专利名称：：Trk受体调节剂的使用方法TRK受体调节剂的使用方法相关申请本申请要求对于2006年12月5日提交的美国申请第60/873,042号的优先权。本文引入上述申请的完整记载作为参考。政府支持本发明部分地受到美国国立卫生研究院(NationalInstituteofHealth)的基金CA82642、NS38569和CA74289的支持，部分地受到加拿大卫生研究所(CanadianInstitutesofHealthResearch)的基金MTD265、MOP57690和CI-CFA-41478的支持。政府拥有本发明的一定权利。
背景技术：
：由青光眼导致的视力损伤影响着世界范围的数以百万计的人们，每年在美国诊断出数十万的青光眼新病例。在该疾病的最常见形式一开角型青光眼中，进行性视神经纤维损失伴随眼压(IOP)升高导致视野损失。由于房水累积导致的高IOP是青光眼的主要的致病因素，并认为其诱导慢性和进行性视网膜神经节细胞(RGC)死亡。据估计，在持续暴露于高眼压的过程中，RGC由于细胞凋亡以大约每周4%的恒定速度死亡，导致神经损伤。尽管治疗在使高IPO正常化方面经常是成功的，但进行性RGC死亡和视野损失一般仍继续。已经表明缺乏被称为神经营养蛋白(NTF)的生长因子家族的营养支持是青光眼中的RGC死亡的一个因素。NTF调节神经元发育、生长、存活、分化、神经元细胞表型和功能的维持。NTF包括神经生长因子(NGF)、脑衍生的神经营养因子(BDNF)、神经营养蛋26白-3(NT-3)和神经营养蛋白-4(NT-4),且这些NTF可结合两种跨膜受体高亲和力受体家族酪氨酸激酶(Trk)(TrkA、TrkB和TrkC)(Kd=10-100pM)和p75受体(Kd=1nM)。尽管Trk家族受体配体具有相当的选择性(例如，NGF结合TrkA,BDNF结合TrkB,NT-3主要结合TrkC)，但p75受体被所有NTF非选择性地结合，使其活化非常杂乱。据信，这两种受体具有相反的作用，Trk家族受体介导与细胞存活和分化、保持和修复的"阳性"信号相关的信号转导。而认为p75受体除了在包括视网膜神经元的某些细胞类型中的自身促细胞凋亡(pro-apoptotic)活性以外，还调节配体对于Trk受体的亲和力，因而调节配体依赖的Trk活化和伴随的酪氨酸激酶活性。另外，据信参与青光眼中的RGC细胞凋亡的受体配体作为治疗剂的应用似乎受到限制。与结合Trk和p75受体的配体相关的复杂的且通常相反的功能，以及多重、多效性途径的活化，使得体内NTF药理学难于预测。实际上，使用重组NTF多肽治疗青光眼的临床试验一般是令人失望的。另外，用于医学治疗的重组蛋白(例如，NGF和其它受体配体)通常难于制备并且生产费用高。需要的是终止RGC细胞凋亡，进而终止持续视(野)损失导致的疾病进展的青光眼治疗。不同于单独使用眼压正常化药物的治疗，这种治疗针对RGC死亡的分子机制，并且具有足够有效的特异性。发明概述本发明涉及使用调节神经营养蛋白受体活性的化合物和/或肽，治疗或预防视网膜神经节细胞(RGC)死亡、尤其是与青光眼相关的RGC死亡的方法。具体地，在一个实施方案中，本发明涉及通过施用有效量的包含选择性TrkA受体激动剂和合适的药物载体的组合物和至少一种眼压正常化药物，治疗或预防受试者的RGC死亡或青光眼的方法。在一个实施方案中，TrkA受体激动剂包括具有13-17个碳原子的大环的|3-转角((3-turn)拟肽(peptidomimetic)环状化合物。在另外一个实施方案中，该P-转角拟肽环状化合物具有式(I):其中，1^和113选自氢、在天然或非天然氨基酸中发现的C广C6烷基或芳基取代基；F"和R"是氢或CrQ烷基；115和116是氢；R1和R2或113和R"与它们所连接的碳原子一起形成环丙基、环丁基、环戊基或环己基；Y是氢或1个或2个芳香取代基；X选自O、N、S、P、Se、C、l-6个碳原子的亚烷基、SO、SC)2或NH;n是0、1、2、3、4或5;且连接体是通过与同型双官能化合物反应有效形成式(I)化合物的二聚体的连接基团。合适的连接体基团包括，但不限于NH2、OH、SH、COOH、CH3CO和CHO。另一种合适的连接体基团是NH-CH2-COOH。在本发明的另一个实施方案中，X是O、S或NH,R1、R3、R5和W各为氢原子，且大环具有14、15或16个环原子。在另一个实施方案中，R1和R3源自选自天然和合成氨基酸的不同氨基酸侧链。在本发明的另一个实施方案中，X是—0—、—S—或—NH—。在一个特别的实施方案中，所述P-转角拟肽环状化合物具有下式眼压正常化药物可以是选自拟副交感神经药、胆石咸能药、拟交感神经药、抗交感神经药、碳酸酐酶抑制剂、前列腺素类似物、类二十二烷酸(docosanoid)和渗透剂的药物。在另外一个实施方案中，本方法进一步包括施用有效量的含有p75受体拮抗剂的组合物；或者，在另一个实施方案中，本方法进一步包括施用有效量的调节一种或多种眼压调节早期基因(IPREG)的表达或活性的组合物。本发明也涉及通过向受试者施用有效量的包含选择性TrkA受体激动剂(包括具有13-17个碳原子的大环的P-转角拟肽环状化合物)和合适的药物载体的组合物，治疗或预防受试者的RGC死亡或青光眼的方法。在一个特别的实施方案中，这种(3-转角拟肽环状化合物具有下式R6连接体Y其中，W和I^选自氢、在天然或非天然氨基酸中发现的C广C6烷基或芳基取代基；112和R"是氢或CrC6烷基；115和116是氢；R1和R2或RS和R"与它们所连接的碳原子一起形成环丙基、环丁基、环戊基或环己基；Y是氢或1个或2个芳香取代基；X选自O、N、S、P、Se、C、l-6个碳原子的亚烷基、SO、SC)2或NH;n是0、1、2、3、4或5;且连接体是通过与同型双官能化合物反应有效形成式U)化合物的二聚体的连接基团。合适的连接体基团包括，但不限于NH2、OH、SH、COOH、CH3CO和CHO。另一种合适的连接体基团是NH-CH2-COOH。最优选地，该化合物是具有下式的D3:H02C在一个实施方案中，本方法进一步包括施用眼压正常化药物。在另一个实施方案中，本方法进一步包括施用有效量的包含p75受体拮抗剂的组合物或调节一种或多种IPREG的表达或活性的组合物。本发明也提供了一种用于治疗受试者的RGC死亡或青光眼的方法，该方法包括向受试者施用有效量的包含TrkC受体激动剂和合适的药物载体的组合物。在一个实施方案中，也与TrkC受体激动剂一起施用眼压正常化药物。在另外一个实施方案中，TrkC受体激动剂也是选自下组的(3-转角环状化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage31</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage32</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage33</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage34</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage35</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage36</formula>3AcH2I本发明也涉及通过向受试者施用有效量的包含作为TrkA受体激动剂、TrkC受体激动剂、p75受体拮抗剂的至少一种分子或作为上述组合的化合物(例如，两种或多种神经营养蛋白受体的激动剂或拮抗剂(例如，一种TrkA和TrkC的激动剂))和合适的药物载体的神经营养蛋白受体调节组合物，治疗或预防受试者的RGC死亡和/或青光眼的方法。