专利名称：一种扁担杆皮的提取物制备方法及其抗肿瘤用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及天然药物领域，尤其是涉及一种扁担杆皮(根皮和茎皮)的提 取物制备方法及其抗肿瘤用途。 技术背景扁担杆(6Ve『/a G. 0011)为杉义树科(77//13<^136)扁担杆属(^^ ^(3)柏」物，该属植物全世界约有150种，为灌木或小乔木。据中国植物志记载我国有 27种和1存疑种，主要分布于云南、广西、广东和江西等省。在非洲和亚洲一 些国家地区，部分扁担杆属植物被作为民间草药使用，多具有抗菌消炎作用。 ^口南非的<7re,/a occ/^/e/^aY/s和巴基其斤i旦的6"re『/a erj^力raea在民间4乍为 传统草药治疗伤口纟田菌感染(D. S. Grierson, A. J. Afolayan. Antibacterial activity of some indigenous plants used for the treatment of wounds in the Eastern Cape, South Africa. Journal of Ethnopharmacology. 1999, 66 (1): 103-106 ; Mudassir A. Zaidi， Sidney A. Crow. Biologically active traditional medicinal herbs from Balochistan， Pakistan. Journal of Ethnopharmacology. 2005, 96 (1): 331-334 )。 Cre『/a Wco7or在苏丹作为传 统草药治疗皮肤脓胞疮，还有镇静作用(M. W. Jaspers, A. L Bashir, L H. Zwaving. InvestigationofGrewiabicolorjuss. Journal of Ethnopharmacology. 1986， 17 (3): 205-211 )。《新<'务本*》记载小花扁4旦^N支 叶煮汁可治小儿蛔虫病，《开宝本草》称其可"主三虫，下气消谷"(唐慎微.重 修政和经史证类备急本草.北京人民卫生出版社，1975， 354 ),《中药大辞典》 记载其全抹和枝叶能祛风除湿，理气消痞，可治小儿因虫痃积，大人气痞，脾 虚食少，妇女崩带，风湿(江苏新医学院编，中药大辞典.科技出版社出版， 1986, 1747 )。我国部分地区民间亦用扁担杆的根皮治疗皮肤脓胞疮等细菌感染。 但未见有扁担杆根皮和茎皮的水一 乙醇提取物抗肿瘤作用报道。 发明内容本发明的第一个目的是提供一种扁担杆皮的提取物的制备方法。 本发明的第二个目的是提供扁担杆皮的提取物的新用途，即扁担杆皮的提 取物在制备抗肿瘤药中的应用。本发明的第一个目的是这样实现的将洗净晾干后的扁担杆根皮或茎皮先 进行干燥，再粉碎得到粉末，然后在粉末中加入0%~100%的乙醇水溶液，加热 回流提取l-3次，合并提取液，浓缩，干燥，得提取物。扁担杆皮的提取物可直接药用，也可通过加入药用辅料制成片剂、胶嚢、 口月良液、软膏、注射剂或乳剂等合适剂型使用。本发明的第二个目的是这样实现的扁担杆皮的提取物在制备抗肿瘤药中 的应用，抗肿瘤药包括抗宫颈癌、肉瘤、白血病、皮肤癌、胃癌、肺癌、肝癌、 食管癌和乳腺癌药。下面是扁担杆根皮和茎皮的提取物(GE)抗肿瘤作用的药理学实验和数据1.扁担杆根皮的乙醇水溶液(0% ~ 100% )提取物GE ( 0% ~簡)对小鼠宫 颈癌U14和小鼠S180肉瘤的影响按无菌操作程序，从接种后7 ~ 9d肿瘤生长及动物健康程度较好的瘤源动物 中抽取腹水，用生理盐水稀释成2. 5~3x 10'/ml瘤细胞悬液。取昆明种小鼠50 只(宫颈癌U14实验小鼠为雌性；S180肉瘤实验小鼠雌雄各半)，体重20g士2g, 于每只小鼠右腋皮下接种O. 2ml。随机分成生理盐水(NS)組、环磷酰胺(CTX) 组、高中低剂量给药组，每组各10只。接种24h后开始灌胃给药，NS组给予O. 2ml 生理盐水、CTX组给予CTX 25mg/kg，给药组给予^是耳又物100、 250、 500mg/kg, 每天l次，连续10天。于末次给药24h后处死动物，称体重，完整剥离瘤块，用 滤纸吸干后称重，求抑瘤率。统计方法采用方差分析。抑瘤率(。/。)"