢囊菌属(抗生素杂志1987，40567-574和US专利4918174)。该微生物被命名为橙色指孢囊菌hamdenensis亚种718C-41。传代培养物得自ARS Patent Collection ofthe Northern Regional Research Center，United States Department ofAgriculture，1815 North University street，Peoria，IL.61604，U.S.A.，其登记号为NRRL 18085。菌株AB 718C-41的特性在抗生素杂志，1987，40567-574和US专利4918174中给出。
本发明包括由橙色指孢囊菌hamdenensis亚种微生物经深层需氧发酵得到的新抗菌剂(Tiacumicins)的组合物。制备方法在WO2004/014295A2中记载，在此引入作为参考。
药物制剂和给药 根据本发明，本发明的Tiacumicin化合物的药物组合物，特别是OPT-80(其几乎完全由R-Tiacumicin组成)可以制成制剂，以在给药后基本上立即或在给药后的任何预定时间或时间段内释放抗生素。
后一种类型的组合物通常为缓释制剂，该缓释制剂包括较长时段内在肠道中释放基本恒定浓度的药物的制剂和如在缓释释药投送技术(Modified-Release Drug Delivery Technology)，编者M.J.Rathbone，J.Hodgraft和M.S.Roberts.Marcel Dekker，Inc.New York中所述的基于暂时的或环境条件的有缓释特性的制剂。
任何口服生物可接受剂型或其组合可在本发明的方法中应用。这些剂型的示例包括但不限于咀嚼片、速溶片、泡腾片、可复制粉剂、酏剂、水剂、栓剂、乳膏剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、片剂、多层片剂、双层片剂、胶囊、软明胶胶囊、硬明胶胶囊、渗透泵片剂、渗透胶囊、薄膜衣片、锭剂、咀嚼锭剂、珠剂、粉剂、颗粒剂、粒剂、微粒剂、分散颗粒剂、可摄入剂、输液、保健棒、糖膏剂、动物饲料、谷类食品、谷类包衣、食品、营养食品、保健食品及其组合。上述任何剂型的制备对本领域普通技术人员是公知的。另外，药物制剂可以设计为在到达靶位置时立即或控制释放抗生素。根据多种因素选择立即或控制释放组合物，这些因素包括物种、所治疗的革兰氏阳性菌的抗生素敏感性和治疗药物的抑菌/杀菌特性。在如RemingtonThe Science and Practice of pharmacy(20th ed.)编者A.R.Gennaro，2000，Lippincott Williams & Wilkins，Philadelphia，或在Encyclopedia of Pharmaceutical Technology，编者J.Swarbrick和J.C.Boylan，1988-1999，Marcel Dkker，New York中可发现用于制备制剂的本领域公知方法。
口服的立即释放制剂包括含有活性成分和非毒性的药学上可接受赋形剂混合物的片剂或胶囊剂。这些赋形剂可以包括例如惰性稀释剂或填充剂(如蔗糖、山梨糖醇、糖、甘露醇、微晶纤维素、包括土豆淀粉的淀粉、碳酸钙、氯化钙、乳糖、磷酸钙、硫酸钙或磷酸钠)；成粒剂和崩解剂(如包括微晶纤维素的纤维素衍生物、包括土豆淀粉的淀粉、交联羧甲纤维素钠、藻酸盐或藻酸)；粘合剂(如蔗糖、葡萄糖、乳糖、山梨糖醇、阿拉伯胶、藻酸、藻酸钠、明胶、淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、硅酸铝镁、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙甲纤维素、乙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮或聚乙二醇)；润滑剂、助流剂和抗粘剂(如硬脂酸镁、硬脂酸锌、硬脂酸、硅酸盐、氢化植物油或滑石粉)。其它药学上可接受辅料可以是着色剂、调味剂、增塑剂、润湿剂、缓冲剂及在例如由Arthur H.Kibbe编写的TheHandbook of Pharmaceutical Excipients，Third edition，AmericanPharmaceutical Association Washington DC中可发现的上述类似物。
