专利名称：：来自柯楠因物种树皮的提取物和其用途以及含有所述提取物的药物、食疗食品和医药制剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及来自柯楠因物种、尤其摩天柱柯楠因树皮的提取物，以及其用于治疗和预防下尿路疾病、性功能障碍、脂质代谢病症、心血管疾病和急慢性疼痛病况的用途。本发明另外涉及含有所述提取物的药物、食疗食品和医药制剂。
背景技术：
：到目前为止，良性前列腺增生(benignprostatichyperplasia,BPH)和伴发的下尿路症状(lowerurinarytractsymptom,LUTS)是最重要的男性泌尿系统疾病。据估计，有三分之一年龄超过50岁的男性在其生活过程中发展出LUTS并且其中有25%的人将需要手术干预。罹患BPH/LUTS的男性的百分比到90岁将增加到90%以上。在德国(FederalRepublicofGermany),—年之中有约四百万患者接受针对这些综合症状的治疗。鉴于对寿命期望的增长和健康意识的提高，在将来必须遏制疾病频率的进一步增加(R.B.Moreland等人，J.Pharmacol.Exp.Ther.2004,308,797)。尽管BPH/LUTS具有极大的临床重要性，但在很大程度上，这一疾病的病因学和发病机理尚未得到解释。除年龄增长外，雄激素的内在产生也是BPH发展的重要先决条件。因此，通常认为BPH是随着年龄增长因激素重组(hormonalreorganization)而发展的衰老男性内分泌病。从组织学观点看，BPH为前列腺上皮和基质部分的良性生长。由于前列腺位于靠近膀胱出口的尿道处，所以会因器官肥大而出现尿路梗阻，伴随有诸如排尿频率增加和夜尿症以及排尿不完全和延迟的症状。到晚期，可能因尿停滞而出现肾功能不全和尿毒症。此外，由于分泌和尿潴留的停滞，会发展非细菌性前列腺炎、充血和复发性尿路感染，除梗阻性疾病外，这还将引起刺激性排尿病症。除了归因于前列腺肥大和由此引起的机械式排尿病症的静态部分外，动态部分也可能涉及于BPH/LUTS中，这可以通过平滑肌紧张度的增加来予以说明。两种机制的涉及程度可能随患者不同而极大变化。这表明前列腺尺寸与症状的严重程度之间仅存在边缘相关性(C.G.RoehrbornandD.A.Schwinn,J.Urol.2004,171,1029)。也见于女性的其它下尿路疾病中也涉及基本上类似的平滑肌紧张度变化，所述疾病诸如压力性尿失禁、急迫性尿失禁和排空膀胱障碍。虽然术语BPH对于前列腺增生的组织学或宏观诊断而言是保守性的，但诸如尿急、排尿频率增加和夜尿症以及排尿不完全和延迟的伴随LUTS对于患者较为常见。对于BPH的治疗选择的种类从观望态度(wait-and-seeattitude)("留意等待(watchfulwaiting)")到开放性前列腺切除术变化。在德国，每年有约33,500名男性接受经尿道前列腺切除术(transurethralresectionoftheprostate),因其极为有效，故认为这一手术为外科方法的金标准(GoldenStandard)。然而，侵入性治疗方法存在相当高的发病率和死亡率风险，无法为众多患者所接受，尤其是患有较低严重程度BPH的患者，这就说明用药物进行的治疗方法越来越重要。除通常用于较不严重的疾病阶段的情况中的植物药剂外，药物种类还主要包括al-拮抗剂和5-a-还原酶抑制剂(E.Koch,PlantaMed.67，489-500(2001))。使用cn-拮抗剂是基于以下观点BPH/LUTS的动态部分是由前列腺平滑肌紧张度增加而引起，而所述紧张度增加是由交感神经元释放去甲肾上腺素(noradrenaline)增加所介导。现今，一般公认onA-肾上腺素受体和ctnr肾上腺素受体主要是在前列腺中表达。临床研究结果表明，a-受体阻断剂会引起症状和最大尿流率的临床上显著的改善。a-受体阻断剂的特殊优势在于其起效迅速。然而，目前尚无令人信服的证据证实其阻止前列腺进一步肥大。a-受体阻断剂的副作用包括眩晕、头痛、无力、直立调节障碍(orthostaticdysregulation)、鼻炎和性功能障碍(逆行射精)，这一般是由a-受体阻断剂在中枢神经系统(centralnervoussystem,CNS)和心血管系统中的作用所引起。主要抑制c^a-受体和cnD-受体的亚型特异性a-受体阻断剂(例如坦索罗辛(tamsulosin))的研发旨在降低副作用的发生频率和严重程度。