专利名称：一种单克隆抗体的制剂的制作方法
一种单克隆抗体的制剂本发明涉及制剂生产领域。更具体地，本发明提供了一种新型免疫抑制剂— 抗CD25嵌合单克隆抗体水针剂，以及相应的生产方法，包括有关的的辅料筛选 和冻干工艺。
背景技术：
器官移植是治疗终末期器官疾病的最有效的治疗手段。以肾移植为例，同 种异体肾移植是目前治疗末期肾病的最有效的方法。肾移植是我国临床开展最 早、例数最多、技术最成熟的大器官移植，已成为治疗终末期.肾病的常规手术。 近年来，器官移植病例数不断增长。以肾移植手术为例至2001年底，我国肾 移植的累积总数达40393例。我国肾移植水平已进入国际先进行列。供体肾脏移植到患者体内，担任体内卫兵的T细胞等免疫系统将会对外源的 肾脏展开进攻，也就是产生移植排斥反应。在这个过程中，L细胞受IL-l作用 后增生，'并且释放IL-2。 IL-2可进而促进L细胞增生并为CTL细胞(CD8 +细 胞毒性T细胞)的分化提供辅助信号。CTL细胞与HLA-1抗原结合后可引起分化， 成为成熟的CTL，溶解移植组织。由此可见，阻断IL-2因子与其受体的结合对 于器官移植的排斥反应相当重要。器官移植后的急性排斥反应较常见，这种反应可能会引起移植肾脏的坏死或 者移植肾功能衰退。因此，能够降低和减弱这类反应的药物对于器官移植的成功与否至^重要。临床上一般采用免疫抑制剂对器官移植病人进行治疗，拘制移植 排斥反应的发生或减轻反应程度。因此，接受肾移植者不得不终身服用免疫抑制 药物以达到l.合理应用以预防和治疗排斥反应(保护异己的肾脏)；2.保持患 者适度的免疫抵抗力(保护患者本身)。
新的免疫抑制剂的研制，使临床肾移植得到更为广泛的并展，肾移植数量急 剧增长，效果明显提高，肾移植一年存^率在先进的移植中心已超过85%，术后 大多数患者恢复正常生活和工作。其中免疫抑制剂在预防和治疗肾移植排斥反应 中起了关键作用。然而，迄今应用于临床的免疫W制剂并没有达到非常满意的效 果。卜虽然移植的肾一年存活率达80-90%，但急性排斥反应发生率仍高达50、。目前，临床上使用较多的免疫抑制剂有化学药物他克罗姆(Neural)，他可 莫司(PK506)或普乐可复、骁悉(画F)、雷帕霉素(RAPA)及新一代单克隆抗 体药物ZenapaxTM、 Simulec^与0KT3 。临床试验表明单克隆抗体类药物的疗效 较化学类药物好，但费用相当昂贵，以ZenapaxTM为例， 一个疗程每人就需要花 约人民币30万元的药费。并且，现有单克隆抗体产品存在一些主要的问题1. 鼠源性单克隆抗体为异种蛋白，进入人体会引起机体的排异反应，针对需要多 次重复治疗的鼠源性单克隆抗体的抗体可将其快速从体内清除，这是限制鼠源性 单克隆抗体治疗性临床应用的最大障碍。同时，鼠源性单克隆抗体激活人体其他 免疫系统如补体系统的能力差，从而影响其临床治疗效果。为解决上述问题，嵌合性和人源化单克隆抗体应运而生。人源化单克隆抗 体的结构中有90%与人的抗体结构相同，从而降低了产品的异源性。2. 高人源化单克隆抗体在进行抗体工程的处理过程中常常会失去对靶抗原的亲 合力和稳定性，同时也存在生产细胞建株困难，产量低等难点，且一直缺乏有效 的解决方法。因此，本领域迫切需要开发新的安全有效、产量高的新型免疫抑制剂。新 型免疫抑制剂一抗CD25嵌合单克隆抗体为一种免疫抑制剂，通过结合与和封闭 IL-2受&，特异性阻断IL-2与其受体的结合，从而减少急性排异反应的发生， 与三联免疫抑制剂合用，可显著减少急性器官移植排异反应的发生。但是，由于 注射用Lotact-l是个全新的蛋白，在国内还没有上市的产品，所以，急需一种高 效、简便、低成本，适用于.产业化生产的生产方法。本发明通过选择适合的剂型、辅料、生产工艺，通过控制关键的工艺条件
使制得的产品保持了很高的活性和稳定性。中试研究表明，产品制造工艺稳 定，操作简单，周期短，成木低。适合产业化牛产。发明内容木发明的目的就是提供一种新型免疫抑制剂一抗CD25嵌合单克隆抗体水针剂木发明的另一目的就是提供一种高效和/或简便的生产新型免疫抑制剂一抗 CD25嵌合单克隆抗体水针剂的方法。在木发明的第一方面，就是提供了一种新型免疫抑制剂一抗CD25嵌合单克 隆抗体水针剂，它是一种磷酸缓冲溶液，含有新型免疫抑制剂一抗CD25嵌合单 克隆抗体，吐温80， NaCl。在木发明的第二方面，提供了一种新型免疫抑制剂一抗CD25嵌合单克隆抗 体水针剂的方法，该方法包括步骤a. 将新型免疫抑制剂一抗CD25嵌合单克隆抗体与辅料混合；b. 加入合适的缓冲溶液；c. 以合适的制剂规格分装；在另一优选例中，所述的辅料是0.15M NaCl， 0.2mg/ml吐温80。 在另一优选例中，所述的缓冲溶液是20mM磷酸缓冲溶液，pH6.9。 在木发明的另一优选例中，新型免疫抑制剂一抗CD25嵌合单克隆抗体水针 剂澄明度好，稳定性可达2年。木发明的优点在于(1) 选用的辅料和缓冲溶液易得，廉价，适合产业化生产。(2) 优化后的牛产工艺稳定，操作简单，效率高，成木低，适合产业化生产。(3) 由于采用水针剂，临床使用便捷，通过控制关键的牛产工艺条件，澄 明度好，稳定性可达2年。