溶出或扩散的控制释放可以通过对化合物的片剂、胶囊、丸剂或颗粒剂制剂适当包衣来实现，或通过将化合物加入适当的基质来实现。控制释放包衣可以包括一种或多种上面提到的包衣物质及/或如虫胶、蜂蜡、glycowax、蓖麻蜡、加拿巴蜡、十八烷醇、甘油单硬脂酸酯、甘油二硬脂酸酯、甘油硬脂酸棕榈酸酯、乙基纤维素、丙烯酸类树脂、dl-聚乳酸、醋酸丁酸纤维素、聚氯乙烯、聚乙酸乙烯酯、乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯、聚甲基丙烯酸酯、异丁烯酸甲酯、2-羟基异丁烯酸、异丁烯酸水凝胶、1，3-丁二醇、乙二醇异丁烯酸酯和/或聚乙二醇。在控制释放基质的制剂中，基质材料也可以包括例如水合甲基纤维素、加拿巴蜡、十八烷醇、Carbopol934、硅氧烷、甘油三硬脂酸酯、丙烯酸甲酯-异丁烯酸甲酯、聚氯乙烯、聚乙烯和/或卤代碳氟化合物。
控释组合物也可以为漂浮片或胶囊形式(如用于口服的可在胃内容物上面漂浮一定时段的片剂或胶囊)。化合物的漂浮片制剂可以通过将抗生素及赋形剂和20-75％w/w的水胶体(如羟乙基纤维素、羟丙基纤维素或羟丙甲纤维素)的混合物成粒加以制备。然后将制得的颗粒压制成片剂。与胃液接触时，上述片剂在其表面形成基本不透水的胶体屏障。该胶体屏障使密度保持小于1，因此上述片剂在胃液中保持漂浮。其它有用的控释组合物在本领域内是公知的(见例如US专利4946685和6261601)。
缓释组合物可以包括压制包衣的芯，该芯的几何形状控制包裹在内的抗生素的释放模式。通过改变芯的几何形状，抗生素的释放模式可以调节至0级、一级或其组合。该体系也可以设计用于同时传送多种有用物质，其中每种物质有不同的释放模式(见例如US专利4111202和3279995)。
本发明中Tiacumicin化合物(特别是几乎完全由R-Tiacumicin组成的OPT-80)的释放到肠道特定区域的制剂也得以制备。本发明的Tiacumicin化合物(特别是OPT-80)可以包裹在肠溶衣中，肠溶衣可以防止在胃中降解和释放，但是其在小肠的弱酸性或中性pH环境下很容易溶解。用于在结肠中释放抗生素的制剂，也可以用如时间依赖的、pH值依赖的或酶侵蚀的聚合基质技术或包衣技术。
本发明中Tiacumicin化合物(特别是几乎完全由R-Tiacumicin组成的OPT-80)的靶向传送特性包括可以用其它方法改性的制剂。例如，抗生素可通过包埋、离子缔合、氢键、疏水键或共价键进行复合。另外易于被酶或微生物裂解的聚合物或复合物也可以用作传送药物的方法。
本发明的Tiacumicin化合物(特别是几乎完全由R-Tiacumicin组成的OPT-80)的胶囊化微球是另外一种有用的用于抗生素靶向释放的药物制剂。包含抗生素的微球可单独用于抗生素传送或用来作为两阶段释放剂型的组分。适当的分阶段释放制剂可以包括对酸稳定的微球(其中包裹后来在下层肠道释放的本发明的Tiacumicin化合物(特别是几乎全部由R-Tiacumicin组成的OPT-80))及将抗生素释放到胃和上部的十二指肠的立即释放制剂。
微球可以通过任何适当的方法或用任何药学上可接受的材料制备。特别有用的为类蛋白质微球(见如US专利5601846或5792451)和含有PLGA的微球(见如US专利6235224或5672659)。其它通常用于形成微球的聚合物包括如聚-ε-己内酯、聚(e-己内酯-Co-DL-乳酸)、聚(DL-乳酸)、聚(DL-乳酸-Co-乙醇酸)和聚(s-己内酯-Co-乙醇酸)(见如Pitt等人，J.Pharm.Sci.，681534，1979)。微球可以通过本领域公知的方法制得，这些方法包括喷雾干燥、凝聚和乳化(见如Davis等人，Microsphere and Drug Therapy，1984，Elsevier；Benoit等人，Biodegradable MicrospheresAdvances inProduction Technologies，Chapter 3，ed.Benita，S，1996，Dekker，NewYork；Microencapsulation and Related Drug Processes，Ed.Deasy，1984，Dekker，New York；US专利6365187)。