然而，有趣地是，非选择性ar拮抗剂阿夫唑嗪(alfuzosin)展现与通常描述为尿道选择性Od-受体阻断剂的坦索罗辛类似的有利副作用概况。除药效作用外，药物动力学特性也似乎有助于尿道选择性。因此，例如可借助缓慢给药或持续释放调配物来防止对血压的影响。而且，除am-受体外，aM-受体也涉及在血压控制中(R.B.Moreland等人，J.Pharmacol.Exp.Ther.308，797,2004;C.G.Roehrbom和D.G.Schwinn,J.Urol.171,1029,2004)，这限制了研发尿道选择性a-受体阻断剂的可能性。一般说来，BPH只在存在生物学有效的男性性激素的情况下发展。事实上，还未在40岁前曾经历阉割或者只因脑垂体功能减退而不形成雄激素或雄激素形成不足的男性中观察到BPH。同样，在遗传缺陷的情况下或者在不存在雄激素受体(例如，睾丸女性化)的情况下不会出现前列腺的正常发育和BPH的发展。生物学上最重要的雄激素为二氢睾酮(dihydrotestosterone，DHT)，它是在5-a-还原酶的影响下由睾丸酮局部形成。由于DHT主要刺激BPH的上皮部分，故可以通过抑制5-a-还原酶来实现腺部分的生长停止或萎縮。然而，BPH的基质部分实质上完全不受影响。举例来说，5-a-还原酶抑制剂非那雄胺(finasteride)的摄取会引起前列腺DHT浓度降低最多85%,而前列腺尺寸的平均减小量仅等于约20%并且还需要最长12个月的时间。这一作用基本上只在前列腺体积在疗法开始时高于40毫升的情况下才具有临床相关性。尽管雄激素在前列腺的正常发育和功能以及BPH的发展中都起到重要作用，但仅男性性激素尚不足以引起前列腺细胞的生长。大量的实验研究表明，活体内雄激素的生'长刺激作用是由生长因子的局部合成所介导，并且BPH的发展实质上涉及前列腺上皮和基质部分内生长控制的旁分泌机制和自分泌机制的功能异常。实际上在前列腺中已检测到多种生长因子(例如，表皮生长因子[EpidermalGrowthFactor,EGF]、转化生长因子a[TransformingGrowthFactor-a，TGF-a]、TGF-p、碱性成纤维细胞生长因子[basicFibroblastGrowthGactor，bFGF]、角质细胞生长因子[KeratinocyteGrowthFactor,KGF]、神经生长因子[NerveGrowthGactor，NGF]、类胰岛素生长因子I[Insulin-likeGrowthFactorI，IGF-1]等)和其受体。由于BPH经常伴随有可能在发病机理中起重要作用的发炎反应，故例如由成纤维细胞、血栓细胞和白细胞释放的血小板源性生长因子(Platelet-derivedGrowthFactor,PDGF)可能对于前列腺细胞增殖特别重要(C.J.Vlahosetal.，J,Cell.Biochem.52,404-413(1993))。生长因子通过与细胞表面的特异性受体结合来介导其生物作用，其具有潜在的酪氨酸激酶活性。在结合配体后，胞内受体域中发生酪氨酸残基磷酸化，随后引起一系列胞内反应。这些反应包括蛋白质合成和DNA合成的刺激以及细胞增殖的活化。因此，认为受体酪氨酸激酶的抑制剂是用于研发治疗伴随有细胞增殖增加的疾病(例如，癌症、动脉粥样硬化、牛皮癣)的新颖药物的颇具前景的物质(A.Levitzki和A.Gazit，Science267,1782-1788(1995))。然而，截至目前，BPH疗法中的这一作用模式还未引起太多关注。近年来，己在不同流行病学研究中证实，BPH/LUTS与勃起功能障碍(erectiledysfunction,ED)的发生密切相关。举例来说，在MSAM-7研究中，己证实ED在无LUTS的50岁到80岁男性中的发病率为约25%。此比率在具有严重症状的患者中增加到超过80%。此外，ED的发生频率因其它同时存在的疾病(诸如，高血压、糖尿病、高胆固醇血症、心绞痛和抑郁)而增力口(M.Shabbir等人，Curr.Med.Res.Opin.20,603,2004)。阴茎松弛主要是通过去甲肾上腺素与阴茎海绵体(corpuscavemosum)中的cua-受体和am-受体结合来维持。因此，在经a-受体阻断剂(例如，多沙唑嗪(doxazosin)和坦索罗辛)治疗的ED患者中观察到性功能的改善也在意料之中。相比之下，勃起主要是由氧化氮(NO)的血管反应性作用介导。NO是由氮能神经元释放并且另外是由阴茎海绵体和尿道海绵体(corpusspongiosum)中的内皮细胞合成。