专利名称：杏树皮及其提取物在制备治疗艾滋病的药物中的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及杏树皮及其提取物在制备治疗艾滋病的药物中的用途，属于中药领域。
背景技术：
艾滋病是获得性免疫缺陷综合征的简称，1981年才被人们认识的一种新的性传播疾病。是由人类免疫缺陷病毒(HIV)引起的人体细胞免疫功能缺陷，导致一系列条件致病微生物感染和肿瘤发生的致命性综合征。
我国自1985年发现首例艾滋病感染者以来，在不到20年时间，经历了艾滋病的传入期和扩散期，局部地区进入快速增长期。近年来，我国艾滋病传播呈快速增长的趋势，2001年报告艾滋病病毒感染人数较2000年增长了58％；据估计，从1985年发现首例艾滋病病毒感染者到2001年底，我国艾滋病病毒感染者累计已达85万人，其中病人数累计达20万人以上，现存活病人8-10万。另据初步统计，2002年上半年我国报告发现艾滋病病毒感染者比2001年同期增长16.7％。虽然增长幅度有所下降，但估计累计感染总人数已增长到近100万。按照国际通行的标准，就感染率而言，我国目前尚处于艾滋病低流行期，但由于我国人口基数大，艾滋病病毒感染者的绝对数很大，艾滋病防治形势不容乐观。根据世界卫生组织统计截至2001年底，包括中国在内的西太平洋地区艾滋病病毒感染者总数为120万，其中我国居该地区第1位，同时居亚洲第4位和世界第17位。据专家预测如不采取积极有效的措施，到2010年，中国艾滋病病毒感染者将超过1000万人。此外，在我国中部一些地区1995年前因不规范和非法采供血活动造成了艾滋病的传播。感染者多以村为单位呈高度聚集灶状分布，重点村庄供血浆人员的艾滋病病毒感染率一般为10-20％，最高达60％。由于感染的时间和地域比较集中，根据艾滋病的发病规律，这些地区艾滋病集中的发病和死亡高峰正在出现，其中主要是青壮年人。
艾滋病的治疗尚无满意的方法，公认有效的治疗药物包括以下几种1.叠氮胸苷是逆转录酶抑制剂，主要用于阻止HIV复制。它可提高CD4细胞数，减缓疾病的进程，延长患者的存活，减少条件性感染，降低死亡率。主要的副作用是骨髓抑制、全血细胞减少而致继发感染加重，此外还能引起药物热、皮疹等。
2.双脱氧肌苷是逆转录酶抑制剂，作用与叠氮胸苷相同，其副作用包括周围神经病、胰腺炎及肾脏损害，因此治疗前必须检查有关项目。
3.双脱氧胞苷也是一种逆转录酶抑制剂，可使患者血清P24抗原减少，CD4细胞短暂升高，副作用与剂量相关，主要有皮疹、口炎、周围神经病等。
4.同他天定是一种新的逆转录酶抑制剂，作用与双脱氧胞苷相似，能增加CD4细胞数。
由于单一用药副作用较大，美籍华裔科学家何大一于1996年提出了一种“鸡尾酒疗法”的治疗方案，并在全世界得到了推广。该疗法通过三种或三种以上的抗病毒药物联合使用来治疗艾滋病，从而减少单一用药产生的抗药性，最大限度地抑制病毒的复制，使被破坏的机体免疫功能部分甚至全部恢复，从而延缓病程进展，延长患者生命，提高生活质量。接受这种疗法的病人如果在感染的最初几个月同时服用三种药物，最能有效地抑制病毒的复制扩散。例如接受AZT、3TC和蛋白酶抑制剂3种药物混合疗法，其中AZT、和3TC两种药物能够初步中断病毒的繁衍，而蛋白酶抑制剂能完全阻断病毒的复制扩散。不过，这种混合多项药物疗法价格非常高昂，每年约需花费两万美元，而新近研究成功的第三种药物蛋白酶抑制则仍供不应求，虽然这种疗法对85％艾滋病人产生显著的疗效，仍有15％的病人情况丝毫没有改善，此外，接受这种疗法的病人，初期会出现许多药物副作用引发的症状，例如严重腹泻、腹部痉挛和贫血等现象，某些药物必须要在饭后服用，其他的则又应空腹时服用，对于病人能否持之以恒并且正确服药，构成相当大的考验。
发明内容
本发明的目的是提供杏树皮及其提取物在制备治疗艾滋病的药物中的用途。