适用于通过加水制备本发明的Tiacumicin化合物(特别是几乎完全由R-Tiacumicin组成的OPT-80)的水溶液或混悬液的粉剂、分散性粉剂或颗粒剂是用于口服的适当剂型。混悬液制剂中有与分散剂或润湿剂混合在一起的活性成分、助悬剂和一种或多种防腐剂。适当的分散剂或润湿剂是如天然存在的磷脂(如卵磷脂或环氧乙烷与脂肪酸的缩合产物、长链脂肪醇或由脂肪酸衍生的偏酯)和己糖醇或己糖醇脱水物(如聚氧乙烯硬脂酸酯、聚氧乙烯山梨醇糖单油酸酯、聚氧乙烯脱水山梨醇糖单油酸酯等)。适当的助悬剂是如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素钠、藻酸钠等。

具体实施例方式 实施例 提供以下实施例，用以描述本发明的具体实施方案，但对本发明的范围没有任何限制。
实施例1R-Tiacumicin B的确切结构 R-Tiacumicin B的确切结构(OPT-80的最主要活性成分)在下面式IV中显示。R-Tiacumicin B的X光衍射晶体结构是从甲醇中生长出的无色平行六面体形晶体(0.08×0.14×0.22mm)得到的，并在

图1中用ORTEP图显示。该X光衍射晶体结构确证了下面式IV中所示结构。正式化学名为3-[[[6-去氧-4-O-(3，5-二氯-2-乙基-4，6-二羟基苯甲酰基)-2-O-甲基-β-D-吡喃甘露糖基]氧基]-甲基-12(R)-[[6-去氧-5-C-甲基-4-O-(2-甲基-1-氧代丙基)-β-D-来苏-吡喃己糖基]氧基]-11(S)-乙基-8(S)-羟基-18(S)-(1(R)-羟基乙基)-9，13，15-三甲基氧杂环十八烷-3，5，9，13，15-五烯-2-酮。

式IV 实施例2OPT-80和相关物质的分析数据 OPT-80(几乎完全由R-Tiacumicin B组成，R-Tiacumicin B是OPT-80的活性最好组分)及三个相关化合物(S-Tiacumicin B、闰年霉素A4和C-19酮)的分析数据总结如下。这些化合物的结构在下面的式VIII和表2中列出。

式VIII 表2R-Tiacumicin B(OPT-80的主要的活性最好组分)和其相关化合物的结构 R-Tiacumicin B的分析数据 mp 166-169℃(从异丙醇中得到的白色针晶) [α]D20-6.9(c 2.0，MeOH)； Ms m/z(ESI) 1079.7(M+Na)+； 1H 1H NMR NMR(400MHz，CD3OD)δ7.21(d，1H)，6.59(dd，1H)，5.95(ddd，1H)，5.83(brs，1H)，5.57(t，1H)，5.13(brd，1H)，5.09(t，1H)，5.02(d，1H)，4.71(m，1H)，4.71(brs，1H)，4.64(brs，1H)，4.61(d，1H)，4.42(d，1H)，4.23(m，1H)，4.02(pentet，1H)，3.92(dd，1H)，3.73(m，2H)，3.70(d，1H)，3.56(s，3H)，3.52-3.56(m，2H)，2.92(m，2H)，2.64-2.76(m，3H)，2.59(heptet，1H)，2.49(ddd，1H)，2.42(ddd，1H)，2.01(dq，1H)，1.81(s，3H)，1.76(s，3H)，1.65(s，3H)，1.35(d，3H)，1.29(m，1H)，1.20(t，3H)，1.19(d，3H)，1.17(d，3H)，1.16(d，3H)，1.14(s，3H)，1.12(s，3H)，0.87(t，3H)； 13C NMR(100MHz，CD3OD)δ178.4，169.7，169.1，154.6，153.9，146.2，143.7，141.9，137.1，137.0，136.4，134.6，128.5，126.9，125.6，124.6，114.8，112.8，108.8，102.3，97.2，94.3，82.5，78.6，76.9，75.9，74.5，73.5，73.2，72.8，71.6，70.5，68.3，63.9，62.2，42.5，37.3，35.4，28.7，28.3，26.9，26.4，20.3，19.6，19.2，18.7，18.2，17.6，15.5，14.6，14.0，11.4. S-Tiacumicin B的分析数据