NO通过剌激鸟苷酸环化酶和增加cGMP合成，使平滑肌细胞松弛。由于抑制ar受体直接引起肌肉松弛并且抑制突触前(x2-受体伴随有氮能神经元释放NO的增加，从而认为ar拮抗作用与(12-拮抗作用的组合对于治疗ED特别有益(http:〃www.bioportfolio.com/leaddiscovery/md满2.htm)。西地那非(sildenafil)(—种抑制cGMP降解的PDE5抑制剂)的研发已彻底改变了ED的治疗。然而，西地那非引起多种副作用(诸如头痛、视力下降、消化不良、血液动力学作用)。此外，有证据显示，功效会随着治疗时间的增加而降低(M.Shabbir等人,Curr.Med.Res.Opin.20,603，2004)。而且，30-50%的患者因疾病的严重性和禁忌症而无法使用西地那非。当前尚无有关新颖PDE5抑制剂的广泛临床经验。此外，PGEi是一种治疗ED的活性物质，但其需要经尿道内注射或投与。另一治疗选择阿朴吗啡(apomorphine)也可用，其充当中枢神经系统中的多巴胺激动剂。其适于不太严重的ED病例。虽然舌下投药具有一般较低的副作用率(恶心、心血管作用)，但由于其需要避免肝脏首次代谢，故认为其相当不利(R.B.Moreland等人，J.Pharmacol.Exp.Ther.2004,308,797)。因此，仍特别需要用于治疗ED且副作用低的有效药物。1999年，展示在美国患有性功能障碍的女性的比例(约43%)显著高于男性(约31%)的出版刊物(E.O.Laumann等人，JAMA281，537,1999)已意外地得到专家们认可。一般说来，将女性性功能障碍分为四类缺乏性欲或性厌恶、性兴奋性降低、性交疼痛(阴道痉挛、性交困难)和高潮障碍。这些不同病症的比例为30%(缺乏性欲)、20%(性兴奋性降低)、10到15%(性交疼痛)和10到15%(高潮障碍)，其中不同种类的性功能障碍之间存在极其密切的关系。男性和女性的正常性功能经由反应周期控制，所述反应周期是由心理预期(性欲)、有效血管充血(男性勃起、女性阴蒂肿胀和阴道润滑)、高潮和最终消退组成。这一事件的整个过程取决于副交感神经系统与交感神经系统之间的稳定平衡。由此，性器官的血管充血具有显著重要性。由于就解剖学结构和阴茎海绵体的神经分布来说阴茎与阴蒂之间具有类似性，故预期可有效治疗勃起功能障碍的相同药理学机制也可用于治疗女性性功能障碍且尤其性应激性降低。_
发明内容因此，本发明的基本目的在于提供药物，其通过抑制(Xr肾上腺素受体和(X2-肾上腺素受体并且通过抑制生长因子介导的上皮细胞和基质细胞增殖来积极实现BPH的动态部分和静态部分，且因此能够全面治疗BPH综合症、LUTS、ED和其它男性和女性性功能障碍，以及高胆固醇血症、膀胱功能障碍、心血管疾病和疼痛病况。根据本发明，通过使用来自柯楠因物种、优选摩天柱柯楠因树皮的提取物治疗和预防以下疾病来达到这一目的男性和女性下尿路疾病(例如，良性前列腺增生、LUTS、前列腺癌、排空膀胱障碍、尿潴留、压力性尿失禁和急迫性尿失禁)、男性和女性性功能障碍(诸如，阳痿、勃起功能障碍、早泄、性欲障碍、性冷感或性快感缺乏)、脂质代谢病症(例如，高胆固醇血症、高脂血症、高甘油三酯血症)、心血管疾病(例如，内皮功能障碍、张力过强、动脉硬化症或者血管舒张或旁路手术后再狭窄)和急慢性疼痛病况(诸如偏头痛、神经病理性疼痛(例如，在糖尿病的情况中)、幻肢痛、触诱发痛、组织损伤后或在炎症情况中的疼痛(例如，带状疱疹后神经痛))。本发明的其它标的为来自柯楠因物种树皮、优选来自摩天柱柯楠因树皮的提取物，其具有稳定的有效组分比率；以及药物和食品，其用于治疗和预防下尿路疾病、性功能障碍、脂质代谢病症、心血管疾病和急慢性疼痛病况，其是以一定含量的根据本发明的提取物为特征；以及呈经口、不经肠或局部投药形式的医药制剂。如本文所使用，术语"食品"特别指食疗食品、饮食补充品以及药食和饮食补充品。摩天柱柯楠因(茜草科(rubiaceae))是西非(塞拉利昂(SierraLeone)到扎伊尔(Zaire))常绿热带雨林中的一种15-20米高且树干直径最多60厘米的树木。其木材普遍用于建筑目的，而且还用于制造灰浆和梳子。树干的干树皮被广泛用于传统医药。咀嚼树皮可抵御寒冷并且还可将树皮煎汤用于麻疯病、胃病、腹泻或心脏和肾病的情况。树皮是以茶的形式用作疟疾情况中的退热剂，以及用作催情剂和促醒剂(wake-promotingagent)。