专利名称：转录调控物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种转录调控物组合物。
背景技术：
雄激素定义为广泛种类的主要控制雄性特征发展及维持的类固醇激素。其经由雄激素受体(AR)发挥其生理作用，该雄激素受体为类固醇激素核受体总科中的一员。该AR通过结合雄激素(例如睾固酮)或相关配位体得以活化。经活化之AR引发信号转导路径，其驱动众多"雄激素响应"靶基因(例如前列腺特异性抗原(PSA))之转录增加。应注意的是，此路径中的信号转导步骤尚未完全阐明。由雄激素活化AR，接着增加雄激素响应靶基因的转录，会激发众多疾病，例如前列腺癌。因此，治疗前列腺癌通常包括投与AR拮抗剂。不幸地，由于由癌细胞所表现之AR常变成雄激素非依赖性，意即组成性活性(例如由于突变)，因此其效用常为短期的。因此，配位体非依赖性AR即使在AR拮抗剂存在下仍驱动高水平的支持持久性癌生长的靶基因转录。因此，需要在A R活化下游的信号转导步骤中调控雄激素回应靶基因转录的组合物，以及用于其识别及治疗用途的方法。
发明内容
本发明部分基于意外发现，即IkB激酶亚单位a (IKKa)与AR相互作用且其活性对于雄激素响应基因转录很关键。因此，本发明一方面涉及通过对受检者投与含有有效剂量之IKKa活性抑制剂的组合物来治疗雄激素刺激的疾病的方法。较佳地，在投与该组合物之前，该受检者经诊断患有该雄激素刺激的疾病。雄激素刺激的疾病为由AR活性所引起或恶化的任何健康异常病症，例如前列腺癌、良性前列腺肥大、乳癌、男性秃头症、痤疮丙酸杆菌、多囊性卵巢症、体染色体显性多囊性肾病或雄性素过多症。组合物可含有来自膨蜞菊(Wedelia chinensis)、鳢肠(Eclipta prostrata)或旱莲草(Eclipta alba)的提取物。IKK α活性抑制剂可为叶含膨蜞菊内酯(wedelolactone)、叶黄酮(Iuteolin)、槲皮酮(quercetin)、洋元荽黄素(apigenin)、15-脱氧-Λ 12，14-前列腺素J2或前列腺素Al。该方法也包括在对受检者投与上述组合物之前或之后测定来自该受检者的生物试样中的PSA含量。在投药之前测定PSA含量适用于诊断受检者患有雄激素刺激的疾病(例如前列腺癌)。在投药之后所测定的PSA含量为响应上述用于治疗雄激素刺激的疾病之方法的治疗的可靠指数。本发明另一方面涉及通过对高风险受检者投与含有有效剂量的IKKa活性抑制剂来降低该受检者的前列腺癌风险的方法。
本发明另一方面涉及用于识别调控物(意即IKK α调节的转录活性的抑制剂或刺激剂)的方法。转录活性抑制剂适用于(例如)治疗诸如前列腺癌等的雄激素刺激的疾病。该方法包括(I)提供哺乳动物细胞，其表达IKKa及AR，且含有包括可操作性地连接于编码报导体多肽序列上的雄激素回应促进剂序列的分离的核酸，从而使得该细胞也表达该报导体多肽，(2)将该细胞与测试组合物接触，且(3)检定表达量(意即mRNA或蛋白质的表达量)或报导体多肽的活性。若该测试组合物增加或降低与负控制治疗有关的表达量或编码的报导体多肽的活性，则认为其为由IKKa调节的转录活性的调控物。经表达的AR可为组成性活性突变体。若AR为非组成性活性，则该 方法包括将细胞与AR促效剂接触。该方法也可包括判定测试组合物对IKKa活性的作用以进一步表征机制，测试组合物通过该机制调控由此激酶调节的转录活性。本发明另一方面涉及用于测定非人类哺乳动物测试受检者中由IKKa调节的转录活性的方法。该方法适用于(例如)判定活体内候选IKK α抑制剂组合物的功效。该方法包括(I)引入众多细胞，其表现IKK α及雄激素受体，且含有具有可操作性地连接于编码报导体多肽序列上的雄激素回应促进剂序列的分离的核酸，从而使得该细胞也表达该报导体多肽；及(2)检测由该等细胞所表达的报导体多肽的活性。报导体活性(例如活体内)的检测指示测试受检者中由IKKa调节的转录活性。该方法也可包括测定来自测试受检者的生物试样中的IKK α活性程度。本发明还提供了下列各项I. 一种用于治疗或预防病患的前列腺癌疾病的医药组合物，其包含含有有效剂量的I K B激酶亚单位α抑制剂。