专利名称：用于治疗癌症的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种用于治疗癌症的药物组合物，包含有效剂量的樟芝萃取物。
背景技术：
传统的癌症治疗，主要是抑制快速增殖癌细胞的生长与引发其凋亡。然而癌细胞的异源性，造成在化疗药物及放射线治疗后，恶性度较高的往往仍能存活，或是躲过免疫系统的侦测，导致癌症在治疗后经常出现复发的情形。近年来，一种新理论的兴起，对于癌症难以治愈的原因提供一种新的解释方式。许多研究指出，多数的癌细胞并不具有引起肿瘤发生的能力，只有极少部分癌细胞才具有致瘤性(tumorigenic)，并且可分化为肿瘤组织中的各种细胞。科学家在包括血癌、乳癌、脑癌、卵巢癌、前列腺癌、大肠直肠癌、口腔癌等不同的癌组织中，发现这些少数细胞相较于其它癌细胞而言，对于一般放射线或药物更具有抵抗性。因此，将这些具有类似干细胞特性的癌细胞命名为癌症干细胞(Cancer Stem Cell)。目前研究指出，癌症干细胞可以从病患肿瘤中分离取出。而极少数的癌症干细胞便可在病患体内形成肿瘤，此种肿瘤干细胞的活化增生的调控与肿瘤复发、远程侵犯甚至病患存活率有极密切的关联。与正常干细胞相似的是，癌症干细胞亦具有自我更新与分化的能力，会不断的生长和分化为不同种类形态的肿瘤细胞，然而癌症干细胞并不像正常的干细胞，其自我更新机制不受正常的调控。就以正常干细胞的表面抗原CD133为例，CD133是一个具有五个穿膜区域(transmembrane domains)的糖蛋白(glycoprotein),首度在成体血液、骨髓与胚胎干细胞中分离出的CD34+前驱细胞中被辨识，而被视为造血干细胞的标志。然而在最近五年的研究中发现，CD133更被认为是血癌、脑癌、视网膜目细胞瘤(retinoblastoma)、肾脏癌、胰脏癌、前列腺癌与肝癌的癌症干细胞的细胞表面标志。最近研究报告也指出，髓母细胞瘤(medul1blastoma)以及神经胶质瘤(glioma)可能具有⑶133+癌症干细胞的存在，且这些⑶133+细胞的增殖与自我更新能力更胜于一般的肿瘤细胞，因此⑶133可视为癌症干细胞的重要标志之一。
目前，根据癌症干细胞的特性，已能利用三种方式成功地自实体肿瘤(solidtumor)中分离出癌症干细胞。第一，根据特异性表现在癌症干细胞的表面抗原，例如CD44或⑶133,利用流式细胞仪(flow cytometry)分离出癌症干细胞。其中，⑶133在多种脑部肿瘤的癌症干细胞中分离出来，包括多形神经胶母细胞瘤(glioblastoma multiforme)、儿童髓母细胞瘤、室管膜瘤(印endymomas)。此外，它也在大肠癌的癌症干细胞中被发现，大肠癌中约1.8-24.5%的细胞表现⑶133，而这些细胞大多具有形成肿瘤的能力。第二，以荧光染剂Hoechst 33342对肿瘤组织或癌细胞群加以染色，分离出不具荧光讯号的侧族群(side population),此为癌症干细胞,据推测，这些细胞也许会导致肿瘤化学抗性(chemoresistance)。ABCG2-—种三憐酸腺苷水解酶运转子(ATPase transporter)的表现与侧族群现象有密切相关；简单说明其原理，因为干细胞的细胞膜表面会高度表现ABCG2，这个运转子会主动的将Hoechst33342燃料从核内排出到核外，因此流式细胞仪分析出来的这群侧族群细胞就定义为具有干细胞的性质。然而最新研究显示，不论有没有表现ABCG2的癌细胞都具有相似的致癌能力。