在特别的实施方案中，TrkA受体激动剂、TrkC受体激动剂和p75受体拮抗剂是上述的(3-转角环状化合物。在其它实施方案中，本方法进一步包括施用至少一种眼压正常化药物和/或IPREG调节组合物与神经营养蛋白受体调节组合物。本发明的方法克服了现有的青光眼治疗的缺点，因为本发明所述药物是特异性、选择性地针对Trk受体和/或p75受体，因此更加有效。另外，用于治疗RGC死亡和/或青光眼的化合物和/或分子是相对稳定的，且易于施用。附图简述图1A显示编号为1、2和3的TrkC受体激动剂的f3-转角骨架代码。图1B显示用字母A、B、C和D表示的TrkC受体激动剂的骨架的X取代基代码。图1C显示TrkC受体激动剂的骨架的二肽R1和R2取代基代码。图1D显示了包括骨架(1、2或3)、X取代基(A、B、C或D)和二肽氨基酸(R/和R2)的TrkC受体激动剂化合物的全字母代码。图2是显示倍他洛尔(betaxolol)降低高眼压(IOP)的效果的图。图3显示了用来测试各种药物处理对于RGC死亡的有效性的实验程序。图4是在诱导高IOP之后，用倍他洛尔和/或TrkA激动剂D3处理的视网膜RGC的一系列显微照片。发明详述本发明的方法涉及神经营养蛋白受体(例如，TrkA、TrkC、p75)的调节剂(例如，激动剂、拮抗剂)用来治疗和/或预防视网膜神经节细胞(RGC)死亡和/或青光眼的的应用。正是这种RGC死亡造成了青光眼的进展和相关的视觉损失。Trk受体(如，TrkA、TrkC)激动剂可以发挥为RGC提供必需的营养支持并防止其死亡的作用。另外，p75受体的拮抗作用(经过例如p75受体本身或TrkC的拮抗作用)抑制青光眼中推测的p75受体介导的RGC死亡。在请求保护的方法中使用的神经营养蛋白受体调节剂可以是选择性诱导特定神经营养蛋白受体的一种或多种活性(例如，激动剂)或抑制其一种或多种活性的任何分子和/或药物。这些受体活性包括，例如，配体(例如，NGF、NT-3或BDNF)介导的受体应答、受体酪氨酸磷酸化、受体信号传导和/或神经营养蛋白受体的相互作用/下游信号分子的活化/磷酸化的增强、细胞生长和存活(营养活性)或分化(神经突发生活性)的促进。本方法中使用的化合物/分子(例如，化合物、肽)优选地是有效治疗人/哺乳动物(例如，能够越过血脑屏障到达CNS靶标并易于递送)、具有最小的副作用(例如，非免疫原性的、非多效性的、可接受的药物代谢动力学)、并具有合理的稳定性和/或半衰期的化合物/分子。因此，神经营养蛋白受体调节剂可以是抗体、肽、蛋白质、基因、分子、化合物、抗体模拟物、模拟肽和/或拟肽。在一个特别的实施方案中，神经营养蛋白受体调节剂是模拟肽或拟肽化合物，特别是特意模拟神经营养蛋白受体配体(例如，NGF或NT-3)的P-转角区域的环状化合物。有利的是，这些环状(3-转角分子是小且稳定的(例如，耐受蛋白水解)，因而它们易于递送且能够容易地接近所针对的神经营养蛋白受体。例如，已经发现，其信号传导促进细胞存活的TrkA受体的选择性活化，有效地阻止RGC细胞凋亡，尤其与使用眼压正常化药物协同。TrkA受体激动剂可以保护RGC免于由包括视神经损伤和青光眼在内的各种视觉损伤引起的细胞凋亡。因此，本发明涉及通过向受试者施用有效量的包含TrkA受体激动剂和合适的药物载体的组合物以及(另外)至少一种眼压正常化药物，治疗或预防受试者的RGC死亡或青光眼的方法。如本文所使用的，向其施用用于这些方法中的组合物的"受试者"是任何已经患有RGC死亡和/或青光眼或具有患RGC死亡和/或青光眼的可能性的动物。受试者优选地是哺乳动物，最优选地是人类。在一个实施方案中，TrkA受体激动剂是抑制NGF与受体结合的抗体(例如，单克隆抗体(mAb)5C3(参见，LaSauteurL.等人，/A^"msc/e"ce16:1308-1316,1996))。在一个特别的实施方案中，环状化合物是具有大约13-17个原子的大环的P-转角拟肽环状化合物。在进一步的实施方案中，大环主要由碳和氮骨架形成，并具有一个或多个从这个骨架伸出的氨基酸侧链。这些侧链给予f3-转角拟肽环状化合物模拟NGF的能力，因为它们对应于天然存在于NGF的(3-转角中的残基。有许多作为TrkA受体的激动剂(例如，D3、D53b-d、D21、P23和P58)有效作用的卩-转角拟肽环状化合物，且这些激动剂在美国专利第6,881,719号中详细描述，本文引入该专利作为参考。在本发明的一个特别的实施方案中，化合物是式(I)的P-转角拟肽环状化合物其中，Ri和R"选自氬、在天然或非天然氨基酸中发现的CrQ烷基或芳基取代基；F"和R"是氢或烷基；115和116是氢；W和I^或R3和R"与它们所连接的碳原子一起形成环丙基、环丁基、环戊基或环己基；Y是氢或1个或2个芳香取代基；X选自O、N、S、P、Se、C、l-6个碳原子的亚烷基、SO、S02或NH;n是0、1、2、3、4或5;且连接体是通过与同型双官能化合物反应有效形成式(I)化合物的二聚体的连接基团。合适的连接体基团包括，但不限于NH2、OH、SH、COOH、CH3CO和CHO。另一种合适的连接体基团是NH-CH2-COOH。R640其被称为"D3"(参见，Maliartchouk等人，Mo/P/mrmco/57(2):385-3912000和US6,881,719),或D3的衍生物。许多D3的衍生物预期可用于本发明的方法中，并且包括如生物素化的形式等简单修饰和其中两个这样的单元通过二聚体连接的分子。D3的其它衍生物包括具有在天然和非天然氨基酸中发现的任何烷基或芳基取代基的侧链R!-R6。蛋白质氨基酸(例如，Arg、Trp、His)的典型的侧链允许形成/设计易于产生D3衍生物的多种多样的结构，并且它们可包括许多类型的官能团。组成氨基酸可以是N-烷基、N-芳基、a，a-二烷基和例如可以由环丙烷氨基酸形成的环状衍生物。取代基Y可以是氢或一个或两个芳香族取代基，例如，竭基、氨基、卤素、烷基(例如1-6个碳原子的烷基、优选l-4个碳原子的烷基)，和芳香基，例如苯基或萘基。烷基和芳基取代基Y可以是在另一个实施方案中，X是O、S或NH,R1、R3、R5和R6各为氢原子，且大环具有14、15或16个环原子。在本发明的另一个实施方案中，R1和R3源自选自天然和合成氨基酸的不同氨基酸侧链。在本发明的另外一个实施方案中，X是O、S或NH。在一个优选的实施方案中，TrkA受体激动剂是下式的(3-转角拟肽环状化合物取代或未取代的，合适的取代基是硝基和l-6个碳原子的烷基。Y也可以用例如生物素的官能团衍生化。基团X可以是任何亲核原子，如O、N、S、P、Se,也可以是其它原子，如C,或者可以是典型地具有1-6个碳原子的亚烷基，如亚甲基；或NH。连接点可以是相对于苯曱酰羰基的邻位或间位。"n"的允许值是0、1、2、3、4和5。加入X的连接侧链可以是如结构(I)所示的脂肪族、芳香族或杂芳香族。侧链烷基R1、R2、R3、R4、115和W可以以多种方式变化，以提高这些物质的生物学活性。典型地，R1、R2、R"和R"是在20种蛋白质-氨基酸中发现的氨基酸侧链取代基，或者非常类似于它们的侧链，例如，任一种光学异构构型的谷氨酸、赖氨酸、鸟氨酸和苏氨酸的侧链。如果Ri取代基是氨基酸侧链，则该碳上的另一个取代基R"典型地是氢，但也可以是曱基、乙基或苄基。或者，R^和R"可以作为残基连接在环丙烷、环丁烷、环戊烷和环己烷中。113和114以与上述的w和le的连接方式相同的方式相关联。即，其中的一个是氨基酸侧链或非常类似的基团。在大多数情况下，这两个取代基中的另一个是氢，但也可以是甲基、乙基、丙基、苄基或如上所述的某些简单的烷基系统。Rs和W有很大的变化范围，这些位置上最常见的取代基是氢。也可以将那些取代基设计为对应于20种蛋白质-氨基酸的侧链之一，尤其是甲基。