专利名称：黄柏多糖提取物及其制备方法和医药用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种中药有效部位提取物，尤其涉及黄柏多糖提取物及其制备方法， 本发明还涉及该黄柏多糖提取物作为免疫抑制剂治疗与免疫有关的免疫炎性损伤性疾病 如肾炎、咽炎、肺炎、上呼吸道感染、肝炎、肠炎、妇科炎症、类风湿性关节炎、糖尿病等免疫 相关性疾病的医药用途，属于中药有效部位提取物领域。
背景技术：
黄柏是芸香科植物黄皮树(Phellodendron Chinense Schneid.)及黄柏树 (P. AmurenseRupr.)除去栓皮的干燥树皮，前者习称“川黄柏”，后者习称“关黄柏”。本品始 载于《神农本草经》，原名“檗术”，列上品。“主五脏肠胃中结热、黄疸、肠痔、止泻痢、女子漏 下赤白、阴伤蚀疮”是我国传统医学中一种重要的常用中药材。统理论认为具有清热燥湿、 泻火解毒、治湿热引起的痢疾、黄疸、白带、痔疮便血、阴虚火旺引起的骨蒸痨热、目赤耳鸣、 盗汗、口舌生疮等功效。现代药理学研究发现黄柏在降血糖、抗癌、抑制免疫、降血压、抗菌、 抗炎、解热、抗溃疡、抗氧化、抗痛风、抗病毒等方面具有良好的功效。目前对黄柏化学成分 的研究主要集中于黄柏中的小檗碱、黄酮类成分上，黄柏多糖尚无人重视，研究甚少。近年 来本课题组对一直被研究者所忽视的黄柏多糖的药理研究结果显示，黄柏多糖具有确切的 免疫抑制活性，为黄柏中的重要活性物质，可以阐明黄柏多方面的药效，并通过免疫抑制作 用机制，用于各种与免疫有关的免疫损伤性疾病如肾炎、肝炎、肺炎、糖尿病、妇科炎症、咽 炎、肠炎、类风湿性关节炎、哮喘等的治疗。至此，黄柏多糖发挥免疫抑制活性用于该类疾病 的治疗还未见报道。
发明内容
本发明目的之一是提供一种具有免疫抑制活性的黄柏多糖提取物。本发明目的之二是提供一种上述黄柏多糖提取物的制备方法，黄柏多糖的含量占 提取物重量百分比的65 %以上。本发明目的之三是将上述黄柏多糖提取物制成各种剂型的免疫抑制剂，用于与免 疫有关的免疫炎性损伤性疾病如肾炎、肝炎、肺炎、妇科炎症、咽炎、肠炎、糖尿病、类风湿性 关节炎、哮喘等的医药用途。本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的本发明的一个目的是提供一种具有免疫抑制活性的黄柏多糖提取物，本发明通过 深入的化学、药理学、药效学研究，确定黄柏多糖为免疫抑制活性部位，具有显著的免疫抑 制活性，用于与免疫相关的各种疾病的治疗用途，包括治疗过肾炎、咽炎、肺炎、上呼吸道感 染、肝炎、肠炎、妇科炎症、类风湿性关节炎、糖尿病等免疫相关性疾病。本发明的另一个目的是提供一种上述黄柏多糖提取物的制备方法，以葡萄糖 (C6H12O6)计，所述黄柏多糖的含量占提取物重量百分比的65%以上。其提取方法主要包括 以下步骤
(1)将黄柏用高浓度乙醇回流脱脂；( 残渣加水回流提取，滤液浓缩，加入乙醇 醇沉，离心得沉淀；C3)沉淀依次用无水乙醇，丙酮分别洗涤；(4)洗涤后的沉淀用蒸馏水复 溶，透析；( 透析液浓缩，加入乙醇醇沉，离心得沉淀；(6)沉淀依次用无水乙醇，丙酮分别 洗涤；(7)洗涤后的沉淀用蒸馏水复溶，采用弱酸弱碱型阴、阳离子交换树脂串联法，脱去 多糖中的色素和蛋白质，即得黄柏多糖提取物。为了达到更好的提取效果，优选的，步骤(1)中将黄柏用6 10倍重量的80-95% 乙醇回流脱脂2 4次，每次回流2- ；步骤O)中将残渣加6-10倍重量的蒸馏水回 流提取2-4次，每次回流提取2- ；将滤液浓缩至药材0. 