专利名称：毛萼乙素纳米混悬剂及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种毛萼乙素制剂。
背景技术：
民间曾将唇形科香茶属植物毛萼香茶菜作为抗肿瘤药使用。中国科学院昆明植物
所孙汉董院士在二十多年化学研究工作的基础上，从毛萼香茶菜和云南特有种疏花毛萼香
茶菜中提取分离得到抗肿瘤有效单体毛萼乙素。由上海医药工业研究院、军事医学科学院
及中科院上海药物所等单位负责进行的体内外抗肿瘤活性测试结果表明，毛萼乙素具有广
谱抑瘤作用，对卵巢癌、乳腺癌、宫颈癌、肠癌、肺癌、胃癌、肝癌、前列腺癌及白血病等细胞
株均具有显著的增殖抑制作用；小鼠体内实验结果也呈现出显著的抗肿瘤作用，显示出良
好的药用开发前景。毛萼乙素在抗肿瘤和抗白血病药物中的应用已申请新药发明专利。 昆明医学院、上海瑞金医院及美国耶鲁大学等单位对毛萼乙素的抗肿瘤作用机制
进行了初步研究，毛萼乙素可提高过氧化物的水平，影响IkBa的磷酸化和降解，阻止NF-kB
进核，从而抑制NF-kB信号通路；下调ERK1/2的磷酸化水平，抑制MAPK信号通路。此外，毛
萼乙素能够抑制细胞中端粒酶的活性，且具有一定的抗新血管生成作用。 申请人:在前期研究中发现，毛萼乙素的生物半衰期短，粘膜透过性差，口服给药生
物利用度低，注射给药是首选给药途径。然而，毛萼乙素在水中的饱和溶解度(25°C )仅约
为0. lmg/ml，受pH和缓冲盐影响小；在植物油中的饱和溶解度小于0. 5mg/ml ;在无水乙
醇、丙二醇、聚乙二醇、聚氧乙烯蓖麻油(cremophor EL)等可注射溶剂中的溶解度均小于
10mg/ml ;仅在二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亚砜(匿SO)、吡啶、氯仿及二氧六环等溶剂中溶
解较好；在正辛醇-水体系中的表观油水分配系数(logPoct)约为2，属水、油均不易溶解
之药物。因此，毛萼乙素的溶解性差是临床应用必须克服的一大障碍。 由于毛萼乙素的溶解性差，在前期进行的体内外抗肿瘤药效试验中，均采用不能
用于注射给药的DMSO作溶剂。虽然采用环糊精包合技术、表面活性剂增溶(胶束)、乳剂、
微乳、脂质体及固体分散技术等均可解决一些难溶性药物的溶解度和溶出度问题，但对水、
油均不易溶解的毛萼乙素，这些方法和技术仍具有较大的局限，而且所用的增溶剂、乳化剂
等常带来一些安全问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种毛萼乙素纳米混悬剂及其制备方法，以克服现有技术 存在的缺陷，满足临床需要。 本发明的毛萼乙素纳米混悬剂，包括治疗有效量的毛萼乙素纳米混悬剂干燥品和 水或其它可注射溶液，优选的，毛萼乙素纳米混悬剂中，毛萼乙素的重量含量为0. 05% 5% ; 所述毛萼乙素纳米混悬剂干燥品，包括毛萼乙素、表面活性剂、附加剂及干燥支架
剂，其中，毛萼乙素与表面活性剂的重量比为毛萼乙素表面活性剂=1 : o.05 i : 5，优选i : o. i i : 2; 优选的，所述的毛萼乙素纳米混悬剂干燥品，包含如下重量百分比的组份 干燥支架剂 0 95% 所述的表面活性剂包括离子型表面活性剂、非离子型表面活性剂或高分子表面活性剂中的一种以上； 所述离子型表面活性剂选自卵磷脂或胆酸盐衍生物等； 所述卵磷脂优选大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂，所述胆酸盐衍生物优选甘胆酸钠、脱氧胆酸钠或牛磺胆酸钠； 