式II(C-19酮) 式V(S-Tiacumicin B) 将NaBH4(9当量，48mg)分三批加到C-19酮(150mg)的甲醇(3mL)溶液中。1小时后，加入饱和NH4Cl溶液。混合物用CHCl3萃取，然后浓缩。用YMC-pack-ODS-A 75×30mm I.D.柱纯化S-Tiacumicin B(H2O∶MeOH∶AcOH 28∶72∶1)，制得35mg纯的S-Tiacumicin B。
MS m/z 1074.5(M+NH4)+； 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.15(d，J＝11.4Hz，1H)，6.58(dd，J＝14.1，11.4Hz，1H)，5.82(ddd，J＝14.1，10.6，3.5Hz，1H)，5.78(s，1H)，5.40(dd，J＝7.8，7.8Hz，1H)，5.15(dd，J＝9.5，9.5Hz，1H)，5.01(d，J＝9.9Hz，1H)，5.01(d，J＝9.9Hz，1H)，4.77(ddd，J＝5.8，5.3，5.3Hz，1H)，4.68(d，J＝11.6Hz，1H)，4.65(brs，1H)，4.62(brs，1H)，4.42(d，J＝11.6Hz，1H)，4.28(brs，1H)，4.07-3.97(m，2H)，3.74-3.58(m，4H)，3.61(s，3H)，3.52(dq，J＝9.5，5.8Hz，1H)，3.08(dq，J＝12.6，6.1Hz，1H)，3.01(dq，J＝12.6，6.1Hz，1H)，2.77-2.65(m，2H)，2.60(heptet，J＝6.9Hz，1H)，2.55-2.44(m，3H)，1.95-1.84(m，1H)，1.80(s，3H)，1.76(s，3H)，1.66(s，3H)，1.34(d，J＝5.8Hz，3H)，1.29-1.24(m，1H)，1.27(d，J＝6.6Hz，3H)，1.21(t，J＝6.1Hz，3H)，1.19(d，J＝6.9Hz，3H)，1.18(d，J＝6.9Hz，3H)，1.15(s，3H)，1.10(s，3H)，0.84(t，J＝7.2Hz，3H)； 13C NMR(100MHz，CDCl3)δ177.4，170.1，168.8，157.6，152.8，144.4，143.1，141.1，136.7，136.2，134.9，133.8，128.7，125.7，125.2，123.0，113.9，107.5，107.2，101.7，94.9，92.6，80.8，79.2，76.6，74.8，73.5，72.7，71.9，71.7，70.2，70.1，69.5，63.5，62.3，41.5，36.6，34.3，29.5，28.2，26.2，26.0，19.4，19.3，18.9，18.5，17.8，17.3，15.3，14.1，13.7，11.1； 闰年霉素A4的分析数据 MS m/z 1060.5(M+NH4)+； 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.12(d，J＝11.6Hz，1H)，6.59(dd，J＝14.1，11.6Hz，1H)，5.85(brs，1H)，5.83(ddd，J＝14.1，10.6，4.8Hz，1H)，5.47(dd，J＝8.3，8.3Hz，1H)，5.12(dd，J＝9.6，9.6Hz，1H)，5.00(d，J＝10.1Hz，1H)，4.98(brd，J＝10.6Hz，1H)，4.75-4.69(m，1H)，4.68(d，J＝11.4Hz，1H)，4.66(brs，1H)，4.62(brs，1H)，4.40(d，J＝11.4Hz，1H)，4.26(brs，1H)，4.07-4.00(m，1