心血管药物制剂、制备方法及用途的制作方法

专利名称：心血管药物制剂、制备方法及用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及药物技术领域，具体的说是一种心血管药物制剂、制备方法及用途。
背景技术：
醋柳黄酮是从天然植物沙棘中提取、分离、精制得到的黄酮化合物，其主要有效成分为异鼠李素、槲皮素、异鼠李素-3-葡萄糖甙等多种黄酮化合物。能增加实验动物心肌和脑组织的血流量，降低心肌耗氧量，提高耐缺氧能力，改善心脑缺血所致的心律失常和细胞损害；降低血清胆固醇和低密度脂蛋白的含量；扩张血管、降低血压；抑制血小板聚集，降低血液黏度。目前市场只有口服固体制剂，由于醋柳黄酮难溶于水，疏水性强，片剂的崩解时间长，吸收差等(中国专利CN1490000A)，无法直接制备水溶性的注射剂，到目前为止还没有增强其水溶性减少吸收差异的口服制剂，也还没有文献报道制备出易溶解的醋柳黄酮的注射剂，也没有制备出易溶解的醋柳黄酮复合物或包合物，并阐明其用途的报道。

发明内容
本发明要解决的技术问题在于研究一种临床适用的一种心血管药物制剂及其制备方法，包括醋柳黄酮注射液、输液、临用前稀释溶解的注射用冻干粉和无菌粉末制剂。心血管药物制剂中可含有易溶解的醋柳黄酮复合物或包合物，并给出了醋柳黄酮复合物或包合物用途。
为解决上述问题，本发明提供如下技术方案心血管药物制剂可由醋柳黄酮、药学上可接受的无机碱或有机碱生成的易溶解于水的复合物，其中醋柳黄酮与药学上可接受的无机或药学上可接受的有机碱的摩尔比为1∶0.8至1∶100；或由醋柳黄酮与环糊精或环糊精衍生物形成水溶性的包合物，其中醋柳黄酮与环糊精或环糊精衍生物的质量比为1∶1至1∶100；也可以由醋柳黄酮和低分子醇，聚山梨醇酯、聚乙烯吡咯烷酮，聚乙二醇、泊洛沙姆助溶剂中的一种或多种组成的水溶性的制剂；在制剂中并可含有药学上可接受的载体，载体包括赋形剂、pH调节剂、抗氧剂、稳定剂、助溶剂，可以制备成包括注射液、输液、冻干粉针、无菌分装粉针制剂。在本发明中醋柳黄酮的量以异鼠李素计。
醋柳黄酮(以异鼠李素计)与药学上可接受的无机或有机碱的摩尔比为1∶0.8至1∶100，可以制备成包括注射液、输液、冻干粉针、无菌分装粉针。醋柳黄酮复盐或复合物中醋柳黄酮(以异鼠李素计)与药学上可接受的无机碱或有机碱的摩尔比优选为1∶1.0～30。
醋柳黄酮复合物中醋柳黄酮(以异鼠李素计)与药学上可接受的无机碱或有机碱的更为理想的摩尔比为1∶2.0～20。
所述醋柳黄酮注射剂，醋柳黄酮由异鼠李素组成，可含少量槲皮素、异鼠李素-3-葡萄糖甙等多种黄酮化合物，醋柳黄酮中有效成分异鼠李素的含量一般在5％～100％之间；一般每单位制剂可含醋柳黄酮复盐或复合物或包合物1～200mg(以异鼠李素计)，也可以单独含异鼠李素复盐或复合物或包合物1～200mg(以异鼠李素计)。
所述的心血管药物制剂，其特征在于其pH在6.5～12之间，优选pH在7.5～11.0之间。
令人惊讶的是，对药用碱与醋柳黄酮作用形成的复合物，不仅使用无机碱药用氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、磷酸氢二钠、磷酸三钠等，而且使用药用有机碱葡甲胺、葡乙胺、烟酰胺、枸橼酸钠、二乙醇胺、氨丁三醇、碱性氨基酸，如赖氨酸、L-精氨酸能与醋柳黄酮作用形成的复盐或复合物，加少量注射用水，生理盐水、5％葡萄糖水或10％葡萄糖水能够很快地溶解，而原来几乎不溶解，而且获得的制剂能够稳定长期储存，满足临床用药安全有效的目的。
药用无机碱或有机碱为广义的路易斯碱，药用无机碱可以是氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸氢盐、磷酸氢二钠、磷酸三钠、磷酸氢二铵、磷酸氢二钾、磷酸钾、偏磷酸钠、稀氨水溶液等无机碱中的一种或几种，有机碱可以是葡甲胺、葡乙胺、葡辛胺、氨丁三醇，无水或六水哌嗪、吗啉、烟酰胺、1，2-己二胺、三羟甲基氨基甲烷、三乙醇胺、二乙醇胺、乙醇胺、异丙醇胺、二异丙醇胺、二异丙胺、二乙胺、乙二胺、苯甲酰胺、硫脲、乌洛托品、双甘氨肽、氨基酸，如L-赖氨酸、D-赖氨酸、DL-赖氨酸、L-精氨酸、D-精氨酸、DL-精氨酸、组氨酸、L-鸟氨酸等，柠檬酸盐、枸橼酸二钠、枸橼酸三钠、枸橼酸钠、枸橼酸钾，乳酸钠，乳酸钾，泛酸钠、葡萄糖酸钠等其中的一种或多种。
碱性氨基酸可以是消旋的氨基酸，也可以是光学活性的氨基酸。如组氨酸可以是消旋的组氨酸，也可以是光学活性的组氨酸。
药用碱较好的选择可以是氢氧化钠、枸橼酸三钠、葡甲胺、葡乙胺、葡辛胺、氨丁三醇，二乙醇胺、无水或六水哌嗪、吗啉、烟酰胺、三羟甲基氨基甲烷、碱性氨基酸，如L-赖氨酸、DL-赖氨酸、L-精氨酸、D-精氨酸、DL-精氨酸、组氨酸、L-鸟氨酸等中的一种或几种。
以上陈述并不妨碍赖氨酸、L-精氨酸等作为辅料存在于制剂中，如赖氨酸、L-精氨酸可作为本发明的冻干制剂中的赋形剂。
本发明突出的一点是得到药用碱与醋柳黄酮作用形成易溶解的复合物，使用药用无机碱或药用有机碱的目的是使其与醋柳黄酮作用形成易溶解的复合物，复盐或复合物存在的形式可以是任何分子形式存在，亦是指配制本发明制剂的物质，对它们在粉末、液体或经冻干状态的制剂中的形态没有限制。
在无菌冻干制剂中，药学上可接受的赋形剂为右旋糖酐、甘露醇、葡萄糖、山梨醇、蔗糖、乳糖、一水乳糖、乳糖醇、海藻糖、麦芽糖、木糖、木糖醇、糖类物质、氯化镁、氯化钠、硫酸钠、琥珀酸钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、葡萄糖酸及盐，如葡萄糖酸钠、钾、钙、镁等，葡萄糖醛酸及盐，乳糖酸盐、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇1000-4000、硫酸镁、肌醇、植酸、咪唑、烟酰胺、枸橼酸、枸橼酸盐、泛酸及其盐，如泛酸钙、泛酸钠，天冬酰胺、甘氨酸、赖氨酸、精氨酸、蛋氨酸、谷氨酸、组氨酸、组氨酸等及其盐，胆酸盐、如甘氨胆酸钠、脱氧胆酸钠、牛磺胆酸钠、胆酸钠、熊脱氧胆酸钠等，甘草酸、甘草次酸、甘草次酸盐、甘草甜素、甘草次酸盐、甘草酸盐如甘草酸三钠、二钠盐、三胺盐、二胺盐、单胺盐、钾盐，葡甲胺或其盐、注射用水、水解明胶、可溶性淀粉、可溶性纤维素类物质，如羟丙基纤维素钠等，环糊精或环糊精衍生物，可含其中的一种或多种。
环糊精或环糊精衍生物，包括α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精，葡糖基-环糊精(G1-CYD)，包括葡萄糖基-α-环糊精(G1-α-CYD)、葡糖基-β-环糊精(G1-β-CYD)、二葡糖基-β-环糊精(2G1-β-CYD)、麦芽糖基-环糊精(G2-CYD)，麦芽糖基-α-环糊精(G2-α-CYD)、麦芽糖基-β-环糊精(G2-β-CYD)、麦芽糖基-γ-环糊精(G2-γ-CYD)，麦芽三糖基-环糊精(G3-CYD)，麦芽三糖基-α-环糊精(G3-α-CYD)，麦芽三糖基-β-环糊精(G3-β-CYD)，麦芽三糖基-γ-环糊精(G3-γ-CYD)，甲基β-环糊精、乙基β-环糊精、二甲基β-环糊精、2，6二甲基β-环糊精(DM-β-CYD)、2，3，6三甲基β-环糊精(TM-β-CYD)、β-环糊精磺烷基醚(SAE-β-CYD)、羟乙基-β-环糊精、羟丙基β-环糊精、2-羟丙基β-环糊精(2-HP-β-CYD)、3-羟丙基β-环糊精(3-HP-β-CYD)、2，3-二羟丙基β-环糊精(DHP-β-CYD)、磺丁醚-β-环糊精(SBE-β-CD)，如(SBE7-β-CD)、SBE4-β-CD等，环糊精聚合物CDPS、CDPS-H、CDPS-L等。
