专利名称：抗乙型肝炎病毒治疗性疫苗佐剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种新的疫苗佐剂，具体涉及抗乙型肝炎病毒(HBV)治疗性疫苗佐剂。
乙型肝炎是由HBV传染的发病率极高的疾病。抗病毒治疗是治疗慢性HBV感染的主要手段。
20世纪90年代至今，研制出许多核苷类似物抗病毒药，其中拉咪呋叮(Lamivudine)已于1998年被美国FDA批准，用于治疗慢性乙肝。
此外，一种新的特异性抗HBV疗法(抗HBV治疗性疫苗)也已研制出来，其中HBV前S与S片段蛋白与T细胞表位多肽治疗性疫苗也已问世，并已用于临床治疗慢性HBV感染患者。2001年Merck研究所研究人员Hilleman在Vaccine杂志上简要综述了现今国际上治疗慢性HBV感染的主要治疗方法。文章中叙述了目前国际上治疗慢性HBV感染的最主要抗病毒疗法包括抗病毒化学疗法、干扰素类抗病毒药、生物学疗法、特异性免疫学疗法等。其中抗病毒化学疗法使用核苷类似物抗病毒药。干扰素类抗病毒药有IFN-α1、2a和2b。生物学疗法是影响HBV复制后转录过程，该疗法使用细胞因子(IFN-γ、TNF-α、IL-2和IL-12)、胸腺激素(Thymosinα1)、反义核苷酸与反义核酸等物质。特异性免疫学疗法使用抗HBV特异性免疫球蛋白、抗HBV治疗性疫苗。目前已有的抗HBV治疗性疫苗主要有三种前S与S片段蛋白治疗性疫苗、T细胞表位脂多肽治疗性疫苗和DNA质粒疫苗。前两种抗HBV治疗性疫苗已有临床应用报告，DNA质粒疫苗则由于存在尚未解决的安全问题而仍处在体外与动物实验的阶段。
根据目前发现的HBV免疫学机理，慢性HBV感染患者的转归与抗病毒治疗的效果有密切关系。极少数病例在抗病毒治疗过程中，肝内与循环血液内HBV被清除，临床上表现为HBsAg、HBeAg及HBV DNA消失，甚至最终产生抗HBs，取得根治性治疗效果；而大部分病例则只是在用药期间HBV复制被抑制，临床上表现为HBeAg及HBV DNA在循环血内达到检测不出的水平。然而，停药后一段时间内复发，返回到治疗前的状况。抗病毒治疗疗效的这种现状表明，慢性HBV感染的根除性治疗问题还远未解决。
在上述的三种已有抗HBV治疗性疫苗中，第一种抗HBV治疗性疫苗由两种制剂构成，其一是HBV特异性抗原。国际上通用HBV S片段或Pre S与S片段蛋白为HBV特异性抗原；其二是免疫佐剂。两种成分都会影响抗HBV治疗性疫苗的临床疗效。特别是免疫佐剂的好坏，对抗HBV治疗性疫苗临床疗效的好坏起决定性作用。
慢性HBV感染病人免疫系统存在的重要问题是免疫耐受。由于免疫耐受使患者的抗HBV免疫反应淋巴细胞对HBV及其抗原不产生免疫应答，因此使HBV在体内呈持续感染状态。现代免疫学的研究提示，解决这种状态的唯一途径是通过应用抗HBV治疗性疫苗进行治疗，来打破免疫耐受。故此，用抗HBV治疗性疫苗打破慢性HBV感染病人的免疫耐受，重建其正常抗HBV免疫应答，不仅是当前一种新治疗途径，而且也是当前最新的治疗思路。
在上述三种抗HBV治疗性疫苗中，现今被认为安全而且有疗效者是抗HBVPre S与S片段蛋白治疗性疫苗。在这个领域内，国际间竞争极为激烈。竞争的重点在于对这种治疗性疫苗佐剂的研制上。可以说，谁搞出最好的佐剂，谁就在国际竞争中占上峰。
在佐剂的研究方面，绝大多数人常用脂多糖类物质或旧结核菌素。由于我们在多年研究中发现，慢性HBV感染患者之所以对HBV呈免疫耐受状态，很重要的原因之一是患者的抗原处理细胞(APCs)上缺乏免疫第二信号(称为B7.1与B7.2或称CD80与CD86多肽)。正由于这种免疫信号缺乏，使得启动抗HBV免疫应答的两种细胞，即HBV抗原特异性细胞毒T淋巴细胞(简称特异性CTL)与辅助性T淋巴细胞(简称CD4+细胞或HTL)不能活化，进而使体内的HBV不能被清除。
