专利名称：一种制备具有抗肿瘤活性天南星多糖的方法
技术领域：
:发明涉及从天南星根茎中提取相关成分的技术领域，具体涉及一种制备具有抗肿瘤活性天南星多糖的方法。
背景技术：
:天南星属天南星科、天南星属，又名半夏精、掌叶半夏、蛇木等，为多年生草本植物。地下块茎呈球形、扁平、黄褐色，除去须根及外皮，以球茎入药。中药天南星药用历史悠久，其名最早见于唐代陈藏器的《本草拾遗》。具有燥湿化痰、祛风止痉、散结消肿之功效。主治顽痰咳嗽、口眼歪斜、半身不遂、手足麻木、癫痫惊风。破伤风、跌打损伤及毒蛇咬伤等。现代医学研究表明，天南星复方对小鼠Lewis肺癌、肝癌、艾氏腹水癌等多种移植性肿瘤均有抑制作用，同时对体外培养人胃癌、肺癌、肝癌细胞也有杀伤和抑制作用。鲜南星水提取液在1: 16的浓度时，对Hela有抑制作用，使细胞浓缩成团块，破坏正常细胞结构，使部分细胞脱落；对小鼠实验性肿瘤如肉瘤S180、HCA、实体型U14(为鳞状上皮型子宫颈癌移植于小鼠者)等均有明显抑制作用。天南星醇提物对Hela细胞有较强抑制作用，对S180的抑制率为45.8%~ 53.7%，对HCA的抑制率为37.1%~ 53.4%，对U4抑制率达61. % 84.8%，说明该提取液对3种动物肿瘤模型均有抑制作用。天南星中提取分离的总蛋白以I %的生理盐水液给小鼠腹腔注射，对小鼠S180瘤株抑制率为50.1% 67.0%，平均值58.3%，表明天南星总蛋白对小鼠S180瘤细胞生长有明显的抑制作用。大量药理及临床研究证实，植物多糖有抗癌、抗肥胖、控制血糖、降胆固醇、降血脂和增强免疫作用等生理功能。但是迄今为止，国内外对天南星多糖的研究鲜见于报道
发明内容
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本发明的目的之一是提供一种具有抗肿瘤活性的天南星多糖，目的之二是提供上述天南星多糖的制备方法，目的之三是提供上述天南星多糖在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明的天南星多糖的制备方法包括以下步骤:(I)取天南星干燥根茎，粉碎成粗粉；(2)取步骤⑴中制得的粗粉I份，加5倍量药材重量的水，煎煮3次，第一次加2倍量水，第二次加2倍量水，第三次加I倍量水,每次煮沸1.5小时，合并水煎液；(3)磷酸盐缓冲液调节步骤(2)制得的水煎液的pH值至6，加入0.005倍药材重量的活性为12U/mg的木瓜蛋白酶，在45°C条件下水解2小时，然后立即煮沸5分钟，4°C静置12小时以上，抽滤去沉淀，将滤液装入分子量为1000的透析袋，用自来水透析I天，蒸馏水再透析I天，袋内多糖液浓缩成2g/mL，加无水乙醇至乙醇体积分数为75%，4°C静置12小时以上，倾去上清液，沉淀减压干燥得天南星多糖，得率约为10.2%。本发明就天南星多糖对小鼠黑色素瘤细胞B16-F10的体外抑制作用及人工肺转移模型的治疗作用做了研究，结果表明天南星多糖在体内、体外均表现出显著的抗肿瘤作用，天南星多糖能作为治疗肿瘤的有效药物。
本发明的优点在于:1.天南星资源丰富，且本发明提供的制备方法简单易操作，适用于大规模工业化生产。2.本发明制备的多糖，经分离、纯化后，在体内外均表现出显著的抗肿瘤作用，与其它化疗药物同服，可以减轻化疗药物的副作用，提高患者的耐受性。3.安全可靠，本发 明制备得到的天南星多糖毒副作用较低，可长期服用，避免化疗药物引起的严重毒副作用。
具体实施方式