其中赋形剂优选甘露醇、木糖醇、山梨醇、葡甲胺、赖氨酸、L-精氨酸、L-鸟氨酸、2-羟丙基β-环糊精、磺丁醚-β-环糊精、注射用水等中的一种或几种。
本发明的相关制剂中，药学上可接受的pH调节剂可以是盐酸、硫酸、磷酸、硝酸、氢溴酸、甲酸、丙酸、醋酸、醋酸钾、醋酸钠、醋酸铵、硼酸、乳酸及其盐，如乳酸钠，枸橼酸及其盐，如枸橼酸二钠、枸橼酸三钠、枸橼酸钠、一水柠檬酸、枸橼酸钾，无水碳酸钠、结晶碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、苏打石灰、氧化钙、注射用水、稀磷酸、磷酸二氢钙、磷酸氢钙、磷酸钙、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二铵、磷酸氢二钾、顺丁烯二酸、琥珀酸及盐、植酸、D-酒石酸，L(+)-酒石酸、酒石酸氢钠、DL-酒石酸、酒石酸氢钾、酒石酸钾钠、硼砂、硼酸、丁二酸、己酸、己二酸、反丁烯二酸、碳酸铵、固体二氧化碳、液体二氧化碳、芳香胺醑、1，2-己二胺、次磷酸、偏磷酸钠、聚偏磷酸钾、偏磷酸钾，三羟甲基氨基甲烷、三乙醇胺、二乙醇胺、乙醇胺、异丙醇胺、二异丙醇胺、2-氨基-2-(羟甲基)1，3-丙二醇胺、1，2-己二胺、N-甲基葡萄胺、二异丙胺以及它们的盐，多羟基羧酸及盐，多羟基羧酸是葡萄糖醛酸、葡萄糖酸、乳糖醛酸、乳糖酸、半乳糖醛酸、苹果酸、苏糖酸、葡庚糖酸、双(羟基甲基)乙酸、三羟基丁酸等，羟基乙酸、二羟基戊酸、二羟基丁酸、二羟基异戊酸、二羟基异丁酸、2，3-二羟基戊二酸、二羟基己二酸、烟酸、浓氨水溶液、稀氨水溶液、二氧化碳、δ-葡萄糖酸内酯，甘草酸盐、植酸(肌醇六磷酸)及盐、如肌醇六磷酸钠、肌醇六磷酸钾、苯甲酸及其盐，如苯甲酸钠，甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、乳糖醛酸、甘油酸、甘氨酸、赖氨酸、精氨酸、蛋氨酸、氨基酸及氨基酸盐的一种或多种。pH调节剂优选葡萄糖酸、盐酸、氢氧化钠、枸橼酸、酒石酸、苹果酸的一种或多种。
其抗氧剂和稳定剂可以是无机硫化合物，亚硫酸、亚硫酸盐化合物(亚硫酸钠、亚硫酸等)、亚硫酸氢盐化合物(亚硫酸氢钠、亚硫酸氢钾等)、焦亚硫酸盐(包括焦亚硫酸钠、焦亚硫酸钾等)、连二亚硫酸盐(钠盐、钾盐等)、硫代硫酸盐(包括钠盐、钾盐等)，有机硫化合物硫脲、谷胱甘肽、巯基乙酸钠、二巯基丙醇、巯基乙酸及盐、如巯基乙酸钠等，甲醛次硫酸钠、硫甘油、硫代乳酸及盐、硫代二丙酸及盐、硫代山梨醇、硫代水杨酸、二硫代草酰胺、8-羟基喹啉、吡多胺及盐、苯酚类化合物，如没食子酸及盐、没食子酸乙酯、没食子酸丙酯、没食子酸辛酯、没食子酸十二酯、咖啡酸、咖啡酸盐、阿魏酸、阿魏酸盐、二丁基羟基甲苯、叔丁基对羟基茴香醚、二叔丁基对苯酚、去甲二氢愈创木酸(NDGA)、2，5-二羟基苯甲酸、2，5-二羟基苯甲酸盐、葡萄糖酸、植酸(肌醇六磷酸)及盐、苯酚或其衍生物、水杨酸或其金属盐；葡甲胺或其盐、氨三丁醇或其盐，氨基酸类化合物，包括谷氨酸钠、甘氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、L-亮氨酸、L-异亮氨酸、L-色氨酸、L-赖氨酸、L-蛋氨酸、L-颉氨酸、氨基酸以及其盐；甘草次酸盐、甘草酸盐、烯醇类化合物，如抗坏血酸及抗坏血酸盐(包括抗坏血酸钠等)、抗坏血酸棕榈酯、异抗坏血酸及异抗坏血酸盐、丙酮合抗坏血酸、a-生育酚、L-半胱氨酸、L-半胱氨酸盐酸盐、烟酰胺、酒石酸、EDTA及EDTA二钠、EDTA四钠、依地酸钙钠、二乙烯基三氨基戊乙酸、二乙基三胺基戊乙酸、N-(2-羟乙基)-乙二胺三乙酸三钠盐、N-二(2-羟乙基)甘氨酸中的一种或多种；优选L-半胱氨酸盐酸盐、亚硫酸钠、依地酸钙钠、焦亚硫酸钠。当在本制剂中加入抗氧剂时，抗氧剂或稳定剂加入量(重量比)为总量的0.0001～5％，优选0.001～1％。
醋柳黄酮可以与以上环糊精形成的水溶性的包合物(亦为复合物)，环糊精优选2-羟丙基β-环糊精(2-HP-β-CYD)、3-羟丙基β-环糊精(3-HP-β-CYD)、磺丁醚-β-环糊精(SBE-β-CD)等中的一种或多种，并由此制备能够稳定存放的制剂，这在已公开文献中未曾报道过。醋柳黄酮与环糊精或环糊精衍生物形成水溶性的包合物，其中醋柳黄酮(以异鼠李素计)与环糊精或环糊精衍生物的质量或重量比为1∶5至1∶60；醋柳黄酮(以异鼠李素计)与环糊精或环糊精衍生物的质量或重量比更优选为1∶5至1∶40。
我们发现疏水的醋柳黄酮当和低分子醇，聚山梨醇酯、聚乙烯吡咯烷酮，聚乙二醇、泊洛沙姆助溶剂中的一种或多种组成的水溶性的制剂时，我们发现疏水的醋柳黄酮能够稳定存在，这在已公开的文献中并没有提供制备上述稳定的制剂的成分和方法。本方法中所提到的低分子醇，可以是丙二醇、乙醇、甘油等，聚山梨醇酯可以是吐温20、吐温40、吐温60、吐温80，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙二醇系列，可以是PEG200、PEG300、PEG400、PEG600、PEG800、1000、PEG1540、PEG4000，泊洛沙姆系列，可以是泊洛沙姆-188，泊洛沙姆-237，泊洛沙姆-338，泊洛沙姆-407等助溶剂其中的一种或多种，其中优选乙醇，丙二醇，吐温80，PEG400、泊洛沙姆-407等药学上可接受的水溶性高分子助溶剂中的一种或多种。以上制备的制剂并可含有药学上可接受的载体，载体包括赋形剂、pH调节剂、抗氧剂、稳定剂。
心血管药物注射剂的制备方法可以如下A.一种心血管药物制剂的注射剂制备方法，将药学上可接受的无机碱或有机碱中的一种或几种的注射用水中，搅拌，使溶解，再将醋柳黄酮粉末加于其中，搅拌10-60分钟，过滤，可加入药学上可接受的抗氧剂，抗氧剂可以是亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、L-半胱氨酸、抗坏血酸钠中的一种或几种，亦可加等渗调节剂氯化钠、或葡萄糖、或右旋糖酐，用药学上可接受的pH调节剂如柠檬酸、醋酸、盐酸、硫酸、磷酸、马来酸、琥珀酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、抗坏血酸中的一种或几种，调节pH至6.5～11.5，优选pH至7.5～11.0，加0.001～2％(g/ml)的活性炭搅拌30分钟，过滤，添加注射用水至足量，滤过，通氮气灌封，灭菌，得到醋柳黄酮注射液或输液。
B.无菌冻干注射剂制备方法在配制容器中，加配制量80％的注射用水，加药学上可接受的无机碱或有机碱中的一种或几种，溶解于水中，再加醋柳黄酮，搅拌10～60min，过滤，再加药学上可接受的抗氧剂中的一种或几种，使溶解，然后以PH调节剂调节pH至7.0～12，优选pH至7.5～11，同时加0.001～2％(g/ml)的活性炭搅拌下30分钟过滤，添加注射用水至足量，无菌过滤，测定中间体含量，分装在西林瓶中，每瓶约1～5ml，加塞、-40℃～-70℃下预冻1～4小时，-25℃～-15℃左右冷冻干燥20～48小时，然后升温15℃～35℃左右干燥2～8小时，重要的是要将控制水分在0.01～10％之间，压塞、放真空、出箱。