所述非离子型表面活性剂选自泊洛沙姆188、聚氧乙烯蓖麻油(cremophor EL)或吐温80中的一种以上； 所述高分子表面活性剂选自聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙二醇、白蛋白、纤维素衍生物或淀粉衍生物等； 所述附加剂为药学上可接受的抗氧剂、抑菌剂、离子络合剂、pH调节剂或渗透压调节剂等中的一种以上；所述抗氧剂如亚硫酸钠、亚硫酸氢钠或抗坏血酸，所述抑菌剂如尼泊金甲酯、苯甲醇或山梨酸钠，所述离子络合剂如乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸二钠或乙二胺四乙酸二钾，所述pH调节剂如磷酸、盐酸或醋酸，所述渗透压调节剂选自葡萄糖、氯化钠或甘油中的一种以上； 所述干燥支架剂选自二糖、多元醇或蛋白质，优选海藻糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、甘露醇、山梨醇或白蛋白中的一种以上； 优选的，所述的毛萼乙素纳米混悬剂干燥品，包含如下重量百分比的组份
毛萼乙素 3 80%
表面活性剂 3 60%
附加剂 0 5%
干燥支架剂 0 90% 最优选的，所述的毛萼乙素纳米混悬剂干燥品，包含如下重量百分比的组份
毛萼乙素 5 60%
表面活性剂 5 60%
附加剂 0 5%
干燥支架剂 0 90% 所述毛萼乙素纳米混悬剂干燥品的制备方法之一，包括如下步骤
(1)将毛萼乙素原料药粉碎成为粒径小于5 i！ m的细粉； (2)在搅拌下，将毛萼乙素细粉加入到含有表面活性剂、附加剂和干燥支架剂的水溶液中； 所述水溶液中，表面活性剂的重量含量为0. 05 2% ;
(3)然后将步骤(2)的产物，进行剪切处理，形成混悬液； 所述剪切处理指的是，将步骤(2)的产物置于高剪切乳化器的小杯中，2000-10000rpm剪切处理；高剪切乳化器为本领域通用的设备，如上海华岩仪器设备有限公司型号为SAII-2的产品； (4)将所述混悬液进行高压均质或超声粉碎，获得毛萼乙素纳米混悬剂； 所述高压均质指的是，将物料在高压均质机中，均质压力在100-3000bar，一次或
多次循环，制备得到粒径小于200nm的微粒； (5)将获得的毛萼乙素纳米混悬剂经喷雾干燥或减压干燥或冷冻干燥，获得纳米混悬剂干燥品； 所述毛萼乙素纳米混悬剂干燥品的制备方法之二，包括如下步骤 (1)将毛萼乙素溶于溶剂中，所述溶剂选自乙醇、甲醇、丙酮中的一种或其任意混
合物，获得毛萼乙素溶液； 溶剂中，毛萼乙素的重量含量为0. 5 5% ; (2)在搅拌下，将所述毛萼乙素溶液与含有表面活性剂、附加剂和干燥支架剂的水溶液混合，药物过饱和析出，获得混悬液； 所述水溶液中，表面活性剂的重量含量为0. 05 2% ; 毛萼乙素溶液水溶液的重量比为i : 4 i : 20; (3)混悬液通过高压均质法或超声粉碎法进一步减小和匀化粒径； (4)减压加热，温度为40 5(TC，挥去有机溶剂，得到纳米混悬剂； (5)将获得的毛萼乙素纳米混悬剂经喷雾干燥或减压干燥或冷冻干燥，获得纳米
混悬剂干燥品； 所述毛萼乙素纳米混悬剂干燥品的制备方法之三，包括如下步骤 (1)将毛萼乙素溶于与水不相混溶的有机溶剂中，获得有机相，有机溶剂优选二氯
