专利名称：对射线敏感的抗癌药物脂质体制剂的制作方法
技术领域：
本发明属药物制剂领域，涉及一种对射线敏感的抗癌药物脂质体制剂。
背景技术：
恶性肿瘤是当今世界威胁人类生命的主要疾病之一。在居民常见死亡原因 中，肿瘤在发达国家占第一位，在发展中国家占第二位。
目前治疗肿瘤的主要方法有手术、化疗和放射，约45%的肿瘤患者可以治 愈，其中放疗的治愈率为18%，而在肿瘤患者的治疗中，约70%接受过放射治 疗，因此，提高放疗疗效对提高肿瘤的临床疗效非常重要。提高放疗疗效主要可 以从两个方面研究，放射物理和放射生物，而提高肿瘤的放射敏感性是放射生物 的一个主要研究方向，由此，放射增敏剂的研究应运而生。
放射增敏剂定义为与放射线合并使用、可以增强放射线对肿瘤的杀伤作用、 对正常组织无毒性的药物。它可以通过改变肿瘤内细胞的周期分布使其进入对射 线敏感的时相、抑制放射损伤的修复、增加乏氧肿瘤细胞的氧合或者调控放射敏 感性基因等方式提高肿瘤的局部放射敏感性，进而增加放疗的疗效。放射增敏剂 的研究已经有四五十年的历史，但至今仍没有令人满意的用于临床的放射增敏药 物。目前临床使用的放射增敏药物存在的问题有增敏药物毒性大、药物的靶向性 差或者每日放疗同时配合每日用药增加了临床应用的不便等。以顺铂为例，该药 物本身有着很好的抗癌效果，可以作为化疗的一线用药。同时，顺铂又是高效的 放疗增敏剂，能够显著增强放疗效果。但是顺铂在杀伤肿瘤细胞同时对人体正常 细胞也造成很大伤害，毒性反应主要包括肾毒性、消化道毒性、骨髓抑制、神经 毒性和耳毒性等，严重的毒副作用使得患者往往不能继续药物治疗。其他若干化 疗药物和放疗增敏剂也都存在类似问题。
为了解决这一问题，研究人员设想通过制剂手段，如脂质体，将抗癌药物直 接定向于肿瘤部位，并取得了一些成功。Nexstar公司采用脂质体技术制备了抗 癌药物柔红霉素脂质体制剂，能够显著降低该药的毒性并提高抗肿瘤效果(EP 219922蒽环类抗肿瘤药物的磷脂颗粒，W0 1989004656多步法制备亲脂药物脂质体)。ALZA公司采用水溶性高分子聚合物修饰脂质，制备了阿霉素长循环脂质 体(USP 5213804实体瘤的治疗方法与处方，USP 20010051183能够延长体内循 环时间的脂质体)。Celsion公司制备了抗癌药物热敏型脂质体，将热疗与化疗 结合起来(USP 2007077230，加热肿瘤组织并给予脂质体以治疗食管癌等癌症)。 但对射线敏感的抗癌药物脂质体制剂尚未见专利和文献报道。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种对射线敏感的抗癌药物脂 质体制剂。本制剂能使具有放疗增敏效果的肿瘤化疗药物和放疗增敏剂富集在肿 瘤部位并在射线照射下从脂质体中释放发挥疗效，提高具有放疗增敏效果的肿瘤 化疗药物和放疗增敏剂在病灶部位的有效浓度以及进入被感染细胞的效率，从而 提高药效，降低用药剂量，减小毒性。
本发明通过以下技术方案实现
采用脂质包裹含有抗癌药物的活性成分，制成脂质体制剂，所述脂质体制剂 在射线的作用下释放药物。
本发明所说的抗癌药物具有放疗增敏作用，包括顺铂、5-氟尿嘧啶、环磷酰 胺、吉西他滨等。
应当说明的是，许多药物都适合用于本发明，除以上药物外，放疗领域内的 技术人员己知的任何放疗增敏剂都可以考虑。
本发明所说的射线能够对肿瘤细胞产生杀伤作用,包括X射线、y射线、(3 射线以及重粒子等。
本发明所说的脂质体，其结构为脂质双分子层构成的囊泡结构，包括单层脂 质体、多层脂质体和多室脂质体，其粒径在20nm到200nm之间。
本发明所说的脂质为各种天然或人工合成的阳离子磷脂、阴离子磷脂、中性 磷脂、以上磷脂的聚乙二醇修饰产物或胆固醇和上述脂质的混合物，该混合物中 包含选自磷脂酰甘油(PG)和磷脂酰胆碱(PC)或其中的一种。
本发明所说的磷脂，具有两亲性，形成双分子层囊泡结构装载药物，或直接 形成脂质颗粒装载药物。
本发明所说的脂质所包含的磷脂酰甘油(PG)和磷脂酰胆碱(PC)在脂质中 的摩尔百分比之和为5 100%。本发明可以通过薄膜分散法、冻干法、乙醇注入法或高压乳匀法等方法实现， 也可通过逆相蒸发法实现，后者有更高的包封率，可达40%以上。