NS组平均瘤重-实验组平均瘤重)/NS组平均瘤重x 100%表l扁担杆根皮的乙醇水溶液(0% 100%)提取物GE (0% 100%)对小鼠宫颈癌U14和小鼠S180肉瘤 的抑制作用(—s， n=10)_组别剂量(mg/kg.d)瘤重(g)抑瘤率U14S180U14S180NS-1.207±0.4131.549 ±0.498--CTX250.574±0.1730.722±0.23852.44%53.39%GE(0%)腦0.854±0.2361.224±0.41229.25%20.98%2500.729 ±0.2400.987±0.28239.60%36.28%5000.552±0.2380.802±0.25854.27%48.22%GE(10%)1000.825±0.3121.302±0.51031.65%15.94%2500.739±0.2161.034±0.30738.77%33.25%5000.601 ±0.2280.853 ±0.30650.21%44.93%GE(30%)1000.884±0.2191.339±0.48726.76%13.56%2500.802 ±0.2341.204±0.37633.55%22.27%5000.658±0.1870.905 ±0.28945.48%41.57%GE(50%)1000細±0.3211.303±0.45828.09%15.88%2500.792 ±0.2781.189 ±0.34234.38%23.24%5000.632±0.1560.918±0.25647.64%40.74%GE(70%)1000.889 ±0.2471.287±0.35626.35%16.91%2500.810±0.3031.125±0.36032.89%27.37%5000.659±0.1360.903±0.19845.40%41.70%GE(90%)1000,卯9±0.2571.152±0.38324.69%25.63%2500.785 ±0.2290.958±0.31334.96%38.15%5000.687±0.2230.823 ±0.32743.08%46.87%GE(100%) 訓0.920 ±0.2311.101 ±0.36423.78%28.92%2500.801 ±0.2430.962 ±0.28733.64%37.90%5000.696±0.3010.819±0.28942.34%47.13%注给药组瘤重与NS组比PO.Ol由表1可以看出，扁担杆根皮的不同浓度乙醇提取物(GE)以剂量依赖方 式抑制小鼠宫颈癌U14和S180肉瘤实体瘤的瘤重，抑瘤率均超过30°/ ，即有明 显的抗肿瘤作用。2.扁担杆根皮的乙醇水溶液(0% ~ 100°/。)提取物GE ( 0% ~ 100% )对人肿瘤 细胞生长的抑制作用细胞抹人早幼粒白血病细胞HL-60,人表皮鳞癌细胞A4 31，人低分化胃 癌细胞BGC-823，人肺癌细胞A549,人肝癌细胞SMMC-7721 ，人食管癌细胞Eca 109，人宫颈癌细力包Hela,人乳腺癌细胞MCF-7。药物及配制提取物GE采用培养液配制，实验终浓度为1、 3、 10、 30和 lOOjug/ml;阳性对照药5-氟尿嘧咬(5Fu )采用培养液配制；阴性对照为培养 液。实验方法采用MTT法对所选的8种细胞林进行实验。取处于对数生长期、 状态良好的肺瘤细胞，用含l 0°/。胎牛血清的RPMI164O培养液将细胞浓度调整为2 xl05/ml, ^接种于96孔;tl中，加入各相应浓度药物，于37。C, 5。/aC02培养箱中 培养，各种药物每浓度设6个平行孔。培养48小时后，每孔加入MTT溶液10u 1, 使其终浓度为5 mg/ml。继续培养4小时后，吸去各孔中上清液，加入DMSO 200 U 1 ，平板摇床上震摇5分钟，用酶联免疫检测仪在57Onra波长下测定各孔的吸光 值。按下式计算细胞生长的抑制率细胞生长抑制率(％)=(对照组吸光值-实验 组吸光值)/对照组吸光值x 100%;并用回归法求出受试药物对各种肿瘤细胞的 半数杀伤浓度(IC5。)。实验结果根皮提取物GE对以上8个肿瘤细胞林的半数杀伤浓度(IC5。)均 小于20 n g/ml，特别是对人早幼粒白血病细胞HL-60抑制作用优于阳性对照5-氟尿嘧啶(见表)，说明GE均有明显的抗肿瘤作用。