一种治疗肝纤维药物组合物及其制备方法
【专利摘要】本发明涉及一种治疗肝纤维药物组合物，具体由原料药丹参酚酸B、丹参酮IIA及甘草次酸组成，所述组合物对肝纤维化具有协同增效的作用，效果强于单用一种或两种。本发明还涉及到所述药物组合物的优选制剂，如脂质体及冻干粉针，以及所述制剂的制备方法。
【专利说明】一种治疗肝纤维药物组合物及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种治疗肝纤维的药物组合物，所述药物组合物由丹参酮IIA、丹参酚酸B及甘草次酸组成，本发明还涉及由该药物组合物制成的药物制剂，如脂质体或冻干粉针及其制备方法，属于药物制剂【技术领域】。
【背景技术】 [0002]肝病是一个严重的公共卫生问题，目前我国慢性肝病及携带患者达1.2亿人。肝纤维化是各种原因引起的慢性肝病共同的病理特征，表现为肝内纤维结缔组织增生与沉积，是机体对慢性肝损伤的创伤-愈合反应，是慢性肝病向肝硬化发展的中间环节，是近10多年来全球范围肝病研究的热点。研究资料表明肝纤维化病症经过治疗可以逆转[1]，但仍有25%~40%的肝纤维化最终会发展为无法逆转的肝硬化。所以，阻断及逆转肝纤维化已成为慢性肝病治疗中的关键环节。
[0003]从现代医学的角度探究，肝纤维化是肝细胞发生坏死及炎症刺激时，肝内纤维结缔组织增生的病理过程，是肝硬化形成的病基。肝纤维化形成机制复杂，但其核心环节为肝星状细胞(HSC)的激活、增殖，以致肝损伤后HSCs发生活化，细胞表型转变为肌纤维样细胞，生成细胞外基质(ECM)的能力明显增强，表达基质金属蛋白酶(MMP)抑制物增加、MMP活性降低及ECM降解减少，进而导致肝脏胶原沉积与纤维化。随着对肝纤维化发生机制的认识不断深入，人们提出了在各个环节上治疗的方法，但临床效果并不理想。西药对肝纤维化的治疗尚缺乏理想的药物和方法，目前认为有一定疗效的药物，不良反应大，费用高。
[0004]中医学认为，肝纤维化属癥瘕、积聚等范畴，其病机为正虚血瘀。在肝纤维化的发病过程中，血瘀与气虚相互伴生及互为因果。瘀血阻络，必阻碍气机，血为气之母，气为血之帅，气机阻滞，血行不畅，进一步导致瘀阻经络，从而形成气血不畅的恶性循环。正气虚弱是肝纤维化的内因和转归，肝血瘀阻是肝纤维化的病理基础。现代病理学研究亦证明，肝细胞及窦内皮细胞的变性坏死，引起肝组织微循环障碍而产生血瘀证，同时贮脂细胞及肝细胞增生分泌大量胶原蛋白，形成胶原纤维束，逐渐发展为纤维化，形成血瘀证。由此可见，血瘀是肝纤维化的病理基础及病机关键。由于中医采用复方中药，对病理复杂的肝纤维化病症可发挥其综合治疗优势。
[0005]丹参-甘草为来源于临床的肝纤维治疗药对，基于中药组分配伍理论，不仅活血与补气的功效互生互动，也实现了将方剂“复杂-简单-复杂”的分解与整合。
[0006]丹参、甘草两药材中对肝纤维化具有治疗作用的主要有丹参酚酸B(Sal B)、丹参酮IIA(TSN)、甘草次酸(GA)、甘草酸(GCA)四种成份，其中，甘草中甘草酸体内活性代谢产物为甘草次酸，且对大鼠离体肝细胞的生物膜效应及肝细胞膜上的结合位点，甘草次酸较甘草酸更为显著。选择临床药对丹参-甘草中的丹参酚酸B、丹参酮IIA和甘草次酸三种抗肝纤维化作用显著但作用环节、作用机理均不相同的有效成分，组成复方，治疗肝纤维。
【发明内容】
[0007]本发明的目的在于提供一种治疗肝纤维化的药物组合物，所述药物组合物主要由原料药丹参酚酸B、丹参酮IIA、甘草次酸组成，各原料药间的重量配比为:以丹参酮IIA为I重量份计，丹参酚酸B为1-12重量份，甘草次酸为1-9重量份。优选地，所述各原料药间的重量配比为，以丹参酮IIA为I重量份计，丹参酚酸B为9重量份，甘草次酸为6重量份。
[0008]本发明技术人员发现，将丹参酮IIA、丹参酚酸B、甘草次酸按适当比例混合，在治疗肝纤维化方面，比如以人肝星状细胞(HSC)为例，可以起到很好的协同增效的作用。
[0009]本发明的再一方面，是提供一种含有本发明所述活性成分的制剂，所述制剂包括本发明由原料药丹参酮IIA、丹参酚酸B、甘草次酸，以及制药上可接受的辅料制成。