甲烷或氯仿等； 有机相中，毛萼乙素的重量含量为0. 5 20% ; (2)将有机相加入到含有表面活性剂、附加剂和干燥支架剂的水溶液中，高剪切搅拌，获得乳液； 所述水溶液中，表面活性剂的重量含量为0. 05 2% ; (3)所述乳液经高压均质进一步减小或匀化粒径； (4)减压加热，温度为40 5(TC，去除有机溶剂，得纳米混悬剂； (5)将获得的毛萼乙素纳米混悬剂经喷雾干燥或减压干燥或冷冻干燥，获得纳米
混悬剂干燥品； 所述毛萼乙素纳米混悬剂干燥品的制备方法之四，包括如下步骤 (1)将毛萼乙素原料药分散在含有表面活性剂、附加剂和干燥支架剂的水溶液
中； 所述水溶液中，表面活性剂的重量含量为0. 05 2% ; (2)加入碾磨介质，所述碾磨介质选用直径为0. 2-2mm的玻璃珠、陶瓷珠、不锈钢珠或聚苯乙烯树脂珠等，1000 5000转/分钟，搅拌碾磨30分钟 数小时，得到混悬液；
(4)混悬液经高压均质法或超声粉碎法进一步减小和匀化粒径，得到纳米混悬剂； (5)将获得的毛萼乙素纳米混悬剂经喷雾干燥或减压干燥或冷冻干燥，获得纳米混悬剂干燥品； 上述的喷雾干燥或减压干燥或冷冻干燥，均为常规的方法，如干燥设备设计选型与应用实用手册中提供的方法。 采用上述方法一 四所制得毛萼乙素纳米混悬剂的平均粒径为50-200nm，毛萼乙素为结晶态或无定型态或二者的混合物； 本发明的纳米混悬剂干燥品，于使用前，加注射用水或其它可注射溶液(生理盐水、5%葡萄糖水等)，可重建成为供注射用的毛萼乙素纳米混悬剂，平均粒径50-200nm。
动物试验证明，本发明的毛萼乙素纳米混悬剂，可通过腹腔注射(ip)、静脉注射(iv)或静脉恒速输注等方式给予需要治疗的患者，以毛萼乙素重量计，剂量一般为5 30mg/天/kg体重，具体可根据患者的病情、年龄等由医师决定。 本发明采用纳米药物晶体技术制备毛萼乙素纳米混悬剂，解决了难溶性药物毛萼乙素的溶解度和溶出度问题。提供了一种可供临床运用的毛萼乙素纳米混悬剂及其制备方法。 本发明毛萼乙素纳米混悬剂的优点是解决了毛萼乙素的溶解度问题，制得的制剂可不含有机溶剂，表面活性剂用量小；纳米混悬剂还可以改变药物的体内分布，降低毒副作用；制得的纳米混悬剂干燥品，具有良好的稳定性。
具体实施例方式
实施例中，剪切乳化器采用上海华岩仪器设备有限公司型号为SAII-2的产品；高压均质机采用加拿大AVESTIN公司型号为EmulsiFlex-C5的产品；碾磨机为通用设备。
实施例1 将毛萼乙素原料药进行气流粉碎，得到粒径小于5ym的微粉。 将200mg毛萼乙素微粉加入到含有0. 1% (w/w)蛋黄卵磷脂的20g水溶液中，在剪
切乳化器中，5000rpm处理3min，得混悬液。 混悬液经高压均质机处理，均质条件为300bar循环3次，500bar循环3次，1000bar循环5次，1500bar循环10次，得到平均粒径为110nm的纳米混悬剂。
实施例2 将毛萼乙素原料药进行气流粉碎，得到粒径小于5ym的微粉。 将200mg毛萼乙素微粉加入到含有1 % (w/w重量)蛋黄卵磷脂和5% (w/w重量)
乳糖的20g水溶液中，在剪切乳化器中，1000rpm处理3min，得混悬液。 混悬液经高压均质机处理，进一步减小和匀化粒径，均质条件为300bar循环3次，
500bar循环3次，1000bar循环5次，1500bar循环10次，得到平均粒径为110nm的纳米混
