专利名称：：一种防治老年痴呆症的药物组合物的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种用于防治老年痴呆症的药物组合物。
背景技术：
：随着全世界向老龄社会进入步伐的不断加快，各种神经退行性老年疾病，如轻度认知障碍、老年痴呆等疾病已经成为威胁人类晚年健康，降低老年人生活质量的重要危险因素，给社会及家庭带来了严重的经济负担和沉重的精神压力。因此，开发改善认知功能障碍，治疗老年痴呆症的药物成为全球各国医疗工作者的研究重点，受到中西方医学界的高度重视。西方医药界研究抗轻度认知障碍及以阿尔茨海默病为主的老年痴呆药物的思路主要围绕四抗(抗炎、抗氧化、抗胆固醇、抗淀粉样蛋白)和两拟(拟胆碱和拟谷氨酸)来进行，目前美国食品药品管理局批准的治疗阿尔茨海默病(AD)的药物包括他克林、多奈哌齐、利凡斯的明、加兰他敏和美金刚等，这些药物虽能短期内改善痴呆患者的症状，但不能延缓疾病的发展，并且其中有些药物对肝脏还具有较强的毒副作用，目前几乎不使用，有些药物价格昂贵，患者及其家属难以承受，因此，急需要开发有良好疗效，副作用少，且价格便宜的新型药物。现代医学中的轻度认知功能障碍、老年痴呆等类疾病大概涵盖于传统中医中“痴呆”、“善忘”、“郁证”、“颤震”、“颤证”、“振掉”等衰老性疾病范畴。概“夫精者，生之本也”(《素问金匮真言论》)，因此，中医认为肾中精气充足与否是决定人体是否衰老的主要条件。而“痴呆”、“善忘”等类的衰老性疾病，多因肾精亏损，脑髓虚空成病，因此多采取补肾益精法进行治疗。
发明内容本发明的目的是提供一种预防和/或治疗老年痴呆症的药物组合物。本发明所提供的药物组合物，由下述质量份的原料组成金丝桃苷10-40、淫羊藿苷20-80和五味子乙素5-20。本发明的药物组合物可进一步由下述质量份的原料组成金丝桃苷18-23、淫羊藿苷35-42和五味子乙素8-12。本发明中所用的原料金丝桃苷，又名槲皮素-3-0-β-D-吡喃半乳糖苷，属于黄酮醇苷类化合物，其化学结构式如式1所示。该化合物广泛存在于各种植物体内，如金丝桃科、蔷薇科、桔梗科、唇形科、杜鹃花科、葵科、藤黄科、豆科以及卫矛科等的果实与全草中，故可从植物中提取得到，如从菟丝子中提取得到金丝桃苷。也可按照现有技术中公开的方法合成得到，或通过商业途径获得。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>本发明中所用的原料淫羊藿苷，其化学结构式如式2所示。该化合物广泛存在于小檗科植物淫羊藿(EpimediumgrandiflorumMorr.)的茎叶，朝鲜淫羊藿(E.koreanumNakai)，心叶淫羊藿(E.brevicornumMaxim.)等植物中，故可从上述植物中提取得到。也可按照现有技术中公开的方法合成得到，或通过商业途径获得。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>本发明中所用的原料五味子乙素，其化学结构式如式3所示。该化合物可从五味子中提取的得到，也可按照现有技术中公开的方法合成得到，或通过商业途径获得。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>本发明的再一个目的是提供所述药物组合物的应用。本发明所提供的药物组合物的应用是该组合物在制备预防和/或治疗老年痴呆症药物中的应用或在制备改善认知功能障碍药物中的应用。所述老年痴呆症具体可为阿尔茨海默病。同时，以本发明所提供的药物组合物为活性成分制成的预防和/或治疗老年痴呆症的药物以及改善认知功能障碍药物也属于本发明的保护范围。所述药物可通过口服、外用、注射、渗透、吸收、物理或化学介导的方法导入机体如肌肉、皮内、皮下、静脉或粘膜组织；或是被其它物质混合或包裹后导入机体。需要的时候，在上述药物中还可以加入一种或多种药学上可接受的载体。所述载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体及润滑剂等。该药物可以制成药学上可接受的任何剂型，如片剂、注射剂、胶囊剂、颗粒剂、丸齐U、微丸、散剂、滴丸剂、汤剂、糖浆剂、合剂、煎膏剂和浸膏剂等。