摩天柱柯楠因树皮含有约6%的吲哚生物碱(indolalkaloid),所述生物碱指定为以下群组柯楠因生物碱(corynantheinealkaloid)(例女B，二氢柯楠因碱(dihydrocorynanteine)、柯楠因碱(corynantheine)、柯楠碱(corynantheidine))或育亨宾生物碱(yohimbinealkaloid)(例如，柯楠因(corynanthine)、a-育亨宾)。对于特定柯楠因生物碱来说，焦点在于其a-肾上腺素受体拮抗活性。此外，已描述对于哺乳动物细胞及恶性疟原虫(Plasmodiumfalciparum)具有中等细胞毒性的杀利什曼原虫活性(leishmanicidalactivity)(D.Staerk等人，PlantaMed.2000,66,531,2000)。柯楠碱1971年的专利说明书主张来自摩天柱柯楠因树皮的干提取物水溶液的抗高血压和镇静作用(BE758049,OmniumChimiqueSA,1971)。现已意外地观察到，来自柯楠因物种、尤其摩天柱柯楠因树皮的提取物的醇或酮、优选乙醇水溶液除on-肾上腺素受体拮抗作用和a2-肾上腺素受体拮抗作用外还展现多种其它生物学作用，诸如细胞增殖抑制特性、内皮依赖性血管舒张特性、降胆固醇特性、止痛和抗氧化特性。这些不同活性表明这些提取物对于各种疾病病况的治疗用途。所述疾病中包括BPH、LUTS、男性和女性性功能障碍、膀胱功能障碍、高胆固醇血症、动脉硬化症、内皮功能障碍和疼痛病况。根据本发明的提取物对于这些适应症的功效得到以下药理学研究的支持。在这些研究中，已证实，根据本发明的提取物除生物碱外还需含有多酚作为活性成分对于提取物的作用而言是必不可少的。由此，术语"多酚"是指可以单体、寡聚物或多聚物形式存在的具有至少两个羟基的芳香族化合物。就整体作用来说，含有两组化合物的提取物明显优于从摩天柱柯楠因分离的成分。具有一定含量的多酚和生物碱的来自柯楠因物种树皮的根据本发明的提取物可根据以下方法获得-(a)在介于l(TC与100。C之间的温度下，用有机溶剂或水或者一种或一种以上有机溶剂和/或水的混合物提取经干燥且经研磨的柯楠因物种树皮；(b)例如通过过滤将所提取的植物材料自提取物溶液分离；(c)视情况用根据步骤(a)的溶剂再提取经提取的植物材料并且根据步骤(b)分离；(d)将于步骤(b)和(c)中获得的提取物溶液合并；(e)蒸发并且干燥来自步骤(d)的合并溶液，得到干提取物。步骤(a)中的优选有机溶剂为醇或酮，其中醇优选为乙醇。尤其优选乙醇与水的混合物。可优选考虑浸渍和渗透作为步骤(a)的提取方法。作为一般规则，步骤(c)进行一次并且也可能摇动步骤(c)或执行多次。步骤(e)中的干燥可通过本身已知的方法进行，诸如冻干或者在真空中在室温或高温下干燥。将摩天柱柯楠因作为优选的柯楠因物种使用。来自柯楠因物种树皮的根据本发明的提取物含有以稳定比率用于预定用途的多酚与生物碱。由此，多酚的含量优选为至少15%,尤其优选为至少24%并且生物碱的含量优选为至少8%，尤其优选为至少12%。已从摩天柱柯楠因分离出典型的多酚，即化合物表儿茶素(epicatechine)、原花青素B2(procyanidinB2)和原花青素C1。然而，柯楠因多酚不限于这三种化合物。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>表儿茶素<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>原花青素B2原花青素C1通过根据福林-西奥卡特(Folin-Ciocalteu)测定总酚含量来进行多酚含量的测定。另外或其它，也可测定表儿茶素、原花青素B2和原花青素C1的含量。所提及的生物碱含量为个别生物碱柯楠因、a-育亨宾、柯楠因碱、二氢柯楠因碱和柯楠碱含量的总和。根据本发明的提取物和提取物部分可以滴液、散剂、颗粒剂、片剂、包衣片剂(糖衣丸)或胶囊的形式投与，优选经口投与。然而，也可能以注射液形式用于不经肠应用或者以乳膏、油膏、栓剂、贴片或类似制剂的形式用于局部应用。对于片剂制备来说，将提取物与适当的医药学上可接受的佐剂(诸如，乳糖、纤维素、二氧化硅、交联羧甲基纤维素和硬脂酸镁)混合并且压制成片剂，所述片剂可视情况具有由例如羟甲基丙基纤维素、聚乙二醇、着色剂(诸如，二氧化钛、氧化铁)和滑石制成的适当包衣。视情况在加入诸如稳定剂、填充剂等佐剂的情况下，也可将根据本发明的提取物填充到胶囊中。剂量为使得能够每天投与5到2000毫克、优选10到1000毫克且尤其优选50到500毫克提取物。