悬液。将纳米混悬液冷冻干燥48h，得纳米混悬剂干燥品。 加注射用水20g，即可重建形成平均粒径为110nm的纳米混悬液。 实施例3 在碾磨机中加入20g水、50mg泊洛沙姆188、30mg吐温80、500mg毛萼乙素和20g直径为0. 5mm的不锈钢珠。开动碾磨机，2000rpm碾磨45min，滤过，得平均粒径为140nm的混悬液。 实施例4
在碾磨机中加入20g水、800mg海藻糖、200mg泊洛沙姆、50mg吐温80、500mg毛萼乙素和20g直径为0. 5mm的不锈钢珠。开动碾磨机，2000rpm搅拌碾磨60min，滤过，得混悬液。 将混悬液转移到高压均质机中，300bar循环3次，500bar循环3次，1000bar循环5次，1500bar循环5次，得到平均粒径为90nm的纳米混悬剂。将纳米混悬液冷冻干燥48h，得纳米混悬剂干燥品。 加重量浓度为5%葡萄糖注射液500g，即可重建形成平均粒径为90nm的混悬液。
实施例5 毛萼乙素原料药100mg溶于3g三氯甲烷中。 搅拌下将毛萼乙素溶液加入到20g含lX (重量)人血清白蛋白的水溶液中，1000rpm匀桨5min得到乳液。 将乳液转移到高压均质机内，800bar循环5次，1500bar循环10次，4(TC减压蒸发20min，除去三氯甲烷，得平均粒径为100nm的混悬液。
实施例6 毛萼乙素原料药100mg，在搅拌下加入到20g含0. 5% (重量)泊洛沙姆188、0.05% (重量)吐温和5% (重量)蔗糖的水溶液中，5000rpm匀浆3min，得到混悬液。
将混悬液在70kHz下进行探针超声15min，为防止超声时过热，每超声5min停lmin，得到平均粒径为160nm的混悬液。
所得混悬液冷冻干燥48h得饼块状物； 加注射用水20ml即可重新分散成平均粒径为160nm的混悬液。
实施例7 毛萼乙素原料药300mg溶于30g含4% (重量)卵磷脂的乙醇水溶液(75% )中。搅拌下，将毛萼乙素溶液滴加到80g含2X (重量)甘露醇的水溶液中，然后转移到高压均质机内，800bar循环5次，1000bar循环10次，得平均粒径为160nm的混悬液。混悬液于4(TC减压蒸发30min，除去乙醇，冷冻干燥48h得饼块状物，加注射用生理盐水500g即可重新分散成平均粒径为160nm的纳米混悬液。
实施例8 采用实施例l制备的毛萼乙素纳米混悬剂，分别以腹腔注射(ip)和静脉注射(iv)二种方式给予2组ICR健康小鼠，给药剂量为10mg/kg。毛萼乙素纳米混悬剂静脉注射给药的半衰期约为48min，表观分布容积为4L/kg。腹腔注射给药的生物利用度约为68%。
实验例9 采用实施例3制备纳米混悬剂，分别以10、20、40mg/kg剂量给予荷H22肝癌ICR小鼠，每组10只。给药途径分别为腹腔注射(ip)、静脉注射(iv)和灌胃(ig)。每次给药前称取体重，按实际体重给药。注射给药每天一次，灌胃给药每天三次(Tid)，共给药7天。于接种肿瘤后的第十一天将小鼠处死，分离肿瘤，称取瘤重，与给予生理盐水的空白组相比，计算抑瘤率，结果见表l。 表l毛萼乙素纳米混悬剂对荷H22瘤小鼠的抑瘤作用组别动物数 (始/终)平均体重 (始/终)瘤重(g)抑瘤率(％)
空白对照18/1522.2g/31.3g2.77±0.49—
紫杉醇 iv 10 mg/kg10/1022.0g/20.2g1.15±0.29**58.4%
紫杉醇 ip 10 mg/kg10/1022.1g/20.71.36±0.47**50.7%
毛萼乙素 iv 10 mg/kg簡O22.0g/30.0g2.10±0.5924.2%