2.如项I的医药组合物，其中该医药组合物为植物提取物。3.如项2的医药组合物，其中该植物为膨蜞菊(Wedelia chinensis)、鳢肠(Eclipta prostrata)或旱莲草(Eclipta alba)。4.如项3的医药组合物,其中该抑制剂为叶含膨蜞菊内酯(wedelolactone)、叶黄酮(Iuteolin)、槲皮酮(quercetin)、洋元荽黄素(apigenin)、15-脱氧-Δ 12’14-前列腺素J2或前列腺素Al。5.如项I的医药组合物，其中该抑制剂为叶含蟛蜞菊内酯。6.如项I的医药组合物，其进一步包含无毒非经肠可接受的稀释剂或溶剂中的溶液或悬浮液。7.如项6的医药组合物，其中该溶液或该悬浮液为1，3- 丁二醇溶液、甘露醇、水、林格氏液或等张氯化钠溶液。8.如项I的医药组合物，其进一步包含不挥发性油的溶剂或悬浮介质。9.如项8的医药组合物，其中该溶剂或该悬浮介质为合成的单甘油酯、合成的二甘油酯、油酸的脂肪酸及其甘油酯衍生物、橄榄油或蓖麻油。10.如项8的医药组合物，其进一步更包含长链醇稀释剂或分散剂、羧甲基纤维素或其类似分散剂。11.如项I的医药组合物，其进一步包含界面活性剂或生物可用性增强剂。12.如项I的医药组合物，其为任何经口可接受的剂型，包括胶囊、锭剂、乳液及水性悬浮液、分散液及溶液。
13.如项12的医药组合物，其进一步可包含载剂、润滑剂、适用稀释剂、甜味剂、调味剂或着色剂。14.如项13的医药组合物，其中该载剂为一种或多种可用作传递活性化合物的医药赋形剂。15.如项13的医药组合物，其中该载剂为胶状氧化硅、硬脂酸镁、纤维素、或月桂基硫酸纳。
16.如项I的医药组合物，其为鼻可用喷雾剂或吸入组合物，进一步可包含使用苄醇的防腐剂、增强生物可用性的吸收促进剂、碳氟化合物、增溶剂或分散剂。17.如项16的医药组合物，其为制备成于生理食盐水中的溶液。此外，本发明还提供下列各项I. 一种含有有效剂量的I K B激酶亚单位α抑制剂的组合物的用途，其用于制备这样的药剂，所述药剂用于治疗需要治疗的受检者中雄激素刺激的疾病。2.如权利要求I的用途，其中在投与该药剂之前，进一步诊断该受检者患有所述雄激素刺激的疾病。3.如权利要求I的用途，其中该组合物为植物提取物。4.如权利要求3的用途，其中该植物为膨蜞菊(Wedelia chinensis)、鳢肠(Eclipta prostrata)或旱莲草(Eclipta alba)。5.如权利要求I的用途，其中该抑制剂为叶含膨蜞菊内酯(wedelolactone)、叶黄酮(Iuteolin)、槲皮酮(quercetin)、洋元荽黄素(apigenin)、15-脱氧-Δ 12’14-前列腺素J2或前列腺素Al。6.如权利要求5的用途，其中该抑制剂为叶含蟛蜞菊内酯。7.如权利要求I的用途，其中该雄激素刺激的疾病为前列腺癌、良性前列腺肥大、乳癌、男性秃头症、痤疮丙酸杆菌、多囊性卵巢症、体染色体显性多囊性肾病或雄性素过多症。8.如权利要求7的用途，其中该雄激素刺激的疾病为前列腺癌。9.如权利要求8的用途，其中在投与该药剂之前或之后进一步测定来自该受检者的生物试样中的前列腺特异性抗原含量。10. 一种含有有效剂量的I K B激酶亚单位α活性抑制剂的组合物的用途，其用于制备这样的药剂，所述药剂用于降低对于前列腺癌具高患病风险的受检者的前列腺癌风险。11. 一种用于识别由I K B激酶亚单位α调节的转录活性的调控物的方法，其包含提供哺乳动物细胞，其表达I K B激酶亚单位α及雄激素受体，且含有经分离的核酸，所述核酸包括可操作性地连接于编码报导体多肽序列的雄激素回应促进剂序列，以使得该细胞表达该报导体多肽；将该细胞与测试组合物接触；及检测表达量或所表达的报导体多肽的活性，其中与无该测试组合物的情况相比，在该测试组合物存在下该表达量或该报导体多肽的活性的差异指示该测试组合物调控由I K B激酶亚单位α调节的转录活性。