C、将药学上可接受的无菌无机碱或有机碱中的一种或几种溶入蒸馏水中，加入醋柳黄酮，搅拌10～60min，加0.001～2％(g/ml)的活性炭搅拌下30分钟过滤，补水，然后以PH调节剂调节pH至7.0～12，再经0.20～0.22μm滤膜无菌过滤，滤液经真空干燥或喷雾干燥或冷冻干燥，控制水分在0.001～10％之间，粉碎得14～150目的颗粒大小的粉末，再将该复合物按剂量进行无菌分装，压盖即得成品。
心血管药物注射剂的制备方法还可以如下A、由无菌高纯的醋柳黄酮与药学上可接受的无菌无机碱或有机碱中的一种或几种分别按粉针剂制备工艺程序操作，分装于西林瓶中；另将一支无菌注射用水1～20ml/支组合成组合包装，使用时将注射用水注入无菌粉针中，使有机碱与醋柳黄酮作用形成易溶解于水的稳定的复合物，使其pH为7.0～12，供临床静脉注射。
B、或将无菌高纯的醋柳黄酮按粉针剂制备工艺程序操作，分装于西林瓶中；另将药学上可接受的无菌无机碱或有机碱中的一种或几种溶解于无菌注射用水，加入适量的药学上可接受的抗氧剂和稳定剂，使注射用溶媒每支体积为1～20ml，与分装于西林瓶中无菌异鼠李素组合成组合包装，使用时将注射用溶媒注入无菌粉针中，使有机碱与醋柳黄酮作用形成易溶解于水的稳定的复合物，使其pH为7.0～12，供临床静脉注射。
C、将药学上可接受的无菌无机碱或有机碱中的一种或几种溶入蒸馏水中，搅拌加入醋柳黄酮，使溶解，过滤，补水，然后以pH调节剂调节pH至7.0～12，再经0.20～0.22μm滤膜无菌过滤，滤液经真空干燥或喷雾干燥或冷冻干燥，控制水分在0.001～10％之间，粉碎得14～150目的颗粒大小的粉末，再将该复合物按含醋柳黄酮(以异鼠李素计)的量1～200mg进行无菌分装，分装于西林瓶中；另将一支无菌注射用水1～20ml/支组合成组合包装。
D、将药学上可接受的无菌无机碱或有机碱中的一种或几种溶入蒸馏水中，搅拌加入醋柳黄酮，溶解，过滤，滤液加甲醇、乙醇、异丙醇、乙酸乙酯、丙酮、苯、石油醚中的一种或几种，于4℃静置过夜，析出结晶，抽干，干燥，得水溶性醋柳黄酮复合物，控制水分在0.001～10％之间。取此复合物过14～100目筛，按醋柳黄酮复合物5～200mg分装，压盖即得成品。
E、将相当于醋柳黄酮1～100倍量的环糊精或环糊精衍生物，优选羟乙基-β-环糊精、羟丙基β-环糊精，如2-羟丙基β-环糊精(2-HP-β-CYD)、3-羟丙基β-环糊精(3-HP-β-CYD)、2，3-二羟丙基β-环糊精(DHP-β-CYD)，如磺丁醚-β-环糊精(SBE-β-CD)，如(SBE7-β-CD)、SBE4-β-CD等其中的一种或多种溶入适量的注射用水中，在10～100℃下搅拌0.2～4h，搅拌加入处方量的醋柳黄酮，使溶解，经0.20～0.22μm滤膜无菌过滤，滤液经真空干燥或喷雾干燥或冷冻干燥，得水溶性醋柳黄酮包合物。该包合物的红外光谱既不同于醋柳黄酮、上述β-环糊精，也不同于醋柳黄酮与上述β-环糊精的混合物。将上述水溶性醋柳黄酮β-环糊精包合物，测定其含量后，按含异鼠李素2～100mg剂量于西林瓶中进行无菌分装，包装得成品。
F、将相当于醋柳黄酮1～100倍量的环糊精或环糊精衍生物，优选羟乙基-β-环糊精、羟丙基β-环糊精，如2-羟丙基β-环糊精(2-HP-β-CYD)、3-羟丙基β-环糊精(3-HP-β-CYD)、2，3-二羟丙基β-环糊精(DHP-β-CYD)，磺丁醚-β-环糊精(SBE-β-CD)，如(SBE7-β-CD)、SBE4-β-CD等其中的一种或多种溶入适量的注射用水中，搅拌溶解后搅拌下加入处方量的醋柳黄酮，在10～100℃下搅拌0.2～4h，可在其中加入药学上可接受的抗氧剂中的一种或几种，亦可加等渗调节剂氯化钠、或葡萄糖、或右旋糖酐，用药学上可接受的pH调节剂中的一种或几种，调节pH至6.5～11.5，优选pH至7.5～11.0，加0.001～2％(g/ml)的活性炭搅拌30分钟，过滤，添加注射用水至足量，滤过至澄明，测定中间体含量，通氮气灌封，灭菌，得到醋柳黄酮注射液或输液。
G、在搅拌中将醋柳黄酮加入溶有低分子醇，可以是丙二醇、乙醇、甘油等，聚山梨醇酯即包括吐温20～吐温40～吐温60～吐温80，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙二醇系列，包括PEG200、PEG300、PEG400、PEG600、PEG800、1000、PEG1540、PEG4000，泊洛沙姆系列，包括泊洛沙姆-124，泊洛沙姆-188，泊洛沙姆-237，泊洛沙姆-388，泊洛沙姆-407等其中的一种或多种的注射用水溶液中，使溶解，过滤去掉不溶物，加入药学上可接受的抗氧剂和稳定剂中的一种或几种，搅拌使溶解，用药学上可接受的pH调节剂中的一种或几种，调节pH至6.5～11.5，优选pH至7.5～11.0，加0.001～2％(g/ml)的活性炭搅拌15～60分钟，过滤，添加注射用水至足量，滤过至澄明，测定中间体含量，按每瓶2～10ml分装，通氮气灌封，灭菌即得。或添加注射用水至足量后，经0.20～0.22μm滤膜无菌过滤，测定中间体含量，按每瓶2～10ml分装于西林瓶中，压盖包装即得。
本发明一种心血管药物制剂或醋柳黄酮复合物或包合物的用途心血管药物制剂醋柳黄酮复合物或包合物抑制哺乳动物的循环和局部ACE活性，减少Ang II的生成和缓激肽的降解，是血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)，用于防治高血压、充血性心力衰竭、抗动脉粥样硬化、抗心肌缺血、以及高血压、充血性心力衰竭、心肌缺血或心肌梗死等原因引起的心室重构、心肌肥大，非糖尿病肾病、1型糖尿病肾病以及蛋白尿。
本发明的优点是解决了长久以来没有解决的难题。本发明心血管药物注射剂单位剂量体积中的异鼠李素含量高，表明了本发明药物制剂既可增加醋柳黄酮的溶解度，又有稳定的载药量。注射液及冻干粉能被0.9％氯化钠或5％的葡萄糖输液稀释而不产生沉淀，在40±2℃，RH75％条件下，经6个月的加速稳定性试验和在25±2℃，RH60％条件下，12～24个月的长期稳定试验证明，醋柳黄酮复合物或包合物注射剂的主药含量基本保持不变，有关物质无明显增加，说明配伍组成的制剂能够长期存储。
具体实施例方式
实施例1醋柳黄酮复合物注射液醋柳黄酮(以异鼠李素计99.8％)10g氢氧化钠2g柠檬酸钠适量柠檬酸 适量亚硫酸钠0.1g注射用水加至1000ml在配制容器中，加配制量80％的注射用水。通氮气饱和，加处方量的氢氧化钠使溶解，再将处方量的醋柳黄酮搅拌使溶，过滤，再加亚硫酸钠搅拌，使溶解，然后以柠檬酸和柠檬酸钠调节pH至7.5～11.0，添加饱和氮气的注射用水至足量，用垂熔玻璃漏斗或膜滤器滤过，测定中间体含量，在氮气流下灌封，每支安瓿灌封2～10ml，用100℃流通蒸气15-30分钟灭菌即得。
样品室温留样12个月，含量和有关物质无明显变化，澄明度及稳定性均好，符合中国药典2000年版注射剂的质量要求。