毛萼乙素 iv 20 mg/kg10/1021.8g/29.2g1.66±0.43**40.1%
毛萼乙素 iv 40 mg/kg10/1021.6g/28.1g1.27±0.47**54.0%
毛萼乙素 ip 10 mg/kg10/1021.6g/22,7g1.18±0.51**57.4%
毛萼乙素，ig 40mg/kg, Tid10/925.0g/17.71.42±0.60**50.3% **与空白对照组相比，p < 0. 001。
权利要求
毛萼乙素纳米混悬剂，其特征在于，包括治疗有效量的毛萼乙素纳米混悬剂干燥品和水或其它可注射溶液。
2. 根据权利要求1所述的毛萼乙素纳米混悬剂，其特征在于，毛萼乙素纳米混悬剂中， 毛萼乙素的重量含量为0. 01% 10%。
3. —种毛萼乙素纳米混悬剂干燥品，包括毛萼乙素和表面活性剂，毛萼乙素与表面活性剂的重量比为毛萼乙素表面活性剂=i : o.05 i : 5。
4. 根据权利要求3所述的毛萼乙素纳米混悬剂干燥品，毛萼乙素与表面活性剂的重量比优选为i : o. i i : 2。
5. 根据权利要求3所述的毛萼乙素纳米混悬剂干燥品，其特征在于，包含如下重量百分比的组份毛萼乙素 0. 5 95%表面活性剂 0. 5 80% 附加剂 0 10% 干燥支架剂 0 95%。
6. 根据权利要求3所述的毛萼乙素纳米混悬剂干燥品，其特征在于，优选的，包含如下 重量百分比的组份毛萼乙素 3 80% 表面活性剂 3 70% 附加剂 0 5% 干燥支架剂 0 90%。
7. 根据权利要求3所述的毛萼乙素纳米混悬剂干燥品，其特征在于，最优选的，所述的 毛萼乙素纳米混悬剂干燥品，包含如下重量百分比的组份毛萼乙素 5 60% 表面活性剂 5 60% 附加剂 0 5% 干燥支架剂 0 90%。
8. 根据权利要求2 7任一项所述的毛萼乙素纳米混悬剂干燥品，其特征在于，所述的 表面活性剂包括离子型表面活性剂、非离子型表面活性剂或高分子表面活性剂中的一种以 上。
9. 根据权利要求8所述的毛萼乙素纳米混悬剂干燥品，其特征在于，所述离子型表面 活性剂选自卵磷脂或胆酸盐衍生物。
10. 根据权利要求9所述的毛萼乙素纳米混悬剂干燥品，其特征在于，所述卵磷脂优选 大豆卵磷脂或蛋黄卵磷脂，所述胆酸盐衍生物优选甘胆酸钠、脱氧胆酸钠或牛磺胆酸钠。
11. 根据权利要求8所述的毛萼乙素纳米混悬剂干燥品，其特征在于，所述非离子型表 面活性剂选自泊洛沙姆188、聚氧乙烯蓖麻油或吐温80中的一种以上。
12. 根据权利要求8所述的毛萼乙素纳米混悬剂干燥品，其特征在于，所述高分子表面 活性剂选自聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙二醇、白蛋白、纤维素衍生物或淀粉衍生物。
13. 根据权利要求3 7任一项所述的毛萼乙素纳米混悬剂干燥品，其特征在于，所述 附加剂为药学上可接受的抗氧剂、抑菌剂、离子络合剂、pH调节剂或渗透压调节剂中的一种以上。
14. 根据权利要求13所述的毛萼乙素纳米混悬剂干燥品，其特征在于，所述渗透压调 节剂选自葡萄糖、氯化钠、甘油中的一种以上。
15. 根据权利要求3 7任一项所述的毛萼乙素纳米混悬剂干燥品，其特征在于，所述 干燥支架剂选自糖类、多元醇或蛋白质中的一种以上。