第三，将肿瘤组织或癌细胞培养于不含血清但含有特定生长因子-如碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor ;bFGF)、表皮生长因子(epidermal growth factor ；EGF)等人工合成生长因子的培养基,发现形成球体(sphere body formation)的细胞中富含癌症干细胞，目前推论这种不含血清的培养环境，可以帮助癌症干细胞维持在未分化的状态。分子标记物主要是确认细胞的表面抗原或是特定的转录因子，各类干细胞及癌症干细胞都需使用不同的标志物来进行确认，而后再检测干细胞自我更新及分化的能力。因此，如何能寻找出癌症干细胞特有并专一表现的表面分子标志或特定基因群，继而辨识出具致瘤能力的癌症干细胞，整饰目前各国顶尖研究团队的首要目标。此外，如果能够正确并且成功地分离出癌症干细胞，将可藉由体外培养进行后续的基因调控的基础研究、人体修复或是药物筛选平台的开发，或直接应用在癌症病人的个体化抗癌治疗的应用。目前，这类癌症干细胞被认为有发展成癌症的潜力，在实验动物的模式中，也证实极少量的癌症干细胞即可形成肿瘤，而非干细胞的其它癌细胞，则需要远大于此数量的细胞数，才可以达到类似的肿瘤生成能力。另一方面，因癌症干细胞的增殖速率极为缓慢，甚至处于停止分裂的状态，也因其ABC运输蛋白的表现量远超过一般的癌症细胞，因此不易被化疗药物或放射线杀死。所以癌症干细胞不但是癌症在治疗后复发并丧失对原本有效药物反应的主因，也很可能是癌症恶性转移的主要原因。这说明了只有消灭癌症干细胞，癌症才有治愈的机会。因此，找出这类细胞与一般癌细胞及正常干细胞间的差别，并针对这些特性发展有效治疗杀死癌症干细胞的策略，是目前癌症研究的重要课题之一。近年来，医学界对于这种难以治愈及容易复发、转移的情形提出新的看法，亦即不同的癌症组织中可能存在特定的癌症干细胞一Cancer Stem Cell，是造成癌症病患肿瘤复发的主要关键。传统的癌症治疗技术，是在手术切除之后进行放射及化学治疗，以抑制癌细胞的生长，进而引发其凋亡。然而，恶性度较高的癌细胞，却可以通过化疗药物及放射线治疗而存活下来，并且躲过免疫系统的侦测，导致癌症在治疗后容易出现复发情形。樟芝(Antrodia camphorata),又称牛樟芝、牛樟燕或红樟芝等，属于无裙菌目(Aphyllophorales)、 多孔菌科(Polyporaceae)、薄孔菌属(Antrodia)的裙多年生蕈菌类， 为台湾特有种真菌，仅生长于台湾保育类树种-牛樟树(Cinnamoum kanehirai Hay)的
中空腐朽心材内壁上。由于牛樟树分布数量极为稀少，加上人为的盗伐，使得寄生于其中方能生长的野生牛樟芝数量更加稀少，另外其子实体生长相当缓慢，生长期亦仅在六月至十月之间，因此价格非常昂贵。在台湾民俗医学上，樟芝具有解毒、减轻腹泻症状、消炎、治疗肝脏相关疾病及抗癌等功能。樟芝乳痛一般食药用的蕈菇类，具有许多复杂的成分，已知的生理活性成分中，包括:三職类化合物(triterpenoids)、多糖体(polysaccharides,如β-D-葡聚醣)、腺苷(ademosine)、维生素(如维生素B、烟碱酸)、蛋白质(含免疫球蛋白)、超氧歧化酵母(superoxide dismutase, SOD)、微量元素(如丐、磷、锗)、核酸、固醇类以及血压稳定物质(如antrodia acid)等,这些生理活性成分被认为具有抗肿瘤、增加免疫能力、抗过敏、抗病菌、抗高血压、降血糖及降胆固醇等多种功效。目前，仅有樟芝萃取物对一般癌细胞具有抑制效果的研究，尚未有针对癌症干细胞的研究。
发明内容