上述各种剂型的药物均可以按照中药制剂的常规方法制备。上述预防和/或治疗老年痴呆症的药物的使用剂量和使用方法取决于诸多因素，包括患者的年龄、体重、性别、自然健康状况、营养状况、化合物的活性强度、服用时间、代谢速率、病证的严重程度以及诊治医师的主观判断。本领域的技术人员根据上述因素可以容易地决定药物组合物使用剂量和使用方法。试验证明经过大鼠定位航行及空间探索实验，本发明的总黄酮和总多糖组合物组可以提高AD(阿尔茨海默病)模型大鼠的空间学习记忆能力一缩短其逃避潜伏期和搜索距离且显著增加空间探索实验中原平台所在象限搜索时间和距离占总时间和距离的百分比。进而表明本发明的药物组合物可用于治疗老年痴呆症，尤其治疗老年痴呆症前期(如阿尔茨海默痴呆前期)，改善患者认知功能障碍，延缓患者大脑萎缩的发展，提高患者记忆力，尤其是肾虚精亏型痴呆前期患者，补肾益精生髓为该药物组合物的最大特点。具体实施例方式下面通过具体实施例对本发明进行说明，但本发明并不局限于此。下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和生物材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。下述实施例中所用的原料来源如下淫羊藿苷天津一方科技有限公司，BBT00838金丝桃苷天津一方科技有限公司，BBT00398五味子乙素中国药品生物制品检定所，110765-200205。实施例1、制备药物组合物的胶囊剂按照下述质量份称取各原料金丝桃苷20、淫羊藿苷40、五味子乙素10；将上述药物混合后按照常规的胶囊剂的制备工艺加入常规辅料制成。实施例2、制备药物组合物的片剂按照下述质量份称取各原料金丝桃苷40、淫羊藿苷20、五味子乙素15；将上述药物混合后按照常规的片剂的制备工艺加入常规辅料制成。实施例3、制备药物组合物的胶囊剂按照下述质量份称取各原料金丝桃苷10、淫羊藿苷80、五味子乙素5；将上述药物混合后按照常规的胶囊剂的制备工艺加入常规辅料制成。实施例4、制备药物组合物的口服液按照下述质量份称取各原料金丝桃苷20、淫羊藿苷80、五味子乙素20；将上述药物混合后按照常规的口服液的制备工艺加入常规辅料制成。实施例5、本发明的药物组合物对于痴呆大鼠学习记忆能力的影响1、材料1.1动物SD雄性大鼠(SPF等级)，体重285315g，由中国军事医学科学院科学实验动物中心提供(许可证号SCXK-军-2007-004)。1.2试剂药物1)试验药物按金丝桃苷、淫羊藿苷、五味子乙素以质量比204010的比例配伍得组合物A；按金丝桃苷、淫羊藿苷、五味子乙素以质量比20400.4的比例配伍得组合物B;2)阳性对照药选用石杉碱甲片，河南太龙药业产品，批号H10940156；3)Αβ25_35购自Sigma公司，无菌生理盐水溶解配制成5μg/ml，37°C老化7天，-20°C保存备用。1.3实验仪器SN_3N脑立体定位仪(日本Narishige)，DMS_2Morris水迷宫系统(中国医学科学院药物研究所)。2、方法2.1构建AD模型大鼠大鼠适应性喂养3d后，用2%戊巴比妥钠腹腔麻醉(4050mg/kg体重)，固定于脑立体定位仪上，头顶部被皮，碘酊消毒后切开皮肤，参照包新民的《大鼠脑立体定位图》，选择右侧侧脑室为注射靶区，于前囟向后1.0mm、中线旁开1.7mm处，用三棱针钻开颅骨，暴露硬脑膜，再用5μ1微量注射器自脑表面垂直进针4.Omm,将IOmMAβ25-35溶液5μ1缓慢注入(注入时间不少于5min)，留针2min后缓慢撤针，缝合伤口；假手术组钻开颅骨后即缝合伤口。各组动物术后常规腹腔注射苄星青霉素抗感染。待动物清醒后治疗组即开始灌胃给药。2.2给药方法分组采用随机数字表法将大鼠分为四个组空白对照组，模型组，组合物A组，组合物B组，石杉碱甲片为阳性药对照组。每组6只。用药量为成人临床剂量的20倍药物组合物15mg·Kg"1·cf1，石杉碱甲片20mg·Kg—1·cf1。诸药均以蒸馏水配成溶液给大鼠灌胃，每日1次，每次2ml，空白对照和模型组则以等体积蒸馏水灌胃，连续15d后进行水迷宫实验。