实施例2醋柳黄酮复合物注射液醋柳黄酮(以异鼠李素计) 10g碳酸钠 20g柠檬酸钠适量柠檬酸 适量亚硫酸钠0.1g注射用水加至2000ml在配制容器中，加配制量80％的注射用水。通氮气饱和，加碳酸钠溶解后，再将醋柳黄酮加热搅拌溶于其中，过滤，再加亚硫酸钠搅拌使溶解，然后以柠檬酸和柠檬酸钠调节pH至7.5～11.0，添加饱和氮气的注射用水至足量，用垂熔玻璃漏斗或膜滤器滤过，测定中间体含量，在氮气流下灌封，每支安剖灌封2～10ml，用100℃流通蒸气15-30分钟灭菌即得。
实施例3醋柳黄酮复合物氯化钠输液醋柳黄酮(以异鼠李素计)20mg，柠檬酸三钠二水合物10mg，烟酰胺10mg，L-鸟氨酸1.8g，3-羟丙基β-环糊精10mg，苹果酸适量，依地酸钙钠2mg，氯化钠适量调节等渗注射用水加至100ml。
在配制容器中，加新鲜的注射用水，通氮气饱和，加处方量的柠檬酸钠三钠二水合物、烟酰胺、依地酸钙钠、L-鸟氨酸、3-羟丙基β-环糊精溶解后，再加处方量的醋柳黄酮，搅拌，过滤，同时加浓溶液量的0.1％(g/ml)的活性炭，混匀，加热煮沸约15分钟，趁热滤过脱炭。滤液加氮气饱和注射用水稀释至所需量，以苹果酸调节pH至8.0～11.0，滤过至澄明，测定中间体含量，通氮气灌封，用115℃流通蒸汽30分钟灭菌即得。
实施例4注射用醋柳黄酮复合物(无菌冻干粉)醋柳黄酮(以异鼠李素计)1g，L-精氨酸8.5g，亚硫酸钠0～0.5g，琥珀酸适量，甘露醇1～10g，EDTA二钠10mg，注射用水加至200～400ml。
在配制容器中，加配制量80％的注射用水，加处方量的L-精氨酸、甘露醇、亚硫酸钠、EDTA二钠溶解后，再加醋柳黄酮，搅拌使溶解，过滤，然后以琥珀酸和琥珀酸钠调节pH至7.8～11，添加注射用水至足量，0.22μm滤膜无菌过滤，测定中间体含量，分装在西林瓶中，每瓶约1～5ml，加塞、-40℃～-70℃下预冻1～4小时，-25℃～-15℃左右冷冻干燥20～48小时，然后升温15℃～35℃左右干燥2～8小时，控制水分在0.5～5％之间，压塞、放真空、出箱。
样品在40±2℃，RH75％条件下，经6个月的加速稳定性试验和在25±2℃，RH60％条件下，24个月的长期稳定试验证明，含量和有关物质均无明显变化，复溶性良好，符合中国药典注射剂的质量要求。
实施例5注射用醋柳黄酮复合物(无菌冻干粉)醋柳黄酮(以异鼠李素计)1g，DL-赖氨酸20g，葡乙胺70g，柠檬酸适量，甘露醇2～5g，EDTA二钠10mg，注射用水加至400ml。
在配制容器中，加配制量80％的注射用水，加入处方量的DL-赖氨酸、葡乙胺、甘露醇、EDTA二钠溶解后，再加醋柳黄酮，搅拌使溶解，过滤，然后以柠檬酸调节pH至7.8～11.5，添加注射用水至足量，0.22μm滤膜无菌过滤，测定中间体含量，分装在西林瓶中，每瓶约1～5ml，加塞、-40℃～-70℃下预冻1～4小时，-25℃～-15℃左右冷冻干燥20～48小时，然后升温15℃～35℃左右干燥2～8小时，控制水分在0.001～10％之间，压塞、放真空、出箱。
冻干粉针室温留样两年，含量和有关物质均无明显变化，复溶性良好，符合中国药典注射剂的质量要求。
实施例6注射用醋柳黄酮复合物(无菌分装粉末)醋柳黄酮(含异鼠李素99.0％以上)10g，L-精氨酸水溶液适量。
醋柳黄酮10g置于三角瓶中，搅拌加入将L-精氨酸的水溶液，使醋柳黄酮全部溶解，无菌过滤，低温冷冻干燥，得水溶性醋柳黄酮L-精氨酸复合物，过40～100目筛，将该复合物按含醋柳黄酮2～200mg进行无菌分装，压盖包装即得成品。
无菌分装粉末室温留样两年，含量和有关物质均无明显变化，复溶性良好，符合中国药典2000年版注射剂的质量要求。
实施例7注射用醋柳黄酮葡甲胺复合物(无菌分装粉末)醋柳黄酮(含异鼠李素99.0％以上)2g葡甲胺10g将处方量的葡甲胺溶入注射用水中，搅拌加入处方量的醋柳黄酮使溶解，过滤，滤液加适量的甲醇、异丙醇和乙酸乙酯，于0～10℃静置过夜，析出固体结晶，过滤，抽干，干燥，得水溶性醋柳黄酮葡甲胺复盐。过40～100目筛，测定中间体含量，将醋柳黄酮葡甲胺复合物按醋柳黄酮2～50mg分装，压盖即得成品。
无菌分装粉末室温留样12个月，含量和有关物质均无明显变化，复溶性良好，符合中国药典2000年版注射剂的质量要求。
实施例8醋柳黄酮氯化钠输液醋柳黄酮(以异鼠李素计)0.2g，二乙醇胺0.4g，三羟甲基氨基甲烷0.4g亚硫酸钠0.1g酒石酸适量，酒石酸钠适量，氯化钠适量调节等渗，注射用水加至1000ml。
在配制容器中，加处方量80％的注射用水，加处方量的二乙醇胺、亚硫酸钠溶解后，再加醋柳黄酮搅拌使溶解，过滤，同时加浓溶液量的0.1％(g/ml)的活性炭，加热煮沸约15～30分钟，趁热滤过脱炭。滤液加氮气饱和注射用水稀释至所需量，以酒石酸和酒石酸钠调节pH至8.5～11，滤过至澄明，测定中间体含量，按每瓶50～100ml分装，通氮气灌封，用115℃流通蒸汽30分钟灭菌即得。
样品经6个月加速稳定性试验，含量和有关物质均无明显变化，稳定性及澄明度均符合中国药典2000年版注射剂的质量要求。
实施例9在GMP条件下，将无菌异鼠李素10g与无菌L-精氨酸100g混合后按粉针剂制备工艺程序操作，分装成500～10000支；另将无菌注射用水2～20ml一支组合成组合包装，使用时将注射用水注入无菌粉针中，使碱与无菌异鼠李素作用形成易溶解于水的复合物，供临床静脉注射。
实施例10在GMP条件下，由无菌异鼠李素100克与无菌葡甲胺600g充分混合，制成组合制剂，按粉针剂制备工艺程序操作，分装成1000～10000支。使用时将注射用水或5％葡萄糖注射液或生理盐水注入无菌粉针中，使碱与无菌异鼠李素作用形成易溶解于水的复合物，供临床静脉注射或滴注。
实施例11将无菌异鼠李素1g分装于100个西林瓶中，另将氨丁三醇1.62克、磷酸钠2克溶于200ml注射用水中，磷酸氢钠和磷酸二氢钠调节pH为11～12，0.22μm滤膜无菌过滤，测定中间体含量，分装在100个西林瓶中，再将一瓶无菌异鼠李素与一瓶注射用溶剂装入同一个包装盒中，组成组合包装；使用时将碱性注射用专用溶剂注入无菌粉针中，使其与醋柳黄酮作用形成易溶解于水的复合物，供临床使用。
实施例12注射用醋柳黄酮3-羟丙基β-环糊精包合物(无菌分装粉末)醋柳黄酮(含异鼠李素99.0％以上)1g3-羟丙基β-环糊精(3-HP-β-CYD)10g将处方量的3-羟丙基β-环糊精(3-HP-β-CYD)溶入200～1000m注射用水中，搅拌溶解后，搅拌加入处方量的醋柳黄酮，使溶解，经0.20～0.22μm滤膜无菌过滤，滤液经真空干燥或喷雾干燥或冷冻干燥，得水溶性醋柳黄酮3-羟丙基β-环糊精包合物。该包合物的红外光谱既不同于醋柳黄酮、3-羟丙基β-环糊精，也不同于醋柳黄酮与3-羟丙基β-环糊精的混合物。将水溶性醋柳黄酮3-羟丙基β-环糊精包合物，控制水分在0.001～10％之间，测定其含量，然后按含异鼠李素2～100mg剂量于西林瓶中进行无菌分装，包装得成品。