本发明的第二个目的是提供有效治疗艾滋病的药物及其制剂。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案杏树是我国原产，久经栽培，品种很多，具有重要的经济价值。树性强健，耐干旱，除作果树和观赏植物以外，还可作为防护林和水土保持用的优良树种。木材坚硬，适宜制作器物。果实富含营养和维生素，除供生食和浸渍用外，还适宜加工制作杏干、杏脯、杏酱等。种仁(杏仁)含脂肪和蛋白质，可供食用及作医药和轻工业的原料。分布于东亚、中亚、小亚细亚和高加索。我国有7种，分布范围大致以秦岭和淮河为界，淮河以北杏的栽培较多，尤以黄河流域各省为其分布中心，淮河以南杏栽植较少。
本发明意想不到地发现了杏树皮及其提取物的新医疗用途，经过细胞学试验、动物试验和临床试验，证实可有效杀灭艾滋病病毒，并能促进免疫重建。
本发明所说的杏树皮包括杏树枝部的树皮、杏树干部的树皮和杏树根部的树皮。
据《全展选编·内科疾病》记载，杏树皮为双子叶植物药蔷薇科植物杏或山杏的树皮。性味甘，寒，入心、肺经。可煎服，用于治过食苦杏仁中毒。原植物杏Prunus armeniaca L.山杏Prunus.Armeniaca L.Var.Ansu Maxim.。
据《本草图经》记载，杏枝为双子叶植物药蔷薇科植物杏或山杏的树枝。辛，平，入肝经，化瘀通络，治跌打损伤，瘀血阻络。原植物杏Prunus armeniaca L.山杏Prunus.Armeniaca L.Var.Ansu Maxim.。
据《本草纲目》记载，杏树根为双子叶植物药蔷薇科植物杏或山杏的根。苦，温入肝、肾经。行气堕胎，消食解毒。治胎盘不下，死胎，过食杏仁中毒。原植物杏Prunus armeniacaL.山杏Prunus.Armeniaca L.Var.Ansu Maxim.。
杏树干茎部位的皮为赤红色，肉眼观察发亮，有光泽，杏树枝在幼年时也发红，当杏树不再年轻，接近土地的杏树干底部皮质变厚，颜色变为灰土色，地下部分的杏树根部，表皮颜色为棕红色。如果把杏树枝皮、杏树干皮及杏树根皮放在一起，肉眼观察，杏树根皮颜色最深，杏树干皮次之，杏树枝皮又次之。再把所有树皮翻过来观察其纤维层，可以很明显的观察到杏树根皮的纤维层最厚，杏树干皮次之，杏树枝皮又次之。所以，虽然三个不同部位的功效是一致的，都可以做为原材料，但从质量，数量方面考虑，优先选择杏树根皮做为原材料显然最好，杏树干皮次之，杏树枝皮又次之。故本发明所涉及的所有科学实验的原材料中杏树根皮数量最多，杏树干皮次之，杏树枝皮又次之，统称为杏树皮。
在取材过程中，由于杏树胶固着在树皮上，难以分离，故只能一同入药，因此不排除杏树胶含有活性成分的可能。因此本发明还保护杏树胶用于制备治疗艾滋病的药物的用途。此处的杏树胶尤指附着于杏树皮上的杏树胶，也可通过其他方式制备。
杏树皮的纤维层分泌有液体，在自然条件下可形成胶状物质，常附着于树皮表层。本发明在研究过程中将其作为有效部位之一，与树皮同时制备药物。由于杏树胶来源于树皮，因此我们有理由相信这种胶状物质也含有未知的活性成分。所以，无论单独使用树胶还是将其与树皮附着在一起混合提取获得含有树胶成分的混合物，均属于本发明的保护范围。
杏树还有野杏树(也叫山杏树)与家杏树(即人工种植杏树)之分，其根皮外观的颜色及厚度无明显区别，区别在于提取物的产出量，野杏树根皮的产量要多于家杏树根皮，根据鉴别中药的一贯经验，所有野生植物品种的质量都要优于人工种植品种，但做为药品的原材料，野杏树不仅药源有限，采购成本更高，而且容易造成对野杏树的过度破坏，监管会有一定困难。有鉴于此，本专利所涉及的所有科学实验的原材料中，少部分为野杏树根皮和野杏树干皮，大部分为家杏树根皮，统称为杏树皮。
本发明所用的杏树皮采摘于山西的吕梁山、太行山和陕西的临潼山，其他来源的杏树皮也同样可以使用。在取下杏树皮后，趁湿先截成3厘米左右的小段，然后洗净，晒干或烘干备用。