采用激光粒度散射仪(英国MALVEN公司)检测实施例1得到的脂质复合物 (脂质体制剂)，其粒径在200纳米以下，且分布集中，呈单峰分布。采用原子 力显微镜(AFM)观察的图片也证实其平均粒径在20纳米到200纳米之间。
通过本发明制剂的体外药物释放实验证实，本发明制得的射线敏感的脂质体 贮存时能够稳定包裹药物，在射线作用下，较普通脂质体能够更加迅速的释放药 物。
本发明的有益效果表现在以下方面
本射线敏感的抗癌药物脂质体制剂能够显著延长药物在动物体内的循环时 间，使药物能够长时间维持对肿瘤的抑制。将所述该类药物中的顺铂制成脂质体， 以C57小鼠作为受试动物，进行药物动力学实验。相对于游离的顺铂(CDDP)溶 液，顺铂脂质体(LDDP)注射后游离顺铂达峰浓度13. 79u g/ml，为前者的4倍多， 而半衰期为19.47小时，为前者的15倍(图l)。这些药物动力学特征的改变， 一方面能够延长药物在体内的维持时间，改善抗肿瘤效果，另一方面能够减少注 射次数，大大方便了患者，改善了顺应性。
本发明的脂质复合物能够有效地延长荷瘤动物的生存时间，以C57BL/6N近 交系Lewis肺癌荷瘤小鼠进行动物实验，包裹顺铂的药物与普通剂型的顺铂比 较，顺铂脂质体可延长局部肿瘤的生长时间及荷瘤鼠生存时间，P值均<0. 01，(表 1)。另外，与放疗结合，顺铂脂质体对荷瘤鼠生存时间的影响有协同作用，P= 0.000。所述的顺铂脂质体显示了药物的长效性，用药后1小时(h)、 24h和72h 与放疗联合，较普通剂型的顺铂比较，均可延长局部肿瘤动物的生存时间，P均 〈0.05 (表2)。对小鼠皮毛观察，顺铂脂质体组的皮毛与无用药组相同，而普通 剂型的顺铂的皮毛表现为无光泽。
图1是包裹顺铂的脂质体的药物动力学实验， 其中，CDDP:普通的顺铂，LDDP:顺铂脂质体。
具体实施方式
实施例l将含144.4rag氢化豆磷脂(HSPC)、 68. lmg胆固醇(cholesterol), 54. 8mg 聚乙二醇2000-二硬酯酰磷酯酰乙醇胺(DSPE-PEG2000) ， 14. 7mg 二棕榈酰磷脂 酰胆碱(DPPC)，溶于12ml有机溶剂中，另外配制3ml 8mg/ml的顺铂氯化钠溶 液，混合后高速乳匀，在旋转蒸发仪上减压除去有机溶剂，使其成为均匀混悬液， 超声1小时，形成半透明的脂质体的混悬液。
本实施例中PC与PG在磷脂中的摩尔百分比之和为51%。 以本实施例制得的制剂作为实验组，同样剂量的顺铂溶液作为对照组，与 对照组相比，在C060r射线6Gy方案下，荷瘤小鼠的生存时间由23天延长至37 (用 药后lh放疗资料)天。
结果显示，本发明脂质复合物能够有效地延长荷瘤动物的生存时间，以 C57BL/6N近交系Lewis肺癌荷瘤小鼠进行动物实验，包裹顺铂的药物与普通剂 型的顺铂比较，顺铂脂质体可延长局部肿瘤的生长时间及荷瘤鼠生存时间，P分 别为0.000， 0.000。另外，与放疗结合，顺铂脂质体对荷瘤鼠生存时间的影响 有协同作用，P=0.000。所述的顺铂脂质体显示了药物的长效性，用药后24h、 72h与放疗联合，较普通剂型的顺铂比较，均可延长局部肿瘤动物的生长时间， P分别为0.009、 0.008,对小鼠皮毛观察，顺铂脂质体组的皮毛与无用药组相同， 而普通剂型的顺铂的皮毛表现为无光泽。
表l是Lewis肺癌荷瘤小鼠用药后局部肿瘤生长时间和小鼠生存时间的比较。
表2是LDDP与CDDP联合6Gy放疗对Lewis肺癌荷瘤小鼠的生存影响比较。
表1
中位生存 P, (Vs对P2(Vs T5V*P， (Vs对P2(Vs 组别 时间(天)照组CDDP) (天) 照组 CDDP) 对照组29 6.16
CDDP 25 >0.05 10.00 0.008
LDDP41.5 <0.01 O.0118.95 0.000 0.000
T5V:局部肿瘤生长为实验前5倍所需要的时间表2
中位生存时间 皮毛失去光泽
组别 -
LDDP CDDP P LDDP CDDP
用药后lh照射 37 23 〈0.05 ±* +
用药后24h照射 60 29 〈0.05 — +
用药后72h照射 53 24 〈0.05 — +
* +:皮毛失去光泽；-皮毛正常
实施例2