实施例13注射用醋柳黄酮3-羟丙基β-环糊精包合物(无菌分装粉末)醋柳黄酮(含异鼠李素99.0％以上) 1g2-羟丙基-β-环糊精(2-HP-β-CYD)80g将处方量的2-羟丙基-β-环糊精(2-HP-β-CYD)溶入500～1000ml注射用水中，搅拌溶解后，搅拌加入处方量的醋柳黄酮，使溶解，经0.20～0.22μm滤膜无菌过滤，滤液经真空干燥或喷雾干燥或冷冻干燥，得水溶性醋柳黄酮3-羟丙基β-环糊精包合物。该包合物的红外光谱既不同于醋柳黄酮、2-羟丙基β-环糊精，也不同于醋柳黄酮与2-羟丙基β-环糊精的混合物。将水溶性醋柳黄酮2-羟丙基β-环糊精包合物，控制水分在0.001～10％之间，测定其含量，然后按含异鼠李素2～100mg剂量于西林瓶中进行无菌分装，即得。
样品经6个月加速稳定性试验，含量和有关物质均无明显变化，复溶性良好，符合中国药典2000年版注射剂的质量要求。
实施例14醋柳黄酮复盐注射液醋柳黄酮(含异鼠李素99.0％)1g(以异鼠李素计)2，6二甲基β-环糊精 5gSBE7-β-CD1g葡乙胺1g焦亚硫酸钠0.06g乳酸(2M) 适量乳酸钠(2M)适量注射用水 100～500ml在搅拌中将处方量的2，6二甲基β-环糊精和SBE7-β-CD溶入适量注射用水中，溶解后，搅拌下加入处方量的醋柳黄酮，使溶解，再加入处方量的葡乙胺和焦亚硫酸钠，搅拌使溶解，加浓溶液量的0.01％(g/ml)的活性炭，40～100℃搅拌约15～30分钟，趁热滤过脱炭。滤液加氮气饱和注射用水至足量后，以乳酸和乳酸钠调节pH至8.5～11.5，滤过至澄明，测定中间体含量，按每瓶2～20ml分装，通氮气灌封，灭菌即得。或添加注射用水至足量后，经0.20～0.22μm滤膜无菌过滤，测定中间体含量，按每瓶2～20ml分装于西林瓶中，压盖包装即得。
样品室温留样12个月，含量和有关物质均无明显变化，稳定性及澄明度符合中国药典2000年版注射剂的质量要求。
实施例15醋柳黄酮复盐注射液醋柳黄酮(含异鼠李素62.0％) 1g(以异鼠李素计)3-羟丙基β-环糊精(3-HP-β-CYD) 60g葡乙胺 1g焦亚硫酸钠 0.06g乳酸(2M) 适量乳酸钠(2M) 适量注射用水加至 500ml在搅拌中将处方量的3-羟丙基β-环糊精(3-HP-β-CYD)溶入400ml注射用水中，溶解后，搅拌下加入处方量的醋柳黄酮，使溶解，过滤，再加入处方量的葡乙胺和焦亚硫酸钠，搅拌使溶解，加浓溶液量的0.1％(g/ml)的活性炭，加热煮沸约15～30分钟，趁热滤过脱炭。滤液加氮气饱和注射用水稀释至所需量，以乳酸和乳酸钠调节pH至8.5～11.5，滤过至澄明，测定中间体含量，按每瓶2～20ml分装，通氮气灌封，用100℃流通蒸汽30分钟灭菌即得。
样品室温留样12个月，含量和有关物质均无明显变化，稳定性及澄明度符合中国药典2000年版注射剂的质量要求。
实施例16
醋柳黄酮复合物注射液醋柳黄酮(含异鼠李素40.0％)(以异鼠李素计) 10g碳酸钠 22g柠檬酸钠(2M) 适量盐酸(1M) 适量甘油 1ml吐温-800.5mlL-半胱氨酸 0.1g注射用水 加至1000ml在配制容器中，加配制量80％的注射用水。通氮气饱和，加处方量的吐温-80、L-半胱氨酸、甘油、碳酸钠搅拌溶解后，再搅拌加入处方量的醋柳黄酮，然后以盐酸和柠檬酸钠调节pH至7.5～11.0，过滤，添加饱和氮气的注射用水至足量，再调节pH至7.5～11.0，用垂熔玻璃漏斗或膜滤器滤过，在氮气流下灌封，每支安剖灌封2～10ml，用100℃流通蒸气15-30分钟灭菌即得。
样品室温留样12个月，含量和有关物质均无明显变化，澄明度及稳定性均好，符合中国药典2000年版注射剂的质量要求。
实施例17醋柳黄酮注射液醋柳黄酮(含异鼠李素30.0％)1g(以异鼠李素计)乙醇 5ml吐温-80 1ml亚硫酸钠 0.03g依地酸钙钠20mg乳酸(2M) 适量乳酸钠(2M)适量注射用水加至 400ml在搅拌中将处方量的醋柳黄酮加入含处方量的乙醇和PEG400的注射用水溶液100ml中，使溶解，搅拌下加入处方量的依地酸钙钠和亚硫酸钠，搅拌使溶解，过滤，同时加浓溶液量的0.1％(g/ml)的活性炭，加热煮沸约15分钟，趁热滤过脱炭。滤液加氮气饱和注射用水稀释至所需量，以乳酸(2M)和乳酸钠(2M)调节pH至7.5～11，无菌滤过至澄明，测定中间体含量，按每瓶2～20ml分装，通氮气灌封，用蒸汽灭菌即得。或添加注射用水至足量后，以乳酸(2M)和乳酸钠(2M)调节pH至7.5～11，经0.20～0.22μm滤膜无菌过滤，测定中间体含量，按每瓶2～20ml分装于西林瓶中，压盖包装即得。
样品经6个月加速稳定性试验，含量和有关物质均无明显变化，澄明度等均好，符合中国药典2000年版注射剂的质量要求。
实施例18醋柳黄酮注射液醋柳黄酮(含异鼠李素30.0％) 1g(以异鼠李素计)乙醇 3ml丙二醇 10ml吐温-80 1ml
亚硫酸钠0.03g依地酸钙钠 20mg乳酸(2M)适量乳酸钠(2M) 适量注射用水加至400ml在搅拌中将处方量的醋柳黄酮加入含处方量的乙醇、丙二醇、依地酸钙钠、亚硫酸钠和PEG400的注射用水溶液200ml中，搅拌使溶解，过滤，以乳酸(2M)和乳酸钠(2M)调节pH至7.5～11，同时加浓溶液量的0.1％(g/ml)的活性炭，加热煮沸约15分钟，趁热滤过脱炭。滤液加氮气饱和注射用水稀释至所需量，再调节pH至7.5～11，无菌滤过至澄明，测定中间体含量，按每瓶2～20ml分装，通氮气灌封，灭菌即得。或添加注射用水至足量后，以乳酸(2M)和乳酸钠(2M)调节pH至7.5～11，经0.20～0.22μm滤膜无菌过滤，测定中间体含量，按每瓶2～20ml分装于西林瓶中，压盖包装即得。
样品室温留样12个月，含量和有关物质等均无明显变化，符合中国药典的质量要求。
实施例19醋柳黄酮注射液醋柳黄酮(含异鼠李素51.0％)1g(以异鼠李素计)乙醇 80mlPEG4001ml吐温-80 1ml亚硫酸钠 0.1g依地酸二钠20mg乳酸(2M) 适量乳酸钠(2M)适量注射用水加至 400ml在搅拌中将处方量的醋柳黄酮加入含处方量的乙醇、PEG400及吐温-80的注射用水溶液300ml中，使溶解，搅拌下加入处方量的依地酸钙钠和亚硫酸钠，搅拌使溶解，过滤，同时加浓溶液量的0.1％(g/ml)的活性炭，加热煮沸15～30分钟，趁热滤过脱炭。滤液加氮气饱和注射用水稀释至所需量，以乳酸(2M)和乳酸钠(2M)调节pH至7.5～11，无菌滤过至澄明，测定中间体含量，按每瓶2～20ml分装，通氮气灌封，用100℃流通蒸汽灭菌即得。
药效学试验仪器及主要试剂紫外分光光度计(岛津UV-2401)，低温台式离心机(MIKRO22R)。马尿酰甘氨酰甘氨酸(HGG)(Sigma公司)和牛血清白蛋白(Gibco公司)。
Wistar大鼠280～300g8只，用1％戊巴比妥钠腹腔麻碎，开胸心脏取血，血样室温静置30min，3500r/min离心10min，取上清液-65℃保存，待测。对于肺组织，大鼠采血后即取肺脏，于4℃生理盐水冲洗2次，去残血，称重，组织剪碎，加缓冲液(75mmol/L NaCl，50μmol/L ZnSO4，0.05mol/L Tris，pH7.4)，冰浴中匀浆，15000r/min 4℃离心30s，纱布过滤后滤液离心4000r/min离心15min，弃上清、沉淀加缓冲液悬浮，-65℃保存，考马斯亮兰法测定肺组织蛋白质含量。ACE活性的测定参考[王赋敏，等.中华医学检验杂志，1983.6(3)，145～151]ACE活性测定方法。分别取14mmol/L HGG 0.1ml、样本0.15ml、以及试验药物醋柳黄酮复盐1溶液0.1ml、醋柳黄酮包合物溶液0.1ml或醋柳黄酮复盐2溶液0.1ml(浓度分别为0.09，0.23，0.61，0.93，2.18mg/ml)于EP管中，反应30min，并设注射用水为空白对照。