H)，4.02(brd，J＝3.3Hz，1H)，3.75-3.61(m，4H)，3.62(s，3H)，3.55(dq，J＝9.6，6.1Hz，1H)，2.82-2.45(m，6H)，2.60(s，3H)，2.07-1.97(m，1H)，1.92(s，3H)，1.81(s，3H)，1.67(s，3H)，1.32(d，J＝6.1Hz，3H)，1.30-1.22(m，1H)，1.21(d，J＝6.6Hz，3H)，1.19(d，J＝7.1Hz，3H)，1.18(d，J＝7.1Hz，3H)，1.15(s，3H)，1.10(s，3H)，0.83(t，J＝7.2Hz，3H)； 13C NMR(100MHz，CDCl3)δ177.4，170.5，168.9，157.8，153.0，144.3，140.9，137.7，137.0，136.3，134.6，134.4，129.1，127.9，125.3，123.2，114.5，107.4，107.0，101.8，94.7，92.5，80.3，79.6，76.7，74.9，73.5，72.7，71.9，71.6，70.2，70.1，69.1，63.6，62.3，41.9，36.9，34.4，28.8，28.2，25.9，20.0，19.3，19.0，18.6，18.5，17.8，17.2，15.5，13.8.11.2； C-19酮的分析数据 MS m/z 1072.5(M+NH4)+； 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.27(d，J＝11.4Hz，1H)，6.61(dd，J＝14.7，11.4Hz，1H)，5.91(ddd，J＝14.7，9.1，5.8Hz，1H)，5.83(s，1H)，5.31(dd，J＝7.9，7.9Hz，1H)，5.14(dd，J＝9.7，9.7Hz，1H)，5.06(d，J＝10.6Hz，1H)，5.00(d，J＝10.1Hz，1H)，4.98(dd，J＝7.1，4.8Hz，1H)，4.67(d，J＝11.9Hz，1H)，4.66(brs，1H)，4.61(brs，1H)，4.42(d，J＝11.9Hz，1H)，4.30(brs，1H)，4.02(brd，J＝3.3Hz，1H)，3.63-3.60(m，4H)，3.62(s，3H)，3.51(dq，J＝9.7，6.1Hz，1H)，3.09(dq，J＝14.4，7.3Hz，1H)，3.03(dq，J＝14.4，7.3Hz，1H)，2.76-2.50(m，6H)，2.21(s，3H)，1.93-1.87(m，1H)，1.87(s，3H)，1.75(s，3H)，1.63(s，3H)，1.32(d，J＝6.1Hz，3H)，1.27-1.22(m，1H)，1.21(t，J＝7.3Hz，3H)，1.19(d，J＝7.1Hz，3H)，1.18(d，J＝7.1Hz，3H)，1.14(s，3H)，1.10(s，3H)，0.84(t，J＝7.3Hz，3H)； 13C NMR(100MHz，CDCl3)δ205.5，177.4，170.1，166.9，157.6，152.8，145.7，143.1，142.0，137.1，136.8，135.5，133.7，128.3，124.8，124.0，122.8，113.9，107.3，107.2，101.3，94.8，92.4，80.4，77.7，76.6，74.7，73.5，72.6，71.8，71.7，70.2，70.0，63.0，62.3，41.5，36.5，34.3，29.6，28.1，26.2，26.1，26.0，19.2，18.9，18.5，17.8，17.3，15.2，14.0，13.3，11.0 实施例3生物活性 对几种艰难梭菌菌株的MIC测定值 用艰难梭菌对OPT-80(几乎完全由R-Tiacumicin B组成)和其相关化合物进行测试。MIC值在下面表3中报道。可以看出，与S-Tiacumicin B和闰年霉素A4相比，OPT-80活性更好。
表3对艰难梭菌菌株的MIC(μg/mL) 对多种微生物的MIC测定值 用其它几种病原体对OPT-80(几乎全部由R-Tiacumicin B组成)和其相关化合物进行测试。MIC值在下面表4中报道。可以看出，与S-Tiacumicin B和闰年霉素A4相比，OPT-80活性更好。
