专利名称：一种双醛羧甲基纤维素-胶原冷冻凝胶及其制备方法
技术领域：
本发明涉及生物医用材料的制备领域，具体而言，涉及一种具有良好的具有多孔 性、亲水性、吸水保水性的双醛羧甲基纤维素一胶原冷冻凝胶及其制备方法。
背景技术：
水凝胶是一种类似生命组织的高分子材料，由在水中不溶解但可溶胀的高分子网 络及水组成，因而具有可成型性、吸湿性、成膜性、粘结性、热容量大等性能，广泛应用于生 物支架、细胞培养、药物控释、组织工程和创伤、烧伤治疗及止血等生物医用领域，其中应用 于组织工程的水凝胶主要分为两大类合成高分子水凝胶和天然高分子水凝胶。胶原是细胞外基质(ECM)的一种结构蛋白质，分子中至少应该有一个结构域具有 a-链组成的三股螺旋构象(即胶原域)。胶原因为自身的特殊性质如低免疫原性、生物相 容性、止血作用、可生物降解性和良好的细胞基质间相互作用，在生物医学领域有着十分广 阔的应用前景。但是由于胶原自身机械性能和可塑性不足；热稳定性差，不能长期保存；对 生物降解的耐受性较差，在体内降解过快，难以与新生组织的生长相匹配，其应用范围因不 能满足某些生物医用材料的功能性需求而受到较大限制。因此，通常使用的胶原基生物材 料都要经过物理或化学方法交联改性，以改善胶原的物化和生物学方面的性能。常见的胶原改性方法主要有物理交联和化学交联。物理交联法主要有真空干热交 联、辐射交联等。这类方法的特点是在交联过程中无需引入其他物质，也不会破坏胶原基材 料的生物相容性，但是单纯的物理交联达不到所要求的交联度，而且过量或长时间的紫外 线或、射线辐照(CN1944495A)会导致胶原构象改变甚至使胶原降解。化学交联法应用 较多的化学交联剂主要是戊二醛、碳化二亚胺类和双环氧类化合物。传统的纯化学交联法 对于交联度的调控比较困难，不能满足再生速率不同的各种组织材料的要求，而以戊二醛 (CN1387923A)做交联剂改性的胶原不会改变胶原的基本构象及基本生物学功能，但由于醛 与胶原的反应过程可逆，生成schiff碱的结构不稳定，很容易在体内水解产生具有代谢毒 性的游离小分子醛。此外，常用的改性方法还有以胶原与其它天然高分子材料共混进行改性，如胶 原一壳聚糖共混(CN1584150A)。虽然共混改性能够借助氢键等次价键改善胶原的强度，并 增添了许多胶原不具有的优良性质，但是该方法改性的胶原在力学性能、热稳定性、抗酶降 解性等方面仍然不能满足组织工程支架的要求。而以胶原与多糖衍生物共混是目前较好的 一种改性方法，如双醛淀粉一胶原冷冻凝胶(CN101234216A)。双醛淀粉具有生物可降解性 和低毒性，能够与胶原发生交联改性，有效的提高了胶原基材料的机械性能和热稳定性，且 使用冷冻凝胶技术使制备的凝胶具有多孔性，利于细胞的吸附和生长。不过双醛淀粉的反 应活性偏低，改性时用量偏大，在一定程度上降低了凝胶的生物相容性。双醛羧甲基纤维素(CN101250827A)是以羧甲基纤维素钠为原料，采用高碘酸盐 制备的新型高分子材料，具有无毒性、生物可降解性和生物相容性等优良的生物学性能，而 且分子结构中含有大量的反应基团醛基，与胶原的反应活性高，因此可以在胶原基材料中
3做交联剂。目前为止，尚未有专利和文献对双醛羧甲基纤维素一胶原冷冻凝胶研究的报道。
发明内容