统计学处理结果以x±S表示，数据作方差分析和t检验。
体外实验结果大鼠(8只)血清、肺组织ACE活性为(56.9±8.25)IU和(151.34±15.68)IU。加入醋柳黄酮复合物A(为醋柳黄酮的主要成分异鼠李素L-精氨酸复合物)、醋柳黄酮包合物(为醋柳黄酮主要成分异鼠李素的2-羟丙基β-环糊精包合物)和不同浓度的醋柳黄酮复合物B(醋柳黄酮葡甲胺复合物)，与空白对照组相比，试验组中大鼠血清、肺组织ACE活性呈浓度依赖性降低(P＜0.01)，醋柳黄酮复合物A(醋柳黄酮L-精氨酸复合物)、醋柳黄酮包合物和不同浓度的醋柳黄酮复合物B(醋柳黄酮葡甲胺复合物)明显抑制ACE活性。结果见表1。
表1醋柳黄酮复合物对ACE活性的抑制作用

近年来，由于血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)在临床心血管方面的广泛应用，以及局部肾素-血管紧张素系统(RAS)的发现和研究，使人们认识到RAS，尤其是心血管局部RAS在许多心血管疾病中起着至关重要的作用。ACE位于RAS的中心，是RAS活性的限速酶，能将血管紧张素I(AngI)转变为血管紧张素II(AngII)。现已证实AngII对心脏具有冠脉收缩和正性心肌力作用；可直接或间接通过促进儿茶酚胺释放使血管平滑肌收缩；并能刺激平滑肌细胞增生，促使心肌细胞肥大；参与缺血-再灌注损伤，引起心律失常。ACE还能水解缓激肚，后者为扩血管物质。
研究表明ACEI的药理作用是多方面的，主要包括①抑制循环中血管紧张素II转化酶系统；②抑制组织及血管紧张素系统；③减少末梢神经元释放去甲肾上腺素；④减少内皮系统形成内皮素；⑤增加缓激肽及扩血管的前列环素的形成；⑥减少醛固酮的分泌，使水钠潴留减少。
血管紧张素转换酶抑制剂通过上述作用可起到以下效应降低血压；逆转心脏及血管结构，减轻左心室肥厚及重量，使阻力血管中层/管腔径比值减小，从而减少高血压、心肌梗塞后及心功能障碍的心肌细胞过度增生及肥厚，改善心肌梗塞后的预后，减少意外发生率及死亡率，减少或防止高血压病靶器官的损害，治疗充血性心力衰竭及心功能障碍，降低充血性心力衰竭的发生及死亡率，增加大血管的顺从性，减少动脉粥样硬化形成及抗心肌缺血；减低胰岛素抵抗，改善对胰岛素的敏感性；具有保护肾脏的作用，特别是在糖尿病高血压患者，由于入球小动脉的压力增高、进入的血流也多(高灌注)，必然导致肾小球的高滤过状态，血管紧张素II生成减少，达到保护肾功能的作用。
本实验表明醋柳黄酮复合物或包合物对循环和局部ACE活性均有抑制作用，提示醋柳黄酮复合物或包合物可减少AngII的生成和缓激肽的降解，这可能是醋柳黄酮复合物扩管降压，保护缺血心肌等的机理之一。因此，应用醋柳黄酮复合物或包合物有助于防治高血压、充血性心力衰竭和心肌梗死等原因引起的心室重构、心肌肥大，非糖尿病肾病、1型糖尿病肾病以及蛋白尿。其给药剂量以主药异鼠李素计一般为2～200mg/天，可经胃肠道给药和静脉给药，静脉给药优选为2～50mg/天。
醋柳黄酮复合物安全性试验结果醋柳黄酮复合物A过敏反应试验摘要豚鼠静脉注射醋柳黄酮复合物A，未观察到动物咳嗽、蜷缩、竖毛、呼吸困难等过敏反应现象。表明醋柳黄酮复合物A对受试动物无致敏作用。
一、试验目的观察醋柳黄酮复合物A经全身给药有无致敏作用。
二、试验材料1.受试动物成年健康白色豚鼠，雄性，体重200-300g。
2.受试物醋柳黄酮复合物A，临用前稀释为0.05％醋柳黄酮复合物溶液备用。
3.溶媒0.9％氯化钠溶液。
4.对照药卵清蛋白，临用前用蒸馏水稀释成5％卵清蛋白备用。
三、试验方法1.致敏接触取豚鼠24只，随机分为3组，分别为溶媒对照组、受试药物组和阳性对照组。每组8只动物。各组动物分别腹腔注射(ip)等容量(0.5ml)0.9％氯化钠溶液、0.05％醋柳黄酮复合物A溶液及5％卵清蛋白，隔日一次，连续5次。
2.激发试验将各组动物在末次致敏给药后第12天进行激发性注射。溶媒对照组、受试药物组及阳性对照组豚鼠分别经颈外静脉注射0.9％氯化钠溶液、0.05％醋柳黄酮复合物A溶液及5％卵清蛋白1ml。观察并记录给药后即刻至15、30、60、120和180min内动物有无如过敏反应症状。
四、试验结果豚鼠腹腔致敏注射0.9％氯化钠溶液、0.05％醋柳黄酮复合物A溶液及5％卵清蛋白致敏后，动物一般情况良好，饮食、排尿及粪便状况正常。动物在末次致敏给药后第12天进行激发性注射。溶媒对照组和受试药物组动物激发给药后即刻至15、30、60、120和180min内均未见咳嗽、蜷缩、竖毛、呼吸困难甚至死亡等过敏反应症状，故评价为过敏反应阴性。阳性对照组豚鼠激发给药后均立即出现痉挛抽搐、喘息、呼吸困难及紫绀等现象，并于激发给药后5min内死亡，过敏反应均为极强阳性，见表2。
表2醋柳黄酮复合物A致豚鼠过敏反应及其程度

五、试验结论本试验表明醋柳黄酮复合物A对豚鼠无致过敏作用。
醋柳黄酮复合物A溶血性反应试验摘要醋柳黄酮复合物A0.1～0.5ml加入到2％人红细胞混悬液中，连续观察3小时，结果各管均未出现溶血及红细胞凝集现象，表明该药无溶血反应及红细胞凝集现象。
一、试验目的观察醋柳黄酮复合物A加入到红细胞混悬液中是否产生溶血作用及红细胞凝集现象。
二、试验材料受试药物醋柳黄酮复合物A，临用前按临床使用浓度稀释为0.05％醋柳黄酮复合物A溶液备用。溶媒0.9％氯化钠溶液三、试验方法1. 2％红细胞混悬液制备取健康人血6ml，肝素抗凝，用玻璃棒不断搅动血液。加入约10倍量的生理盐水，摇匀，1500rpm离心15min，去上清液，沉淀的红细胞再用生理盐水按上述方法反复洗涤3～4次，至上清液不显红色为止。将所得红细胞用生理盐水配成2％的混悬液，供试验用。
2.试验方法取洁净试管7只，进行编号，1-5号管为供试品管，6号管为阴性对照管，7号管为阳性对照管。按表4所示依次加入2％红细胞混悬液2.5ml和不同容积生理盐水，混匀，37℃±0.5℃温育半小时后，第1-5管加入不同容积的0.05％醋柳黄酮复盐A溶液，第6管加入生理盐水2.5ml，第7管加入蒸馏水2.5ml，混匀后，立即置37℃±0.5℃温育。15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时和3小时各观察一次。溶液若呈澄明红色，管底无或有少量红细胞残留，表明有溶血发生；若溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀，振摇后不分散，则再进一步对细胞凝集现象进行判定。
四、试验结果结果见表3。可见1～6管在所观察的3小时内上清液均无色透亮，且无絮状物。第7管溶液呈澄明红色，表示阳性对照管有溶血产生。
表5醋柳黄酮复合物A对人红细胞悬液的作用

五、试验结论醋柳黄酮复合物A无溶血反应，未观察到红细胞凝集现象。
醋柳黄酮复合物A血管注射刺激性试验摘要兔耳缘静脉连续滴注醋柳黄酮复合物A，连续滴注五天。病理检查结果表明其血管刺激性反应与对照组相比，无显著差异。提示醋柳黄酮复盐A对血管基本无刺激性。
一、试验目的观察动物在静脉滴注醋柳黄酮复合物A后，产生的血管刺激反应情况。