2.3行为学实验方法水迷宫由圆形水池、黑色平台和记录系统3部分组成。水池直径(120X50X30)cm；水池用墨水染成黑色，水温保持在22°C-26°C；水池放在1间小屋的中央。池壁上随意挂两个物体作为近距离视觉暗示，室内的门、窗、柜组、摄像头等构成远距离视觉暗示。平台没于水下2cm，上面有几个小孔以提供一个大鼠容易站稳的表面。水迷宫测试包括连续5d的定位航行试验(placenavigation)和一次空间探索试验(spatialprobetest)。定位航行试验试验前Id将大鼠放入水池中(不放入平台)自由游泳2min，使其熟悉迷宫内的环境。试验历时5d，每天分上、下午两个时间段，每个时间段测试4次，每天共8次。测试开始时，将平台放在近端的象限中点，平台隐藏于水面下1cm，沿水池的4个象限中部的池壁将大鼠面向池壁轻巧地放入水池，自动摄像系统记录大鼠寻找平台的时间(逃避潜伏期)和游泳途径(过程)，电脑自动记录上述数据；设定120s为最长逃避潜伏期，120s后自动停止记录。如果大鼠在120s内找到平台，记录其实际逃避潜伏期；如果在120s未找到平台，由实验者将其引上平台并停留10s，逃避潜伏期记为120s。空间探索试验第6d撤除平台，让大鼠自原平台对侧象限盆壁的中点入水自由游泳120s，记录其游泳轨迹，软件分析计算动物在各象限所用时间和各象限轨迹长度。计算动物在原平台所在象限游泳时间占逃避潜伏期的百分比，在原平台象限的轨迹长度占搜索距离的百分比。2.4统计方法统计学处理数据以均数士标准差(〒±s)表示，采用SPSS10.0统计分析软件。定位航行实验采用多元方差分析(M-ANOVA)，空间探索实验采用单因素方差分析(OneWayAN0VA)，组间两两比较采用LDS法。3、结果3.1药物组合物对AD模型大鼠定位航行试验逃避潜伏期的影响表1、各组对AD大鼠定位航行实验中逃避潜伏期和搜索距离的影响(J±^n=6)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注与模型组比较"P<0.05表2、各组对AD大鼠空间探索实验中在原平台所在象限搜索时间及距离的百分比的影响(3f±5，n=6)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注与模型组比较2)P<0.01；与空白对照组比较3)P<0.01结果表明经过大鼠定位航行及空间探索实验，金丝桃苷、淫羊藿苷和五味子乙素组合物A可以提高AD模型大鼠的空间学习记忆能力一缩短其逃避潜伏期和搜索距离且显著增加空间探索实验中原平台所在象限搜索时间和距离占总时间和距离的百分比。实施例6、药物组合物对于痴呆大鼠在体长时程增强的影响1、材料1.1动物同实施例5。1.2试剂药物同实施例5。1.3实验仪器SN_3N脑立体定位仪(日本Narishige)，VC-Il记忆示波器(日本NihonKonden),SEN-7203三道电子刺激器(日本NihonKonden)，SS-202J刺激隔离器(日本NihonKonden)。2、方法2.1构建AD模型大鼠同实施例5。2.2给药方法同实施例5。2.3电生理学实验方法(1)电极的埋植以20%乌拉坦(urethane，1.2g/kg，ip.)麻醉动物，并固定于立体定位仪上，电极定位参照pellegrino大鼠脑图谱，双极刺激电极埋植于内嗅区前穿通纤维(perforantpath,PP)，其定位坐标为AP-7.5mm,L4.2mm,H3.Omm；记录电极坐标为AP-3.8mm,L2.5mm,H3.5mm，位于同侧海马齿状回的颗粒细胞层。在上述坐标部位钻一直径为1.5mm的小孔，分别埋植记录电极及刺激电极，调整刺激电极和记录电极的位置，找到以固定强度的刺激记录到最大的群峰电位(p0pulati0nspike，PS)时将电极固定。(2)诱发电位的记录和观测采用细胞外记录方法。测试刺激(频率为1/30HZ，波宽为0.Ims的方波)由电子刺激器产生后，经刺激隔离器和刺激电极输向PP，诱发的动作电位经生物放大器在记忆示波器上显示，并同时输入计算机进行分析、记录PS幅值，作为DG颗粒细胞群兴奋性的指标。调整刺激强度，采用引起最大PS幅值所需刺激强度的1/2作为测试刺激强度，整个实验过程中测试刺激强度参数恒定不变。