化合物(I)更具体地是由20种蛋白质-氨基酸或其简单的类似物制备的化合物，包括其对映异构体、N-烷基、N-芳基、a,a-二烷基和环状氨基酸。发现尤其有助于生物活性的侧链是R1和R3为赖氨酸、谷氨酸、酪氨酸、异亮氨酸、天冬酰胺和苏氨酸的侧链，R2、R4、115和116为氬。尤其选择一个或多个侧链对应于NGF的转角区域中的侧链。一般地，大环化合物具有13-16元环，其中，X取代基是O、N、s、SO或so2。本发明也涉及用上述的TrkA激动剂化合物治疗或预防RGC死亡或青光眼的方法。因此，本方法包括通过向受试者施用有效量的TrkA受体激动剂(包括具有13-17个碳原子的大环的(3-转角拟肽环状化合物)和合适的药物载体，治疗RGC死亡或青光眼。如上所述，大环可以具有一个或多个从骨架环原子上伸出的侧链，在一个实施方案中，其对应于NGF的(3-转角。在一个特别的实施方案中，(3-转角拟肽环状化合物具有下式其中，W和RS选自氢、在天然或非天然氨基酸中发现的C广Q烷基或芳基取代基；112和114是氢或烷基；115和116是氢；W和ie或R3和R"与它们所连接的碳原子一起形成环丙基、环丁基、环戊基或环己基；Y是氢或1个或2个芳香取代基；X选自O、N、S、P、Se、C、l-6个碳原子的亚烷基、SO、S02或NH;n是0、1、2、3、4或5;且连接体是通过与同型双官能化合物反应有效形成式(I)化合物的二聚体的连接基团。合适的连接体基团包括，但不限于NH2、OH、SH、COOH、CH3CO和CHO。另一种合适的连接体基团是NH-CH2-COOH。更进一步地，X可以是O、S或NH,R1、R3、R5和R"各为氩原子，且大环具有14、15或16个环原子，1^和113可以源自选自天然和合成氨基酸的不同氨基酸侧链，更特别地，X是O、S或NH。在一个优选的实施方案中，用于本方法的TrkA受体激动剂是具有下式的化合物D3及其衍生物:HOCTrkC是另外一个与青光眼和RGC死亡相关的Trk受体家族成员。在高眼压的视网膜神经节细胞(Miiller细胞)中，TrkC表达、尤其是TrkC的截短同种型(truncatedisoform)的表达有早期和持续的增加(参见，Rudinski等人，,A^/ro^o/58:341-354，2004)。这些Miiller细胞的足突(endfeetprocesses)感觉到玻璃体(vitreal)环境，并以旁分泌的方式作用以支持RGC。通过选择性剪接产生的TrkC的截短同种型缺乏TrkC激酶结构域，因而缺乏全长TrkC受体的激酶活性和伴随的催化活性(参见，例如，TsoulfasP等人，A^wrow10:975-990,1993和ValenzuelaDM等人，iVewra"10:963-974，1993)。据信，非催化性的、截短的TrkC受体螯合神经营养蛋白，并且进一步抑制活性催化TrkC受体的信号传导(参见，例如，PalkoME等人,JiVew簡"'e證19:775-782,1999)。因此，TrkC激动剂和拮抗剂可以在治疗或预防青光眼和RGC死亡的方法中使用。TrkC激动剂可以用来活化全长TrkC受体，并诱导可以保护RGC免于由眼压过高诱导的细胞凋亡的存活和/或保护因子。相反地，Miiller细胞中的缺乏激酶结构域的截短的TrkC的上调可能是促使RGC死亡的因素。这些仍然能够结合NT-3的无催化活性的TrkC受体，可以降低NT-3对于RGC的可用性，这对于由于缺乏的生长因子的逆向转运而已经耗竭营养支持的RGC是有害的。因此，TrkC拮抗剂可以用于本方法中以抑制神经营养蛋白(例如，NT-3)与截短型TrkC受体的结合，增加神经营养蛋白对于RGC的可用性。另外，TrkC也可以调节p75的功能(HapnerSJ等人，"evA'o/201:90-100，1998)，并且在眼压过高的条件下，全长TrkC可以提高和/或活化p75受体介导的RGC细胞凋亡。TrkC拮抗剂可以用来抑制这种TrkC介导的p75受体的细胞凋亡活化。因此，本发明也涉及通过向受试者施用有效量的包含TrkC受体激动剂或TrkC受体拮抗剂和合适的药物载体的组合物，治疗或预防受试者的RGC死亡和/或青光眼的方法。在一个特别的实施方案中，TrkC受体激动剂能够刺激全长TrkC的一种或多种活性，和/或提高神经营养蛋白与全长TrkC的相互作用，而TrkC受体拮抗剂能够抑制全长和/或截短的TrkC的一种或多种活性，或防止神经营养蛋白与全长TrkC和/或截短的TrkC的相互作用。在本方法中使用的TrkC受体激动剂或拮抗剂可以是上述的基因、蛋白质、多肽、抗体、拟肽等。在一个实施方案中，TrkC受体激动剂是抗体(例如，mAb2B7(参见，PattarawarapanM等人，C&m45:4387-4390,2002))。在另一个实施方案中，TrkC受体激动剂是P-转角环状化合物。在另外一个实施方案中，TrkC受体激动剂是包含环状氨基、醚或硫醚支架(参见图1A)、具有各种取代基(例如，氨基、胍或MeS02NH)(参见图1B)和包含二肽氨基酸片段的W和R^基团(参见图1C)的化合物(也参见图1D)。根据本方法的一个特别的方面，TrkC受体激动剂是选自下组的P-转角环状化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage46</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage47</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage48</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage49</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage50</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage51</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage52</formula>3Ac根据本发明的方法，有效量的包含TrkA受体激动剂和/或TrkC受体激动剂或TrkC受体拮抗剂的组合物通过合适的途径向受试者施用，而且可以单独施用或与另一种药物(例如，眼压正常化药物)或其它合适的分子/化合物联合施用。组合物的有效量是在给药条件下足以实现希望的治疗或预防效果的量。例如，施用的组合物的量是使得RGC细胞凋亡减轻和/或停止，因而青光眼进展减轻和/或停止的量。对于人类受试者的治疗，这种量可以是，例如，大约0.1-100mg/kg患者体重的(3-转角环状化合物(例如，神经营养蛋白受体调节化合物)。以这种浓度施用化合物一般需要组合物中存在大约100-200毫克的P-转角环状化合物。组合物可以浓缩并稀释使用，适于稀释的组合物典型地含有大约90%重量或更多的化合物。这些包含Trk受体调节剂(例如，拟肽、基因、抗体)的组合物进一步包含合适的药物载体，剂型根据选择的给药途径而不同，这种给药途径受以下因素影响或根据以下因素来选择化合物的溶解性、稳定性和半衰期。合适的药物载体也可以包含不与组合物中的调节性物质/活性物质相互作用的惰性成分。可以采用标准的药物酉己制才支术，如Remington'sPharmaceuticalSciences、MackPublishingCompany,Easton,PA中所述的技术。用于肠胃外给药的合适的药物载体包括，例如，无菌水、生理盐水、抑菌盐水(含有大约0.9%mg/ml苯曱醇的盐水)、磷酸盐緩沖液、Hank's溶液、乳酸盐林格溶液(Ringer'slactate)、右旋糖、乙醇、如甘油的表面活性剂或赋形剂。优选地以任何有效或方便的方式施用在适当的药物载体中的组合物，包括眼内注射、局部结膜施用、局部角膜施用或通过使用机械递送装置。