一种治疗艾滋病的药物，活性成份为杏树皮或杏树皮提取物。
本发明可以采用中药制剂常规方法制备成任何常规剂型，例如将这些原料药研磨成粉末混合均匀制成散剂冲服；也可以将这些药物一起水煎，然后浓缩水煎液，制成口服液；还可以使用有机溶剂提取该药物原料中的脂溶性成分，制成常规药剂；本发明还可以在简单处理后加入药剂学可接受的辅料，制备成各种其他剂型。
加入的辅料可以是淀粉、蔗糖、乳糖、甘露醇、硅衍生物、纤维素及其衍生物、明胶、甘油、琼脂、碳酸钙、表面活性剂、聚乙二醇、糊精等。
药剂的剂型可以是片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、喷雾剂、滴丸剂等，优选的口服剂型是颗粒剂、胶囊剂、片剂、口服液、滴丸剂、丸剂等。
一种治疗艾滋病的粉剂，将杏树皮直接粉碎即得。该杏树皮可以含有树胶物质。
一种治疗艾滋病的粉剂，按下述方法制成取杏树皮100克，(也可削去外面表皮，仅留中间纤维部分，对于效果基本无影响)，加水500毫升，煮沸20分钟，文火至粘稠状，烘干粉碎即可。
一种治疗艾滋病的汤剂，按下述方法制成取杏树皮100克，(也可削去外面表皮，仅留中间纤维部分，对于效果基本无影响)，加水500毫升，煮沸20分钟，文火至粘稠状即可。
虽然我们目前还没有明确杏树皮治疗艾滋病的机理，但杏树皮提取物在细胞学实验、动物试验和临床试验中都表现出了极好的治疗效果，这令发明人确信，在杏树皮中及其提取物(包括杏树胶)含有某种或某些对于艾滋病毒具有杀灭作用的物质。实验还证实了杏树皮提取物对于提高人体免疫力具有优异的效果，这也有助于理解艾滋病患者在实验过程中体质得到改善的现象。
本发明的优点是本发明能够有效杀灭艾滋病毒，治疗艾滋病，提高患者的免疫力，在药物有效范围内无毒副作用，使用安全。
下面结合本发明较佳实施例对本发明作进一步说明，凡是依照本发明公开内容进行的任何本领域的等同替换均属于对本发明专利权的侵犯。
具体实施例方式
实施例1一种治疗艾滋病的汤剂取杏树皮100克，加水500毫升，煮沸20分钟，文火煎煮至粘稠状即可。提取物的外观为棕红色汤剂，闻起来无味，人服用的味觉为苦涩味。
实施例2一种治疗艾滋病的粉剂取杏树皮100克，粉碎成100目细粉，即得。
外观为棕红色粉剂，闻起来无味，人服用的味觉为苦涩味。
实施例3一种治疗艾滋病的粉剂取杏树皮100克，加水500毫升，煮沸20分钟，文火煎煮至粘稠状，烘干粉碎即可。提取物的外观为棕红色粉剂，闻起来无味，人服用的味觉为苦涩味。
实施例4细胞实验采用体外抑制实验方法，观察本发明在敏感细胞MT4中的抑制作用。
一.材料1.药物实施例2的药粉，用无血清的RPMI1640培养基配制成所需浓度(1mg/ml)。
2.细胞及病毒MT4(淋巴细胞株)，中国预防医学中心病毒学研究所肿瘤室提供，在含有10％小牛血清的RPMI1640完全培养液中培养。
3.HIV-1病毒，为国际标准株，中国疾病预防控制中心病毒病控制所提供。
二.方法1.HIV-1，P24抗原检测试验采用一种抗原微量ELISA测定方法，以定量测定体外培养的上清液中的P24抗原量，其方法如下(1)吸取裂解液置于包被有P24单抗的条孔中，每孔25μl。
(2)各加100μl样品，包括药物组、病毒对照，细胞对照于已设计好的条孔中，条孔置湿盒中于37℃培养60分钟。
(3)用磷酸缓冲液冲洗条孔，至少冲洗4次。
(4)每孔加100μl酶标抗体(IgG)，37℃培养60分钟。
(5)用磷酸缓冲液冲洗条孔，至少冲洗4次。
(6)每孔加入100μ新配制的底物，室温避光放置30分钟。
(7)每孔加入100μ中止液。
(8)用酶标仪在630nm及450nm范围内双波测定OD值，最终选取570nm用于检测。
三.预实验细胞毒性分析按照抗病毒分析试验方法，将MT4细胞以20％血清的RPMI1640完全培养液配成50万/毫升，种入96孔板，每孔加100μ细胞液，另加入不同浓度的药液100μl，对照组不加药，改加无血清RPMI1640培养基100μ。置于37℃培养箱中培养6-7天后，观察药物对细胞的毒性。