(3)HFS参数海马齿状回的颗粒细胞层LTP是由10串200Hz的HFS所诱导，每串刺激由5个波宽0.Ims的方波刺激组成，刺激间隔为200ms，刺激强度与测试刺激相同。(4)数据的采集每个测试刺激都诱发出一个PS，将连续10个PS幅值叠加后的平均值作为一个时间点的PS幅值，以给药前30min所测得6个时间点的PS幅值的平均值作为自身基础突触传递水平，每个时间点的突触传递水平以与基础突触传递水平比较得出的相对值(％)表示。2.5统计方法统计学处理电生理学按下式计算PS增加幅度PS增加幅度=(给药后某时间点的PS幅值-给药前的PS幅值)/给药前的PS幅值。t检验用于组间比较。P<0.05为差异有统计学意义。3、结果表3高频刺激后各组PS幅度增强的比较(无±s，n=6)_组别PS增幅(％)_空白对照组220·8±3·6αα#模型组173.4士4.5石杉碱甲组210.3士4·药物组合物A组197.15士4·55α**药物组合物B组178.8士4.67_注与模型组比较，AP<0.05,AAP<0.01；与总方组比较，#Ρ<0.01；与空白对照组比较，*Ρ<0.05，<0·01。如表3所示，各组动物在高频刺激后PS的幅度都较刺激前增加，表明各组动物海马齿状回都有LTP的形成。模型组PS虽然有一定的增强，但明显低于空白对照组(P<0.01)；石杉碱甲组高频刺激后PS幅度增强明显大于模型组(P<0.01)，药物组合物A组与模型组比较，幅度也有增加(P<0.05)，药物组合物B组增长幅度与模型组比较无统计学意义。权利要求一种预防和/或治疗老年痴呆症的药物组合物，由下述质量份的原料组成金丝桃苷10-40、淫羊藿苷20-80和五味子乙素5-20。2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述药物组合物由下述质量份的原料组成金丝桃苷18-23、淫羊藿苷35-42和五味子乙素8_12。3.根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于所述药物组合物由下述质量份的原料组成金丝桃苷20、淫羊藿苷40和五味子乙素10。4.一种预防和/或治疗老年痴呆症药物，其活性成分为权利要求1-3中任一所述的药物组合物。5.根据权利要求7所述的药物，其特征在于所述药物的剂型为药学上可接受的任意一种剂型；优选为口服剂型。6.一种改善认知功能障碍药物，其活性成分为权利要求1-3中任一所述的药物组合物。7.根据权利要求6所述的药物，其特征在于所述药物的剂型为药学上可接受的任意一种剂型；优选为口服剂型。8.权利要求1-3中任一所述的药物组合物在制备下述药物中的应用1)预防和/或治疗老年痴呆症药物，所述老年痴呆症优选为阿尔茨海默痴呆症；2)改善认知功能障碍药物；3)提高阿尔茨海默痴呆症模型大鼠空间学习记忆能力药物。9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于所述老年痴呆症为阿尔茨海默痴呆症。10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于提高所述空间记忆学习能力表现为在定位航行试验中缩短其逃避潜伏期和搜索距离，且增加空间探索实验中原平台所在象限搜索时间占总时间的百分比，以及搜索距离占距离的百分比。全文摘要本发明公开了一种预防和/或治疗老年痴呆症的药物组合物。该组合物是由下述质量份的原料组成金丝桃苷10-40、淫羊藿苷20-80和五味子乙素5-20。试验证明经过大鼠定位航行及空间探索实验，本发明的药物组合物可以提高AD(阿尔茨海默病)模型大鼠的空间学习记忆能力--缩短其逃避潜伏期和搜索距离且显著增加空间探索实验中原平台所在象限搜索时间和距离占总时间和距离的百分比。因此表明该提取物组合物可用于预防或治疗老年痴呆症。文档编号A61P25/28GK101797267SQ20101016123公开日2010年8月11日申请日期2010年4月28日优先权日2010年4月28日发明者刘庚信,富宏,张泰,曾克武,李娌,杨金霞,王学美,黎巍威申请人:北京大学第一医院