专利名称：：一种新型的抗乙型肝炎病毒药物及其制备方法
技术领域：
：本发明属于药物化学合成领域，特别涉及一种以钒氧稀土杂多化合物为抗乙型肝炎病毒药物及其制备方法。
背景技术：
：病毒是引起人类传染病的重要病原体之一。在人类的传染病中，由病毒引起的疾病约占3/4。由病毒引起的疾病具有传染性强、流行面广、发病率高等特点。例如由乙肝病毒引起的乙型肝炎全世界感染者现已超过20亿人。研究表明，乙型肝炎患者发展为肝硬化和肝细胞癌的机率比正常人高200-250倍。目前临床上常用的治疗乙型肝炎病毒的药物，主要有阿德福韦、更昔洛韦、泛昔洛韦和以及嘧咬类的拉米夫定。这些药物属核苷类药物，存在易产生耐药性、抗病毒谱较窄、多数具有毒副作用、而且价格较高、用药时间较长等缺点，至使其广泛应用受到了很大的限制。杂多化合物的抗病毒研究始于七十年代，自1971年首次发现杂多阴离子[SiWuO40]"具有抑制白血病病毒活性以来，相继发现有些杂多化合物对合胞病毒、麻渗病毒、腮腺炎病毒等多种病毒有较强的抑制作用。近年来杂多化合物的抗病毒研究主要集中在抗HIV病毒、流感病毒等多种RNA病毒的研究上。而国内外尚未见利用钒氧稀土杂多化合物抗乙型肝炎病毒的报导。
发明内容为了解决上述问题，本发明提供一种毒性低、价格低廉、能有效抑制乙肝病毒的抗乙型肝炎病毒药物。它是一种钒氧稀土杂多化合物。本发明的另一目的是提供新型的抗乙型肝炎病毒药物的制备方法。本发明采用的技术方案是新型的抗乙型肝炎病毒药物以通式[Ln(V03)2].nH20所表示，其中Ln为镧系元素中La、Ce、Pr、Nd、Pm、Sm、Eu、Gd、Tb或Dy中的一种，n=l~5。新型的抗乙型肝炎病毒药物的制备方法是将稀土氯化物和硫酸氧钒溶解在蒸馏水中，滴加有机胺或有机羧酸，搅拌后，转移到反应釜中，在90-200。C保温l-9天，过滤、滤液冷却，滤液冷却后析出浅黄色晶体[Ln(V03)2].nH20。其中，稀土氯化物和硫酸氧钒的摩尔比为1:2,每毫摩尔稀土氯化物加入蒸馏水1040ml,加入有机胺或有机羧酸0.10.5克。所述的稀土氯化物为La、Ce、Pr、Nd、Pm、Sm、Eu、Gd、Tb或Dy的氯化物。所述的有机胺是盐酸羟胺、N，N-二乙基羟胺或肼的一种。所述的有机羧酸是2-吡咬硫代乙酸、3-吡啶硫代乙酸或代乙酸的一种或两种以上混合物。本发明的抗乙型肝炎病毒药物易溶于水或极性有机溶剂中，其水溶液在pH=48时化学性质是稳定的，其水溶液的酸碱稳定性是依据电位滴定法测定的。本发明的新型的抗乙型肝炎病毒药物(也即钒氧稀土杂多化合物)具有二维结构，结构如图l所示，稀土离子是+2的，钒原子是+5价的。九配位的稀土离子和四配位的钒中心相互连接构成二维层状化合物。本发明的抗乙型肝炎病毒药物，在治疗乙型肝炎中的应用时，其有效剂量一般为，按成人一天0.1克，比较合适。可以纯的钒氧稀土杂多化合物服用，也可按常规生产工艺制成片剂，粉剂，胶嚢，水剂。本发明的有益效果是本发明的抗乙型肝炎病毒药物生产工艺简单，原料易得，产率高，产率可达52%,生产成本降低，价格低廉。通过对乙肝病毒的抑制作用试验，本发明所涉及的药物对HBeAg和HBsAg均有抑制作用，对HBeAg分泌的抑制率在第9天最高，药物浓度为10pg/ml抑制率达68.4%，药物浓度为80jag/ml抑制率达94.2%。第九天时的半数抑制浓度(IC50)为7.8|ug/ml。对HBsAg分泌的抑制作用，当药物作用第9天时HBsAg的分泌量均受到了明显的抑制，其中浓度为5.6jug/ml对HBsAg分泌量抑制率达60.2%。