正常细胞毒性原液浓度为1mg/ml试验结果样品浓度 1mg/ml 1∶5 1∶10 1∶20570nmOD值 0.5450.625 0.774 0.820正常细胞对照 0.847活细胞数率 64.3573.79 91.38 96.81 (％)带毒细胞毒性原液浓度为1mg/ml试验结果(570nm OD值)原液浓度1mg/ml样品浓度 1∶2 1∶4 1∶5 1∶8 1∶10 1∶20 1∶400.1695 0.459 0.669 0.909 0.525 0.406 0.340正常细胞对照1.3111带毒细胞对照1.078与正常细胞对比活细胞数率12.93 35.01 51.03 69.33 40.04 30.97 25.93(％)与带毒细胞对比活细胞数率15.72 42.58 62.06 84.32 48.70 37.66 31.54(％)四.抗病毒实验(每孔5万个MT4细胞)用100TCID50HIV-1病毒感染易感淋巴细胞株(MT4细胞)，置于37℃培养箱中60-90分钟后，用无血清RPMI1640液清洗，离心(1800转/分)去掉上清液，加入96孔细胞板中，将配制好的不同药物浓度分别加入其中，用RPMI1640完全培养液，培养6-7天后，用《HIV-1，P24试剂盒》(市售)检测上清液中的P24抗原，同时做同等条件的病毒对照及正常细胞对照组。
试验结果 原液浓度1mg/ml样品浓度 1∶5 1∶100.324 0.539正常细胞对照 1.3111带毒细胞对照 1.078对病毒的抑制率 69.94 50.00(％)五.结论本发明药物在0.2mg/ml时，对HIV-1病毒的抑制率为69.94％。
本发明药物在0.125mg/ml时，与正常细胞对比活细胞数率为69.33％。
与带毒细胞对比活细胞数率为84.32％。
实施例5动物实验对本发明药物进行了对鼠白血病病毒(鼠AIDS)的抑制作用的动物实验，利用Friend型鼠白血病病毒(FLV)感染BALB/C小鼠为动物模型，以脾指数及相应的脾指数抑制率，以及血白细胞的变化为评价指标观察本发明抗鼠白血病病毒作用。结果表明该药物各剂量组均能抑制病毒引起的小鼠病变。
一.实验材料1.药物按实施例2制备的棕红色粉末。阳性对照药物为AZT，厦门制药厂生产，批号9802011。
2.动物BALB/C小鼠由南方医科大学实验动物中心提供，雌性，体重13-15克。
3.试剂动物血液分析试剂稀释液，Diluent(批号0795712)，清洗液，Detergent(0795712)，鞘液，Sheath(680112)，溶血素，Lyse，批号17912，均购自美国雅培公司。
4.仪器CELL-DYN3500R血球计数器5.毒种Friend鼠白血病病毒购自美国经典培养物收藏中心(ATCC)，经腹腔注射小鼠增强毒力后，传代1次。并测定其半数致死量为2.0。
二.实验方法1.稀释病毒试验前取毒种，用流水冲浸融化，以DMEM稀释成每0.2ml含5个LD50，放冰水中保存。
2.感染小鼠小白鼠随即分组，每组5-8只，分阳性药物组(AZT)、病毒对照组及本发明药物大、中、小剂量组。在碘酒和酒精消毒后，用已经滴定鼠白血病病毒液注射腹腔，每只鼠约0.2ml，同时设正常小鼠对照组。
3.给药本发明药物按0.3g/kg、0.2g/kg和0.1g/kg分为大、中、小剂量给药；阳性药物(AZT)对照组按100mg/kg给药。以上药物均在病毒攻击的同一天开始给药，共给药20天，给药1次/天，灌胃给药。
4.测定脾指数感染后21天，杀剖小鼠，杀剖前禁食禁水4小时以上，称小鼠体重，处死后取出鼠脾、胸腺，称重。按照以下公式计算得出脾指数、胸腺指数和抑制率。
5.鼠血常规测定摘取眼球抗凝取血，测定血常规，包括红细胞计数和白细胞计数等指标。
