一种新的中药免疫活性成分---中华猕猴桃多糖（Actinidia Chinensis Polysaccharide,简称ACPS），经本发明人研究表明，作为一种新的多糖免疫调节剂，能有效抑制流感病毒的复制及预防流行性感冒。据此而创制的“抗流感免疫多糖含片”，为防治流行性感冒提供了一种新的安全有效的天然制剂。本发明属医药生物学技术领域。
背景技术：
流行性感冒（简称流感），是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病。因病毒表面抗原（HA、NA）容易发生变异，使疫苗预防流感增加变数，也使人群缺乏免疫力。所以传播迅速，流行广泛。过去大流行时曾夺走了数千万人的生命。流感病毒有甲、乙、丙等型。我国曾发生十几次较大流行。主要由甲型病毒引起。新型禽流感病毒H7N9亦属甲型流感病毒亚型。目前尚缺特效防治流感的药物。虽已研制出一些新药，如金刚烷胺、三氮唑核苷、帕拉米韦等，但因这些合成的药物，均有不同程度的毒副反应。因而从植物药中寻找安全有效的抗流感病毒药物，已得到了欧美等各国及我国的重视。免疫力低下者以及老年人，是流感易感人群。因此，寻找能提高免疫力的药剂的研究工作也已展开。一种由美国推出的草药紫锥菊制剂，用作调节免疫力、预防流感的保健食品，近年已进入我国市场。但美国FDA已发出警告称“我们对以前批准的紫锥菊用于食品的依据不能确定。”，并责令违规公司予以纠正。不管怎样，寻找新的既能提高机体免疫力、达到预防流感，又能直接抑制流感病毒而达到治疗的天然药物，就显得迫切需要。
技术实现要素：
ACPS有抗流感病毒和预防流感作用。1983~1992年间，我们在最初发现民间抗癌中草药藤梨根的提取物，具有Lectin样作用。又历经多年研究后，发现其活性部位是一种多糖，是由半乳糖（G）与阿拉伯糖（A）聚合而成，G/A=3.05±0.28。随后，我们将其命名为中华猕猴桃多糖（ACPS）。并在国内外首先证明这是一种新的免疫调节剂。
进一步研究发现ACPS有明确的抗流感作用。简述于下：
1.ACPS对病毒空斑形成的抑制作用
流感病毒感染的狗肾传代细胞MDCK培养于凹孔板内，加入不同浓度的ACPS，对照组不加ACPS。继续培养后，观察计算每孔内空斑数，按公式计算：空斑抑制率%=（对照组平均空斑数-给药组平均空斑数）/对照组平均空斑数×100%。结果如表1所示：
表1 ACPS对流感病毒空斑形成的抑制作用
结果显示对所列流感病毒各毒株的抑制率，随着ACPS浓度的增加而增强。浓度大于0.5mg/ml即显示有抑制作用。ACPS对流感病毒空斑形成的抑制，表明它能抑制流感病毒的复制；
2.预先给予ACPS，对小鼠感染流感病毒的预防效果
昆明种小鼠预先腹腔一次性给药ACPS，对照组腹腔给予生理盐水安慰剂。24小时后，小鼠静脉注射感染流感病毒甲型H3N2京防75-39株的尿囊液。观察七天内小鼠死亡率，与安慰剂组比较，结果见说明书附图图1所示。显示预先一次性腹腔给予ACPS，小鼠死亡率从病毒对照组(不给药)的90％降至给药组的30％(25mg/kg组)P＜0.01。并显示药效的剂量依赖关系。表明ACPS有明显的预防流感的效果。 于感染流感病毒前24小时，一次性给予ACPS对流感小鼠的保护效果。每组小鼠10只，腹腔注射（i.p）给药。另外，根据总计240只小鼠分四批次实验，于24小时前一次性腹腔注射（i.p）给予ACPS，然后感染流感病毒。测得ACPS对流感病毒致死保护作用的半数有效剂（ED50mg/kg）分别为13.70/8.17/11.67和8.48，平均ED50为9.95±3.36；