表4对其它微生物的MIC(μg/mL) 实施例4 OPT-80对艰难梭菌的抗生素后效应 用两种艰难梭菌菌株(ATCC 43255和临床分离菌LC3)对OPT-80(几乎全部由R-Tiacumicin B组成)的抗生素后效应进行测定。另外，用LC3对万古霉素和利福平进行测试。
观察到在4倍MIC下的PAE非常长对于两种菌株都超过24小时。由于该效应的长持续时间，没有计算出准确的PAE。另一方面，用LC3菌株在4倍MIC下，万古霉素有小于1小时的很一般的PAE。
实施例5 OPT-80的体外活性 用艰难梭菌的110种遗传性不同的临床分离菌通过琼胶稀释法对T-80(几乎全部由R-Tiacumicin B组成)、甲硝唑和万古霉素的体外效应进行评估。MIC数据列在表5和表6中。
表5OPT-80、万古霉素和甲硝唑对于艰难梭菌的110种临床分离菌的几何平均数、MIC范围、MIC50和MIC90值，单位μg/mL 表6OPT-80、万古霉素(VAN)和甲硝唑(MTZ)对于艰难梭菌的110种临床分离菌的原始MIC数据，单位μg/mL 实施例6 OPT-80对所选厌氧菌的活性 测得OPT-80对350种厌氧菌的体外活性。所用实验方法在抗微生物剂和化学治疗，2004，484430-4434中记载，在此引入作为参考。
包括21种艰难梭菌菌株的所有生物为分开的分离菌，不是与克隆有关的菌。所有NCCLS推荐的质量对照革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均包括在每一系列中在每种情况下，结果(当可得到时)在范围内。
MIC测试结果在表7中列出。
表7 OPT-80的MICs(μg/mL) 实施例7OPT-80对肠细菌的体外活性 对OPT-80针对肠细菌的体外活性进行评价。所用实验方在抗微生物剂和化学治疗，2004，484898-4902中记载，在此引入以作参考。
抗微生物浓度范围选取包括或超过在肠中应当达到的水平(到可以获得信息的程度)，受测试介质中的药物溶解度的限制。在测试中所用OPT-80的浓度范围为0.03μg/mL至1024μg/mL。
为了进行分析，测试菌通常以包括10种分离菌的属、种或其它组别归类。除了少于10种测试菌株(只报道了浓度范围)的生物外，对浓度范围和50％和90％分离菌被抑制的MICs进行测定(表8)。
OPT-80对大多数厌氧革兰氏阳性非芽胞杆菌和厌氧革兰氏阳性球菌有很好活性。OPT-80对肠球菌和葡萄球菌也有好的活性。
表8 OPT-80对453种细菌分离菌的体外活性 其它实施方案 在此引入上面讨论的所有文献的全部内容作为参考，并用于本发明的各种目的。尽管参照优选的实施方案对本发明进行了具体显示和描述，但是本领域技术人员可以理解，可以进行各种形式或细节的改变而不违背所附权利要求书中所定义的本发明的范围和精神。
权利要求
1.组合物，该组合物包含70％-100％式VII化合物
式VII
其中，
X为选自甲基、乙基、正丙基和异丙基的低级烷基；
Y为OH或酮(＝O)；并且
Z为H或选自甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基和戊基的低级烷基。
2.权利要求1的组合物，其中所述组合物另外包括0％-30％的Tiacumicin B相关化合物。
3.权利要求1的组合物，其中所述组合物包括75％的式VII化合物。
4.权利要求1的组合物，其中所述组合物包括80％的式VII化合物。
5.权利要求1的组合物，其中所述组合物包括85％的式VII化合物。
6.权利要求1的组合物，其中所述组合物包括90％的式VII化合物。
7.权利要求1的组合物，其中所述组合物包括95％的式VII化合物。
8.权利要求1的组合物，其中
X为甲基或乙基；
Y为OH或酮(＝O)；并且
Z为异丙基。
9.权利要求8的组合物，其中
X为乙基；
Y为OH或酮(＝O)；并且
Z为异丙基。
10.权利要求9的组合物，其中
X为乙基；
Y为OH；并且
Z为异丙基。
11.组合物，该组合物包含70％-100％式IV化合物
