一种复方阿普洛尔纳米乳抗高血压药物的制作方法

本发明属于医药领域，涉及一种抗高血压药物阿普洛尔的新剂型，特别涉及一种复方阿普洛尔纳米乳抗高血压药物。

技术背景

阿普洛尔(Alprenolol)即1-(异丙基氨基)-3-(2-烯丙基苯氧基)-2-丙醇[1-(Isopropylamino)-3-(2-allylphenoxy)-2-propanol]。分子式C₁₅H₂₃NO₂。分子量249.35。CAS号13655-52-2。本品有肾上腺素β受体部位竞争性地抑制儿茶酚胺的作用。通过减弱或防止β受体兴奋而使心脏的收缩力与收缩速度下降，通过传导系统的传导速度减慢，使心脏对运动或应激的反应减弱。本品通过中枢、肾上腺素能神经元阻滞、抗肾素活性以及心排血量减低等降低血压，适用于治疗高血压。由于本品能拮抗儿茶酚胺效应，也用于治疗嗜铬细胞瘤及甲状腺机能亢进，使β1和β2受体的活动均处于抑制状态。本品属有内在拟交感活性的、无选择性的β受体阻断药，其可使血压降低，但对心肌及房室传导的抑制作用较小。口服吸收良好。

现在市场上已有如阿普洛尔片剂的降压药物，虽然口服后能从胃肠道吸收，但吸收不完全，另外片剂中药物的溶出速率慢，生物利用度极差，使得阿普洛尔的药效无法迅速得到利用；另一方面，天麻和钩藤这些效果显著的中药也没有合适的剂型得到应用。

技术实现要素：

针对现有技术中存在的缺陷与不足，本发明的目的在于提供一种分布均匀，稳定性好，渗透性高、溶解度好、生物利用度高的复方阿普洛尔纳米乳抗高血压药物。

实现上述发明目的的技术方案是：

一种复方阿普洛尔纳米乳抗高血压药物，其原料及其质量百分比为：

其余成分为蒸馏水，上述原料的质量百分比之和为100％。

所述的表面活性剂为聚氧乙烯40氢化蓖麻油、蓖麻油聚氧乙烯醚40、吐温80或泊洛沙姆188中的任意一种或与span80的混合物，这些表面活性剂对人体低毒、安全、无刺激。

本发明选用的油是的油是肉豆蔻酸异丙酯、乙酸乙酯、油酸或油酸乙酯中的任意一种或几种的混合物，安全、无毒。

所述的助表面活性剂为无水乙醇、1，2-丙二醇、聚乙二醇400或丙三醇中的任意一种或几种的混合物。

本发明复方阿普洛尔纳米乳抗高血压药物，其特征在于：该药的粒径介于10～100nm之间。

本发明选用钩藤有良好的降压作用。钩藤煎剂，无论对麻醉动物或不麻醉动物，正常动物或高血压动物，也不论静脉注射或灌胃给药均有降压作用。且无快速耐受现象。麻醉兔静脉注射钩藤煎剂2～3g/kg或麻醉犬静脉注射该煎剂0.05g/kg，均可使血压比原水平降低30～40％，持续3～4小时以上。麻醉猫静脉注射钧藤煎剂6.25g/kg，钩藤总碱盐酸盐20mg/kg、钩藤碱盐酸盐20mg/kg，血压均呈三相变化：先降压，随之很快回升，然后又下降，降压幅度分别为30～70％、13.9～23.2％和11.7～41.7％，维持3～4小时。但钩藤煎剂久煎则降压作用减弱，以煎20分钟以内为宜。钧藤乙醇水提物3g/kg的降压程度与煎剂2g/kg相似。猫静脉注射钩藤碱20mg/kg或钩藤总碱20mg/kg均有降压作用；大鼠灌胃钩藤总碱50mg/kg.天20天或钩藤碱50mg/kg.天15天，均有显著降压作用。用肾型高血压大鼠，分别灌胃钧藤煎剂8g/kg、钩藤总碱50mg/kg和钩藤碱50mg/kg，每日1次，连续15～20天，血压于第3～5天开始下降，第7～15天降至最低，平均降压分别为16.9mmHg、12mmHg和18mmHg；钩藤碱20mg/kg，腹腔注射，可使大鼠当天血压下降，用药8天，平均降压24mmHg。麻醉犬12只，静脉恒速灌注钩藤总碱20mg/kg后出现血压下降；心输出量先短暂增加继而略有减少；总外周血管阻力在降压初期明显降低；心率显著减慢；心搏量明显增加。钩藤总碱通过降低外周阻力(早期)和减少心输出量(后期)引起降压。从钧藤碱对麻醉犬和猫心肌力学的影响中，采用dp/dt做为采用多指标综合分析，在测定dp/dt的同时，用应力计弓测定左室壁肌张力，作为一个心肌收缩力指标，并结合负荷依赖性小，反映收缩性能水平急性改变敏感的VcE类指标，观察钧藤碱对其心脏的肌力效应。静脉注射钩藤碱20mg/kg后，显著降低LVP，dp/dtmax，LVMT，Vpm，和Vmax等心肌收缩性指标；钩藤碱可使心室内压下降，故TTI减小，表示心肌能量和O₂的消耗减少，在心肌供应不足时可能具有保护意义。钩藤碱虽有明显的负性肌力作用并能减少O₂，然而各项指标在药后15分钟左右趋于恢复，表明其抑制心肌收缩性能的作用是可逆的。该药降压作用除血管扩张、外周阻力降低外，部分与心肌收缩性能受抑也有关系。用离体兔胸主动脉条，探讨钩藤碱扩张血管的机理，并与异搏定相比较。两者可使K⁺和去甲肾上腺素所致的收缩张力下降，K⁺收缩的作用显著大于去甲肾上腺素，两药明显减弱去甲肾上腺素收缩反应中内Ca⁺释放部分，并使K⁺、去甲肾上腺素和Ca²⁺量-效曲线右移，最大反应压低，提示钧藤碱阻滞外Ca²⁺内流和内Ca²⁺释放，其特点与异搏定相似。钧藤的甲醇水提物给大鼠静脉注射0.1mg/kg，也有强而持久的降压作用。