:实施例1天南星多糖的制备取天南星干燥根茎5kg，粉碎成粗粉，加水煮3次，第一次加水10L，第二次加水10L，第三次加水5L，每次煮沸1.5小时，合并水煎液，用磷酸盐缓冲液调pH值至6，加入25g活性为12U/mg的木瓜蛋白酶，在45°C条件下水解2小时，然后立即煮沸5分钟，4°C静置12小时以上，抽滤去沉淀，将滤液装入分子量为1000的透析袋，用自来水透析I天，蒸馏水再透析I天，袋内多糖液浓缩成2g/mL，加无水乙醇至乙醇体积分数为75%，4°C静置12小时以上，倾去上清液，沉淀减压干燥得天南星多糖，510g。实施例2天南星多糖药物胶囊的制备在实施例1中所得的510g天南星多糖粉末中加入16g微晶纤维素，混匀，过筛，干燥后，制得药物胶囊的药用原料。药用原料填充入1545个胶囊中，制得每个胶囊含0.33g天南星多糖的药物胶囊，相当于每个胶囊含天南星生药材3.24g。建议的用法用量:成人每天服用天南星多糖胶囊I次，每次一粒，连续服用30天以上。本发明并不局限于说明书中所举的实施例，本发明的药物剂型可以是片剂、胶囊等各种口服使用的剂型。本发明产物在制备抗肿瘤药物中的应用通过下面的实验数据说明:1.天南星多糖对小鼠黑色素瘤细胞B16-F10的体外抑制作用本试验取对数生长期的小鼠黑色素瘤细胞B16-F10单细胞悬液，调整细胞浓度至2X105/ml，以每孔100μ I接种于96孔板，37°C、5% CO2孵育24小时。弃上清，每孔加入无血清MDM配制的天南星多糖100 μ 1，药物终浓度分别为100 μ g/mL，50 μ g/mL，25 μ g/mL,以无血清MDM为对照组。每组设4个复孔。37°C、5% CO2分别培养24小时，48小时。离心去上清，加入MTS/PMS液40 μ 1，37。。、5% CO2孵育4小时。离心去上清，混匀于490nm处测吸光度(A)值。按下式计算细胞抑制率。细胞抑制率=(1-给药组A值/对照组A值)XlOO %。本发明中的天南星多糖浓度为25 100 μ g/mL在体外产生对小鼠黑色素瘤细胞B16-F10较明显的生长抑制，这种抑制作用具有剂量依赖性，具体结果如下:表I天南星多糖对小鼠黑色素瘤细胞B16-F10的体外抑制作用
权利要求
1.天南星多糖在制备抗肿瘤药物中的应用。
2.一种天南星多糖的制备方法是，包括以下步骤: (1)取天南星干燥根茎，粉碎成粗粉； (2)取步骤(I)中制得的粗粉I份，加5倍量药材重量的水，煎煮3次，第一次加2倍量水,第二次加2倍量水，第三次加I倍量水,每次煮沸1.5小时，合并水煎液； (3)磷酸盐缓冲液调节步骤(2)制得的水煎液的pH值至6，加入0.005倍药材重量的活性为12U/mg的木瓜蛋白酶，在45°C条件下水解2小时，然后立即煮沸5分钟，4°C静置12小时以上，抽滤去沉淀，将滤液装入分子量为1000的透析袋，用自来水透析I天，蒸馏水再透析I天，袋内多糖液 浓缩成2g/mL，加无水乙醇至乙醇体积分数为75%，4°C静置12小时以上，倾去上清液，沉淀减压干燥得天南星多糖，得率约为10.2%。
全文摘要
本发明公开了一种具有抗肿瘤活性的天南星多糖的制备方法和用途，属于医药技术领域。采用水提、醇沉的方法提取天南星多糖，并对其抗肿瘤活性做了初步评价，上述提取的天南星多糖可用于抗肿瘤药物的开发。
文档编号A61P35/00GK103120700SQ201210593450
公开日2013年5月29日 申请日期2012年12月22日 优先权日2012年12月22日
发明者姜爽, 杜培革, 杨学良, 苑广信, 李洪宇, 安丽萍, 韩笑, 赵南晰 申请人:北华大学