通过对小鼠的急性毒性实验给药后观察小鼠的中毒表现，连续观察14d,用改良寇氏法测定半数致死剂量LD50为2169mg/kg。根据WHO毒性分级标准，该受试药物为低等毒性。图1为本发明的抗乙型肝炎病毒药物的分子结构示意图。具体实施例方式实施例1[Ce(V03)2]'2H20(POM-6)的制备将稀土氯化铈1.0mmol;硫酸氧钒2.0mmol溶解在23ml的蒸馏水中，滴加O.lg盐酸羟胺搅拌后，转移到反应釜中，160。C保温7天，滤液冷却后析出浅黄色晶体[Ce(V03)2]'2H20。实施例2[La(V03)2]'2H20的制备将稀土氯化镧1.0mmol;硫酸氧钒2.0mmol溶解在15ml的蒸馏水中，滴加0.3g4-吡啶基硫代乙酸搅拌后，转移到反应釜中，200°C保温2天，滤液冷却后析出浅黄色晶体[La(V03)2]'2H20。实施例3[Pr(V03)2]'2H20的制备将稀土氯化镨1.0mmol;硫酸氧钒2.0mmol溶解在40ml的蒸馏水中，滴力。0.1g2-吡咬硫代乙酸和0.4g3-吡啶基硫代乙酸混合物，搅拌后，转移到反应釜中，90。C保温9天，滤液冷却后析出浅黄色晶体[Pr(V03)2]'2H20。实施例4药效学实验取实施例1的抗乙型肝炎病毒药物(POM-6)进行药效学实验一、对乙肝病毒的抑制作用1.受试抗乙型肝炎病毒药物对2.2.15细胞的毒性实验取处于指数生长期的2.2.15细胞，用含10%胎牛血清的IMDM培养液调细胞浓度为5xl04/ml，于96孔培养板中加入200pl单细胞悬液，于37。C，5%<302条件下培养过夜。吸弃上清，实验组每孔加入含不同浓度药物的培养液200^1,最高浓度为2000jag/ml，最低浓度为125pg/ml，倍比稀释。阴性对照。对照组每孔加入含10。/。胎牛血清的IMDM培养液200jul，于37。C，5%C02条件下培养48h。实验结束前4h每孔加入MTT液(5mg/ml)20pl，再培养4h,弃上清，每孔加150plDMSO，振荡5分钟，用酶标仪在490nm波长下测定OD值。每个浓度三复孔。实验结果如表1所示，从表中可以看出药物对2.2.15细胞的半数抑制浓度IC50为732.86pg/ml。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>2.受试抗乙型肝炎病毒药物对HBeAg、HBsAg的抑制实验取处于对数生长期的2.2.15细胞，用含'10%胎牛血清的IMDM培养液调细胞浓度为5x104/ml，于24孔培养板中每孔加入lml单细胞悬液，于37。C,5。/。C02条件下培养，细胞长至汇合时实验组每孔加入含不同浓度受试药物的细胞培养液lml,最高浓度为80^g/ml，倍比稀释，最低浓度为5.0吗/ml。阴性对照组每孔加入含10%胎牛血清的IMDM培养液lml，阳性对照组每孔加入含不同浓度阿德福韦(Lamivudine)的培养液lml，继续培养。每两天收集上清液，同时补充等体积的含不同浓度受试药物的细胞培养液，上清液于-20。C保存。于加药后第9天收集上清液后，收集2.2.15细胞，PBS悬浮于Eppendorf管中，离心弃上清，加入DEPC-H20,-70°0:冻存。取不同时间收集的上清液，用乙型肝炎病毒e(s)抗原诊断试剂盒检测化合物对细胞分泌HBeAg的抑制作用。