三.统计学处理对所得实验数据进行t检验，求统计学的的显著性，凡p值小于0.05的，定为此药物有效。
四.实验结果见表1。
表1本发明药物对小鼠实验感染鼠白血病病毒抑制作用
注与病毒对照组相比，*p＜0.05，**p＜0.01五.结论以上结果显示，杏树皮含有可有效抑制鼠白血病病毒的感染的物质，其树皮直接粉碎得到的药物能够治疗鼠AIDS。提示，如果对杏树皮进行进一步提取，得到的物质将可能具有更好的疗效。
从脾指数和白细胞计数指标来看，脾指数比病毒对照组低，白细胞计数接近正常组值，说明本发明对胸腺T淋巴系统的不良影响比阳性药物AZT要小，更有利于免疫功能重建，在杀灭病毒的同时全面提升机体免疫功能，标本兼治。
实施例5艾滋病患者服用本品显效的临床观察一、一般资料4例患者均属AIDS相关综合征期。其中男2例，女2例，均属上世纪90年代初因卖血受传播而发病。有非特异性临床症状，如原因不明消瘦、发热、咳嗽、乏力、慢性腹泻、盗汗、长期眠差、失眠、咽痛、体重下降、皮肤病、厌食、口腔感染等；有国家卫生部指定的本地及省艾滋病检验机构提供的HIV抗体阳性，或确认试验阳性者；符合临床诊断为AIDS病人的。
二、治疗方法1.治疗药物服用实施例3的药物粉末，每日2次，每次5-15g，温开水送服，服药期间不再应用中西药及抗HIV病毒药物。服药30天为1疗程。
2.观察方法4例患者治疗前后观察症状、体征，有关检验及病毒载量、CD4、CD8计数比值、心电图、血、尿常规。
三、治疗结果经过3个疗程的治疗，患者症状均有显著减轻或者消失，血常规趋于正常。治疗过程中CD4与CD8的比值普遍升高，所有病人都出现了CD4/CD8双阳性的细胞，这是CD4和CD8的前体细胞，显示了免疫重建的迹象。疗程结束未发现有任何毒副作用。
表2艾滋病患者服用本品有效的临床观察
小结通过服用本品，能够提高艾滋病毒感染者的免疫功能，促进免疫重建，减少或阻止机会性感染的发生，有效提高感染者和艾滋病患者的生活质量，达到防治的目的。参加本实验的患者均已恢复了正常的生活，并能够参加体力劳动，甚至较重的体力劳动。
权利要求
1.杏树皮在制备治疗艾滋病的药物中的应用。
2.杏树皮提取物在制备治疗艾滋病的药物中的应用。
3.根据权利要求1或2所述的杏树皮在制备治疗艾滋病的药物中的应用，其特征在于所述杏树皮为杏树枝部的树皮、杏树干部的树皮和杏树根部的树皮。
4.杏树胶在制备治疗艾滋病的药物中的应用。
5.一种治疗艾滋病的药物，其特征在于活性成份为杏树皮或杏树皮提取物。
6.一种治疗艾滋病的制剂，其特征在于由权利要求5所述的药物和药剂学可接受的辅料组成。
7.根据权利要求6所述的一种治疗艾滋病的制剂，其特征在于所述药剂学可接受的辅料为淀粉、蔗糖、乳糖、甘露醇、硅衍生物、纤维素及其衍生物、明胶、甘油、琼脂、碳酸钙、表面活性剂、聚乙二醇、糊精等。
8.根据权利要求6所述的一种治疗艾滋病的制剂，其特征在于所述制剂的剂型为片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、喷雾剂、滴丸剂等，优选的口服剂型是颗粒剂、胶囊剂、片剂、口服液、滴丸剂、丸剂等。
9.一种治疗艾滋病的汤剂，按下述方法制成取杏树皮100克，加水500毫升，煮沸20分钟，文火至粘稠状即可。
10.一种治疗艾滋病的粉剂，按下述方法制成(1)将杏树皮直接粉碎；或(2)取杏树皮100克，加水500毫升，煮沸20分钟，文火至粘稠状，烘干后粉碎。
全文摘要
本发明公开了杏树皮及其提取物在制备治疗艾滋病的药物中的应用。本发明的优点是本发明能够有效杀灭艾滋病毒，治疗艾滋病，提高患者的免疫力，在药物有效范围内无毒副作用，使用安全。
文档编号A61K9/02GK1981830SQ200610161978
公开日2007年6月20日 申请日期2006年12月8日 优先权日2005年12月9日
发明者范建荣 申请人:范建荣