单纯的胶原凝胶力学性能差、热稳定性低和抗酶降解性能弱，不能满足材料的使 用性能，而且传统改性方法会降低胶原凝胶生物相容性的特点，为此本发明提供了一种双 醛羧甲基纤维素一胶原冷冻凝胶及其制备方法。本发明通过以下技术方案实现，除特别说明外，所涉及的份数均为重量份数，百分 比均为重量百分数一种双醛羧甲基纤维素一胶原冷冻凝胶及其制备方法，其特征是将质量分数为 (1 3) %的胶原溶液和质量分数为(0. 01 1) %的双醛羧甲基纤维素溶液混合均勻，然后 注入模具中于一40 0°C贮藏1 7天，取出缓慢解冻即得到双醛羧甲基纤维素一胶原冷 冻凝胶。在上述技术案中，所述冷冻凝胶中双醛羧甲基纤维素和胶原的比例按干重计为 1 (100 10000)，优选范围为 1 (500 5000)。在上述技术案中，所述胶原为从健康动物皮或腱中提取的，三股螺旋结构保持完 好的胶原。在上述技术案中，所述双醛羧甲基纤维素为以羧甲基纤维素钠为原料，采用高碘 酸或高碘酸盐氧化制备，醛基含量为(30 92) %的双醛羧甲基纤维素。在上述技术案中，所述混合溶液注入模具中于-25 -10°C贮藏3 7天。在上述技术案中，所述冷冻凝胶可用于生物支架、细胞培养、药物控释、组织工程、 创伤和烧伤治疗。本发明与已有技术相比，具有多方面的积极效果和优点，具体可归纳概括如下(1)本发明中使用的交联剂是双醛羧甲基纤维素。双醛羧甲基纤维素反应活性 高，微量的双醛羧甲基纤维素即可使胶原的力学性能、热稳定性和抗酶降解性得到较大的 改善。除了其本身具有的无毒性、生物可降解性和生物相容性等优良的生物学性能外，采用 它制备的双醛羧甲基纤维素一胶原冷冻凝胶可避免游离小分子醛造成的代谢毒性现象，而 且所制得的冷冻凝胶主体为胶原，使其具有更高的生物相容性。(2)本发明采用冷冻凝胶技术使制备的双醛羧甲基纤维素一胶原冷冻凝胶具有多 孔性结构和亲水性，从而具备了良好的吸水保水性，也便于细胞的吸附和生长，适用于组织 工程材料。(3)本发明采用冷冻凝胶技术，以生物学性能优良的双醛羧甲基纤维素交联胶原 制备冷冻凝胶，改善了胶原基凝胶的力学性能、热稳定性和抗酶降解性能，使其生物降解吸 收的速度可控；且低温条件下避免了胶原的热变性，更好的保持了胶原的天然结构和优良 的生物活性。(4)本发明所使用的结构保持完好的胶原可以从健康的家畜动物皮或腱中经酶法 提取，来源广泛而且价格低廉，最终形成的双醛羧甲基纤维素一胶原冷冻凝胶适用于生物 医药领域，可作为表面伤口敷料或体内组织工程材料等，具有较高的附加值。本发明还具有一些其他方面的优点。
具体实施例方式
下面给出本发明的两个实施例，通过实施例对本发明进行具体描述。有必要在此 指出的是，实施例只用于对本发明进行进一步的说明，不能理解为对本发明保护范围的限 制，该领域的技术熟练人员可以根据上述本发明的内容做出一些非本质的改进和调整。在以下实施例中，除特别说明外，所涉及的份数均为重量份数，百分比均为重量百 分数。实施例1以新鲜健康的猪皮为原料，采用酶法提取制备三股螺旋结构保存完好的胶原，再 经透析、冻干处理后即制备得到胶原干品。以羧甲基纤维素钠为原料，高碘酸钠为氧化剂，两者比例为1 1，在35°C、pH值 3. 0条件下反应约4hrs，经过醇沉、洗涤、干燥和粉碎后制得醛基含量为73. 85%的双醛羧 甲基纤维素。称取10份胶原干品添加到990份的水中，10°C左右下不断搅拌约Shrs得到质量 分数约为胶原溶液。同时称取1份双醛羧甲基纤维素添加到999份的水中，25°C左右 不断搅拌约8hrs，得到质量分数约为0. 双醛羧甲基纤维素溶液。在室温下，按双醛羧甲 基纤维素与胶原干重比为1 1000的比例共混，并加入与胶原溶液等份的水不断搅拌约 8min，得到浓度以胶原干品重量计约为0.5%的双醛羧甲基纤维素和胶原的共混液。之后将 双醛羧甲基纤维素和胶原混合液注入模具，放置在低温反应器内，在_15°C左右下保持约7 天。然后将模具取出，在室温下缓慢融化，即得到双醛羧甲基纤维素一胶原冷冻凝胶。实施例2以新鲜健康的牛跟腱为原料，采用酶法提取制备三股螺旋结构保存完好的胶原， 再经透析、冻干处理后即制备得到胶原干品。以羧甲基纤维素钠为原料，高碘酸钠为氧化剂，两者比例为1 1，在35°C、pH值
2.0条件下反应约4hrs，经过醇沉、洗涤、干燥和粉碎后制得醛基含量为91. 37%的双醛羧