受试抗乙型肝炎病毒药物[Ce(V03)2]对HBeAg的抑制作用见表2,从表中可以看出随着受试药物浓度的增加，受试药物对HBeAg分泌的抑制作用增强，受试药物对HBeAg分泌的抑制率在第9天最高，药物浓度为10pg/ml抑制率达68.4。/。，药物浓度为80吗/ml抑制率达94.2%。第九天时的半数抑制浓度(IC50)为7.8pg/ml。表2受试药物POM-6对HBeAg的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>受试药物对HBsAg的抑制作用见表3。从表3可以看出，受试药物对HbsAg均有抑制作用，且随着受试药物浓度的增加，受试药物对HBsAg分泌的抑制作用增强，当药物作用第9天时HBsAg的分泌量均受到了明显的抑制，其中受试药物浓度为5.6txg/ml对HBsAg分泌量抑制率达60.2%。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>二.受试药物的急性毒性实验选取体重18~22g小鼠，随机分为5组，每组10只，雌雄各半，常规喂养3~5天，健康者供实验用。实验前禁食12h,给药后3h喂食。阴性对照组口服生理盐水；实验组共6个剂量组，分别为406.23、641.85、1014.12、1602.31、2531.65、4000mg/kg体重。经口一次灌胃给药，给药后观察小鼠的中毒表现，连续观察14d,记录死亡数(表4)。用改良寇氏法测定半数致死剂量LD50为2169.83mg/kg。根据WHO毒性分级标准，该受试药物为低等毒性。表4受试药物急性毒性实验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>权利要求1、一种新型的抗乙型肝炎病毒药物，其特征在于所述的抗乙型肝炎病毒药物以通式[Ln(VO3)2]·nH2O所表示，其中Ln为镧系元素中La、Ce、Pr、Nd、Pm、Sm、Eu、Gd、Tb或Dy中的一种，n＝1～5。2、权利要求1所述的新型的抗乙型肝炎病毒药物的制备方法，其特征在于是将稀土氯化物和硫酸氧钒溶解在蒸馏水中，滴加有机胺或有机羧酸，搅拌后，转移到反应釜中，在90-200°C保温1-9天后，緩慢降温，过滤、结晶。3、根据权利要求2所述的新型的抗乙型肝炎病毒药物的制备方法，其特征在于所述的稀土氯化物为La、Ce、Pr、Nd、Pm、Sm、Eu、Gd、Tb或Dy的氯化物。4、根据权利要求2所述的新型的抗乙型肝炎病毒药物的制备方法，其特征在于所述的有机胺是盐酸羟胺、N,N-二乙基羟胺或肼中的一种。5、根据权利要求2所述的新型的抗乙型肝炎病毒药物的制备方法，其特征在于所述的有机羧酸是2-吡咬硫代乙酸、3-吡啶硫代乙酸或4-吡咬」琉代乙酸的一种或两种以上混合物。全文摘要本发明涉及一种新型的抗乙型肝炎病毒药物及其制备方法。采用的技术方案是抗乙型肝炎病毒药物，以通式Ln(VO<sub>3</sub>)<sub>2</sub>]·nH<sub>2</sub>O所表示，其中Ln为镧系元素中La、Ce、Pr、Nd、Pr、Sm、Eu、Gd、Tb或Dy中的一种，n＝1～5。抗乙型肝炎病毒药物的制备方法是将稀土氯化物和硫酸氧钒溶解在蒸馏水中，滴加有机胺或有机羧酸，搅拌后，转移到反应釜中，在90-200℃保温1-9天，过滤、滤液冷却。本发明具有价格低廉，毒性低，能有效抑制乙肝病毒。文档编号A61K33/24GK101161248SQ200710157960公开日2008年4月16日申请日期2007年11月6日优先权日2007年11月6日发明者何永科,娟李,韩正波申请人:辽宁大学