天麻(Gastrodia elata Bl)，味甘、性微温。有平肝、息风、镇痉等功能。天麻对麻醉犬和兔血液动力学参数的影响。麻醉犬血液动力学实验：取杂种犬16只，雌雄兼用，体重11.9±SD1.9kg，随机等分两组，戊巴比妥钠30mg/kg，静脉注射麻醉，用MPU-0.5A压力换能器测取平均动脉血压(mAP)，用RM-6000型多导生理仪记录。十二指肠给药，实验用20％AG混悬液，对照用生理盐水。给予AG后的10～60分钟椎动脉流量增加15～30％(P＜0.05，0.01)，其作用峰时在30～40分钟。其它各项动力学参数均无明显改变。表现为AG选择性增加椎动脉流量的同时未见任何其它心血管效应。麻醉兔颈内动脉流量和心输出量实验：日本种大耳兔24只，雌雄兼用，体重2.2±0.4kg，随机分为三组，十二指肠给药，实验用20％AG混悬液，阳性对照用尼卡的平(250ug/ml)，对照用生理盐水。给予天麻水提物后10～60分钟颈内动脉流量增加24～111％，其作用峰时在40～60分钟，心输出量并无明显改变。生理盐水组的上述两项指标均无明显变化。尼卡的平组在用药后20-60分钟，颈内动脉流量增加41～88％，其作用峰时在30～50分钟，心输出量在10～40分钟有轻度增加。从上述实验提示由于天麻水提物，吸收迅速，显效快，口服几无毒性，故对脑血管疾病有开发价值。

本发明中由于阿普洛尔在水及油中的溶解度均不大，所以加入了乙醇、乙酸或磷酸为助溶剂。

本发明在药物中加入刺激性小的助表面如乙醇、1，2-丙二醇、丙三醇或聚乙二醇400，除了助溶作用外，助表面活性剂主要是为了调整表面活性剂的亲水亲油平衡值(HLB)，使得油水界面张力进一步降低，增大界膜的油水性和刚性。助表面活性剂掺入到界面膜中，促进曲率半径很小膜的形成，扩大复方阿普洛尔纳米乳的乳区面积。

本发明的复方阿普洛尔纳米乳通过口服给药，极大的提高了药物的溶解度，减少药物在体内的首过效应，促进药物的胃肠道吸收。阿普洛尔在水中极难溶解，使药物的转运及吸收变得困难，纳米乳基质为阿普洛尔提供了良好的溶解环境。口服时可经淋巴吸收，克服首过效应和分子通过胃肠道时的屏障。此外，复方中加入纯天然的钩藤水提物和天麻水提物，提高了本纳米乳的疗效，并且加压更加持久。

本发明的复方阿普洛尔纳米乳与现有技术相比，具有以下优点：

1.本发明的阿普洛尔抗高血压纳米乳的药物粒径在10～100nm之间，平均粒径为39.8nm，是将阿普洛尔溶于助溶剂中，再与油相互溶，加入表面活性剂(或和助表面活性剂)，用蒸馏水滴定到均匀、透明的纳米乳体系。形成的复方阿普洛尔纳米乳含阿普洛尔达6.3％以上。