12.如权利要求11的方法，其中该雄激素回应促进剂包括SEQ ID N0s:l、2或3中的至少一个复本。13.如权利要求12的方法，其中该雄激素回应促进剂包括SEQ ID N0s:l、2及3中的至少一个复本。 14.如权利要求13的方法，其中该雄激素回应促进剂包括SEQ ID N0:4。15.如权利要求11的方法，其进一步包含将该细胞与该雄激素受体的促效剂接触。16.如权利要求11的方法，其中该雄激素受体为该雄激素受体的组成性活性突变体。17.如权利要求11的方法，其进一步包含在该接触步骤之后，测定该I K B激酶亚单位α的活性程度。18. 一种用于测定非人类哺乳动物测试受检者中由I K B激酶亚单位α调节的转录活性的方法，其包含将细胞引入该测试受检者中，该细胞表达IkB激酶亚单位α及雄激素受体且含有包括可操作性地连接于编码报导体多肽序列的雄激素回应促进剂的经分离的核酸，以使得所述细胞表现该多肽；及检测由引入该测试受检者中的所述细胞所表达的该报导体多肽的活性，其中该报导体活性之检出指示在该测试受检者中由I K B激酶亚单位α调节的转录活性。19.如权利要求18的方法，其中该雄激素回应促进剂包括SEQ ID N0s:l、2或3中的至少一个复本。20.如权利要求19的方法，其中该雄激素回应促进剂包括SEQ ID N0s:l、2及3中的至少一个复本。21.如权利要求20的方法，其中该雄激素回应促进剂包括SEQ ID N0:4。22.如权利要求18的方法，其中该活性在活体内检测。23.如权利要求18的方法，其进一步包含测定来自该测试受检者的生物试样中该
IK B激酶亚单位α的活性程度。本发明其它特征或优点将因以下实施方式亦及申请专利范围而显而易见。实施方式下文所描述用于识别特定调控例如雄激素响应靶基因而发生转录的IKKa调节型转录(IKKaRT)的组合物的方法。下文也描述通过投与有效剂量的所属组合物来治疗患有雄激素刺激的疾病或对于雄激素刺激的疾病具高风险的受检者的方法。 IKK a RT调控物组合物(意即降低或增加IKK a RT的组合物)通过雄激素回应报导体检测来识别。雄激素响应报导体结构通过将雄激素响应促进剂与编码报导体多肽的核酸融合来产生。雄激素回应促进剂为可由AR依赖性信号转导路径活化的促进剂。将该雄激素响应报导体结构引入宿主细胞中以产生雄激素回应报导体细胞，在该雄激素回应报导体细胞中该雄激素响应促进剂驱动报导体多肽的表达。为评估在报导体细胞中测试组合物调控IKKaRT的能力，可通过在有或无测试组合物的情况下将所属细胞与雄激素(例如睾固酮或5α-二氢睾固酮)接触来增加报导体细胞的IKKa活性。将细胞与雄激素在加上或无测试组合物的情况下接触后，测定报导体表达或活性。若在测试组合物存在下与无测试组合物相比，响应雄激素刺激的报导体的表达或活性增加或降低，则认为该组合物为IKK a RT调控物。测试组合物可为(例如)自生物源纯化或合成的天然产生的组合物、植物提取物、蛋白质、肽或小分子(例如选自组合合成库的化合物)。合适的雄激素响应报导体细胞可衍生自哺乳动物组织或细胞株(例如衍生自人类、猴、小鼠、大鼠或仓鼠)。宿主细胞内因性或异源性地表现IKKa (例如GenBank第ΝΡ_001269号)及AR (例如GenBank第ΑΑΑ51729号)。举例而言，得自美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection) (ATCC 保藏号:CRL_250 5 )的人类 PCa22Rvl细胞株可用于产生雄激素回应报导体细胞株。在报导体测定中，可通过使用表现组成性活性AR的报导体细胞来避免雄激素刺激，例如Marcelli等人(1995)，Endocrinology第136卷,第3期中所述。用于产生报导体结构、将其引入细胞中且测定多种报导体多肽活性的方法于(例如)Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N. Y. (2005),分别3. 16-3. 17及9. 1-9. 14中详细说明。雄激素回应促进剂应包括以下雄激素响应元素中的至少一种AGAACAGCAAGTGCT (SEQIDN0:1)GGATCAGGGAGTCTC (SEQ ID NO 2)GGAACATATTGTATC (SEQ ID NO 3)参见Cleutjens 等人(1997)，Mol. Endocrinol. 