二、试验材料1.动物成年健康新西兰大耳白雌性家兔，体重2.0～2.5kg。
2.受试物醋柳黄酮复合物A，临用前稀释为0.05％醋柳黄酮复合物A溶液备用。
3.溶媒0.9％氯化钠溶液。
三、试验方法雌性家兔4只。第1只未用任何药物，作空白平行对照观察。另3只于右耳缘静脉滴注0.05％醋柳黄酮复合物A溶液，滴注速度为20～30滴/min；左耳缘静脉给予等容量0.9％氯化钠溶液作对照，滴注速度与受试药相同。每天一次，连续滴注5天。滴注期间，每天肉眼定时观察耳缘静脉的刺激性反应。第7天处死家兔，在双侧耳缘静脉近心端距注射部位1.0cm～1.5cm处取材，用甲醛固定，做常规组织切片，进行病理学检查。
四、试验结果1.肉眼结果血管纹路清晰，未见血管充血发红，周围组织水肿等炎症反应。
2.病理结果空白对照组镜下见静脉血管腔完整，未见狭窄，其管壁未见炎性细胞浸润。
醋柳黄酮复合物组(右耳缘静脉，滴注0.05％醋柳黄酮复合物A溶液)镜下见静脉血管腔完整，其管壁见少许炎性细胞浸润。余未见明显病变。
生理盐水组(左耳缘静脉，滴注0.9％氯化钠溶液)镜下见静脉血管腔完整，其管壁见少许炎性细胞浸润。余未见明显病变。
五、试验结论家兔耳缘静脉滴注0.05％醋柳黄酮复合物A溶液5天后，注射部位无肉眼所见刺激性反应。显微病理检查结果表明，未见血管结构异常、内皮损伤、血栓形成及其它病理变化，此结果与溶媒对照组一致。提示醋柳黄酮复合物A对血管无明显刺激性。
本研究首次发现豚鼠静脉注射醋柳黄酮复合物，未观察到动物咳嗽、蜷缩、竖毛、呼吸困难等过敏反应现象，表明醋柳黄酮复合物A对受试动物无致敏作用。醋柳黄酮复合物对人无溶血反应及红细胞凝集现象。兔耳缘静脉连续滴注醋柳黄酮复合物，连续滴注五天，醋柳黄酮复合物对血管基本无刺激性，证明醋柳黄酮复合物可静脉给药，用于治疗高血压、充血性心力衰竭、心肌梗死，心功能不全、非糖尿病肾病、1型糖尿病肾病以及蛋白尿。
本发明不限于以上所述的实施例。
权利要求
1.心血管药物制剂，其特征在于心血管药物制剂可由醋柳黄酮、药学上可接受的无机碱或有机碱生成的易溶解于水的复合物，其中醋柳黄酮与药学上可接受的无机或药学上可接受的有机碱的摩尔比为1∶0.8至1∶100；或由醋柳黄酮与环糊精或环糊精衍生物形成水溶性的包合物，其中醋柳黄酮与环糊精或环糊精衍生物的质量比为1∶1至1∶100；也可以由醋柳黄酮和低分子醇，聚山梨醇酯、聚乙烯吡咯烷酮，聚乙二醇、泊洛沙姆助溶剂中的一种或多种加水组成的水溶性的制剂；其中醋柳黄酮的量以异鼠李素计。在制剂中并可含有药学上可接受的载体，载体包括赋形剂、pH调节剂、抗氧剂、稳定剂、助溶剂，可以制备成包括注射液、输液、冻干粉针、无菌分装粉针制剂。
2.根据权利要求1所述的心血管药物制剂，其特征在于醋柳黄酮主要由异鼠李素组成，醋柳黄酮中有效成分异鼠李素的含量在5％～100％之间，可含少量异鼠李素-3-葡萄糖甙、槲皮素。
3根据权利要求1所述的心血管药物制剂，其特征在于醋柳黄酮与药学上可接受的无机碱或药学上可接受的有机碱的摩尔比为1∶1.0～30。
4.根据权利要求1所述的心血管药物制剂，其特征在于药学上可接受的无机碱为路易斯碱，可以是氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸氢盐、磷酸氢二钠、磷酸三钠、磷酸氢二铵、磷酸氢二钾、偏磷酸钠等无机碱的一种或几种，药用有机碱为路易斯碱，可以是有机胺如葡甲胺、葡乙胺、葡辛胺、氨丁三醇，无水或六水哌嗪、吗啉、烟酰胺、1，2-己二胺、三羟甲基氨基甲烷、二乙醇胺、乙醇胺、异丙醇胺、二异丙醇胺、二异丙胺，柠檬酸盐枸橼酸二钠、枸橼酸三钠、枸橼酸钾，乳酸钠、泛酸钠、葡萄糖酸钠，碱性氨基酸如L-赖氨酸、DL-赖氨酸、L-精氨酸、D-精氨酸、DL-精氨酸、L-鸟氨酸、组氨酸等中的一种或几种。
5.根据权利要求1、4所述的心血管药物制剂的药用碱，其特征在于药学上可接受的无机碱和有机碱优选氢氧化钠、碳酸钠、磷酸氢二钠、磷酸三钠、葡甲胺、葡乙胺、氨丁三醇，无水或六水哌嗪、吗啉、烟酰胺、三羟甲基氨基甲烷、L-赖氨酸、DL-赖氨酸、L-精氨酸、D-精氨酸、DL-精氨酸、组氨酸、L-鸟氨酸、枸橼酸三钠中的一种或几种。
6.根据权利要求1所述的醋柳黄酮与环糊精形成的包合物，其特征在于环糊精或环糊精衍生物，可以是α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精，葡糖基-环糊精(G1-CYD)，包括葡萄糖基-α-环糊精(G1-α-CYD)、葡糖基-β-环糊精(G1-β-CYD)、二葡糖基-β-环糊精(2G1-β-CYD)、麦芽糖基-环糊精(G2-CYD)，麦芽糖基-α-环糊精(G2-α-CYD)、麦芽糖基-β-环糊精(G2-β-CYD)、麦芽糖基-γ-环糊精(G2-γ-CYD)，麦芽三糖基-环糊精(G3-CYD)，麦芽三糖基-α-环糊精(G3-α-CYD)，麦芽三糖基-β-环糊精(G3-β-CYD)，麦芽三糖基-γ-环糊精(G3-γ-CYD)，甲基β-环糊精、乙基β-环糊精、二甲基β-环糊精、2，6二甲基β-环糊精(DM-β-CYD)、2，3，6三甲基β-环糊精(TM-β-CYD)、β-环糊精磺烷基醚(SAE-β-CYD)、羟乙基-β-环糊精、羟丙基β-环糊精、2-羟丙基β-环糊精(2-HP-β-CYD)、3-羟丙基β-环糊精(3-HP-β-CYD)、2，3-二羟丙基β-环糊精(DHP-β-CYD)、磺丁醚-β-环糊精(SBE-β-CD)，如(SBE7-β-CD)、SBE4-β-CD等其中的一种或多种；并优选为羟乙基-β-环糊精、羟丙基-β-环糊精、磺丁醚-β-环糊精的一种或几种。
7.根据权利要求1所述的心血管药物制剂，其特征在于也可以由醋柳黄酮和低分子醇，如丙二醇、乙醇、甘油等，聚山梨醇酯可以是吐温20、吐温40、吐温60、吐温80，聚乙烯吡咯烷酮、泊洛沙姆、聚乙二醇可以是PEG200、PEG300、PEG400、PEG600、PEG800、1000、PEG1540、PEG4000等助溶剂其中的一种或多种，其中优选乙醇、丙二醇、甘油、吐温80、PEG400、泊洛沙姆-407其中的一种或多种组成水溶性的制剂。
8.根据权利要求1所述的心血管药物制剂，其特征在于其pH在6.5～12之间，pH优选在7.5～11.2之间。