将含57mg 二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)的有机溶剂溶液加到茄形瓶中，30 'C水浴，旋转蒸发除去有机溶剂使其成膜后，保持真空1小时以除尽溶剂，向茄 形瓶中加入10mg/ml 5-Fu的HEPES溶液lml，强烈振荡，室温放置2h ,超声振 荡，形成半透明均匀的脂质体的混悬液。
本实施例中PC与PG在磷脂中的摩尔百分比之和为100%。 以本实施例制得的制剂作为实验组，同样剂量的5-Fu溶液作为对照组，与 对照组相比，在同样的放射治疗方案下，荷瘤小鼠的生存时间得到延长10-15 天。
实施例3
将含12.6mg 二油酰磷脂酰甘油(DOPG)、 12.8mg 二棕榈酰磷脂酰胆碱 (DPPC)、 4.7mg聚乙二醇2000-二硬酯酰磷酯酰乙醇胺(DSPE-PEG2000)的有机 溶剂溶液加到茄形瓶中，水浴，旋转蒸发使其成膜后，向茄形瓶中加入40mg/ml 环磷酰胺溶液lml，振摇，室温放置2h，过高压乳匀机10次，形成半透明的脂 质体的混悬液。
本实施例中PC与PG在磷脂中的摩尔百分比之和为95%。 以本实施例制得的制剂作为实验组，同样剂量的环磷酰胺溶液作为对照组， 与对照组相比，在同样的放射治疗方案下，荷瘤小鼠的生存时间延长7-10天。实施例4
将83. 7mg 二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、 4. 5mg 二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG) 溶于叔丁醇中，将4mg吉西他滨配成水溶液，两者混合成为透明均匀溶液，冻干, 以生理盐水水合，过高压乳匀机10次，形成半透明的脂质体的混悬液。 本实施例中PC与PG在磷脂中的摩尔百分比之和为100%。 以本实施例制得的制剂作为实验组，同样剂量的吉西他滨溶液作为对照组， 与对照组相比，在同样的放射治疗方案下，荷瘤小鼠的生存时间获得了延长至 IO天左右。
权利要求
1、一种对射线敏感的抗癌药物脂质体制剂，其特征在于，以脂质包裹含有抗癌药物的活性成分制成脂质体制剂，所述脂质体制剂在射线的作用下释放药物。
2、 根据权利要求1所述的对射线敏感的抗癌药物脂质体制剂，其特征是，所述的抗癌药物具有放疗增敏作用，选自顺铂、5-氟尿嘧啶、环磷酰胺或吉西他滨。
3、 根据权利要求1所述的对射线敏感的抗癌药物脂质体制剂，其特征是，所述的射线具有对肿瘤细胞杀伤的作用,选自X射线、y射线、(3射线或重粒子。
4、 根据权利要求1所述的对射线敏感的抗癌药物脂质体制剂，其特征是，所述的脂质体为脂质双分子层构成的囊泡结构，包括单层脂质体、多层脂质体和/或多室脂质体。
5、 根据权利要求1或4所述的对射线敏感的抗癌药物脂质体制剂，其特征是，所述的脂质体，其粒径在20nm到200nm之间。
6、 根据权利要求1所述的对射线敏感的抗癌药物脂质体制剂，其特征是，所述的脂质选自天然或人工合成的阳离子磷脂、阴离子磷脂、中性磷脂或以上磷脂的聚乙二醇修饰产物、胆固醇或其混合物，所述的混合物其中包含选自磷脂酰甘油和磷脂酰胆碱的一种或两种。
7、 根据权利要求6的所述的对射线敏感的抗癌药物脂质体制剂，其特征是，所述的磷脂具有两亲性，其形成双分子层囊泡结构装载药物，或直接形成脂质颗粒装载药物。
8、 根据权利要求6所述的对射线敏感的抗癌药物脂质体制剂，其特征是，所述的脂质，包含磷脂酰甘油和磷脂酰胆碱中的一种或两种，两者在脂质中的摩尔百分比之和为5 100%。
全文摘要
本发明属药物制剂领域，涉及一种对射线敏感的抗癌药物脂质体制剂。本发明以脂质包裹含有抗癌药物的活性成分制成脂质体制剂，在射线的作用下释放药物。本制剂能使具有放疗增敏效果的肿瘤化疗药物和放疗增敏剂富集在肿瘤部位并在射线照射下从脂质体中释放发挥疗效，提高具有放疗增敏效果的肿瘤化疗药物和放疗增敏剂在病灶部位的有效浓度和在体内的停留时间以及进入被感染细胞的效率，从而提高了药物的抗肿瘤作用，降低用药剂量和药物毒性，延长肿瘤患者生存期。本发明制剂可用于治疗各种肿瘤。
文档编号A61K9/127GK101455641SQ20071017209
公开日2009年6月17日 申请日期2007年12月11日 优先权日2007年12月11日
发明者徐宇虹, 杨焕军, 葛勇前, 蒋国梁, 剑 陈 申请人:复旦大学附属肿瘤医院