11 (9) : 1256-65。举例而言，雄激素回应促进剂可为P S A促进剂，其含有全部三种上文所列的雄激素响应元素，且具有以下序列AGCTTCTAGTTTTCTTTTCCCGGTGACATCGTGGAAAGCACTAGCATCTCTAAGCAATGATCTGTGACAATATTCACAGTGTATTGCCATCCAGGGAACTCAACTGAGCCTTGATGTCCAGAGATTTTTGTGTTTTTTTCTGAGACTGAGTCTGGCTCTGTGCCCAGGCTGGAGTGCAGTGGTGCAACCTTGGCTCACTGCAAGCTCCGCCTCCTGGGTTCACGCCATTCTCCTGCCTCAGCCTCCTGAGTAGCTGGGACTACAGGCACCCGCCACCACGCCTGGCTAATTTTTTTGTATTTTTAGTAGAGATGGGGTTTCACTGTGTTAGCCAGGATGGTCTCAGTCTCCTGACCTCGTGATCTGCCCACCTTGGCCTCCCAAAGTGCTGGGATTACAG
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权利要求
1.一种用于治疗或预防病患的前列腺癌疾病的医药组合物，其包含含有有效剂量的 IkB激酶亚单位a抑制剂。
2.如权利要求1的医药组合物，其中该医药组合物为植物提取物。
3.如权利要求2的医药组合物，其中该植物为膨蜞菊(Wedeliachinensis)、鳢肠 (Eclipta prostrata)或旱莲草(Eclipta alba)。
4.如权利要求3的医药组合物，其中该抑制剂为叶含膨蜞菊内酯(wedelolactone)、叶 黄酮(luteolin)、槲皮酮(quercetin)、洋元荽黄素(apigenin)、15-脱氧-A 12’14-前列腺 素J2或前列腺素A1。
5.如权利要求1的医药组合物，其中该抑制剂为叶含蟛蜞菊内酯。
6.如权利要求1的医药组合物，其进一步包含无毒非经肠可接受的稀释剂或溶剂中的 溶液或悬浮液。
7.如权利要求6的医药组合物，其中该溶液或该悬浮液为1，3-丁二醇溶液、甘露醇、 水、林格氏液或等张氯化钠溶液。
8.如权利要求1的医药组合物，其进一步包含不挥发性油的溶剂或悬浮介质。
9.如权利要求8的医药组合物，其中该溶剂或该悬浮介质为合成的单甘油酯、合成的 二甘油酯、油酸的脂肪酸及其甘油酯衍生物、橄榄油或蓖麻油。
10.如权利要求8的医药组合物，其进一步更包含长链醇稀释剂或分散剂、羧甲基纤维 素或其类似分散剂。
11.如权利要求1的医药组合物，其进一步包含界面活性剂或生物可用性增强剂。
12.如权利要求1的医药组合物，其为任何经口可接受的剂型，包括胶囊、锭剂、乳液及 水性悬浮液、分散液及溶液。
13.如权利要求12的医药组合物，其进一步可包含载剂、润滑剂、适用稀释剂、甜味剂、 调味剂或着色剂。
14.如权利要求13的医药组合物，其中该载剂为一种或多种可用作传递活性化合物的 医药赋形剂。
15.如权利要求13的医药组合物，其中该载剂为胶状氧化硅、硬脂酸镁、纤维素、或月 桂基硫酸钠。
16.如权利要求1的医药组合物，其为鼻可用喷雾剂或吸入组合物，进一步可包含使用 苄醇的防腐剂、增强生物可用性的吸收促进剂、碳氟化合物、增溶剂或分散剂。
17.如权利要求16的医药组合物，其为制备成于生理食盐水中的溶液。
全文摘要
本发明涉及通过对需要治疗的受检者投与含有有效剂量的IκB激酶亚单位α活性抑制剂的组合物来治疗该受检者的雄激素刺激的疾病的方法。亦可对具有前列腺癌高患病风险的受检者投与该组合物作为用以降低该受检者的前列腺癌风险的方法。另一种方法涉及识别由I κB激酶亚单位α所调节的转录活性的调控物。又一种方法涉及测定非人类哺乳动物测试受检者中由IκB激酶亚单位α调节的转录活性。
文档编号A61K36/28GK102657867SQ20121015027
公开日2012年9月12日 申请日期2007年5月30日 优先权日2007年5月30日
发明者萧培文 申请人:中央研究院