来自柯楠因物种树皮的根据本发明的提取物的功效将通过下文所述的实验来支持。图1绘示用根据本发明的提取物(450mg/kg)口服治疗对患有经TritonWR1339诱导的高胆固醇血症的小鼠体内胆固醇含量的影响(如与对照组相比较，平均P〈0.05(t检验))。实验结果证实，用实例1中获得的根据本发明的提取物治疗引起胆固醇含量增加的显著降低。具体实施例方式药理学研究针对a-肾上腺素受体结合特性的检定通过使用大鼠脑细胞膜的受体结合检定来进行有关与a-肾上腺素受体相互作用的柯楠因提取物和柯楠因提取物部分的测试。为制备细胞膜，以(302麻醉对雄性斯普拉-道来大鼠(Sprague-Dawleyrat)(150-250克)施以安乐死并且移出脑(无小脑)。在去除粘附的血液和脑膜后，将脑立即在其10倍体积的冰冷的均质化缓冲液(50mMTris-HCl，pH7.4)中处理并且使用冰冷的玻璃匀桨机均质化。将细胞匀浆以50,000g(4。C)离心10分钟并且将离心块再悬浮于冰冷的均质化缓冲液中。再次离心(4'C和50,000g下10分钟)后，将细胞膜在其10倍体积的结合缓冲液(50mMTris-HCl、0.5mMNa陽EDTA、0.01%抗坏血酸、10pM帕吉林(pargylin)，pH7.4)中处理并且在-80。C下分数份(lml)储存。使用150pl结合缓冲液中的二甲亚砜(DMSO)溶解根据本发明的提取物或者生物碱部分或多酚部分，并且在室温下与结合缓冲液中的50pl脑细胞膜(每毫升蛋白质2.5毫克)和50nl放射性配体一起培养45分钟。将311-哌唑嗪(prazosin)(300pM，比活性80Ci/mmol)用作关于与cn-肾上腺素受体相互作用的检定的放射性配体。在存在2pM酚妥拉明(phentolamine)的情况下测量非特异性结合。311-可乐定(clonidine)(1pM，比活性55.5Ci/mmo1)充当测定ct2-肾上腺素受体结合的放射性配体。针对与012-肾上腺素受体的非特异性结合的检定是在存在lO)aM育亨宾的情况下进行。随后使反应混合物滤过己经用聚乙烯亚胺(0.2%于蒸馏水中)预先处理整夜的玻璃纤维过滤器(GF/B型)。在每次使用3ml冰冷的结合缓冲液将过滤器洗涤两次后，在6(TC下将过滤器干燥24小时。在将过滤器转移到P-粒子计数器(betacounter)中的4ml闪烁液(过滤器安全(filtersafe),Zinsser-Analytik)中之后，进行结合放射性的测定。与已同时研究的溶剂对照组相比较计算311-哌唑嗪与ar肾上腺素受体或311-可乐定与(X2-肾上腺素受体的特异性结合的抑制百分比。通过非线性回归计算来进行半数最大抑制浓度(IC5Q值)的测定。研究结果概括于表l中。可看出，来自柯楠因树皮的根据本发明的提取物抑制3H-哌唑嗪与W-肾上腺素受体的结合和3&可乐定与(X2-肾上腺素受体的结合，此作用基本上是建立在生物碱存在的基础之上。表l:311-哌唑嗪和3&可乐定分别与CH-肾上腺素受体和(X2-肾上腺素受体的结合的抑制<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>关于生长因子介导的细胞增殖的抑制的检定对小鼠NIH-3T3成纤维细胞检定总提取物或提取物部分对生长因子诱导的细胞增殖的影响。在补充有10%胎牛血清(fetalcalfserum，FCS)、2mM谷氨酰胺和抗生素/抗霉菌溶液的杜贝卡氏经改良依格氏培养基(Dulbecco，smodifiedEagle'smedium,DMEM)中培养细胞。每周两次有规律地更换培养基。在最后一次转种后四天，使用胰蛋白酶/EDTA从细胞培养瓶底部分离粘附细胞并且以50,000个细胞/毫升的密度再悬浮于补充有0.5%FCS的DMEM中。随后，将细胞以每孔200微升的体积转移到微量滴定盘(F形)中并且在37。C下再培养96小时。更换培养基(无FCS的DMEM)并且加入该等物质后，60分钟后加入10ng/ml重组人血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)。随后在恒温箱中在37'C下再培养细胞24小时。在采集细胞前6小时，每孔加入0.5)aCi甲基-311-胸苷。培养期结束后，以400g将微量滴定盘离心5分钟并小心吸出细胞上清液。使用胰蛋白酶/EDTA将细胞自底部分离，且随后使用细胞采集器(Inotech)在玻璃纤维过滤器(G-10型，ICH-201)进行采集。