一种苦菜总黄酮的提取方法及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种苦菜总黄酮的提取方法及其应用，具体涉及一种利用超声波辅助醇提的方法。其处理步骤：将新鲜的野生苦菜烘干→用粉碎机粉碎→超声波提取→合并滤液→减压浓缩→萃取→干燥。本发明工艺简单，提取效率高，节约能源，成本低、适于大规模工业化生产。本发明所述的苦菜总黄酮提取物尤其适合在制备抗肿瘤产品中的应用，所述的产品包括药品、保健品、食品。
【专利说明】一种苦菜总黄酮的提取方法及其应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种天然药用植物中活性成分的提取技术，特别是涉及一种利用超声波辅助醇提提取天然植物中有效成分的方法，以及所得苦菜总黄酮在制备抗肿瘤产品中的应用。
【背景技术】
[0002]癌症是一大类恶性肿瘤的统称。癌细胞的特点是无限制、无止境地增生，使患者体内的营养物质被大量消耗；癌细胞释放出多种毒素，使人体产生一系列症状；癌细胞还可转移到全身各处生长繁殖，导致人体消瘦、无力、贫血、食欲不振、发热以及严重的脏器功能受损等等。与之相对的有良性肿瘤，良性肿瘤则容易清除干净，一般不转移、不复发，对器官、组织只有挤压和阻塞作用，但癌症(恶性肿瘤)还可破坏组织、器官的结构和功能，引起坏死出血合并感染，患者最终由于器官功能衰竭而死亡。到了科学高速发展的今天，我们有理由相信癌症并非不治之症。致力于自然医学研究的医学专家们研究发现:负离子对抑制癌细胞转移有令人鼓舞的效果，重要的是利用自然因子负离子对癌症患者治疗对机体无任何损害，没有任何毒副作用。
[0003]癌症严重威胁着人类的生命，是当今世界上大多数国家的主要死因之一。据世界卫生组织统计，全世界每年死于癌症的患者约500万，因此癌症的治疗和预防任务十分艰巨。
[0004]生物总黄酮是指黄酮类化合物，是一大类天然产物，广泛存在于植物界，是许多中草药的有效成分。在自然界中最常见的是黄酮和黄酮醇，其它包括双氢黄(醇)、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等。
[0005]近年来，由于自由基生命科学的进展，使具有很强的抗氧化和消除自由基作用的类黄酮受到空前的重视。类黄酮参与了磷酸与花生四烯酸的代谢、蛋白质的磷酸化、钙离子的转移、自由基的清除、抗氧化活力的增强、氧化还原作用、螯合作用和基因的表达。它们对健康的好处有:(1)抗炎症(2)抗过敏(3)抑制细菌(4)抑制寄生虫(5)抑制病毒
[6]防治肝病(7)防治血管疾病(8)防治血管栓塞(9)防治心与脑血管疾病(10)抗肿瘤
(11)抗化学毒物等。天然来源的生物黄酮分子量小，能被人体迅速吸收，能通过血脑屏障，能时入脂肪组织，进而体现出如下功能:消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、活化大脑及其他脏器细胞的功能、抗脂肪氧化、抗衰老。
[0006]苦菜是菊科的一年生的或两年生的草本植物，别名山苦菜。主要分布在分布于中国北部、东部和南部等地区，生长于山地草坡，路边以及田野里，取材范围很广。苦菜，味:辛、苦，性寒。功效:清热解毒，凉血，祛瘀止痛，可以用来治疗肠痈、肺痈高热、咳吐脓血、热毒疮疔、疮疖痛肿、胸腹疼痛、阑尾炎、肠炎、痢疾、产后腹痛、痛经等。本实验发明采用的是液-液-液三相萃取，由于生物体系的组分特性以及产物的不稳定性，使得在生物体系中使用传统的液-液萃取过程存在很多不足之处，如选择性差、步骤繁多、产品活性损失过大。由于液-液-液三相萃取体系可在一定程度上改善萃取效果，弥补液-液两相萃取的不足。并且现在目前传统植物提取方法设备昂贵，提取天然植物有效成分效率低，污染大，成本高，提取过程较复杂，使得天然药用植物的价值得不到很好的利用。