可以以单一剂量或多剂量施用该组合物，以确保患者在治疗方案期间维持治疗显著的组合物水平。剂量可以由熟练的医师使用本领域内已知的方法确定，且取决于为组合物选择的具体化合物、受试者的年龄、体重、环境、遗传因素、对药物的敏感性和耐受性和总体健康情况。在治疗或预防中，活性剂可以作为可注射的组合物向受试者施用，例如，作为无菌水分散液，优选等渗的，或"包装"为脂质体或微球体。因此，当需要可注射的组合物时，Trk受体调节剂可以通过将其在水性或非水性溶剂(如植物油、合成脂肪酸甘油酯、高级脂肪酸的酯或丙二醇)中溶解、悬浮或乳化而制成(例如)注射制剂；如果需要，采用如增溶剂、等渗剂、悬浮剂、乳化剂、稳定剂和防腐剂的常规添加剂。活性成分也可以为粉末形式，在施用前用合适的载体重配。如在一个实施方案中，如果组合物用于局部眼睛使用，制剂可以适合那种给药类型(例如，无菌、无刺激性/无毒性)。组合物也可以制成用于局部施用，例如，为软膏、乳膏、洗剂、眼膏的形式，且最优选地为滴眼剂或眼凝胶剂的形式，且可以包含合适的常规添加剂，包括如防腐剂、有助于药物渗透的溶剂和软膏和乳膏中的软化剂。这样的局部制剂也可以包含相容的常规载体，例如，乳膏基质或软膏基质，和用于洗剂的乙醇或油醇。或者，如果可以使用一种适当的递送方法，如果需要，可以使用包括乳糖、微晶纤维素、玉米淀粉、硬脂酸等的药学上可接受的片剂赋形剂将包含TrkA受体激动剂的组合物制成用于口服给药的剂型。口服给药也可以包括在水、二元醇、油、醇等中制成的液体组合物。本文公开的发现表明，将选择性Trk受体调节剂(例如，TrkA激动剂、TrkC激动剂)与降低眼压的药物组合，在防止RGC损失方面是非常有效的。因此，本发明的方法也包括施用许多眼压正常化药物中的至少一种。眼压正常化药物包括拟副交感神经药/胆碱能药物(例如，毛果芸香石咸(pilocarpine)、醋克利定(aceclidine)、卡巴胆碱(carbachol))、拟交感神经药物(例如，肾上腺素、地匹福林(dipivefrin)、a-选择性肾上腺素能激动剂)、抗交感神经药(例如，(3-阻断剂(例如，噻吗咯尔(timolol)、倍他洛尔、左布诺洛尔(levobunolol)、卡替洛尔(carteolol)、美替洛尔(metipranolol)))、碳酸酐酶抑制剂(例如，乙酰唑胺(acetazolamide)、醋甲唑胺(methazolamide)、双氯非那胺(dichlorfenamide)、多佐胺(dorzolamide)、布片木佐胺(brinzolamide))、前歹'JA泉素类会乂对勿(<列^口，4立i旦前歹iJ素(latanoprost)、曲1"犬前歹U素(travoprost)、t匕马前歹'J素(bimatoprost))、类二十二步克酸(，H口，乌i若前歹寸酉同(unoprostone))和渗透剂。在本发明的方法中，可以施用至少一种眼压正常化药物(单一治疗)，而且，如果需要/必需的话，可以给予超过一种药物。在使用超过一种眼压正常化药物的情况中，一般施用各种类型的药物的组合(例如，p塞吗咯尔和多佐胺，或瘗吗咯尔和拉坦前列素)。眼压正常化药物的施用量随受试者(例如，人或其它动物)的大小、生物半衰期、眼压过高的严重水平和所用/需要的|3-转角拟肽环状化合物的量而变化。对确定的剂量范围的调整和控制在本领域技术人员的能力之内，且优选地该剂量使副作用和毒性最小化。例如，在一个特别的实施方案中，眼压正常化药物是可以在0.25%的眼科用悬浮液(例如，盐酸倍他洛尔)中向人类受试者施用的倍他洛尔。可以根据包括青光眼的程度和/或阶段的几个因素以一定的间隔施用眼压正常化药物和Trk受体调节组合物，且由本领域的技术人员针对特定的患者对这种给药方案进行评价。在一个实施方案中，每日(即，在24小时的周期内)一次或两次施用有效量的眼压正常化药物。取决于用于所用的化合物或分子的药物载体以及给药途径，可能希望和/或必须作为单独的药物赋形剂或作为一种结合的组合物，同时(即，并行地)施用化合物。例如，可以局部施用或眼内注射(例如，向非人类的动物)药物和化合物。或者，可以相继地施用选择的眼压正常化药物和Trk受体调节化合物，即，作为单独的组合物依次施用。每种组合物的施用之间的时间间隔随患者对于化合物的耐受性和治疗需要而不同。一般地，向患者定期(例如，每天)施用眼压正常化药物，且根据为最佳治疗响应/结果(例如，基于化合物的半衰期和患者症状的严重性程度)而设计的时间表施用神经营养蛋白受体调节化合物。熟练的医师可以调整和/或改变给药顺序或时间表，以最有效地治疗患者。本发明的治疗或预防RGC死亡和/或青光眼的方法也可以进一步包括施用有效量的p75受体拮抗剂。据信，p75受体在RGC细胞凋亡中发挥作用(参见，例如，Khursigara等人，/Ao/C/iem274:2597-2600)。尽管本文发现单独的选择性p75受体拮抗剂对于RGC细胞凋亡没有影响，但Trk受体的特异性活化与p75受体的抑制可能在防止RGC死亡和/或治疗青光眼方面是组合或协同的。用于本方法的p75受体拮抗剂可以是如前对于神经营养蛋白受体调节剂(例如，化合物、分子、蛋白质、肽或拟肽)所述的特异性抑制p75受体信号传导/活性的任意组成物，包括例如抗体(例如，mAbNGF30)(参见，Saragovi等人，/祝o/C7^m273:34933-34940，1998)。在一个特别的实施方案中，由于其效力和总体上易于施用，施用的p75受体拮抗剂也是一种或多种表1所示的(3-转角环状化合物。表1.|3-转角环状p75受体拮抗齊<table>tableseeoriginaldocumentpage56</column></row><table>这些p75受体拮抗剂模拟NGF的A-A"环。该肽中的半胱氨酸(Cys)残基的氧化导致Cys-Cys二硫键的形成，导致分子环化(参见，LeSauteur等人，/AWC7^m270(12):6564-6569,1995)。可以在上述的合适的药物载体(例如，无菌水、生理盐水、抑菌盐水、磷酸盐緩沖液、Hank's溶液、乳酸盐林格溶液、右旋糖、乙醇、表面活性剂或赋形剂)中施用p75受体拮抗剂，而且，取决于药物载体的组成，在合适的施用途径中，可以局部施用、口服施用、静脉施用、腹膜内施用、肌内施用、皮下施用、鼻内施用、经皮施用或皮内施用。优选地，向眼睛局部施用p75受体拮抗剂，最优选通过^f吏用滴眼剂、眼凝胶剂或眼膏。根据患者对于拮抗剂/激动剂的耐受性和治疗需要，可以以与其它Trk受体调节剂(例如，TrkA和TrkC)相同或类似的时间表，按照熟练的医师确定的最佳量/剂量施用p75受体拮抗剂，而且，进一步，化合物/分子可以作为单独的药物赋形剂单独(例如，连续地)施用或者可以作为一种结合的组合物联合(例如，并^f亍地或同时)施用。在涉及一种或多种Trk受体调节剂(例如，TrkA受体激动剂、TrkC受体激动剂、TrkC受体拮抗剂)和一种或多种眼压正常化药物(例如，倍他洛尔)的治疗方案期间，可以施用p75受体拮抗剂。本发明也提供了一种使用一种或多种上述的神经营养蛋白受体调节组合物，治疗或预防受试者的RGC死亡或青光眼的方法。因此，本方法包括向受试者施用有效量的包含一种或多种选自TrkA受体激动剂、TrkC受体激动剂、TrkC受体拮抗剂、p75受体拮抗剂和/或上述组合的化合物(例如，同时作为TrkA激动剂和TrkC激动剂起作用的一种化合物)的化合物/分子和合适的药物载体的组合物。包含激动剂和/或拮抗剂的组合物如前所述，在作为用于特定给药途径的可接受和有效的制剂的药物载体中。此外，如果在本方法中使用超过一种分子，组合物可以通过一种或多种途径相继施用(例如，TrkA激动剂、接着是TrkC激动剂、然后是p75拮抗剂)、同时施用(例如，在包含TrkA激动剂、TrkC激动剂和p75拮抗剂的一种组合物中)或使用两种途径的组合施用(例如，TrkA激动剂、接着是包含TrkC拮抗剂和p75拮抗剂的一种组合物)。