具体实施方式
本发吸人通过深入而广泛的研究，通过对辅料、缓冲溶液等因素的筛选和优 化，生产新型免疫抑制剂一抗CD25嵌合单克隆抗体水针剂，获得高稳定和高活 性的水针剂，实现了新型免疫抑制剂一抗CD25嵌合单克隆抗体水针剂规模化生 产，在此基础上完成了本发明。本发明根据相关资料的查询整理总结，通过对辅料、缓沖溶液和生产工艺 的筛选和摸索，以澄明度、活性变化等参数为指标优化工艺，方法概要如下表。 表1方法概要步骤试验名称取点工作基础要获得的参数单次试验时间试验l辅料种类3-5种，浓度 5-15%文献、溶解性能外观、活性变化第1周试验2辅料浓度l-2种，浓度细化试验1外观、活性变化第2周'试验3初步稳定 ,、， 性试验数 据"2种试验:'3外观、活性变化第4周开始，约 2个月试验4中试放大1种.试验3外观、活性变化试验5中试优化1种试验3外观、活性变化、 产业化价值在本发明的一个实例中，进行了缓冲溶液及其pH的筛选。保证了样品的活 性和稳定性。 .在本发明的另一个实例中，进行了辅料种类及其浓度的筛选，进一步保证了 新型免疫抑制剂一抗CD25嵌合单克隆抗体活性和稳定性。在本发明的另一个实例中，进行了新型免疫抑制剂一抗CD25嵌合单克隆抗 体水针剂的初步稳定性试验，结果表明该水针剂稳定。通过以上方法，得到优化的工艺，通过此工艺制得新型免疫抑制剂一抗CD25 嵌合单克'隆抗体'注射用水针剂。中试研究表明，产品制造工艺稳定，操作简单，周期短，成本低，适合产业 化生产。下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明 本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法， 通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆实验室手册(New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建 议的条件。实施例l.初步稳定性实验辅料为氯化钠0.15MNad,加速稳定性实验结果显示，一2(TC条件下，保存3个月，在灯下用肉眼观察新型免疫抑制剂一抗CD25嵌合单克隆抗体水针澄明 度良好，电泳检测结果显示，此产品具有很好的稳定性。
权利要求
1.一种新型免疫抑制剂-抗CD25嵌合单克隆抗体水针剂，其特征在于，它由新型免疫抑制剂-抗CD25嵌合单克隆抗体，合适的辅料和合适的缓冲体系组成。
2. 如权利要求1所述M水针'剂，其特征在于，所述的辅料为0.Q,1-0.5M NaCl氯化钠， 0.01-0.5mg/ml吐温§0，较佳地，0.15MNaCl氯化钠，0.2mg/ml吐温80。
3. 如权利要求1所述的水针剂，其特征在于，所述的缓冲体系是10-100mM磷酸缓冲溶 液，pH5-8。较佳地，20mM磷酸缓冲溶液，pH6.9。
4. 一种新型免疫抑制剂一抗CD25嵌合单克隆抗体水针剂的制备方法，其特征在于，该方 法包括步骤a. 将新型免疫抑制剂一抗CD25嵌合单克隆抗体与辅料混合；b. 加入合适的缓冲溶液；c. 按合适的规格分装。
5. 如权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(a)所述的辅料是0.01-0.5MNacl氯化 钠，0.01-0.5mg/ml吐温80，较佳地，0.15MNacl氯化钠，0,2mg/ml吐温§0。
6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(b)所述的缓冲溶液是10-100mM磷酸 缓冲溶液，pH5-8。较佳地，20mM磷酸缓冲溶液，pH6.9。
全文摘要
本发明提供了一种新型免疫抑制剂-抗CD25嵌合单克隆抗体水针剂，及其生产方法。通过新型免疫抑制剂-抗CD25嵌合单克隆抗体与合适的辅料混合，并通过冻干程序、工艺优化的摸索和研究后，得到了一套新型免疫抑制剂-抗CD25嵌合单克隆抗体水针剂的生产方法。用本法，可得到高活性、高稳定性的抗CD25嵌合单克隆抗体嵌合体水针品。本发明高效、简便、低成本，适用于产业化生产。
文档编号A61K39/395GK101152572SQ20071014708
公开日2008年4月2日 申请日期2007年9月5日 优先权日2006年9月6日
发明者军 任, 瑶 张, 汤志清, 骏 蔡, 郭学彦, 黄阳滨 申请人:上海新生源生物医药有限公司