借助线性分析器(LB2842，Berthold)进行新合成的DNA中SH-胸苷纳入的测定。在各情况中，与同时检定的溶剂对照组相比较来进行在存在提取物和提取物部分的情况下细胞增殖抑制的测定。结果概述提供于表2中。从这些结果可看出，根据本发明的提取物的细胞增殖抑制作用可主要归因于多酚部分。表2:MH3T3成纤维细胞的PDGF介导的细胞增殖的抑制<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>针对血管舒张特性的检定为检定血管舒张作用，检验根据本发明的提取物和提取物部分对雄性斯普拉-道来大鼠(Janvier,LeGenest,France)的分离大动脉收縮的影响。移出后立即将器官转移到台氏溶液(Tyrode'ssolution)(以mM为单位:NaCl118.2、NaHC0324.8、KC14.6、CaCl22.5、MgS041.2、KH2P041.2、葡萄糖10)中并且与粘附的结缔组织分离。随后制备约4毫米厚的血管环(vascularring)。对于一些实验移出内皮。出于这一目的，将大动脉环以轻轻压在钢制套管上的方式安装到钢制套管上，且随后通过转动并同时纵向移动来移出最内部的血管层。使用金属钩将大动脉环固定于填充有台氏溶液的器官槽(20ml;HugoSachs,Hugstetten)中。用碳合氧(pH7.4)对培养基(37°C)持续通气。对于有关测定使用苯福林(phenylephrine,PE)使器官预收缩后血管舒张的实验来说，将以下物质加到台氏溶液中盐酸普萘洛尔(propanolol-HCl)(6pM;RBI)、盐酸皮质酮(6pL;Sigma)和地昔帕明(desipramine)(0.6pM;Sigma)。在关于使用U-46619刺激后松弛的测试中，加入卩引哚美辛(indomethacin)(2.8nM;Sigma)。在l.O克的预载荷下使用力传感器(StathamUC2，HugoSachs)等轴测量器官张力并使用4频道记录器(4-channel-writer)(Linearcorder，Graphtec)记录。30分钟的平衡期后，用PE(0.15pg/ml，EK0.74pM)以15分钟的间隔引起4次收縮，以便实现可再现的器官收缩。在第四次PE加入后，在达到最大收縮(累积剂量效应)后加入增加浓度的测试物质。实验结束时，通过应用乙酰胆碱(0.25pg/ml，EK1.38nM)来测试血管舒张的内皮依赖性。测试在无内皮的情况下大动脉环的松弛效应也遵照基本上类似的测试程序。在平衡30分钟后，用PE(0.15pg/l，EK0.74pM)以15分钟的时间间隔引起三次收缩。在第三次加入PE后达到最大收縮之后，应用乙酰胆碱(0.25pg/ml，EK1.38pM)以便确定内皮的完全去除。冲洗掉乙酰胆碱后，在25分钟后引起PE收縮(0.15pg/ml，EK0.74)LlM)并且接着以增加的浓度加入测试物质。如上文关于PE所述，以相同方式进行针对用U-46619(0.022pg/ml,EK0.063pM)或KC1(3mg/ml，EK40mM)诱导收縮后松弛效应的检定。提取物对激动剂的松弛作用是以百分比测定。通过使用Prism3.0软件(GraphPadSoftwareInc.)的浓度-效应曲线的非线性回归分析来测定ICmj僮。实验结果展示于下表中。从数据显而易见，用PE刺激后根据本发明的提取物的血管舒张作用由含生物碱部分和无生物碱部分所介导。无生物碱部分的松弛作用完全依赖于完整内皮的存在。在用U-46619或KC1去极化使血管环预收縮后也可观察到无生物碱部分的内皮依赖性血管舒张作用，并且所述作用明显建立在NO的内皮释放增加的基础之上。相比之下，生物碱部分的作用主要是建立在存在具有Ct-肾上腺素受体阻断特性的成分的基础之上，且因此也可在去除内皮后测定到。表3:针对血管舒张作用的检定<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>有关抗高胆固醇血症作用的检定对于患有由TritonWE1339诱导的高胆固醇血症的雄性NMRI小鼠(Janvier,LeGenest,France)检验根据本发明的提取物对血浆胆固醇含量的影响。在标准化环境条件(21°C，60%相对湿度，12/12小时白天/黑夜)下保持小鼠并且使其自由进食饮用水和粒状食物(Altromin1324)。将Triton-WR1339(400mg/kg，Sigma)溶解于生理NaCl溶液中并且经由尾静脉注入动物体内(10ml/kg)。