如同上述方法，本方法可以进一步包括施用至少一种前述的眼压正常化药物。TrkA受体激动剂、TrkC受体激动剂和p75受体拮抗剂如上所述，且在一个特别的实施方案中，它们是上述的P-转角环状化合物。在本方法的一方面，用于本方法的同时作为TrkA和TrkC受体激动剂发挥作用的化合物可以包括(3-转角环状化合物3Ac、3Ae、3Ak、3Ca、1Aa、1Ad。这些化合物的结构也如下所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage58</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage59</formula>如果需要或必需，患有青光眼和/或RGC死亡的受试者也可以进一步用治疗或预防RGC细胞凋亡和青光眼的其它药物、分子或化合物来治疗。例如，已确认了几种被称为眼压调节基因(IPREG)的基因，它们由于高眼压(IOP)而具有明显和特异性改变的(增加的、减少的)表达，且被认为参与和/或与细胞信号传导和细胞死亡相关(参见，2006年11月22日提交的国际申请PCT/US2006/045169(代理人案巻号No.3966.1000-003)，于2007年5月31日作为WO2007/062101公开，本文引入作为参考)。使用大鼠高眼压模型确认了这些基因，使用基因微阵列阐明了改变的基因表达。确定为IPREG的基因(例如，那些可能参与眼睛退化的基因)满足一种或多种特定的标准(例如，高IOP的特异性和早期诱导，在诱导之后持续表达，和/或高IOP的正常化，和那些被认为在细胞死亡、存活或相关的信号传导中发挥作用的基因)。被确认的已知基因包括a2巨球蛋白、PSD-95/SAP90相关蛋白-4、Reggiel-l、RBCK、Gza、蛋白质磷酸酶lY、核糖体蛋白L23相关的产物、胶质细胞原纤维酸性蛋白(gialfibrillaryacidicprotein)、环状核苦酸门控的阳离子通道、SPARC、B-2芳基胺N-乙酰基转移酶、淀粉状蛋白前体样蛋白2、双载蛋白1、Crybb2、Ras相关的p23、解旋酶Rap30、蛋白体rPA28亚单位(3、ATP酶a-l亚单位、PA3/A1晶体蛋白、(3A4晶体蛋白、S-腺苷甲石危氨酸合酶、天冬酰胺合酶。因此，例如，发现IPREGa2巨球蛋白的表达响应于高IOP而上调，a2巨球蛋白的中和抗体导致明显减少的RGC细胞凋亡。因此，可以与本发明方法使用的神经营养受体调节剂一起施用抑制一种或多种由高IOP上调的IPREG(例如，a2巨J求蛋白、PSD-95/SAP90相关蛋白-4、Reggiel-l、RBCK、Gza、蛋白质磷酸酶lY、核糖体蛋白L23相关的产物、胶质细胞原纤维酸性蛋白、环状核苷酸门控的阳离子通道、SPARC和B-2芳基胺N-乙酰基转移酶)的活性和/或表达的组合物、和/或提高一种或多种由高IOP下调的IPREG(例如，淀粉状蛋白前体样蛋白2、双载蛋白1、Crybb2、Ras相关的p23、解旋酶Rap30、蛋白体rPA28亚单位P、ATP酶a-l亚单位、PA3/A1晶体蛋白、(3A4晶体蛋白、S-腺苷曱硫氨酸合酶和天冬酰胺合酶)的表达和/或活性的组合物。IPREG调节组合物可以包含抑制性的化合物/分子(例如，小干扰RNA(siRNA)、反义寡核苷酸、中和抗体、小分子、重组基因表达载体、重组基因病毒载体、合成的肽、重组多肽、拟肽和上调的IPREG的调节区的抑制剂(例如，肽、基因、载体))和/或活化或诱导表达的化合物/分子(例如，siRNA、反义寡核苦酸和下调的IPREG的负性调节剂的中和抗体、小分子、重组基因表达载体、重组基因病毒载体、合成的肽、重组多肽、拟肽和下调的IPREG的调节区的活化剂)。为了向受试者施用，包含IPREG调节物质(例如，化合物、分子)的组合物也可以包含合适的药物载体，如前述的那些载体。可能按照本领域的技术人员确定的剂量和时间表施用IPREG调节组合物，以补充(联合或协同)用神经营养受体调节组合物和眼压正常化药物对患者的治疗。可以通过各种上述的途径(例如，眼内注射、局部结膜应用、局部角膜应用、机械递送装置)施用IPREG调节组合物，并且也优选向眼睛局部施用(例如，通过滴眼剂、软膏、凝胶或乳膏)。如熟练的医师认为是必需的，为了完全/有效地治疗青光眼或RGC死亡，可以使用前述组分的任意组合。因此，可以向需要的受试者(例如，患有RGC细胞凋亡和/或青光眼的受试者)施用眼压正常化药物和/或p75受体拮抗剂和/或IPREG调节组合物，以及Trk受体调节剂。对于特定的患者，应该量身定制具体的治疗方案，例如，这取决于疾病阶段、严重性、任何已知的疾病机制和患者对于使用两种或多种上述组合物的耐受性。实施例实施例1:眼压过高的实验模型^浓在^渗爭和源，通过经巩膜上静脉烧灼减少房水流出，在大鼠眼睛中诱导高IOP，而对侧的眼睛经过假手术用作对照(图2)。在静脉烧灼后，烧灼过的眼睛的IOP明显高于对侧的对照眼睛(p〇0.01)。患有青光眼的眼睛的平均IOP是21mmHg,与之相比，正常眼睛的平均IOP是12.6mmHg。在烧灼后第4天，开始用倍他洛尔每日局部处理，减少房水的产生，并在3天内使高IOP降至正常水平，但对没有烧灼的对侧眼睛的正常IOP没有明显的影响。用倍他洛尔处理的烧灼过的眼睛的IOP相比用或未用倍他洛尔处理的对照正常IOP的眼睛没有明显的区别。由專/op谬爭^度'/iwgcz^和/opji#化之^^舉#使用逆向示踪剂，在细胞体标记存活的RGC,并分析:f见网膜平铺片(flatretinalspread)的RGC数(表2)。烧灼大鼠眼睛，并且，或者不予处理，或者通过从第4天开始直至第42天终点每日用倍他洛尔处理〃使其高IOP正常化。眼压过高的RGC损失是时间依赖性的。如果烧灼过的眼睛没有用倍他洛尔处理，在烧灼后的第21天和第42天，分别有~16%和~35。/。的平均RGC损失。相反地，如果每日用倍他洛尔处理眼睛，在烧灼后的第21天和第42天，分别有7%和20%的平均RGC损失，如表2所示。表2.降低高眼压只是部分防止青光眼中的RCG死亡每个数据点代表3-4个视网膜/实验组的平均值±标准差(sd)。在烧灼后的指定的天数，每日局部施用倍他洛尔。为了清晰起见，没有显示平均IOP,但接受倍他洛尔的大鼠到第7天具有正常的IOP,而未处理的大鼠具有升高1.7倍的IOP。计数平铺的视网膜中逆向标记的存活的RGC。从第21天起，相对于未处理组，在每日倍他洛尔处理组中可见RGC死亡的统计学减少(p^0.01)。在>3个独立实验中重复了数据。灼烧后RGC损失(正常IOP的％)的天数未处理的+每日倍他洛尔<table>tableseeoriginaldocumentpage63</column></row><table>这一在其IOP用倍他洛尔正常化的眼睛中的^f皮减緩的RGC损失速度在统计上不同于未处理的眼睛(p^0.005)。但是，IOP正常化减少了RGC的损失，但没有避免。相比正常的眼睛，用倍他洛尔处理的烧灼过的眼睛中的RGC的绝对损失在第35天和第42天是非常明显的(p0.001)。因此，在诱导高IOP后不久眼压的完全正常化仅仅为如果IOP不正常化则将会死亡的RGC中的大约一半提供了保护。但是慢性RGC损失更緩慢地持续。实际上，临床实验已显示，尽管IOP成功地正常化，但是在人体中，RGC死亡和随后的浮见力损失也通常持续。实施例2:眼压过高的TrkA受体激动剂治疗选择性TrkA激动剂的体内RGC保护为了测试TrkA介导的针对RGC细胞凋亡的保护，目艮内注射被称为D3的小分子选择性TrkA激动剂。