3.不同时间预先给药，对于小鼠流感病毒感染的预防效果
各组小鼠于静脉感染流感病毒前24小时和6小时，分别一次性i.P给予ACPS 3.125mg/kg、6.25 mg/kg、12.5 mg/kg、25 mg/kg、50 mg/kg及安慰剂生理盐水。给药后同批静脉注射流感病毒，观察死亡、延长生命等情况。结果如表2所示。显示感染前24小时给药的预防效果优于6小时前给药，并显示ED50前者为6.25 mg/kg，后者为8.43 mg/kg；
表2 不同时间预先给予ACPS对小鼠静脉感染流感病毒的保护作用
注：-6、-24即感染前6小时、24小时一次性给药（i.P）。*P<0.05 **P<0.01
此外，于另一组实验中，于24小时前一次性口服25 mg/kg ACPS后，感染流感病毒，显示小鼠的保护率与生命延长率，与腹腔给药3.125 mg/kg组相当，前者分别为22.22%和42.8%，后者分别为22.22%和47.6%；
4.ACPS诱导小鼠体内产生干扰素
昆明种小鼠一次性i.P给予ACPS，于2、4、6、18小时取血，分离血清，2倍稀释后，加入L929细胞培养物内，测定血清干扰素滴度，并与阳性抗病毒药聚肌胞Poly I:C对比，结果显示，腹腔注射ACPS后2小时的血清干扰素达高峰。当ACPS剂量为50mg/kg、25 mg/kg和12.5mg/kg，分别测得干扰素滴度为160,40和10，呈量效关系。2小时的血清干扰素滴度与Poly I:C相当，4小时后滴度下降，6小时后消失。ACPS诱生的干扰素，对酸和热的耐受性与聚肌胞相似。因此，可能也是α-干扰素。如表3所示：
表3 ACPS诱生的干扰素及其对耐酸耐热性的比较
小结：①在体外通过病毒空斑形成抑制试验证明ACPS能直接抑制流感病毒的复制；②在体内通过预先给药后感染流感病毒的试验，证明ACPS有预防流感的作用。ACPS的抗流感作用可能还与它能诱生干扰素有关。
发现和证明ACPS的免疫调节作用：
1.体内试验表明ACPS能增强巨噬细胞的吞噬功能及小鼠抗感染免疫力。BALB/C小鼠每日i.P 注射ACPS 32 mg/kg×12，停药后次日测得腹腔巨噬细胞吞噬红酵母菌的功能明显增加，吞噬细胞的百分比从未给药对照组的15.0±4.8，增加至给药组的37.5±9.0(p<0.01)；吞噬指数从对照组的0.28±0.13增至给药组的0.92±0.67（p<0.05）。另外，小鼠用半数致死量的活菌E.Coli感染后，其死亡率从对照组的50%降至给药组的0%（p<0.0.1），但ACPS在体外并不抑制细菌生长；
2.对小鼠及人的T淋巴细胞的增殖作用
小鼠胸腺T细胞与ACPS一起培养后，加入3H-TdR后，显示ACPS促进胸腺T细胞的DNA合成。平均CPM±SD从空白对照组的3449±231，增至给药组的13342±2473(p<0.01)。另外，经分离获得的人外周血T及B淋巴细胞，与ACPS一起培养，用MTT法测得T细胞的增殖代谢明显增加，且有药物量效关系。但B细胞无影响。如表4所示：
表4 ACPS对人T、B细胞增殖的影响
5例慢性乙肝患者志愿应用ACPS 2-4mg/日×10天，取外周血淋巴细胞，用单克隆抗体间接免疫荧光法测得T4及T8细胞。结果显示T4细胞（CD4细胞）从治疗前的22-30.4%（平均25.2%）增至治疗后的31-37.5%（平均36.5%），T4/T8比值亦见恢复增加；