式IV。
12.权利要求11的组合物，其中所述组合物另外包括0％-30％的Tiacumicin B相关化合物。
13.权利要求12的组合物，其中所述Tiacumicin B相关化合物选自闰年霉素A4和C-19酮。
14.权利要求12的组合物，其中所述组合物包括
(a)≥90％的式IV化合物；和
(b)≤10％的Tiacumicin B相关化合物。
15.权利要求14的组合物，其中所述Tiacumicin B相关化合物选自闰年霉素A4和C-19酮。
16.药物组合物，该药物组合物包括
(a)70％-100％的式VII化合物，
其中，
X为选自甲基、乙基、正丙基和异丙基的低级烷基；
Y为OH或酮(＝O)；并且
Z为H或选自甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、叔丁基和戊基的低级烷基；
(b)0％-30％的Tiacumicin B相关化合物；和
(c)药学上可接受载体。
17.权利要求16的药物组合物，该药物组合物另外包括选自抗微生物剂和抗真菌剂的附加物质。
18.权利要求16的药物组合物，其中
X为甲基或乙基；
Y为OH或酮(＝O)；并且
Z为异丙基。
19.权利要求18的药物组合物，其中
X为乙基；
Y为OH或酮(＝O)；并且
Z为异丙基。
20.权利要求19的药物组合物，其中
X为乙基；
Y为OH；并且
Z为异丙基。
21.权利要求20的药物组合物，其中所述Tiacumicin B相关化合物选自闰年霉素A4和C-19酮。
22.药物组合物，该药物组合物包括
(a)70％-100％的式IV化合物；
(b)0％-30％的Tiacumicin B相关化合物；和
(c)药学上可接受载体。
23.权利要求22的药物组合物，其中所述药物组合物包括
(a)≥90％的式IV化合物；
(b)≤10％的Tiacumicin相关化合物；和
(c)药学上可接受载体。
24.权利要求23的药物组合物，其中所述Tiacumicin B相关化合物选自闰年霉素A4和C-19酮。
25.治疗哺乳动物细菌感染的方法，该方法包括对哺乳动物给予药物组合物，该药物组合物包括治疗有效量的权利要求16的药物组合物。
26.权利要求25的方法，其中
X为甲基或乙基；
Y为OH或酮(＝O)；并且
Z为异丙基。
27.权利要求26的方法，其中
X为乙基；
Y为OH或酮(＝O)；并且
Z为异丙基。
28.权利要求27的方法，其中
X为乙基；
Y为OH；并且
Z为异丙基。
29.权利要求28的方法，其中所述Tiacumicin B相关化合物选自闰年霉素A4和C-19酮。
30.权利要求28的方法，其中药物组合物包括权利要求23的药物组合物。
31.权利要求30的方法，其中所述Tiacumicin B相关化合物选自闰年霉素A4和C-19酮。
32.权利要求30的方法，其中所述药物组合物有MIC值，其显著低于Tiacumicin B相关化合物的MIC值。
33.权利要求32的方法，其中所述Tiacumicin B相关化合物选自闰年霉素A4和C-19酮。
34.权利要求32的方法，其中所述MIC值用选自艰难梭菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌和屎肠球菌的细菌进行测定。
35.权利要求30的方法，其中所述药物组合物有超过24小时的抗生素后效应(PAE)。
36.权利要求30的方法，其中所述药物组合物另外包括选自抗微生物剂和抗真菌剂的附加物质。
全文摘要
本发明广泛地涉及称为Tiacumicins的18元环大环抗微生物剂，特别是OPT-80(几乎完全由R-Tiacumicin B组成)，本发明还涉及包含OPT-80的药物组合物和应用OPT-80的方法。具体地讲，该化合物是用于治疗细菌感染的有效药物，特别是艰难梭菌(C.difficile)感染。
文档编号A61K31/70GK101128114SQ200580048715
公开日2008年2月20日 申请日期2005年1月31日 优先权日2005年1月31日
发明者Y-K·舒, C-K·王, Y-H·邱, A·罗梅罗, F·巴巴卡尼, P·西尔斯, F·奥库姆 申请人:浩鼎生技公司