[0007]苦菜在人类生活中的应用并不是很广泛，尤其在在抗肿瘤药物中的应用更是很少见报道。
【发明内容】
[0008]为了扩大苦菜的应用范围，扩大抗肿瘤产品的应用品种，本发明特别提供了一种苦菜总黄酮的提取方法和其在抗肿瘤产品中的应用。
[0009]为实现上述目的，苦菜总黄酮的提取方法采用如下制作步骤:
O以新鲜的野生苦菜为原料，清洗干净，烘干，用粉碎机粉碎；
2)称取一定量苦菜粉末于提取器中，向提取器中加入料液比为1:1-10、50%-70%的乙醇溶液，超声提取时间为5(T90min，提取温度为6(T75°C，超声波提取频率为20_80KHz ；
3)冷却抽滤，滤渣利用超声提取2次，合并三次滤液后，将其减压浓缩，减压浓缩至原体积的1/3-1/2，然后转至分液漏斗中用石油醚和乙酸乙酯的混合物进行萃取，取下层，回收试剂，冷冻干燥得到苦菜总黄酮。
[0010]步骤2)中所述的浓缩液、石油醚、乙酸乙酯体积比为1:2-5:2_6。
[0011]本发明的目的在于提供一种苦菜总黄酮在抗肿瘤方面的应用。
[0012]本发明制备的提取物在抗肿瘤作用上的药理活性通过以下药理实验证明。
[0013]选用人肝癌(H22)或人大肠癌(HT-29)或艾氏腹水瘤(EAC)细胞系对数期细胞，用0.5%的胰蛋白酶分解细胞后，用含10%胎牛血清的1640培养液中配成单个细胞悬浮液，接种到96孔培养板中，每孔100 μ L，置37°C，5%C02的条件下培养24小时，倒置显微镜下观察。(2)设置实验组和对照组，实验组换新的含不同浓度苦菜总黄酮培养基(苦菜总黄酮提取物的浓度为1.82,0.96,0.51,0.08,0.0020mg/ml)，对照组则换含等体积溶剂的培养基，每组设3组平行孔，置37°C，5%C02的条件下培养2?4天，离心(1000转，5min),弃去上清液。
(3)每孔加入100 μ L新鲜配置的含0.15mg/ml MTT的无血清培养基。37°C继续培养3h。小心弃去上清液，并加入200 μ LDMS0，用微型超声振荡器混匀后，在酶标仪上以实验波长为570nm测定光密度值。并计算不同药剂量对肿瘤细胞的抑制率。结果见表I。
[0014]肿瘤细胞抑制率=(1-OD实验/OD对照)*100%
表I
苦荽总黄Si的浓度 _编邋CH33) 人大麗埔编邋犮氏應水嫿编邋 CMgtel)抻制聿(K)arr-29)押幸(K) (EAC)抑胡聿(1K)
1Λ267J0370.0369_56
0_9672*574J257134
0:5170.4169J23703t
OJOt40J2345j6350J3S
0002010.7515J231712
以上实验数据表明苦菜总黄酮对人肝癌(H22)、人大肠癌(HT-29)、艾氏腹水瘤(EAC)细胞具有明显的抑制作用。
[0015]本发明所制备的苦菜总黄酮提取物与一种或多种药学上可接受的固体或液体赋形剂或辅剂结合，制成适合人或动物适合的剂型。
[0016]下面将结合【具体实施方式】进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
[0017]【具体实施方式】:
实施例1:
苦菜总黄酮的提取方法