[0010]本发明所述的包含本发明原料药活性成分的制剂，可以是口服给药的制剂，如片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、口服液，也可以是非经胃肠道给药的制剂，如注射剂、喷雾剂、贴剂等。
[0011]优选的一方面，本发明所述制剂为脂质体制剂。
[0012]由于丹参酚酸B化学结构不稳定，在水溶液中极易降解和被氧化，通过一系列反应生成丹参素、原儿茶醛、咖啡酸、紫草酸和丹酚酸E、紫草酸异构体1、I1、III及原紫草酸和二聚咖啡酸等复杂产物。
[0013]丹参酮IIA在水中的溶解度较差，为0.24mg/L。李素春等将美国FTSN指导新药研究的生物药剂学分类系统运用到丹参酮IIA的吸收预测和剂型设计中，研究表明丹参酮IIA溶解度和渗透性均较低，属于第IV类化合物。研究证实，丹参酮II A的口服绝对生物利用度低于3.5%，一方面是由于其水溶性极差，另一方面是由于其透膜性差，自身受P-糖蛋白作用以及受首过代谢的影响。因此含丹参酮II A的普通制剂(如片剂、胶囊等)，生物利用度均不高，直接影响临床疗效。
[0014]甘草次酸为三萜皂苷元成分，是甘草酸类口服药在体内真正的药用结构，但其难溶于水，水中溶解度仅为6.32mg/L, 口服利用度差，故市售制剂一般为甘草酸盐，但是由于其需要经过水解方可吸收，且有复杂的肝肠循环，不同患者的生物利用度及药动学数据差别很大，且长期服用易出现水钠潴留、高血压、低钾性肌病等假醛固酮症。
[0015]基于上述三种药物药效显著但口服生物利用率均较低的特点，选择合适的药物传递系统以提高药效尤为重要。
[0016]因此，本发明提供了一种脂质体制剂，所述脂质体的处方组成为:丹参酮IIA为I重量份，丹参酚酸B为9重量份，甘草次酸为6重量份，磷脂为70-80重量份，胆固醇为10-20重量份。
[0017]在本发明的一实施例中，提供了制备本发明所述脂质体的方法。制备本发明所述脂质体的方法，可以是采用薄膜分散法、超声分散法、PH梯度法、硫酸铵梯度法、醋酸钙梯度法、逆向蒸发法、注入法、高压乳匀法、复乳法、冻融法、超临界法中的一种或多种，优选为采用薄膜分散法、超声分散法及PH梯度法相结合。具体地，制备本发明所述脂质体的步骤包括:称取处方量磷脂、胆固醇、甘草次酸及丹参酮II A，溶于共溶的有机溶剂中，蒸发除去有机溶剂，形成均匀透明的薄膜，加入纯水使薄膜溶胀水合。得到的甘草次酸-丹参酮IIA脂质体混悬液进一步匀化处理；另取丹参酚酸B溶于甘氨酸-盐酸缓冲液中，溶解，加入甘草次酸-丹参酮IIA脂质体混悬液中，水浴摇匀或超声分散即得甘草次酸-丹参酮IIA-丹参酚酸B复方脂质体。[0018]本发明的还一目的，在于提供另外一种非胃肠道给药的药物制剂，将上述制备得到的脂质体，加以制药上适当的支持剂，即可制备本发明所述的另一种非经胃肠道给药的制剂，冻干粉针制剂。所述的适当的支持剂，可以是蔗糖、山梨醇、右旋糖酐、木糖醇、乳糖、甘露醇、海藻糖中的一种或多种。
[0019]具体地，本发明所述的非胃肠道给药的冻干粉针剂，其处方组成为:丹参酮IIA为I重量份，丹参酚酸B为9重量份，甘草次酸为6重量份，磷脂为70-80重量份，胆固醇为10-20重量份，冻干支持剂为9重量份，所述冻干支持剂选自蔗糖、甘露醇或山梨醇。
[0020]制备本发明所述的非胃肠道给药粉针剂的方法，包括将上述制备得到的脂质体溶液，加入冻干支持剂，通过冷冻干燥，即可得到。
[0021]所述方法包括:称取处方量磷脂、胆固醇、甘草次酸及丹参酮IIA，溶于共溶的有机溶剂中，蒸发除去有机溶剂，形成均匀透明的薄膜，加入纯水使薄膜溶胀水合。得到的甘草次酸-丹参酮IIA脂质体混悬液进一步匀化处理；另取丹参酚酸B溶于甘氨酸-盐酸缓冲液中，溶解，加入甘草次酸-丹参酮IIA脂质体混悬液中，水浴摇匀或超声分散即得甘草次酸-丹参酮IIA-丹参酚酸B复方脂质体，分装，加入支持剂冷冻干燥，即得。
【专利附图】
【附图说明】
[0022]图1TSN-GA-Sal B混合液组对HSC增值细胞的生长抑制图；
[0023]图2TSN-GA_Sal B复方脂质体组对HSC增值细胞的生长抑制图；
[0024]图3为空白脂质体组对HSC增值细胞的生长抑制图；
[0025]图4为HSC对照 组；
【具体实施方式】
[0026]实施例1不同配比的本发明药物复方对人HSC的抑制作用