以前在CNS中评估了D3,其中，D3显示长期活性，结合并活化TrkA，并在空间记忆测试中保护胆碱能神经元的数量、表型和功能。被称为C59的具有类似结构的无活性拟肽用作对照。设计实验方案以逼真地模拟青光眼的进展，以治疗预先存在的疾病和正在发生的RGC损伤(参见图3的实验流程图)。进行烧灼以诱导高IOP14天，在这一时间点发生8%的RGC损失。在该时间点，注射TrkA激动剂D3、NGF或对照(即，无活性的拟肽、盐水载体)(在烧灼后第14天和第21天，进行两次独立的眼内注射，每次lng化合物)。这些处理也结合或不结合每日倍他洛尔处理(从第14天到第42天终止)，以使IOP正常化。这种情况更好地反映了用降低眼压药物治疗青光眼患者的临床情况。在手术后的第42天计数由逆向标记确认的存活的RGC。在这种方案中，在第21天和第42天之间没有给予TrkA激动剂或对照，以评估任何保护是否可以长期存在。数据在表3中显示。表3.用TrkA受体激动剂保护青光眼中的RGC每个数据点代表至少6个视网膜/实验组的平均值±标准差。为了清晰起见，没有显示平均IOP。眼内注射拟肽D3(TrkA激动剂)或对照物，每次注射1|ig/l)al。"一"表示没有处理。眼压没有受眼内注射的影响(青光眼仍是青光眼，正常的仍是正常)。烧灼后第42天，在平铺的视网膜中计数逆向标记的存活的RGC(除了在第14天和第28天终止的第3行和第4行)。两个研究人员计数RGC,每个人不知道分组情况。在3个于第42天终止的独立实验和在1个于第49天终止的独立实验中获得类似的数据。<table>tableseeoriginaldocumentpage65</column></row><table>标记的RGC的代表性照片如图4所示。高IOP42天之后，相比正常IOP的眼睛，有36。/。RGC的明显损失(表3，第1行相比第5行；p^0.001)。高IOP中的RGC损失是进行性的和时间依赖性的。在第28天的高IOP有19%RGC损失，在第14天的高IOP有8。/。RGC损失(表3，第3行和第4行)。每日施用倍他洛尔使IOP正常化(从第14天到第42天)明显将RGC的损失从36%降低到21%(表3,第5行相比第8行；p^0.005)。但是，在高IOP17天和正常IOP25天(第42天终点时)之后发现的21Q/。RGC损失明显高于在高IOP14天和第14天的终点之后可见的8Q/。RGC损失(表3，第8行相比第3行；p^0.005)。两个单一的TrkA激动剂D3的眼内注射(在青光眼的第14天和第21天)将RGC损失平均从36%减少到29%(表2，第7行相比第5行；p〇0.1)。这代表了对于25%的RGC的保护(使用公式(检测损失-第14天损失)/(第42天损失-第14天损失)*100)，但没有统计学意义。用TrkA激动剂D3联合倍他洛尔的处理明显将RGC损失减少到11%(表3，第IO行)。这种组合明显好于每一种单独处理，并代表〉90%的保护。实际上，D3+倍他洛尔联合处理中的RGC计数与经受14天高IOP和第14天终点的眼睛中的RGC计数在统计学上没有差异(表3，第10行相比第3行)。另外，无论是否与倍他洛尔组合，NGF都没有保护RGC免于死亡(表3,第ll行和第12行)。无活性化合物或盐水的对照眼内注射也没有改变正常视网膜或42天青光眼的视网膜中的RGC计数(表3，第2行和第6行)，且没有改变正常化IOP的保护效果(表3,第8行和第9行)。将这种青光眼模型中的结果和公开的视神经轴突切开术(opticnerveaxotomy)(其中，切开或碾碎一见神经，并损伤RGC轴突)中的结果进行对比是重要的。这两者是非常不同的RGC损伤的模型，其中，青光眼是慢性、进行性的且是眼内疾病，而轴突切开术是急性的且是眼外疾病。因此，已经在视神经轴突切开术中成功地应用了NTF。NGF、BDNF、NT-4、CNTF以及bFGF和GDNF可促进轴突切开的视神经的存活。与这些以前的研究一致，D3模拟物也显示出对于轴突切开的RGC的强的促进存活效应。实施例3:眼压过高的p75受体拮抗剂处理/75f雄^"在W不^娱^,^狭哞^AGCNGF不能保护青光眼中的RGC可能是由于多效信号的活化，包括由p75受体自身介导的信号。因此，类似的实验方案用来研究p75受体拮抗剂C(28-35)以测试内源性的神经营养蛋白对于p75受体活化的潜在效应(表4)。将该方案略微改变为终点为49天，且包括TrkA激动剂D3作为阳性对照。表4.p75受体拮抗剂不能保护青光眼中的RGC每个数据点代表4个视网膜/实验组的平均值±标准差。为了清晰起见，没有显示平均IOP。眼内注射测试肽和拟肽或对照物。"一"表示没有注射。烧灼后第49天，在平铺的视网膜中计数逆向标记的存活的RGC。<table>tableseeoriginaldocumentpage67</column></row><table>p75受体拮抗剂C(28-35)没有提高RGC的存活。高IOP49天之后，相比正常IOP的眼睛，有41%RGC的明显损失(表4，第l行相比第2行；p^0.001)。每日施用倍他洛尔(从第14天到第49天)使IOP正常化明显将RGC的损失从41%降低到27%(表4,第2行相比第3行；p0.01)。另外，两次单一的p75受体拮抗剂C(28-35)的眼内注射(在青光眼的第14天和第21天)没有明显阻止RGC损失(表4，第8行)。当单独应用C(28-35)时，在每个实验中，RGC的存活有高变化性，但是当C(28-35)联合倍他洛尔处理(表4，第9行)时，一直没有提高的保护，且RGC计数与单独的倍他洛尔处理(表4，第3行)没有不同。作为阳性对照，TrkA激动剂D3处理(单独或联合倍他洛尔)显著降低了RGC细胞凋亡(表4,第6行和第7行)；且C(28-35)的无关肽阴性对照没有效应(表4，第4行和第5行)。总之，在实验的期限内，p75的肽C(28-35)拮抗剂没有阻止或降低青光眼中的RGC死亡。但是，p75可以被外源性加入的神经营养蛋白活化，这可以解释NGF为何不能保护RGC(表2)。此外，通过在较早的时间点拮抗p75可能有可检测到的RGC保护。以前的体内研究表明C(28-35)在CNS中具有体内稳定性和有效性。其它研究表明C(28-35)在视神经轴突切开术中提供了短期的体内RGC保护。因此，p75受体活性的抑制(例如，使用C(28-35))在治疗眼压过高、RGC死亡和青光眼中可能是有效的，尤其是与TrkA受体激动剂联合。实施例4:材冲牛和方法專/OPW谬爭所有动物实,验程序经McGill动物保护委员会(McGillAnimalWelfareCommittee)批准。在麻醉下对雌性、8周鼠龄的Wistar大鼠进行巩膜外烧灼(Episcleralcauterization)。结膜切开后，分离眼外肌，根据位置、相对固定性、较大的口径和分支模式来确认主缘引流静脉(majorlimbaldrainingvein)。用30"烧灼头(cauterytip)对右眼中的3个巩膜外血管(episcleralvessel)进行烧灼。每只动物的68左眼在假手术(结膜切开，没有烧灼)后用作正常IOP的对照。无论是左眼还是烧灼的右眼，IOP没有差别；因此出于记录和管理的目的，选择右侧。利用平面检眼镜检查法(Planarophthalmoscopy)证实IOP升高时视网膜的正常灌注。烧灼导致在90%的大鼠中IOP升高1.7倍(10%由于超过1.9倍的极高IOP或者因为发生白内障而被放弃且不再用于实验)。比起与压力升高>2倍且通常导致局部缺血的其它模型的相关性，1.7倍的升高与人的开角型青光眼更相关。在轻度麻醉(肌内注射4mg/kg的氯胺酮(ketamine)、0.32mg/kg的赛拉。秦(xylazine)和0.4mg/kg的乙酰丙口秦(acepromazine))下使用TonopenXL眼压计测量IOP。