为评估樟芝对抗肺癌、脑癌、头颈癌、大肠直肠癌以及乳癌具有抑制癌症干细胞生长潜力的药物，共计5种樟芝萃取物于下:樟芝浓缩液(Dl)，樟芝浓缩液EA (乙酸乙酯)萃取物(D2)、樟芝浓缩液冻干粉(D3)、樟芝浓缩液冻干粉EA(乙酸乙酯)萃取物(D4)、樟芝菌丝体EA(乙酸乙酯萃取物(D5)。本发明的目的在于筛选具有抗癌作用的樟芝萃取物，以MTT(3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl) ~2, 5-diphenyltetrazoIium bromide)测验来完成细胞毒性测试，本发明以人类肺癌干细胞Lung CSC、人类纤维母细胞AF-1 (Adultfibroblast-1)、脑癌干细胞GBM CSC、人类纤维母细胞AF-2 (Adult fibroblast-2)、头颈癌干细胞HNSCC CSC、大肠直肠癌干细胞CRC CSC以及乳癌干细胞Breast CSC、肝癌干细胞Hepatoma CSC、血癌干细胞Leukemia CSC、胃癌干细胞Gastric CSC作为细胞实验模型。本发明提供一种用于治疗由癌症干细胞引起的癌症的药物组合物，包含有效剂量的樟芝萃取物。樟芝萃取物选自由樟芝浓缩液冻干粉乙酸乙酯萃取物及樟芝菌丝体乙酸乙酯萃取物做组成的群组；癌症干细胞为肝癌干细胞、肺癌干细胞、脑癌干细胞、头颈癌干细胞、大肠直肠癌干细胞、乳癌干细胞、血癌干细胞或胃癌干细胞；樟芝萃取物的有效剂量较佳为 10 μ g/ml 至 500 μ g/ml。本发明的药物组合物与化疗药物并用可增加对癌症干细胞的抑制效果；化疗药物为顺钼或紫杉醇；癌症干细胞为肺癌干细胞、脑癌干细胞、头颈癌干细胞、大肠直肠癌干细胞、乳癌干细胞或肝癌干细胞。本发明的药物组合物与放射线治疗并用亦可增加对癌症干细胞的抑制效果；癌症干细胞为肺癌干细胞、脑癌干细胞、头颈癌干细胞、大肠直肠癌干细胞、乳癌干细胞或肝癌干细胞。本发明所述樟芝萃取物包含有效成份4-乙酰基-安卓奎诺尔B (4-acetyl-antroquinonol B)。本发明亦提供一种用于治疗由癌症干细胞引起的癌症的药物组合物，包含有效剂量的4-乙酰基-安卓奎诺尔B (4-acetyl-antroquinonol B);癌症干细胞为肺腺癌CD133阳性肿瘤干细胞、肺癌干细胞、脑癌干细胞、乳癌干细胞、口腔癌干细胞或大肠直肠癌干细胞；4-乙酰基-安卓奎诺尔B的有效剂量较佳为0.1 μ g/ml至100 μ g/mlο
图1为本发明所用樟芝萃取物的制作过程。图2为4-乙酰基-安卓奎诺尔B的ESI (+) -MS的质谱图。图3为4-乙酰基-安卓奎诺尔B的紫外光吸收光谱图。图4为4-乙酰基-安卓奎诺尔B的1H-NMR (500MHz，CDCl3)光谱图。图5为4-乙酰基-安卓奎诺尔B的13C-NMR(125MHZ，CDCl3)光谱图。图6是樟芝浓缩液的pH值特性与抑制人类干细胞生长图。图7为樟芝浓缩液(Dl)抑制人类肺癌干细胞Lung CSC的细胞毒性曲线。图8为樟芝浓缩液EA (乙酸乙酯)萃取物(D2)抑制人类肺癌干细胞Lung CSC的细胞毒性曲线。
图9为樟芝浓缩液冻干粉(D3)抑制人类肺癌干细胞Lung CSC的细胞毒性曲线。图10为樟芝浓缩液冻干粉EA (乙酸乙酯)萃取物(D4)抑制人类肺癌干细胞LungCSC的细胞毒性曲线。图11为樟芝菌丝体EA (乙酸乙酯)萃取物(D5)抑制人类肺癌干细胞Lung CSC的细胞毒性曲线。图12为樟芝浓缩液(Dl)抑制人类纤维母细胞AF-1 (Adult fibroblast-1)的细胞毒性曲线。图13为樟芝浓缩液EA (乙酸乙酯)萃取物(D2)抑制人类纤维母细胞AF_1 (Adultfibroblast-1)的细胞毒性曲线。图14为樟芝浓缩液冻干粉(D3)抑制人类纤维母细胞AF-1 (Adultfibroblast-1)的细胞毒性曲线。图15为樟芝浓缩液冻干粉EA(乙酸乙酯)萃取物(D4)抑制人类纤维母细胞AF-1 (Adult fibroblast-1)的细胞毒性曲线。图16为樟芝菌丝体EA (乙酸乙酯)萃取物(D5)抑制人类纤维母细胞AF_1 (Adultfibroblast-1)的细胞毒性曲线。图17为樟芝浓缩液(Dl)抑制脑癌干细胞GBM CSC的细胞毒性曲线。图18为樟芝浓缩液EA (乙酸乙酯)萃取物(D2)抑制脑癌干细胞GBM CSC的细胞