[0027]肝星状细胞(HSC)是位于肝血窦内皮细胞与肝细胞之间的一种肝非实质细胞，约占正常肝内细胞总数的5%~15%。HSC的激活及EMC的大量产生活化决定肝纤维化的形成、发展与转归，是肝纤维化的核心环节，活化后的HSCs分泌大量的细胞外基质和细胞因子，后者相互作用并形成网络结构，反过来促进HSCs的活化和增殖，不断循环，最终形成肝纤维化甚至肝硬化。而HSCs的凋亡则是肝纤维化逆转的关键。
[0028]取对数生长期的人HSC，0.25%胰蛋白酶消化后，用含10%胎牛血清的DMEM制成细胞悬液，以IXlOVmL接种于96孔板，每孔200 μ L。24小时后将96孔板中的培养液弃去，加入事先配好的各组药物，使其最终容积为200 μ L/孔，分成单纯HSC对照组，空白溶剂组、丹参酮IIA(TSN)组、甘草次酸(GA)组、丹参酚酸B(Sal B)组、TSN-GA混合溶液组、TSN-SalB混合溶液组、GA-Sal B混合溶液组、TSN-GA-Sal B混合溶液组，给药组药物浓度见表1，每组6个复孔。37°C、5% C02孵箱内培养24、48h后每孔加入A液(含MTT成分)10 μ L，继续孵育4h进行显色实验，可见蓝紫色结晶。终止培养，吸弃孔内培养上清液，每孔加入100 μ L的B液，低速振荡lOmin，使结晶充分溶解。选择490nm为测量波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔吸光度值(A值)。并根据A值计算细胞生长抑制率(GI) = (AO-Ai)/A0，其中GI表示药物对细胞增殖抑制率，Ai表示实验组细胞A值，AO表示对照组细胞A值，光镜监控细胞形态变化。[0029]表1 TSN-GA-Sal B为1:6:9时对人HSC增值的影响
[0030]
【权利要求】
1. 一种治疗肝纤维化的药物组合物，所属组合物由原料药丹参酮IIA、丹参酚酸B及甘草次酸组成，所述原料药的重量配比为:以丹参酮IIA为I重量份计，丹参酚酸B为1-12重量份，甘草次酸为1-9重量份。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，所述原料配比为:以丹参酮IIA为I重量份计，丹参酹酸B为9重量份,甘草次酸为6重量份。
3.—种药物制剂，所述药物制剂含有权利要求1或2所述原料药组分，及制药上可接受的赋形剂。
4.权利要求3所述的药物制剂，其中所述制剂为原料药与赋形剂制成的脂质体。
5.根据权利要求3所述的药物制剂，所述脂质体的处方组成为:丹参酮IIA为I重量份，丹参酚酸B为9重量份，甘草次酸为6重量份，磷脂为70-80重量份，胆固醇为10-20重量份。
6.一种制备权利要求4或5所述脂质体的方法，所述方法包括:称取处方量磷脂、胆固醇、甘草次酸及丹参酮ΠΑ，溶于共溶的有机溶剂中，蒸发除去有机溶剂，形成均匀透明的薄膜，加入纯水使薄膜溶胀水合。得到的甘草次酸-丹参酮IIA脂质体混悬液进一步匀化处理；另取丹参酚酸B溶于甘氨酸-盐酸缓冲液中，溶解，加入甘草次酸-丹参酮IIA脂质体混悬液中，水浴摇匀或超声分散即得甘草次酸-丹参酮IIA-丹参酚酸B复方脂质体。
7.权利要求3所述的药物制剂，所述制剂为冻干粉针剂。
8.权利要求7所述的药物制剂，所述冻干粉针的处方为:丹参酮IIA为I重量份，丹参酚酸B为9重量份，甘草次酸为6重量份，磷脂为70-80重量份，胆固醇为10-20重量份，冻干支持剂为9重量份,所述冻干支持剂选自鹿糖、甘露醇或山梨醇。
9.一种制备权利要求7或8所述冻干粉针的方法，所述方法包括:称取处方量磷脂、胆固醇、甘草次酸及丹参酮II A，溶于共溶的有机溶剂中，蒸发除去有机溶剂，形成均匀透明的薄膜，加入纯水使薄膜溶胀水合。得到的甘草次酸-丹参酮IIA脂质体混悬液进一步匀化处理；另取丹参酚酸B溶于甘氨酸-盐酸缓冲液中，溶解，加入甘草次酸-丹参酮IIA脂质体混悬液中，水浴摇匀或超声分散即得甘草次酸-丹参酮IIA-丹参酚酸B复方脂质体，分装，加入支持剂冷冻干燥，即得。
【文档编号】A61K9/127GK103520182SQ201310496973
【公开日】2014年1月22日 申请日期:2013年10月22日 优先权日:2013年10月22日
【发明者】王秀丽, 林珈好, 王玉蓉 申请人:王秀丽