16. 根据权利要求5 15任一项所述的毛萼乙素纳米混悬剂干燥品的制备方法，其特 征在于，包括如下步骤(1) 将毛萼乙素原料药粉碎成为粒径小于5 ii m的细粉；(2) 在搅拌下，将毛萼乙素细粉加入到含有表面活性剂、附加剂和干燥支架剂的水溶液中；所述水溶液中，表面活性剂的重量含量为0. 05 2% ;(3) 然后将步骤(2)的产物，进行剪切处理，形成混悬液；所述剪切处理指的是，将步骤(2)的产物置于剪切乳化器的小杯中，2000-10000rpm剪 切处理；(4) 将所述混悬液进行均质或超声粉碎，获得毛萼乙素纳米混悬剂；(5) 将获得的毛萼乙素纳米混悬剂经喷雾干燥或减压干燥或冷冻干燥，获得纳米混悬 剂干燥品。
17. 根据权利要求5 15任一项所述的毛萼乙素纳米混悬剂干燥品的制备方法，其特 征在于，包括如下步骤(1) 将毛萼乙素溶于可与水混溶的溶剂中，溶剂中毛萼乙素的重量含量为0. 5 5% ;(2) 在搅拌下，将所述毛萼乙素溶液与含有表面活性剂、附加剂和干燥支架剂的水溶液 混合，药物过饱和析出，获得混悬液；所述水溶液中，表面活性剂的重量含量为0. 05 2% ;毛萼乙素溶液水溶液的重量比为i : 4 i : 20;(3) 混悬液通过高压均质法或超声粉碎法进一步减小和匀化粒径；(4) 减压加热，温度为40 5(TC，挥去有机溶剂，得到纳米混悬剂；(5) 将获得的毛萼乙素纳米混悬剂经喷雾干燥或减压干燥或冷冻干燥，获得纳米混悬剂干燥品。
18. 根据权利要求5 15任一项所述的毛萼乙素纳米混悬剂干燥品的制备方法，其特征在于，包括如下步骤(1) 将毛萼乙素溶于与水不相混溶的有机溶剂中，获得有机相； 所述有机相中，毛萼乙素的重量含量为0. 5 20% ;(2) 将有机相加入到含有表面活性剂、附加剂和干燥支架剂的水溶液中，搅拌，获得乳液；所述水溶液中，表面活性剂的重量含量为0. 05 2% ;(3) 所述乳液经高压均质进一步减小或匀化粒径；(4) 减压加热，温度为40 50°C，除有机溶剂，得纳米混悬剂；(5) 将获得的毛萼乙素纳米混悬剂经喷雾干燥或减压干燥或冷冻干燥，获得纳米混悬 剂干燥品。
19.根据权利要求5 15任一项所述的毛萼乙素纳米混悬剂干燥品的制备方法，其特 征在于，包括如下步骤(1) 将毛萼乙素原料药分散在含有表面活性剂、附加剂和干燥支架剂的水溶液中； 所述水溶液中，表面活性剂的重量含量为0. 05 2% ;(2) 加入碾磨介质，所述碾磨介质选用直径为0. 2-2mm的玻璃珠、陶瓷珠、不锈钢珠或 聚苯乙烯树脂珠等，1000 5000转/分钟，搅拌碾磨30分钟 数小时，得到混悬液；(4) 混悬液经高压均质法或超声粉碎法进一步减小和匀化粒径，得到纳米混悬剂；(5) 将获得的毛萼乙素纳米混悬剂经喷雾干燥或减压干燥或冷冻干燥，获得纳米混悬 剂干燥品。
全文摘要
本发明公开了一种毛萼乙素纳米混悬剂及其制备方法，治疗有效量的毛萼乙素纳米混悬剂干燥品和水或其它可注射溶液，所述毛萼乙素纳米混悬剂干燥品，包括毛萼乙素、表面活性剂、附加剂及干燥支架剂，其中毛萼乙素与表面活性剂的重量比为毛萼乙素∶表面活性剂＝1∶0.05～1∶5。本发明解决了毛萼乙素的溶解度问题，制得的制剂可不含有机溶剂，表面活性剂用量小；纳米混悬剂还可以改变药物的体内分布，降低毒副作用；制得的纳米混悬剂干燥品，具有良好的稳定性。
文档编号A61K9/10GK101708158SQ20091020100
公开日2010年5月19日 申请日期2009年12月11日 优先权日2009年12月11日
发明者侯惠民, 夏怡然, 孙汉董, 普建新, 朱兆云, 王健, 陈芳 申请人:上海现代药物制剂工程研究中心有限公司;中国科学院昆明植物研究所;云南省药物研究所