开始时，每日测量IOP(每次记录3个连续读数)，然后每周测量，直至终止。已确定了甚至在麻醉下，与其它仪器相比，Ton叩en的读数具有精确性。大鼠在麻醉下的平均正常IOP是12mmHg(10-14mmHg的范围)，在烧灼过的眼睛中IOP升高至稳定的平均值21mmHg(18-24mmHg的范围)，超过4个月。这些值与以前公开的数据一致。z^/(9尸^秀參箏/庶每日应用作为滴眼剂的选择性P-阻断剂(0.5%的倍他洛尔，Alcon)。如所示出的那样(例如，烧灼后4天)开始局部倍他洛尔施用，导致3天后IOP完全正常化。只要应用倍他洛尔，IOP持续保持正常。倍他洛尔对于正常眼睛的IOP没有明显的影响。在眼的颞上象限(superiortemporalquadrant)处进行结膜切开。用30G针在眼壁进行穿刺，以在眼眶中放置插管。以45。角经过巩膜将针尖插入玻璃体。这种给药途径避免了损伤眼结构。玻璃插管(10|um厚度，用直立微电极拉出器(microlectrodepuller)(Narishige)制备)经过塑料管连接至Hamilton注射器以分配测试物质或对照物质的溶液。在手术后第14天和第21天，在具有正常IOP的假手术的对照眼睛和具有高IOP的烧灼眼睛中进行眼内注射。眼内注射含有总共1ILlg化合物的1pl体积。在眼内注射之后不能立即测量IOP。但是，在眼内注射之后的2天之内，高IOP的眼睛保持高IOP,而正常IOP的眼睛保持正常IOP(数据未显示)。因此，长期的眼压似乎不受眼内注射的影响。秀參拟肽D3是TrkA的选择性部分激动剂。不管p75受体是否表达，D3结合并活化TrkA,但它不结合p75。NGFC(28-35)的肽类似物是p75-NGF相互作用的拮抗剂。在癫痫模型中，C(28-35)已在体内用作CNS中的p75受体拮抗剂。用3%DIi(l，l-二(十八烷基)-3,3,3,3-四曱基吲哚羰花青高氯酸盐)或用3%Fluorogold标记RGC。简单地说，麻醉大鼠，并将它们的头固定于立体定向仪中。暴露上丘(SC),并以两个深度将染料注射进入每个半球第一个为前囟后5.8mm,侧面1.0mm及4.5mm和3.5mm的深度。f错^挽辨處和AGC#炎逆向标记7天后，通过穿心施用磷酸盐緩冲液(PB)接着是溶于PB的4。/。PFA灌注大鼠，并立即摘除眼睛。后固定1小时后，穿过巩膜形成切口，并在视神经乳头处从眼窝(eyecup)上分离视网膜。将视网膜平铺于载玻片上(玻璃质侧向上)、风干并使用封固剂(MolecularProbes)以盖3皮片覆盖(cover-slipped)。用焚光显孩丈4竟(Zeiss)观察视网膜。对于每个视网膜，以20x的放大倍数采集每个象限(上、下、鼻侧和颞侧)共4个数字图像。根据逆向转运的染料的存在及其形态，在平铺的视网膜中识别RGC。根据其形态，经掺入Dil或FluoroGold的小胶质细胞和巨噬细胞。以RGC/mm2的数值，平均计算在所有4个象限(16个图像/视网膜)中计数的RGC。对于RGC的存活，每组至少研究6只眼睛(即，±烧灼、±倍他洛尔、±眼内注射)，并独立地重复实验。对样品编号，并由不知道编号的实验人员进行RGC计数。本文所引用的所有参考文献、专利和专利申请的相关记载均通过完整引入作为参考。尽管已经参照其优选实施方案具体显示和描述了本发明，但本领域的技术人员可以理解，可以在不背离由所附的权利要求书所限定的本发明的范围的情况下进行各种形式和细节上的变化。本文提到的和/或引用的所有科学期刊文章和专利均在此引入作为参考。权利要求1.一种治疗或预防受试者的视网膜神经节细胞(RGC)死亡或青光眼的方法，包括向受试者施用有效量的a)包含选择性TrkA受体激动剂和合适的药物载体的组合物；和b)至少一种眼压正常化药物。2.如权利要求1所述的方法，其中，所述RGC死亡与青光眼相关。3.如权利要求2所述的方法，其中，所述选择性TrkA受体激动剂包括具有13-17个碳原子的大环的P-转角拟肽环状化合物。4.如权利要求3所述的方法，其中，所述P-转角拟肽环状化合物在所述大环上具有一个或多个侧链，该一个或多个侧链从骨架环原子上伸出。5.如权利要求4所述的方法，其中，所述一个或多个侧链对应于在神经生长因子(NGF)的(3-转角中发现的残基。6.如权利要求5所述的方法，其中，所述P-转角拟肽环状化合物是式(I)的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>其中，W和I^选自氢、在天然或非天然氨基酸中发现的C广C6烷基或芳基取代基；R"和R"是氢或烷基；115和116是氢；W和R"或R3和R"与它们所连接的碳原子一起形成环丙基、环丁基、环戊基或环己基；Y是氢或1个或2个芳香取代基；X选自O、N、S、P、Se、C、l-6个碳原子的亚烷基、SO、S()2或NH;n是0、1、2、3、4或5;且连接体是通过与同型双官能化合物反应有效形成式(I)化合物的二聚体的连接基团。7.如权利要求6所述的方法，其中，X是O、S或NH,R1、R3、115和116各为氩原子，且大环具有14、15或16个环原子。8.如权利要求6所迷的方法，其中，R'和RS源自选自天然和合成氨基酸的不同氨基酸侧链。9.如权利要求6所迷的方法，其中，X是O、S或NH。10.如权利要求3所述的方法，其中，所述P-转角拟肽环状化合物具有下式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>11.如权利要求1所述的方法，其中，所述至少一种眼压正常化药物选自拟副交感神经药、胆石咸能药、拟交感神经药、抗交感神经药、碳酸酐酶抑制剂、前列腺素类似物、类二十二烷酸和渗透剂。12.如权利要求11所述的方法，其中，所述至少一种眼压正常化药物是倍他洛尔。13.如权利要求11所述的方法，进一步包括施用有效量的包含p75受体拮抗剂的组合物。14.如权利要求13所述的方法，其中，所述p75受体拮抗剂选自抗体、化合物、蛋白质、肽和拟肽。15.如权利要求14所述的方法，其中，所述p75受体拮抗剂是选自C(30-35)(SEQIDNO:1)、C(32画35)(SEQIDNO:2)、C(29-35)△D30A(SEQIDNO:3)、C(31-35)(SEQIDNO:4)和C(28画35)(SEQIDNO:5)的|3-转角环状化合物。16.如权利要求11所述的方法，进一步包括施用有效量的调节一种或多种IPREG的表达或活性的组合物，该IPREG选自a2巨球蛋白、PSD-95/SAP90相关蛋白-4、Reggiel-l、RBCK、Gza、蛋白质磷酸酶ly、核糖体蛋白L23相关的产物、胶质细胞原纤维酸性蛋白、环状核苷酸门控的阳离子通道、SPARC、B-2芳基胺N-乙酰基转移酶、淀粉状蛋白前体样蛋白2、双载蛋白1、Crybb2、Ras相关的p23、解旋酶Rap30、蛋白体rPA28亚单位卩、ATP酶a-l亚单位、(3A3/A1晶体蛋白、(3A4晶体蛋白、S-腺苷甲硫氨酸合酶、天冬酰胺合酶。17.—种治疗或预防受试者的视网膜神经节细胞RGC死亡或青光眼的方法，包括向受试者施用有效量的包含选择性TrkA受体激动剂和合适的药物载体的组合物，所述选择性TrkA受体激动剂包括具有13-17个碳原子的大环的P-转角拟肽环状化合物。18.如权利要求17所述的方法，其中，所述RGC死亡与青光眼相关。19.如权利要求18所述的方法，其中，所述化合物在所述大环上具有一个或多个侧链，该一个或多个侧链从骨架环原子上伸出。20.如权利要求19所述的方法，其中，所述一个或多个侧链对应于在神经生长因子(NGF)的|3-转角中发现的残基。21.