甲基纤维素。称取10份胶原干品添加到990份的水中，10°C左右下不断搅拌约12h得到质量分 数约为胶原溶液。同时称取1份纯化的双醛羧甲基纤维素添加到999份的水中，25°C左 右不断搅拌约lOhrs，得到质量分数约为0. 双醛羧甲基纤维素溶液，在室温下，按双醛 羧甲基纤维素与胶原干重比为1 2000的比例共混，并加入与胶原溶液等份的水不断搅拌 约lOmin，得到浓度以胶原干品重量计约为0. 5%的双醛羧甲基纤维素和胶原共混液。之后 将双醛羧甲基纤维素和胶原混合液注入模具，放置在低温反应器内，在-20°C左右下保持约 5天，然后将模具取出，在室温下缓慢融化，即得到双醛羧甲基纤维素一胶原冷冻凝胶。实施例3以新鲜健康的牛跟腱为原料，采用酶法提取制备三股螺旋结构保存完好的胶原， 再经透析、冻干处理后即制备得到胶原干品。以羧甲基纤维素钠为原料，高碘酸钠为氧化剂，两者比例为10 9，在45°C、pH值
3.O条件下反应约4hrs，经过醇沉、洗涤、干燥和粉碎后制得醛基含量为56. 85%的双醛羧 甲基纤维素。称取10份胶原干品添加到990份的水中，10°C左右下不断搅拌约12hrs得到质量分数约为胶原溶液。同时称取10份双醛羧甲基纤维素添加到990份的水中，25°C左 右不断搅拌约lOhrs，得到质量分数约为双醛羧甲基纤维素溶液，在室温下，按双醛羧 甲基纤维素与胶原干重比为1 1 00的比例共混，并加入与胶原溶液等份的水不断搅拌约 5min，得到浓度以胶原干品重量计约为0. 5%的双醛羧甲基纤维素和胶原共混液。之后将 双醛羧甲基纤维素和胶原混合液注入模具，放置在低温反应器内，在_15°C左右下保持约3 天，然后将模具取出，在室温下缓慢融化，即得到双醛羧甲基纤维素一胶原冷冻凝胶。
权利要求
一种双醛羧甲基纤维素—胶原冷冻凝胶及其制备方法，其特征是将质量分数为(1～3)％的胶原溶液和质量分数为(0.01～1)％的双醛羧甲基纤维素溶液混合均匀，然后注入模具中于-40～0℃贮藏1～7天，取出缓慢解冻即得到双醛羧甲基纤维素—胶原冷冻凝胶。
2.根据权利要求1所述，其特征是所述冷冻凝胶中双醛羧甲基纤维素和胶原的比例按 干重计为1 (100 10000)。
3.根据权利要求1所述，其特征是所述冷冻凝胶中双醛羧甲基纤维素和胶原的比例按 干重计为1 (500 5000)。
4.根据权利要求1所述，其特征是所述胶原为从健康动物皮或腱中提取的，三股螺旋 结构保持完好的胶原。
5.根据权利要求1所述，其特征是所述双醛羧甲基纤维素为以羧甲基纤维素钠为原 料，采用高碘酸或高碘酸盐氧化制备，醛基含量为(30 92) %的双醛羧甲基纤维素。
6.根据权利要求1所述，其特征是所述混合溶液注入模具中于-25 -10°C贮藏3 7天。
7.根据权利要求1所述，其特征是所述冷冻凝胶可用于生物支架、细胞培养、药物控 释、组织工程、创伤和烧伤治疗。
全文摘要
本发明提供了一种双醛羧甲基纤维素-胶原冷冻凝胶及其制备方法。本方法首先将质量分数为(1～3)％的胶原水溶液和质量分数为(0.01～1)％的双醛羧甲基纤维素水溶液混合均匀，然后将混合溶液注入模具，在-40～0℃的低温反应器中贮藏1～7天，取出后缓慢解冻即得到双醛羧甲基纤维素-胶原冷冻凝胶。本发明制备的双醛羧甲基纤维素-胶原冷冻凝胶，在保持胶原凝胶本身的生物活性的同时，改善了凝胶的力学性能、热稳定性、抗酶降解性。该冷冻凝胶具有多孔性、亲水性、吸水保水性等优点，可广泛应用于生物支架、细胞培养、药物控释、组织工程、创伤和烧伤治疗等生物医用领域，具有很好的市场应用前景。
文档编号A61L27/24GK101845226SQ201010148578
公开日2010年9月29日 申请日期2010年4月15日 优先权日2010年4月15日
发明者李宏利, 李德富, 李昌朋, 林炜, 穆畅道 申请人:四川大学