对于口服治疗测试动物来说，将提取物溶解于0.2%琼脂悬浮液中并且在注射Triton-WR1339之前24小时和1小时以及在注射Triton-WR1339之后6小吋经由管饲法投与动物(10ml/kg中450mg/kg)。仅用载剂(0.2。/。琼脂，10ml/kg)治疗对照组的动物。注射Triton-WR1339之前1小时和注射Triton-WR1339之后6小时、24小时和48小时时，使用肝素化毛细管从动物的尾静脉取得血液样本(32pl)并且此后立即测定胆固醇浓度(Reflotron，BoehringerMannheim)。图1绘示用根据本发明的提取物(450mg/kg)口服治疗对患有经TritonWR1339诱导的高胆固醇血症的小鼠体内胆固醇含量的影响(如与对照组相比较，平均P〈0.05(t检验))。实验结果证实，用实例1中获得的根据本发明的提取物治疗引起胆固醇含量增加的显著降低。针对止痛作用的检定为检定止痛作用，在小鼠中使用福尔马林(formalin)测试。将福尔马林局部注射到小鼠后足中导致在两个短暂间隔阶段内发生的对疼痛敏感性的增加。第一阶段是由P物质、缓激肽(bradykinin)和兴奋性氨基酸(例如，谷氨酰胺)的释放引起的疼痛受体的直接刺激所介导。在随后的第二阶段中，组织中出现组胺、血清素和前列腺素的积累，从而导致局部炎症反应和中枢神经系统的功能改变。对于所述实验，使用重约22-26克的雄性NMRI小鼠(Janvier,LeGenest,France)。用根据本发明的提取物或提取物部分经口治疗动物。l小时后，将20^1的3.5%福尔马林溶液注入左侧的一只脚中。随后将动物个别放入金属笼中并记录45分钟时间内疼痛反应(舔脚爪)的次数。与同时测试的对照组相比较来测定疼痛抑制作用。对照组的动物仅用载剂介质(0.2%琼脂悬浮液，10ml/kg)治疗。表4中的结果证实柯楠因提取物的潜在止痛作用，所述止痛作用实质上是由所述提取物中所含的生物碱所介导。&^针对止痛作用的检定<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>针对抗氧化特性的检定脂质的自动氧化与光发射有关。可使用这一特别弱的化学发光的测定来测定过氧化物的量并评定抗氧化剂的功效。雄性小鼠(NMRI,20-30g，Centred，ElevageJanvier,LeGenest-SaintIsle,France)的脑组织在本研究中用作富含脂质的组织。移出脑后，将其用冰冷的磷酸盐缓冲生理盐水(PBS，pH7.4)洗涤并与脑膜和残余血液分离。将组织样本用其4倍体积(v/w)的PBS均质化并且在4t:下以1000g离心IO分钟。将上清液立即用相同缓冲液稀释到其3倍体积并且在冰上储存。将250^稀上清液转移到测试管中并且在37。C下在6通道照度计(Multi-BiolumatLB9505C，Berthold，BadWildbad)中培养10分钟。加入含有2.5。/。DMSO的PBS中的25pl化合物II后，再持续培养10分钟。随后测定化学发光(chemiluminescence，CL)强度达60分钟的时间。与同时测试的溶剂对照组(含有2.5%DMSO的PBS)相比较来计算自动氧化的抑制百分比。如可从表5中概括的结果看出，根据本发明的提取物展现潜在的抗氧化特性，这主要是由多酚部分所介导。表5针对抗氧化特性的检定脂质过氧化反应的抑制IC50(mg/ml)根据本发明的提取物(实例1)1151多酚部分916(比较实例l)生物碱部分4786(比较实例2)实例根据福林-西奥卡特的酚总含量的测定在与钼酸盐-钨酸盐试剂反应后以与关于鞣剂(DAB)的药典方法类似的方法用光度计进行多酚总含量的测定。出于这一目的，将提取物溶解于乙醇水溶液中，用碳酸钠溶液碱化并加入钼酸盐-钨酸盐试剂。离心后，在720nm下对比水测量上清液的吸光度。计算是基于表儿茶素进行。实例l:来自摩天柱柯楠因树皮的根据本发明的干提取物6CTC下，将500克经研磨的摩天柱柯楠因树皮搅拌2次达1小时，每次使用3.5千克60重量％乙醇。滤过SeitzSupra1500后，在约50'C和减压下蒸发已合并的提取物溶液并且在真空中于50。C下干燥183.8克(36.8%)。提取物含有14.62%生物碱(4.75%柯楠因、0.8P/。a-育亨宾、3.86%柯楠因碱、1.91%二氢柯楠因碱和3.29%柯楠碱)并且具有26.8%的总酚含量(包括2.66%表儿茶素、3.05%原花青素B2和1.25%原花青素<:1)。