2-1. 0倍体积，加入80-95 % 乙醇醇沉，离心得沉淀；步骤(3)、(6)中将沉淀依次用2-4倍重量的无水乙醇，2-4倍重 量的丙酮分别洗涤；步骤中的沉淀以0.5-2倍重量的蒸馏水复溶，以分子量大小为 3. OXlO3-L 2 X IO4 的透析袋透析 24-72h。本发明的目的还包括将上述黄柏多糖提取物制成各种剂型的免疫抑制剂，用于与 免疫有关的免疫炎性损伤性疾病如肾炎、咽炎、肺炎、上呼吸道感染、肝炎、肠炎、妇科炎症、 类风湿关节炎、糖尿病等的医药用途。本发明黄柏多糖提取物可以加入制备不同剂型时所需的各种辅料和药学上可接 受的载体、赋形剂或稀释剂后，以常规的中药制剂方法制备成任何一种适宜的临床制剂，例 如可以是注射剂(粉针、冻干粉针、水针、输液等)、口服制剂(片剂、口服液、颗粒剂、胶囊 剂、软胶囊或滴丸)等。
具体实施例方式下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而 更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术 人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式 进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。实施例1取干燥至恒重的黄柏粉末(60°C条件下干燥8h)约500g，用95%乙醇回流提取3 次，每次池，用亚麻布抽滤，将滤渣至通风处自然晾干，残渣加蒸馏水6倍量，回流提取3次， 每次池，用亚麻布抽滤，合并滤液，减压回收溶剂至药材0. 5倍体积，用95 %乙醇调至含醇 量为80%，静置过夜，2000rpm每分钟离心，沉淀依次用3倍量无水乙醇、丙酮洗涤，蒸馏水 复溶，经过弱酸弱碱型阴、阳离子交换树脂脱去总多糖中色素和蛋白质冷冻干燥得黄柏粗 多糖。取粗多糖加水溶解，上清液装入透析袋中透析Mh，透析液减压浓缩至药材0. 5体积， 加入95%乙醇调含醇量为80%，静置过夜，2000rpm每分钟离心，沉淀用3倍量无水乙醇、丙 酮依次洗涤，得精制黄柏多糖。用DNS比色法，722型可见分光光度计在480nm处，测定黄柏 多糖含量，以葡萄糖计为70%。实施例2取干燥至恒重的黄柏粉末(60°C条件下干燥8h)约500g，用80%乙醇回流提取2 次，每次3h，用亚麻布抽滤，将滤渣至通风处自然晾干，残渣加蒸馏水10倍量，回流提取2 次，每次池，用亚麻布抽滤，合并滤液，减压回收溶剂至药材1倍体积，用100%乙醇调至含 醇量为85 %，静置过夜，2000rpm每分钟离心，沉淀依次用4倍量无水乙醇、丙酮洗涤，蒸馏水复溶，经过弱酸弱碱型阴、阳离子交换树脂脱去多糖中色素和蛋白质冷冻干燥，得多糖。 用DNS比色法，722型可见分光光度计在480nm处，测定黄柏多糖含量，以葡萄糖计为65 %。实施例3制成输液剂取实施例1所制备的黄柏多糖提取物适量，加入适量增溶剂，研磨，再加入少量注 射用水进行稀释，混勻，然后加入氯化钠适量，溶解后再加注射用水至规定量，滤过，灌封， 灭菌，即得。实施例4制成片剂取实施例3所制备的黄柏多糖提取物适量，加入稀释剂、崩解剂等辅料适量，混 勻，制成颗粒，干燥，压制成片，包衣或喷薄膜衣即得。试验例1黄柏多糖抗炎实验ICR小鼠雄性80只，随机分成黄柏多糖高剂量组GOOmg/kg)、黄柏多糖低剂量组 (100mg/kg)、阳性对照地塞米松组(3.6mg/kg)和空白对照组。秤取各组小鼠体重，计算均 值标准差确定无组间差异，连续灌胃给药三天，第三天于末次给药后50min，每鼠右耳涂致 炎剂(二甲苯20ul)，左耳作为空白对照，3小时后将处死，剪下两耳并打下圆耳片，分析天 平称重，计算小鼠耳朵肿胀度，比较4组肿胀度的差异性。实验结果见表1 表1黄柏多糖抗炎实验结果(I ±S, η = 10)