2.本发明的阿普洛尔抗高血压纳米乳分布均匀，体系透明、稳定性好，有较低的表面张力，油包水型纳米乳具有良好的流动性。

3.本发明的阿普洛尔抗高血压纳米乳给药后迅速被网状内皮细胞吞噬，使药物迅速起效，并维持恒定的血药浓度及药理效应，提高药物的生物利用度，减少药物的用量和使用次数。

4.复方中加入纯天然的钩藤水提物和天麻水提物，提高了本纳米乳的疗效，并且加压更加持久。

5.本发明的阿普洛尔抗高血压纳米乳制备方法简单，药效稳定，生耗能低。

6.本发明制成纳米后可制成口服液直接服用、也可经胶囊包封或经冻干粉技术等处理。

附图说明

图1为本发明复方阿普洛尔纳米乳电镜照片。

图2为本发明复方阿普洛尔纳米乳粒径分析图。

具体实施方式

发明人给出具体制备方法实施例及使用药效试验来进一步说明本发明药物的效果。

试验例1本发明复方阿普洛尔纳米乳抗高血压药物粒径大小分析

本发明经透射电子显微镜检测(图1)，液滴呈类球形，分散性好，无粘连。经马尔文粒度分析仪检测(图2)其直径分布在21.4～60.1nm之间，平均粒径为39.8nm。

试验例2本发明复方阿普洛尔纳米乳抗高血压药物稳定性分析

通过以下离心试验、光稳定性试验、温度稳定性试验等观察本发明复方阿普洛尔纳米乳抗高血压药物的稳定性，观察本发明是否有分层、浑浊或晶体析出等不稳定现象。

1.高速离心试验

取适量制备好的本发明复方阿普洛尔纳米乳抗高血压药物于离心管中，以15 000r/min的转速离心10min，离心试验后，本发明复方阿普洛尔纳米乳抗高血压药物依然保持离心前的澄清透明，未见分层、浑浊或晶体析出等不稳定现象。

2.光稳定性试验

将适量制备好的复方阿普洛尔纳米乳抗高血压药物装入透明好的无色、透明小玻璃瓶中，密封，放置于正常光照条件下10d，每隔24h取样观察。结果表明复方阿普洛尔纳米乳抗高血压药物每份样品均保持澄清透明，未见分层、浑浊或晶体析出等不稳定现象。

3.温度稳定性试验

将适量制备好的复方阿普洛尔纳米乳抗高血压药物装入透明好的无色、透明玻璃瓶中，密封，放置于4℃、室温(25℃)和40℃三中温度条件下留样考察各30d，每隔3d取样观察。结果表明，复方阿普洛尔纳米乳抗高血压药物在此三种温度条件下均保持澄清透明，未见分层、浑浊或晶体析出等不稳定现象。

4.长期稳定性试验

将3批纳米乳密封于棕色玻璃瓶内，置于(25±2)℃、相对湿度(60±5)％条件下12个月，分别于0、3、6、9和12个月时取样，考察纳米乳的性状及含量变化，并参考文献统计分析方法，计算复方阿普洛尔纳米乳抗高血压药物的有效期。试验结果表明在长期试验条件下，复方阿普洛尔纳米乳抗高血压药物的外观一直保持澄明、均一，未见分层、色变、絮凝和破乳等现象；体系中的阿普洛尔含量随时间延长而逐渐降低，其含量-时间变化曲线提供的线性回归方程，计算出复方阿普洛尔纳米乳抗高血压药物的有效期为27.13个月。

试验例3大鼠尾部测压法测定复方阿普洛尔纳米乳抗高血压药物的药效(与市售阿普洛尔片对比)

SHR大鼠30只随机分为3组，每组10只，分别设为阿普洛尔片干预组、复方阿普洛尔纳米乳组和阳性对照组，前两组分别给予阿普洛尔片混悬液和复方阿普洛尔纳米乳各15mg/kg·d，溶于饮水中，均从饮水中给药，1次/d，连续14周。WKY大鼠10只为正常对照组，SHR大鼠10只为阳性对照组、对照组不给药物，正常饮水。

测量各组大鼠尾动脉血压。鼠龄为6周时(即用药前)测压1次，鼠龄7周(用药后1周)测压1次，以后每隔两周测1次血压，直到实验结束。结果见表1。

表1各组大鼠SBP的比较(x±s，n＝10)

结果显示，复方阿普洛尔纳米乳与阳性对照组比较，差异极显著，表明阿普洛尔不但能显著降低阳性大鼠的血压，而且降压效果与阿普洛尔片剂相比效果更好。

试验例4毒性试验

本发明产品严格按照新药非临床安全性评价方法与市售阿普洛尔片剂对比进行了急性毒性试验，重复给药毒性试验、遗传毒性试验(包括Ames试验、小鼠骨髓微核试验、体外培养哺乳动物细胞染色体突变试验)、生殖毒性试验(一般生殖毒性试验、致畸敏感期毒性试验、围产期毒性试验)、致癌试验、免疫毒性试验和局部刺激性试验，试验结果如下。