鉴于上述原因，本发明人研究的重点是研制出具有免疫第二信号功能的多肽物质作为抗HBV治疗性疫苗的佐剂。经过多年研究之后，我们有了很大的发现，即基因重组白细胞介素-2(IL-2)、基因重组GM-CSF与破伤风类素(TT)衍生多肽按特定比例组合在一起，加一定剂量的Pre S与S片段蛋白疫苗，能表现两个作用①替代患者APCs缺乏的免疫第二信号；②重建患者失去的抗HBV免疫应答。这种研制抗HBV治疗性疫苗佐剂的新思路，以及在这种新思路基础上研制出来的新佐剂，到目前为止，在国际上仍然是独一无二的。
本发明的目的是提供新的佐剂，特别是提供适用于抗HBV治疗性疫苗的佐剂。
本发明的一个实施方案是提供一种新的疫苗佐剂，其中所述佐剂由白细胞介素-2(IL-2)、人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、破伤风类毒素衍生多肽(TT)组成。IL-2与GM-CSF可以是天然蛋白，也可以是重组蛋白。IL-2、GM-CSF以及TT均有市售，IL-2可以从北京四环生物工程制品厂以注射用重组人白细胞介素-2的产品名获得；GM-CSF可以从Schering-Plough(Brinny)Co.以Leucomax的商品名获得；TT可以从兰州生物制品研究所以破伤风类毒素的商品名获得。另外，IL-2、GM-CSF以及TT的生产方法也是本领域已知的，例如参见Wong GG，witek JS，Temple PA，et al，Molecular cloning ofhuman and givvon GM-CSF cDNA’s and purification of the natural and recombinanthuman proteins.Cancer Cells 1985；3235-242。
本发明的另一实施方案是提供由白细胞介素-2(IL-2)、人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、破伤风类毒素衍生多肽(TT)组成的新佐剂，其中所述IL-2、GM-CSF和TT的比例(重量比)为50-600∶10-200∶6-20，优选IL-2、GM-CSF和TT的重量比例为56∶16∶6。所述三种组分的含量以所得的佐剂不会产生毒性为准。
本发明的佐剂可用于疫苗，特别是用于抗HBV治疗性疫苗。
按上述比例取IL-2、GM-CSF和TT混合在一起，即可制成本发明所述的佐剂。按照本领域熟知的方法，可将上述组分按比例组合后制成水剂或者冻干制剂。
权利要求
1.一种新的疫苗佐剂，其特征在于所述佐剂由白细胞介素-2(IL-2)、人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、破伤风类毒素衍生多肽(TT)组成。
2.根据权利要求1的疫苗佐剂，其中所述IL-2、GM-CSF和TT的重量比例为50-600∶10-200∶6-20。
3.根据权利要求1的疫苗佐剂，其中所述IL-2、GM-CSF和TT的重量比例为56∶16∶6。
4.根据权利要求1-3的任一疫苗佐剂，其中所述IL-2和GM-CSF可以是重组生产的。
5.权利要求1-4的任一疫苗佐剂在抗乙型肝炎病毒(HBV)治疗性疫苗中的应用。
全文摘要
本发明涉及一种新的治疗性疫苗佐剂。本发明的佐剂特别适用于抗HBV治疗性疫苗。所述疫苗由白细胞介素－2(IL－2)、人粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子(GM－CSF)、破伤风类毒素衍生多肽(TT)组成。
文档编号A61K39/39GK1424110SQ0215991
公开日2003年6月18日 申请日期2002年12月30日 优先权日2002年12月30日
发明者苏盛 申请人:北京市希波医学技术开发公司