以新鲜野生苦菜为原料，清洗干净，烘干，将其粉碎，取2kg苦菜粉末置于提取设备中，并加入料液比为1:1、50%的乙醇，超声提取时间为50min，提取温度为60°C，超声波提取功率为20KHz，冷却抽滤，滤渣超声提取2次，合并3次滤液，减压浓缩至原体积的1/3，并将其移至分液漏斗中，加入浓缩液、石油醚、乙酸乙酯体积比为1:2:2进行萃取，取下层，回收试齐U，冷冻干燥得到苦菜总黄酮。经UV检测，得到提取物中总黄酮的含量为75.05%。
[0018]实施例2:
苦菜总黄酮的提取方法
以新鲜野生苦菜为原料，清洗干净，烘干，将其粉碎，取2kg苦菜粉末置于提取设备中，并加入料液比为1:5、65%的乙醇，超声提取时间为70min，提取温度为70°C，超声波提取功率为65KHz，冷却抽滤，滤渣超声提取2次，合并3次滤液，减压浓缩至原体积的1/3，并将其移至分液漏斗中，加入浓缩液、石油醚、乙酸乙酯体积比为1:3:3进行萃取，取下层，回收试齐U，冷冻干燥得到苦菜总黄酮。经UV检测，得到提取物中总黄酮的含量为75.05%。
[0019]实施例3:
苦菜总黄酮的提取方法
以新鲜野生苦菜为原料，清洗干净，烘干，将其粉碎，取2kg苦菜粉末置于提取设备中，并加入料液比为1:10、70%的乙醇，超声提取时间为90min，提取温度为75°C，超声波提取功率为80KHz，冷却抽滤，滤渣超声提取2次，合并3次滤液，减压浓缩至原体积的1/2，并将其移至分液漏斗中，加入浓缩液、石油醚、乙酸乙酯体积比为1:5:6进行萃取，取下层，回收试齐U，冷冻干燥得到苦菜总黄酮。经UV检测，得到提取物中总黄酮的含量为75.05%。
[0020]实施例4:
苦菜总黄酮制成注射剂
在实施例1、2、3中制得的苦菜总黄酮活性成分中加入乙醇或它们的混合物作为溶剂，并加入泊洛沙姆作为增溶剂，醋酸盐作为PH调剂剂，氯化钠作为渗透压调节剂即可制成注射剂。
[0021]实施例5:
苦菜总黄酮制成片剂
在实施例1、2、3中制得的苦菜总黄酮总加入淀粉、蜂蜜、乙醇、干淀粉、滑石粉、聚乙二醇即可制成片剂。
【权利要求】
1.一种苦菜总黄酮的提取方法，其特征在于:以新鲜野生苦菜为原料，清洗干净，烘干，用粉碎机粉碎，过2(Γ60目筛，将苦菜粉末放于提取装置中，然后按照一定的料液比加入乙醇溶液，超声提取；冷却抽滤，滤渣重复提取2次；合并三次滤液后，减压浓缩至原体积的1/3-1/2，浓缩液转至分液漏斗中用石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂进行萃取，取下层，回收试剂，冷冻干燥得到苦菜总黄酮。
2.根据权利要求1所述的一种苦菜总黄酮的提取方法，其特征在于:所述的料液比为1:1-10。
3.根据权利要求1所述的一种苦菜总黄酮的提取方法，其特征在于:所述的乙醇浓度为50%-70%，超声提取时间为50-90min，提取温度为60_75°C。
4.根据权利要求1所述的一种苦菜总黄酮的提取方法，其特征在于:所述的超声波提取频率为20-80KHz。
5.根据权利要求1所述的一种苦菜总黄酮的提取方法，其特征在于:所述的浓缩液、石油醚、乙酸乙酯体积比为1:2-5:2-6。
6.根据权利要求Γ5所述方法制备的苦菜总黄酮提取物在制备抗肿瘤产品中的应用。
7.根据权利要求6所述的抗肿瘤产品包括药品、保健品、食品。
【文档编号】A61P35/00GK104173403SQ201410445547
【公开日】2014年12月3日 申请日期:2014年9月4日 优先权日:2014年9月4日
【发明者】张金芳, 杨存 申请人:南京标科生物科技有限公司