权利要求
1.一种黄柏多糖提取物，其特征在于所述黄柏多糖的含量占提取物重量百分比的 65%以上。
2.一种黄柏多糖提取物的制备方法，其特征在于制备方法包括黄柏原药材脱脂后， 先经过水提取，再醇沉淀得到粗多糖，粗多糖经过透析、离子交换层析脱去蛋白、色素，除去 小分子化学成分，制成较高纯度的黄柏多糖提取物。
3.一种黄柏多糖提取物的制备方法，包括以下步骤(1)将黄柏用高浓度乙醇回流除去脂溶性杂质；( 残渣加水回流提取，滤液浓缩，加 入乙醇醇沉，离心得沉淀；C3)沉淀依次用无水乙醇，丙酮分别洗涤；(4)洗涤后的沉淀用蒸 馏水复溶，透析；(5)透析液浓缩，加入乙醇醇沉，离心得沉淀；(6)沉淀依次用无水乙醇，丙 酮分别洗涤；(7)洗涤后的沉淀用蒸馏水复溶，采用弱酸弱碱型阴、阳离子交换树脂串联法 脱去多糖中的色素和蛋白质，即得黄柏多糖提取物。
4.按照权利要求2、3所述的方法，其特征在于步骤(1)中将黄柏用6 10倍重量的 80 95%乙醇回流脱脂2 4次，每次回流2 池；步骤O)中将残渣加6 10倍重量 的蒸馏水回流提取2 4次，每次回流提取2 池，将滤液浓缩至药材0. 2 1. 0体积，加 入80 95%乙醇醇沉，离心得沉淀；步骤C3)、(6)中将沉淀依次用2 4倍重量的无水 乙醇，丙酮分别洗涤；步骤中的沉淀以0. 5 2倍重量的蒸馏水复溶，以分子量大小为 3. OXlO3-L 2X IO4的透析袋透析24 72h。
5.按照权利要求1、2所述的黄柏多糖，其特征在于所述黄柏来源包括芸香科植 物黄皮树(Phellodendron Chinense khneid.)，即药材“川黄柏”，和芸香科植物黄柏 (P. AmurenseRupr.)，即药材“关黄柏”除去栓皮的树皮。
6.按照权利要求1、2、5所述的黄柏多糖提取物具有显著免疫抑制活性，用于与免疫相 关的各种疾病的治疗用途，包括治疗肾炎、咽炎、肺炎、上呼吸道感染、肝炎、肠炎、妇科炎 症、类风湿性关节炎、糖尿病等免疫相关性疾病。
7.按照权利要求1、2、5、6所述的黄柏多糖提取物，可以制成免疫抑制活性的药物或作 为制备其他免疫抑制药物的原料药的医药用途，加上药学上常用的附加剂或与其它医药原 料配伍制备成临床上常用的注射制、片剂、颗粒剂、胶囊剂或外用制剂。
全文摘要
本发明涉及一种黄柏多糖提取物及其制备方法和医药用途。本发明提取物中黄柏多糖的含量以葡萄糖计，所述多糖的含量占黄柏提取物重量百分比65％以上；本发明通过大量的药理学实验发现，黄柏总多糖提取物具有显著的免疫抑制活性，可以制成用作免疫抑制的药物或作为制备其他免疫抑制药物的原料药，用于与免疫反应相关的各种疾病的治疗用途，包括治疗肾炎、咽炎、肺炎、上呼吸道感染、肝炎、肠炎、妇科炎症、类风湿关节炎、糖尿病等免疫相关性疾病。
文档编号A61P19/02GK102139002SQ201110077860
公开日2011年8月3日 申请日期2011年3月30日 优先权日2011年3月30日
发明者匡海学, 夏永刚, 杨炳友, 焦文娟, 王秋红 申请人:匡海学