9.一种心血管药物制剂的制备方法，其特征在于包括如下方法A.一种心血管药物制剂的注射剂制备方法，将药学上可接受的无机碱或有机碱中的一种或几种的注射用水中，搅拌，使溶解，再将醋柳黄酮粉末加于其中，搅拌10-60分钟，过滤，可加入药学上可接受的抗氧剂，抗氧剂可以是亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、L-半胱氨酸、抗坏血酸钠中的一种或几种，亦可加等渗调节剂氯化钠、或葡萄糖、或右旋糖酐，用药学上可接受的pH调节剂如柠檬酸、醋酸、盐酸、硫酸、磷酸、马来酸、琥珀酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、抗坏血酸中的一种或几种，调节pH至6.5～11.5，优选pH至7.5～11.0，加0.001～2％(g/ml)的活性炭搅拌30分钟，过滤，添加注射用水至足量，滤过，通氮气灌封，灭菌，得到醋柳黄酮注射液或输液；B.无菌冻干注射剂制备方法在配制容器中，加配制量80％的注射用水，加药学上可接受的无机碱或有机碱中的一种或几种，溶解于水中，再加醋柳黄酮，搅拌10～60min，过滤，再加药学上可接受的抗氧剂中的一种或几种，使溶解，然后以PH调节剂调节pH至7.0～12，优选pH至7.5～11，同时加0.001～2％(g/ml)的活性炭搅拌下30分钟过滤，添加注射用水至足量，无菌过滤，测定中间体含量，分装在西林瓶中，每瓶约1～5ml，加塞、-40℃～-70℃下预冻1～4小时，-25℃～-15℃左右冷冻干燥20～48小时，然后升温15℃～35℃左右干燥2～8小时，重要的是要将控制水分在0.01～10％之间，压塞、放真空、出箱；C、将药学上可接受的无菌无机碱或有机碱中的一种或几种溶入蒸馏水中，加入醋柳黄酮，搅拌10～60min，加0.001～2％(g/ml)的活性炭搅拌下30分钟过滤，补水，然后以pH调节剂调节pH至7.0～12，再经0.20～0.22μm滤膜无菌过滤，滤液经真空干燥或喷雾干燥或冷冻干燥，控制水分在0.001～10％之间，粉碎得14～150目的颗粒大小的粉末，再将该复合物按剂量按进行无菌分装，压盖即得成品。
10.一种心血管治疗药物制剂的制备方法，其特征在于A、由无菌高纯的醋柳黄酮与药学上可接受的无菌无机碱或有机碱中的一种或几种分别按粉针剂制备工艺程序操作，分装于西林瓶中；另将一支无菌注射用水1～20ml/支组合成组合包装，使用时将注射用水注入无菌粉针中，使有机碱与醋柳黄酮作用形成易溶解于水的稳定的复合物，使其pH为7.0～12，供临床静脉注射；B、或将无菌高纯的醋柳黄酮按粉针剂制备工艺程序操作，分装于西林瓶中；另将药学上可接受的无菌无机碱或有机碱中的一种或几种溶解于无菌注射用水，加入适量的药学上可接受的抗氧剂和稳定剂，使注射用溶媒每支体积为1～20ml，与分装于西林瓶中无菌异鼠李素组合成组合包装，使用时将注射用溶媒注入无菌粉针中，使有机碱与醋柳黄酮作用形成易溶解于水的稳定的复合物，使其pH为7.0～12，供临床静脉注射；C、将药学上可接受的无菌无机碱或有机碱中的一种或几种溶入蒸馏水中，搅拌加入醋柳黄酮，使溶解，过滤，补水，然后以PH调节剂调节pH至7.0～12，再经0.20～0.22μm滤膜无菌过滤，滤液经真空干燥或喷雾干燥或冷冻干燥，控制水分在0.001～10％之间，粉碎得14～150目的颗粒大小的粉末，再将该复合物按含醋柳黄酮(以异鼠李素计)的量1～200mg进行无菌分装，分装于西林瓶中；另将一支无菌注射用水1～20ml/支组合成组合包装。
11.一种心血管治疗药物制剂的制备方法，其特征在于将药学上可接受的无菌无机碱或有机碱中的一种或几种溶入蒸馏水中，搅拌加入醋柳黄酮，溶解，过滤，滤液加甲醇、乙醇、异丙醇、乙酸乙酯、丙酮、苯、石油醚中的一种或几种，于4℃静置过夜，析出结晶，抽干，干燥，得水溶性醋柳黄酮复合物，控制水分在0.001～10％之间，取此盐过14～100目筛，按醋柳黄酮复合物5～200mg分装，压盖即得成品。
12.一种心血管治疗药物制剂的制备方法，其特征在于A、将相当于醋柳黄酮1～100倍量的环糊精或环糊精衍生物，优选羟乙基-β-环糊精、羟丙基β-环糊精，如2-羟丙基β-环糊精(2-HP-β-CYD)、3-羟丙基β-环糊精(3-HP-β-CYD)、2，3-二羟丙基β-环糊精(DHP-β-CYD)，如磺丁醚-β-环糊精(SBE-β-CD)，如(SBE7-β-CD)、SBE4-β-CD等其中的一种或多种溶入适量的注射用水中，在10～100℃下搅拌0.2～4h，搅拌加入处方量的，使溶解，经0.20～0.22μm滤膜无菌过滤，滤液经真空干燥或喷雾干燥或冷冻干燥，得水溶性醋柳黄酮包合物，该包合物的红外光谱既不同于醋柳黄酮、上述β-环糊精，也不同于醋柳黄酮与上述β-环糊精的混合物，将上述水溶性醋柳黄酮β-环糊精包合物，测定其含量后，按含异鼠李素2～100mg剂量于西林瓶中进行无菌分装，包装得成品；B、将相当于醋柳黄酮1～100倍量的环糊精或环糊精衍生物，优选羟乙基-β-环糊精、羟丙基β-环糊精，如2-羟丙基β-环糊精(2-HP-β-CYD)、3-羟丙基β-环糊精(3-HP-β-CYD)、2，3-二羟丙基β-环糊精(DHP-β-CYD)，磺丁醚-β-环糊精(SBE-β-CD)，如(SBE7-β-CD)、SBE4-β-CD等其中的一种或多种溶入适量的注射用水中，搅拌溶解后搅拌下加入处方量的醋柳黄酮，在10～100℃下搅拌0.2～4h，可在其中加入药学上可接受的抗氧剂中的一种或几种，亦可加等渗调节剂氯化钠、或葡萄糖、或右旋糖酐，用药学上可接受的pH调节剂中的一种或几种，调节pH至6.5～11.5，优选pH至7.5～11.0，加0.001～2％(g/ml)的活性炭搅拌30分钟，过滤，添加注射用水至足量，滤过至澄明，测定中间体含量，通氮气灌封，灭菌，得到醋柳黄酮注射液或输液；C、在搅拌中将醋柳黄酮加入溶有低分子醇，可以是丙二醇、乙醇、甘油等，聚山梨醇酯即包括吐温20～吐温40～吐温60～吐温80，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙二醇系列，包括PEG200、PEG300、PEG400、PEG600、PEG800、1000、PEG1540、PEG4000，泊洛沙姆系列，包括泊洛沙姆-124，泊洛沙姆-188，泊洛沙姆-237，泊洛沙姆-388，泊洛沙姆-407等助溶剂其中的一种或多种的注射用水溶液中，使溶解，过滤去掉不溶物，加入药学上可接受的抗氧剂和稳定剂中的一种或几种，搅拌使溶解，用药学上可接受的pH调节剂中的一种或几种，调节pH至6.5～11.5，优选pH至7.5～11.0，加0.001～2％(g/ml)的活性炭搅拌30分钟，过滤，添加注射用水至足量，滤过至澄明，测定中间体含量，按每瓶2～10ml分装，通氮气灌封，灭菌即得，或添加注射用水至足量后，经0.20～0.22μm滤膜无菌过滤，测定中间体含量，按每瓶2～10ml分装于西林瓶中，压盖包装即得。
13.一种心血管药物制剂或醋柳黄酮复合物或包合物的用途其特征在于心血管药物制剂或醋柳黄酮复合物或包合物抑制哺乳动物的循环和局部ACE活性，减少Ang II的生成和缓激肽的降解，是血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)，用于防治高血压、充血性心力衰竭、抗动脉粥样硬化、抗心肌缺血、以及高血压、充血性心力衰竭、心肌缺血或心肌梗死等原因引起的心室重构、心肌肥大，非糖尿病肾病、1型糖尿病肾病以及蛋白尿。
全文摘要
一种心血管药物制剂、制备方法及用途包括心血管药物制剂——由醋柳黄酮、药学上可接受的无机碱或药学上可接受的有机碱等组成；或由醋柳黄酮与环糊精形成水溶性的包合物；或由醋柳黄酮和低分子醇，聚山梨醇酯、聚乙二醇、泊洛沙姆等助溶剂组成的水溶性的制剂；使不溶于水的醋柳黄酮作用形成易溶解于水的制剂，并报道了醋柳黄酮复合物及制剂的用途。优点是解决了长久以来没有解决的难题，表明了本发明药物制剂既可增加醋柳黄酮的溶解度，又有稳定的载药量，经加速稳定性试验和长期稳定试验证明，说明配伍组成的制剂能够长期存储。
文档编号A61P9/12GK1839821SQ20061001818
公开日2006年10月4日 申请日期2006年1月17日 优先权日2006年1月17日
发明者刘力 申请人:刘力