表2受试药物对8个肿瘤细胞株的半数杀伤浓度(IC50)细胞株ic50((ig/ml)GE (0%)GE (0%)GE (30%)GE (50%)GE (70%)GE (90%)GE (100o/fl,) 5FuHL-600.0530.0470.0680,039O麓0.0410.120.87A4317,357.189.229,5612.1212.3614.782.35BGC-82312.7613.4517.8718.1217.0918.1719.042.10A54914.2814.6912.0714.3415.0917.9815.345.38SMMC-777.979.1811.388.279.659.7612.471.9821Eca 1095.085.1511.838.2712,8415.0414.5712.03Hela4.644.834.097.547.707.899.453.86MCF-711.9712.0712.5810.0615.3919.5219.025.13高效液相色谱和抗胂瘤实验研究还表明扁担杆茎皮不同浓度乙醇水溶液提取物与相对应的根皮提取物的化学成分和抗肿瘤效果基本一致。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细说明，但应理解本发明的范围非仅 限于这些实施例的范围。实施例1:扁担杆根皮提取物的制备将洗净晾干后的扁担杆根皮lkg先进行干燥，再粉碎得到粉末，然后用水 或不同浓度的乙醇水溶液(见表3 )将粉末在室温下浸泡12h后，加热回流提取 3次，每次2h,滤过，合并滤液，减压蒸干得扁担杆根皮提取物千膏(GE), 产量见表3。表3扁担杆根皮不同浓度乙醇水溶液提取物产量乙醇水溶液浓度(％)010305070卯訓GE(根皮)(g)1101201401601509180实施例2:扁担杆茎皮提取物的制备将洗净晾干后的扁担杆茎皮lkg先进行干燥，再粉碎得到粉末，然后用水 或不同浓度的乙醇水溶液(见表4 )将粉末在室温下浸泡12h后加热回流提取3 次，每次2h，滤过，合并滤液，减压蒸干得扁担杆茎皮提取物干膏(GE)，产 量见表4。表4扁担杆茎皮不同浓度乙醇水溶液提取物产量乙醇水溶液浓度(％)01030507090100GE(茎皮)(g)1011081251461358473实施例3:用本技术领域公知的方法，以扁担杆根皮提取物干膏(GE )为原料，制成 抗宫颈癌乳剂。 实施例4:用本技术领域公知的方法，以扁担杆茎皮提取物干膏(GE)为原料，制成 抗乳腺癌片。 实施例5:用本技术领域公知的方法，以扁担杆茎皮提取物干膏(GE)为原料，制成 抗食管癌注射液。 实施例6:用本技术领域公知的方法，以扁担杆根皮提取物干膏(GE)为原料，制成 抗白血病月交囊。 实施例7:用本技术领域/>知的方法 抗胃癌口服液。实施例8:用本技术领域公知的方法 抗皮肤癌软膏。 实施例9:用本#支术4贞域/>知的方法 抗肝癌胶嚢。 实施例10:用本^支术领域/>知的方法 抗肺癌口服液。以扁担杆根皮提取物干膏(GE)为原料，制成 以扁担杆根皮提取物干膏(GE)为原料，制成 以扁担杆茎皮提取物干膏(GE)为原料，制成 以扁担杆根皮提取物干膏(GE)为原料，制成
权利要求
1、一种扁担杆皮的提取物制备方法，其特征在于将洗净晾干后的扁担杆根皮或茎皮先进行干燥，再粉碎得到粉末，然后在粉末中加入0％～100％的乙醇水溶液，加热回流提取1-3次，合并提取液，浓缩，干燥，得提取物。
2、 如权利要求1所述的扁担杆皮的提取物制备方法，其特征在于扁担杆皮的 提取物可直接药用，也可通过加入药用辅料制成片剂、胶嚢、口服液、软膏、 注射剂或乳剂等合适剂型使用。
3、 扁担杆皮的提取物在制备抗肿瘤药中的应用。
4、 如权利要求3所述的扁担杆皮提取物在制备抗肿瘤药中的应用，其特征在于 抗肺瘤药包括抗宫颈癌、肉瘤、白血病、皮肤癌、胃癌、肺癌、肝癌、食管癌 和乳腺癌药。
全文摘要
本发明公开了一种扁担杆皮的提取物制备方法及其抗肿瘤用途，它将洗净晾干后的扁担杆根皮或茎皮先进行干燥，再粉碎得到粉末，然后在粉末中加入0％～100％的乙醇水溶液，加热回流提取1-3次，合并提取液，浓缩，干燥，得提取物。本发明通过多种实验证实了扁担杆皮的提取物具有明显的抗肿瘤作用。
文档编号A61P35/00GK101244100SQ20081007069
公开日2008年8月20日 申请日期2008年2月27日 优先权日2008年2月27日
发明者刘建群, 吴继梅, 寇晓莉, 沁 洪 申请人:江西中医学院