比较实例l:多酚部分(无生物碱)将445克根据实例1的干提取物于4千克乙醇(50体积％)中的溶液放在具有3.4升强酸性离子交换剂的柱上(Merckl)并用乙醇(50体积％)洗脱。收集9升洗出液，在减压下于5(TC下蒸发并在干燥箱中于5(TC和12毫巴(mbar)下干燥352.4克(79.2%)。提取物不含任何生物碱(未检测到柯楠因、a-育亨宾、柯楠因碱、二氢柯楠因碱和柯楠碱)并且展现28.4%的总酚含量(包括2.57%表儿茶素、2.24%原花青素B2和0.76%原花青素C1)。比较实例2:生物碱部分使用50体积％乙醇与5。/。NH3溶液(具有25%浓度)的混合物进一步洗脱来自比较实例1的离子交换柱。收集16升洗出液并且如实例2中一般蒸发和干燥:46.8克(10.5%)。提取物含有69.28%生物碱(24.01%柯楠因、2.25%01-育亨宾、19.05%柯楠因碱、9.56%二氢柯楠因和14.41%柯楠碱)并且具有13.0%的总酚含量(未检测到表儿茶素、原花青素B2和原花青素C1)。实例2:片剂将来自摩天柱柯楠因树皮的干提取物(实例1中所获得的根据本发明的提取物)与佐剂混合并压成片剂(片芯=第1-6项)。片剂具有由羟丙基甲基纤维素制成的包衣(第7-10项)。<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>权利要求1.一种来自柯楠因物种(corynanthespecies)树皮的提取物，其具有一定含量的多酚和生物碱，所述提取物可通过以下制造过程获得(a)在介于10℃与100℃之间的温度下，用有机溶剂或水或者一种或一种以上有机溶剂和/或水的混合物提取经干燥且经研磨的柯楠因物种树皮；(b)例如通过过滤将所提取的植物材料自提取物溶液分离；(c)视情况用根据步骤(a)的溶剂再提取经提取的植物材料并且根据步骤(b)分离；(d)将于步骤(b)和(c)中获得的提取物溶液合并；(e)蒸发并且干燥来自步骤(d)的合并溶液，获得所述干提取物。2.根据权利要求l所述的提取物，其中所述有机溶剂为醇或酮。3.根据权利要求2所述的提取物，其中所述醇为乙醇。4.根据权利要求1至3中任一权利要求所述的提取物，其中所述提取溶剂为乙醇与水的混合物。5.根据权利要求1至4中任一权利要求所述的提取物，其中摩天柱柯楠因(corynanthepachyceras)用作所述柯楠因物禾中。6.根据权利要求1至5中任一权利要求所述的提取物，其特征在于多酚含量为至少15%和生物碱含量为至少8%。7.根据权利要求6所述的提取物，其特征在于多酚含量为至少24%。8.根据权利要求6或7中任一权利要求所述的提取物，其特征在于生物碱含量为至少12%。9.一种根据权利要求1至8中任一权利要求所述的提取物的用途，其用于治疗和/或预防下尿路疾病、性功能障碍、脂质代谢病症、心血管疾病和急慢性疼痛病况。10.根据权利要求9所述的用途，其中所述下尿路疾病选自良性前列腺增生、下尿路症状、前列腺癌、排空膀胱障碍、尿潴留、压力性尿失禁和急迫性尿失禁。11.根据权利要求9所述的用途，其中所述性功能障碍选自阳痿、勃起功能障碍、早泄、性欲障碍、性冷感和性快感缺乏。12.根据权利要求9所述的用途，其中所述脂质代谢病症选自高胆固醇血症、高脂血症和高甘油三酯血症。13.根据权利要求9所述的用途，其中所述急慢性疼痛病况选自偏头痛、神经病理性疼痛、幻肢痛、触诱发痛、组织损伤后和炎症情况中的疼痛。14.根据权利要求9所述的用途，其中所述心血管疾病选自内皮功能障碍、张力过强、动脉硬化症和血管舒张或旁路手术后再狭窄。15.—种药物或食品，其用于治疗和/或预防下尿路疾病、性功能障碍、脂质代谢病症、心血管疾病和急慢性疼痛病况，所述药物或食品是以一定含量的根据权利要求1至8中任一权利要求所述的提取物为特征。16.—种医药制剂，其是由根据权利要求1至8中任一权利要求所述的提取物和适当佐剂组成，所述医药制剂呈经口、不经肠或局部投与形式。全文摘要本发明涉及来自柯楠因物种(corynanthespecies)、尤其摩天柱柯楠因(corynanthepachyceras)树皮的提取物，以及其用于治疗和预防下尿路疾病、性功能障碍、脂质代谢病症、心血管疾病和急慢性疼痛病况的用途。本发明还涉及含有这些提取物的药物、食疗食品和医药制剂。文档编号A61P5/00GK101291682SQ200680038827公开日2008年10月22日申请日期2006年11月7日优先权日2005年11月8日发明者艾贡·寇驰,赫曼·郝耳申请人:威玛舒培博士两合公司