本品对小鼠急性毒性实验结论：与市售阿普洛尔片剂对比，复方阿普洛尔纳米乳未出现计量内不良反应及死亡。

本发明产品的Ames试验、小鼠精子畸形试验和睾丸染色体畸变试验等遗传毒性试验的结果均为阴性。

大鼠30d喂养本发明产品的结果表明：与市售阿普洛尔片剂对比，在试验期内，复方阿普洛尔纳米乳计量内各实验组动物生长发育良好，体重、摄食量、血常规、血生化、脏器系数等指标均在正常范围内，病理组织学检查亦未见异常。

本品长期毒性实验结论：与市售阿普洛尔片剂对比，在试验期内，复方阿普洛尔纳米乳计量内，本药品在连续灌胃给药三个月未见大鼠不良反应，各项检查指标均在正常范围内，病理检查其主要脏器及靶器官均未见该药引起的中毒性病理改变。

钩藤碱和钩藤总碱小鼠腹腔注射的半数致死量分别为162.3mg/kg与144.2mg/kg，中毒时活动减少，全身无力；煎剂每日10g/kg分2次给兔灌服10天，钩藤总碱以50mg/kg给大鼠灌胃14天，均未见毒性症状与内脏病理形态的变化；钩藤总碱按每公斤50mg与100mg分别给幼大鼠灌服二月，低剂量组对生长、发育，肝、肾功能及血象均无明显影响，而高剂组的致死动物的心、肝、肾均呈明显的病理变化，因此大剂量或长期服用时，应注意肝、肾功能的检查。钩藤煎剂对小鼠腹腔注射的半数致死量为26.1±4.3g/kg或29.05±0.8g/kg。钩藤嫩枝煎剂则为35.2±5.4g/kg。钩藤总碱盐酸盐对小鼠灌胃和腹腔注射的半数致死量分别为514.6±29.1mg/kg和144.2±3.1mg/kg。钧藤碱对小鼠腹腔注射和皮下注射的半数致死量分别为162.3mg/kg和165mg/kg。家兔灌胃钩藤煎剂5g/kg，每日2次，连续10天，无明显中毒症状。幼年大鼠灌胃钩藤总碱盐酸盐50mg/kg(治疗剂量)，每日1次，于14天后解剖观察，未见内脏法生病理形态改变。但剂量加倍时，肝脏出现轻度炎性改变，停药后可很快恢复。断乳大鼠灌胃钧藤总碱盐酸盐50-100mg/kg，每日1次，连续2月，停药后再观察1月，小剂量(50mg/kg)对动物生长、发育、肝、肾功能及血象均无明显影响，病理检查仅见肾脏轻度营养性障碍。大剂量(100mg/kg)则可使动物致死。死亡的动物心、肝、肾均有明显的病变。

试验例5药物动力学

本品45min后血药浓度达峰值；与血浆蛋白结合率为89％。在肝中几乎全部被代谢成仍具药理活性的4-羟阿普洛尔。

实施例1

精确称取12g助溶剂乙醇，尽量多的溶入阿普洛尔中，得到其溶解量为6.3g，再与7gIPM互溶；精确称取表面活性剂EL40 28g和助表面活性剂乙醇4g，和已溶解阿普洛尔的油在室温(25℃)条件下搅拌均匀，然后向其中缓慢滴入溶解钩藤水提物与天麻水提物的蒸馏水。随着蒸馏水量的增加，体系黏稠度增大，当加入蒸馏水的量使体系由油包水变为水包油型纳米乳时，体系粘稠度从最粘稠的状态变稀，此时产生的即是澄清透明的复方阿普洛尔纳米乳，此时加入蒸馏水的量为32.5g，钩藤水提物为4.8g，天麻水提物为5.4g。此比例即为阿普洛尔抗高血压纳米乳的最优配比。

以下实施例步骤同实施例1：

实施例2

助溶剂乙醇10g，阿普洛尔5.7g，IPM 6.5g，EL40 24g，1，2-丙二醇8g，钩藤水提物为5.2g，天麻水提物为6g，蒸馏水34.6g。

实施例3

助溶剂乙醇14g，阿普洛尔8.1g，乙酸乙酯9.5g，泊洛沙姆188 24g，丙三醇12g，钩藤水提物为1.8g，天麻水提物为2.7g，蒸馏水27.9g。

实施例4

助溶剂乙醇10g，阿普洛尔5.1g，油酸乙酯6g，RH40 24g，乙醇4g，钩藤水提物为5.8g，天麻水提物为6.4g，蒸馏水38.7g。

实施例5

助溶剂乙醇11g，阿普洛尔6.7g，油酸乙酯7g，吐温80 20g，丙三醇12g，钩藤水提物为4.4g，天麻水提物为5.8g，蒸馏水33.1g。