毒性曲线。图19为樟芝浓缩液冻干粉(D3)抑制脑癌干细胞GBM CSC的细胞毒性曲线。图20为樟芝浓缩液冻干粉EA (乙酸乙酯)萃取物(D4)抑制脑癌干细胞GBM CSC的细胞毒性曲线。图21为樟芝菌丝体EA (乙酸乙酯)萃取物(D5)抑制脑癌干细胞GBM CSC的细胞
毒性曲线。图22为樟芝浓缩液(Dl)抑制人类纤维母细胞AF-2 (Adult fibroblast-2)的细胞毒性曲线。图23为樟芝浓缩液EA (乙酸乙酯)萃取物(D2)抑制人类纤维母细胞AF_2 (Adultfibroblast-2)的细胞毒性曲线。图24为樟芝浓缩液冻干粉(D3)抑制人类纤维母细胞AF_2 (Adultf ibroblast-2)的细胞毒性曲线。图25为樟芝浓缩液冻干粉EA(乙酸乙酯)萃取物(D4)抑制人类纤维母细胞AF-2 (Adult fibroblast-2)的细胞毒性曲线。图26为樟芝菌丝体EA (乙酸乙酯)萃取物(D5)抑制人类纤维母细胞AF_2 (Adultfibroblast-2)的细胞毒性曲线。图27为樟芝浓缩液(Dl)抑制头颈癌干细胞HNSCC CSC的细胞毒性曲线。图28为樟芝浓缩液EA (乙酸乙酯)萃取物(D2)抑制头颈癌干细胞HNSCCCSC的细胞毒性曲线。图29为樟芝浓缩液冻干粉(D3)抑制头颈癌干细胞HNSCC CSC的细胞毒性曲线。图30为樟芝浓缩液冻干粉EA (乙酸乙酯)萃取物(D4)抑制头颈癌干细胞HNSCCCSC的细胞毒性曲线。
图31为樟芝菌丝体EA(乙酸乙酯)萃取物(D5)抑制头颈癌干细胞HNSCCCSC的细胞毒性曲线.
图32为樟芝浓缩液(Dl)抑制大肠直肠癌干细胞CRC CSC的细胞毒性曲线。图33为樟芝浓缩液EA (乙酸乙酯)萃取物(D2)抑制大肠直肠癌干细胞CRC CSC的细胞毒性曲线。图34为樟芝浓缩液冻干粉(D3)抑制大肠直肠癌干细胞CRC CSC的细胞毒性曲线。图35为樟芝浓缩液冻干粉EA(乙酸乙酯)萃取物(D4)抑制大肠直肠癌干细胞CRC CSC的细胞毒性曲线。图36为樟芝菌丝体EA (乙酸乙酯)萃取物(D5)抑制大肠直肠癌干细胞CRC CSC的细胞毒性曲线。图37为樟芝浓缩液(Dl)抑制乳癌干细胞Breast CSC的细胞毒性曲线。图38为樟芝浓缩液EA (乙酸乙酯)萃取物(D2)抑制乳癌干细胞Breast CSC的细胞毒性曲线。图39为樟芝浓缩液冻干粉(D3)抑制乳癌干细胞Breast CSC的细胞毒性曲线。图40为樟芝浓缩液冻干粉EA(乙酸乙酯)萃取物(D4)抑制乳癌干细胞BreastCSC的细胞毒性曲线。图41为樟芝菌丝体EA (乙酸乙酯)萃取物(D5)抑制乳癌干细胞Breast CSC的细胞毒性曲线。图42为樟芝浓缩液冻干粉EA (乙酸乙酯)萃取物(D4)抑制肝癌干细胞IfepatomaCSC的细胞毒性曲线。图43为樟芝菌丝体EA (乙酸乙酯)萃取物抑制肝癌干细胞Ifepatoma CSC的细胞毒性曲线。图44为樟芝浓缩液冻干粉EA (乙酸乙酯)萃取物(D4)抑制血癌干细胞LeukemiaCSC的细胞毒性曲线。图45为樟芝菌丝体EA (乙酸乙酯)萃取物(D5)抑制血癌干细胞LeukemiaCSC的细胞毒性曲线。图46为樟芝浓缩液冻干粉EA (乙酸乙酯)萃取物(D4)抑制胃癌干细胞GastricCSC的细胞毒性曲线。图47为樟芝菌丝体EA (乙酸乙酯)萃取物(D5)抑制胃癌干细胞Gastric CSC的细胞毒性曲线。