如权利要求20所述的方法，其中，所述(3-转角拟肽环状化合物是式(I)的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>其中，Ri和I^选自氢、在天然或非天然氨基酸中发现的烷基或芳基取代基；P^和R"是氢或烷基；RS和R"是氢；1^和112或113和114与它们所连接的碳原子一起形成环丙基、环丁基、环戊基或环己基；Y是氢或1个或2个芳香取代基；X选自O、N、S、P、Se、C、1-6个碳原子的亚烷基、SO、SC)2或NH;n是0、1、2、3、4或5;且连接体是通过与同型双官能化合物反应有效形成式(I)化合物的二聚体的连接基团。22.如权利要求21所述的方法，其中，X是O、S或NH，R1、R3、115和116各为氢原子，且大环具有14、23.如权利要求21所述的方法，其中，合成氨基酸的不同氨基酸侧链。24.如权利要求21所述的方法，其中25.如权利要求18所述的方法，其中15或16个环原子。RJ和R源自选自天然和X是O、S或NH。所述化合物具有下式26.如权利要求18所述的方法，进一步包括施用至少一种选自拟副交感神经药、胆石咸能药、拟交感神经药、抗交感神经药、>碳酸酐酶抑制剂、前列腺素类似物、类二十二烷酸和渗透剂的眼压正常化药物。27.如权利要求26所述的方法，进一步包括施用有效量的包含p75受体拮抗剂的组合物。28.如权利要求26所述的方法，进一步包括施用有效量的调节一种或多种眼压调节早期基因(IPREG)的表达或活性的组合物，该IPREG选自a2巨球蛋白、PSD-95/SAP90相关蛋白-4、Reggiel國l、RBCK、Gza、蛋白质磷酸酶ly、核糖体蛋白L23相关的产物、胶质细胞原纤维酸性蛋白、环状核苷酸门控的阳离子通道、SPARC、B-2芳基胺N-乙酰基转移酶、淀粉状蛋白前体样蛋白2、双载蛋白1、Crybb2、Ras相关的p23、解旋酶Rap30、蛋白体rPA28亚单位|3、ATP酶ot-l亚单位、[3A3/A1晶体蛋白、(3A4晶体蛋白、S-腺苷曱硫氨酸合酶、天冬酰胺合酶。29.—种治疗或预防受试者的视网膜神经节细胞(RGC)死亡或青光眼的方法，包括向所述受试者施用有效量的包含TrkC受体激动剂和合适的药物载体的组合物。30.如权利要求29所述的方法，其中，所述方法进一步包括施用至少一种眼压正常化药物。31.如权利要求30所述的方法，其中，所述RGC死亡与青光眼相关。32.如权利要求31所述的方法，其中，所述选择性TrkC受体激动剂是选自下组的)3-转角环状化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>33.如权利要求32所述的方法，其中，所述方法进一步包括施用有效量的包含p75受体拮抗剂的组合物。34.如权利要求33所述的方法，其中，所述p75受体拮抗剂是选自C(30画35)(SEQIDNO:1)、C(32-35)(SEQIDNO:2)、C(29-35)AD30A(SEQIDNO:3)、C(31-35)(SEQIDNO:4)和C(28-35)(SEQIDNO:5)的P-转角环状化合物。35.如权利要求33所述的方法，其中，所述方法进一步包括施用有效量的调节一种或多种眼压调节早期基因(IPREG)的活性或表达的组合物，该IPREG选自a2巨球蛋白、PSD-95/SAP90相关蛋白-4、Reggiel-l、RBCK、Gza、蛋白质磷酸酶ly、核糖体蛋白L23相关的产物、胶质细胞原纤维酸性蛋白、环状核苷酸门控的阳离子通道、SPARC、B-2芳基胺N-乙酰基转移酶、淀粉状蛋白前体样蛋白2、双载蛋白1、Crybb2、Ras相关的p23、解旋酶Rap30、蛋白体rPA28亚单位P、ATP酶a-l亚单位、(3A3/A1晶体蛋白、卩A4晶体蛋白、S-腺苷曱硫氨酸合酶、天冬酰胺合酶。36.—种治疗或预防受试者的视网膜神经节细胞(RGC)死亡或青光眼的方法，包括向所述受试者施用有效量的包含至少一种选自下组的分子的神经营养蛋白受体调节组合物a)TrkA受体激动剂，b)TrkC受体激动剂，c)p75受体拮抗剂，和d)作为上述组合的化合物；和合适的药物载体。37.如权利要求36所述的方法，其中，所述方法进一步包括施用至少一种眼压正常化药物。38.如权利要求37所述的方法，其中，所述TrkA受体激动剂是具有13-17个原子的大环的P-转角环状化合物。39.如权利要求38所述的方法，其中，所述(3-转角环状化合物是式(I)的化合物R6连接体Y其中，！^和RS选自氢、在天然或非天然氨基酸中发现的d-Q烷基或芳基取代基；112和114是氢或烷基；115和116是氢；Ri和E^或R3和R"与它们所连接的碳原子一起形成环丙基、环丁基、环戊基或环己基；Y是氢或1个或2个芳香取代基；X选自O、N、S、P、Se、C、l-6个碳原子的亚烷基、SO、S02或NH;n是0、1、2、3、4或5;且连接体是通过与同型双官能化合物反应有效形成式(I)化合物的二聚体的连接基团。40.如权利要求39所述的方法，其中，X是O、S或NH,R1、R3、115和116各为氢原子，且大环具有14、15或16个环原子。41.如权利要求39所述的方法，其中，R^和R源自选自天然和合成氨基酸的不同氨基酸侧链。42.如权利要求39所述的方法，其中，X是O、S或NH。43.如权利要求39所述的方法，其中，所述|3-转角拟肽环状化合物具有下式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage16</formula>44.如权利要求37所述的方法，其中，所述TrkC受体激动剂是选自下组的P-转角环状化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage16</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula>45.如权利要求37所述的方法，其中，所述p75受体拮抗剂是选自C(30-35)(SEQIDNO:1)、C(32-35)(SEQIDNO:2)、C(29画35)△D30A(SEQIDNO:3)、C(31-35)(SEQIDNO:4)和C(28-35)(SEQIDNO:5)的P-转角环状化合物。46.如权利要求37所述的方法，其中，所述化合物是TrkA受体激动剂和TrkC激动剂，且其中，所述化合物是选自下组的(3-转角环状化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage23</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>47.如权利要求36所述的方法，其中，所述方法进一步包括施用有效量的调节一种或多种眼压调节早期基因(IPREG)的活性或表达的组合物，该IPREG选自oc2巨球蛋白、PSD-95/SAP90相关蛋白-4、Reggiel-l、RBCK、Gzoc、蛋白质磷酸酶ly、核糖体蛋白L23相关的产物、胶质细胞原纤维酸性蛋白、环状核苷酸门控的阳离子通道、SPARC、B-2芳基胺N-乙酰基转移酶、淀粉状蛋白前体样蛋白`2、双载蛋白1、Crybb2、Ras相关的p23、解旋酶Rap30、蛋白体rPA28亚单位p、ATP酶a-l亚单位、卩A3/A1晶体蛋白、卩A4晶体蛋白、S-腺普曱硫氨酸合酶、天冬酰胺合酶。全文摘要本发明涉及使用包含β-转角拟肽环状化合物或其衍生物的神经营养受体调节剂治疗或预防视网膜神经节细胞(RGC)死亡和/或青光眼的方法。神经营养受体调节剂可以单独使用、组合使用，和/或与一种或多种治疗或预防眼压过高、RGC死亡和/或青光眼的其它化合物、分子或药物联合使用。文档编号A61K38/12GK101657212SQ200780050089公开日2010年2月24日申请日期2007年12月5日优先权日2006年12月5日发明者H·U·萨拉戈维申请人:皇家学习促进会/麦吉尔大学