图48为合并放射线治疗(2Gy)对脑癌干细胞GBM CSC的效果图。图49为合并放射线治疗(2Gy)对肺癌干细胞Lung CSC的效果图。图50为合并放射线治疗(2Gy)对头颈癌干细胞HNSCC CSC的效果图。图51为合并放射线治疗(2Gy)对乳癌干细胞Breast CSC的效果图。图52为合并放射线治疗(2Gy)对肝癌干细胞!fepatoma CSC的效果图。图53为合并放射线治疗(2Gy)对大肠直肠癌干细胞CRC-CSC的效果图。图54为合并放射线治疗(4Gy) 对脑癌干细胞GBM CSC的效果图。图55为合并放射线治疗(4Gy)对肺癌干细胞Lung CSC的效果图。图56为合并放射线治疗(4Gy)对头颈癌干细胞HNSCC CSC的效果图。
图57为合并放射线治疗(4Gy)对乳癌干细胞Breast CSC的效果图。图58为合并放射线治疗(4Gy)对肝癌干细胞!fepatoma CSC的效果图。图59为合并放射线治疗(4Gy)对肝癌干细胞!fepatoma CSC的效果图。图60为合并化疗药物治疗(Cisplatin，10 μ g/ml)对脑癌干细胞GBM CSC的效果图。图61为合并化疗药物治疗(Cisplatin，10 μ g/ml)对肺癌干细胞Lung CSC的效果图。图62为合并化疗药物治疗(Cisplatin，10 μ g/ml)对头颈癌干细胞HNSCCCSC的效果图。图63为合并化疗药物治疗(Cisplatin，10 μ g/ml)对乳癌干细胞Breast CSC的效果图。图64为合并化疗药物治疗(Cisplatin, 10 μ g/ml)对肝癌干细胞Hepatoma CSC的效果图。图65为合并化疗药物治疗(Cisplatin，10 μ g/ml)对大肠直肠癌干细胞CRC-CSC的效果图。图66为合并化疗药物治疗(Taxol，5ng/ml)对脑癌干细胞GBM CSC的效果图。图67为合并化疗药物治疗(Taxol，5ng/ml)对肺癌干细胞Lung CSC的效果图。图68为合并化疗药物 治疗(Taxol，5ng/ml)对头颈癌干细胞HNSCC CSC的效果图。图69为合并化疗药物治疗(Taxol，5ng/ml)对乳癌干细胞Breast CSC的效果图。图70为合并化疗药物治疗(Taxol，5ng/ml)对肝癌干细胞H印atoma CSC的效果图。图71为合并化疗药物治疗(Taxol，5ng/ml)对大肠直肠癌干细胞CRC-CSC的效果图。图72为4-乙酰基-安卓奎诺尔B抑制肺腺癌⑶133阳性肿瘤干细胞的细胞毒性曲线。图73为4-乙酰基-安卓奎诺尔B抑制口腔癌干细胞Oral CSC的细胞毒性曲线。图74为4-乙酰基-安卓奎诺尔B抑制脑癌干细胞GBM-CSC的细胞毒性曲线。图75为4-乙酰基-安卓奎诺尔B抑制乳癌干细胞Breast CSC的细胞毒性曲线。图76为4-乙酰基-安卓奎诺尔B抑制肺癌干细胞Lung CSC的细胞毒性曲线。图77为4-乙酰基-安卓奎诺尔B抑制大肠直肠癌干细胞CRC-CSC的细胞毒性曲线。
具体实施例方式为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步描述。实施例1樟芝萃取物的制备樟芝经培养产生樟芝发酵浓缩液，樟芝生产过程如附图1所不，共制备五种樟芝萃取物，如下:
1、樟芝浓缩液(Dl)；2、樟芝浓缩液EA (乙酸乙酯)萃取物(D2)；3、樟芝浓缩液冻干粉(D3)；4、樟芝浓缩液冻干粉EA(乙酸乙酯)萃取物(D4)；5、樟芝菌丝体EA (乙酸乙酯)萃取物(D5)。樟芝经培养产生樟芝发酵液，经低温膜过滤浓缩产生樟芝浓缩液(Dl)，进一步将樟芝浓缩液冷冻干燥可得樟芝浓缩液冻干粉(D3)。制备樟芝浓缩液乙酸乙酯萃取物(D2):取IOOml樟芝浓缩液加入IOOml乙酸乙酯分离(三次)，收集乙酸乙酯层，浓缩干燥后即为乙酸乙酯萃取物。制备樟芝浓缩液冻干粉乙酸乙酯萃取物(D4):取IOg樟芝浓缩液冻干粉加入IOOml 95%乙醇回流萃取3小时，样品浓缩干燥后，加入IOOml水及IOOml乙酸乙酯分离(三次)，收集乙酸乙酯层，浓缩干燥后即为乙酸乙酯萃取物。制备樟芝菌丝体乙酸乙酯萃取物(D5):取IOg樟芝菌丝体加入IOOml 95%乙醇回流萃取3小时，样品浓缩干燥后，加入IOOml水及IOOml乙酸乙酯分离(三次)，收集乙酸乙酯层，浓缩干燥后即为乙酸乙酯萃取物。实施例2分离樟芝菌丝体乙酸乙酯萃取物 (D5)的4-乙酰基-安卓奎诺尔B成分取樟芝菌丝体3千克，以95%的乙醇IOL加热回流萃取四次，萃取液经过滤后浓缩，减压干燥得乙醇萃取物384g，将乙醇萃取物悬浮于水以等量乙酸乙酯进行分配(partition)分离，乙酸乙酯层经减压浓缩可得乙酸乙酯层分离物157.57g及水层分离物159.51g0上述乙酸乙酯层分离物157.57g以硅胶管柱(IOcmX30cm)进行层析，依次以正己烷一正己烷-乙酸乙酯(10: I — 10: 2—10: 3—10: 4—10: 5—1: 1 — 1:2，v/v)—乙酸乙酯一甲醇，每种比例各IOL进行冲提，每IL收集成一分离物。其中正己烷和乙酸乙酯混合物(正己烷:乙酸乙酯=10: 4)冲提的分离物56-63 (3.015g)，以逆相制备级管柱 Tosoh 0DS-80Ts (21.5mmX 300mm, 10 μ m)进行层析，以 H2O-CH3CN(20: 80)为移动相，流速10ml/min进行层析，以265nm为检测波长，管柱控温40°C，可获得4-乙酰基-安卓奎诺尔 B (4-acetyl-antroquinonol B) 131mg04-乙酰基-安卓奎诺尔B的结构鉴定4-乙酰基-安卓奎诺尔 B ESI(+)MS (m/z):485 [M+Na]+, 502 [M+K]+.UV λ max (nm):206,265.1H-NMR(500MHz，CDCl3) δ (ppm):5.70 (1H, d, J = 3.2Hz, H_4)，5.20 (1H, t, J =6.4Hz，H-12)，5.09 (1H, t, J = 6.8Hz，H_8)，4.60 (1H, m, H-15)，3.98 (3H, s，H-24)，3.65 (3H,s’ H-23)，2.67 (1H, m, H-17)，2.50 (1H, dq, J = 6.9，10.8Hz, H_6)，2.39 (1H, dd, J = 6.5，
13.9Hz, H-14)，2.23 (1H, m, H-1 I)，2.19 (1H, m, H-14)，2.14 (1H, m, H-16)，2.09 (2H, m, H_7)，
2.08 (3H, OAc)，2.00 (2H, m, H-10)，1.94 (1H, m, H-1 I)，1.90 (1H, m, H-16)，1.86 (1H, m, H_5)，
1.63 (3H, s’ H-21)，1.54 (3H, s’ H_20)，1.25 (3H, d, J = 7.3Hz, H-19)，1.18 (3H, d, J =
6.9Hz, H-22).13C-NMR (125MHz，CDCl3) δ (ppm): 197.1 (C_l)，180.3 (C-18)，170.0 (CH3C0)，158.4(C-3)，137.7 (C_9)，137.6 (C_2)，130.4 (C-13)，128.5 (C-12)，121.0 (C_8)，77.1 (C-15)，69.4 (C_4) ,61.0 (C—23)，60.0 (C—24)，45.2 (C—14)，43.3 (C_5) ,41.6 (C_6)，39.6 (C-1O)，34.9 (C-16)，33.9 (C-17)，27.1 (C-1l)，26.5 (C_7)，21.2 (CH3CO)，16.7 (C-21)，16.3 (C-20)，16.1 (C-19)，13.1 (C-22)。实施例3药物毒性试验本实施例以特定的细胞数种植在25T细胞培养基，等待六小时后，细胞贴附至培养基底部，但细胞仍未分裂的状态下，加入浓度为0、50、100、200以及400nM的药物，分别于时间0、6、12以及24小时后移除含有药物的培养液，以PBS冲洗一次，再加入未含有药物的新鲜培养液，培养10至14天，以甲醇固定后，再以吉姆沙(Giemsa)染色，计算细胞菌落数(每个菌落须大于50个细胞)，则其存活分率(SF surviving fractions)的计算公式为:
权利要求
1.一种用于治疗癌症的药物组合物，主要用于治疗由癌症干细胞引起的癌症，其特征在于，包含有效剂量的樟芝萃取物。
2.按权利要求1所述的用于治疗癌症的药物组合物，其特征在于，所述樟芝萃取物选自由樟芝浓缩液冻干粉乙酸乙酯萃取物及樟芝菌丝体乙酸乙酯萃取物所组成的群组。
3.按权利要求1所述的用于治疗癌症的药物组合物，其特征在于，所述癌症干细胞是肝癌干细胞、肺癌干细胞、脑癌干细胞、头颈癌干细胞、大肠直肠癌干细胞、乳癌干细胞、血癌干细胞或胃癌干细胞。
4.按权利要求1所述的用于治疗癌症的药物组合物，其特征在于，所述有效剂量为.10 μ g/ml 至 50 0 μ g/ml。
5.按权利要求1所述的用于治疗癌症的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物与化疗药物并用可增加对癌症干细胞的抑制效果。
6.按权利要求5所述的用于治疗癌症的药物组合物，其特征在于，所述化疗药物为顺钼或紫杉醇。
7.按权利要求5所述的用于治疗癌症的药物组合物，其特征在于，所述癌症干细胞为肺癌干细胞、脑癌干细胞、头颈癌干细胞、大肠直肠癌干细胞、乳癌干细胞或肝癌干细胞。
8.按权利要求1所述的用于治疗癌症的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物与放射线治疗并用可增加对癌症干细胞的抑制效果。
9.按权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，所述癌症干细胞为肺癌干细胞、脑癌干细胞、头颈癌干细胞、大肠直肠癌干细胞、乳癌干细胞或肝癌干细胞。
10.一种用于治疗癌症的药物组合物，主要用于治疗由癌症干细胞引起的癌症，其特征在于，包含有效剂量的4-乙酰基-安卓奎诺尔B (4-acetyl-antroquinonol B)。
11.按权利要求10所述的药物组合物，其特征在于，所述癌症干细胞是肺腺癌CD133阳性肿瘤干细胞、肺癌干细胞、脑癌干细胞、乳癌干细胞、口腔癌干细胞或大肠直肠癌干细胞。
12.按权利要求10所述的药物组合物，其特征在于，所述有效剂量为0.1 μ g/ml至.100 μ g/mlο
全文摘要
本发明提供一种用于治疗由癌症干细胞引起的癌症的药物组合物，包含有效剂量的樟芝萃取物。本发明亦提供一种用于治疗由癌症干细胞引起的癌症的药物组合物，包含有效剂量的4-乙酰基-安卓奎诺尔B(4-acetyl-antroquinonol B)。
文档编号A61P35/00GK103083364SQ20111034497
公开日2013年5月8日 申请日期2011年11月4日 优先权日2011年11月4日
发明者黄俊智, 陈志杰, 陈立耿 申请人:丽丰实业股份有限公司