3.诱生小鼠内源性白介数2（1L-2）
小鼠每日I.P ACPS 6 mg/kg×4天，停药后第3、6天，用1L-2依赖的T细胞株CTLL细胞，加3H-TαR掺入后，测得小鼠的脾淋巴细胞培养上清液内，其促进CTLL细胞的1L-2活性，与生理盐水对照组比较，分别提高243%（3天，p<0.01）与265%（6天，P<0.05）。24 mg/kg剂量组的结果类似；
4.ACPS激活体内天然杀伤（NK）细胞的活性
BALB/C小鼠i.P ACPS连续10天，于第10、13天各取脾淋巴细胞作为效应细胞。靶细胞YAC-1瘤细胞预先用125I-UdR标记成每个细胞的放射性为1-2CPM。按效靶细胞之比为200:1与400:1，把两者混合培养后，分别测定上清液和细胞沉淀物的放射性脉冲数，计算125I-UdR释放百分率=上清液总CPM/(细胞CPM+上清液总CPM)×100%。结果如表5所示：
表5 体内给予ACPS对脾脏NK细胞活性的影响
表5结果显示，与安慰剂组相比，给ACPS组小鼠的脾NK细胞对靶细胞的细胞毒作用均明显提高，表明ACPS在体内能激活NK细胞的溶瘤活性
小结；以上各结果证明ACPS作为一种免疫调节剂，对免疫反应中起重要作用的巨噬细胞、T淋巴细胞，特别是T4细胞、NK细胞等均有促进作用，从而有利于启动免疫防御链的多个环节，以对抗因免疫监视功能低下而引起的肿瘤、病毒、真菌等感染疾病。
安全性评测确认ACPS安全无毒：
1.小鼠急性毒性试验。剂量>800mg/kg，腹腔注射，无死亡小鼠；
2.大鼠、家狗全身给药长期毒性试验。剂量从5 mg/kg/日-100 mg/kg/日，连续60天和180天，未见动物死亡。体重、食欲、行为无明显变化，血、尿常规、肝肾功能均未见异常。对心、肺、肝、肾、肠等脏器病理切片检查，未见病理性损伤；
3.家兔长期滴眼（45天），角膜刺激反应0，眼压和瞳孔无异常，角膜病理切片检查未见损伤。家兔静脉注射ACPS剂量4.5 mg/kg、13.5 mg/kg、22.5 mg/kg，共计12次实验，未测得心电图异常，血压呼吸亦无明显影响。
ACPS的提取制备方法：
1.取洁净的干燥猕猴桃根饮片或干果皮，粗粉碎后，加六倍沸水，室温下浸渍过夜
2.收集浸出液；药材再加沸水浸渍一次，收集和合并两次浸出液
3.浸出液过滤，滤液减压浓缩至1/10
4.浓缩液在搅拌下，缓缓加入乙醇，使终浓度达30%，静置24小时
5.吸取上清液，同法加入乙醇达75%浓度，静置过夜
6.离心或滤取沉淀物。加五倍量去离子水，煮沸后趁热滤除不溶物。冷却后缓缓加入乙醇达80%浓度，取沉淀物
7.沉淀物用无水乙醇洗涤一次，再用乙醚洗涤一次
8.沉淀物在室温下减压干燥，得ACPS粗多糖干燥无定形粉末。密封干燥保存。
抗流感免疫多糖含片的配方组分及其制备方法：
1.配方组分：ACPS干粉50-85%，黄金茶提取物15-45%，辅料：填充剂、润滑剂等适量，调味剂桉叶油适量
2.制造方法：将配方药物干粉混匀，加适量填充剂（淀粉、糊精、糖粉及已吸附桉叶油的硫酸钙）和润滑湿剂（50%乙醇），迅速搅拌混匀，制软材，机制颗粒，60℃减压干燥（含水量3~5%），整粒（过筛），加崩介剂混匀，压片（0.65g/片），包衣，质量检验，最后包装
备注：也可采用粉末直接压片法（见实施例）。自制黄金茶提取物的简要方法：取黄金茶，粗粉碎，水煎剂，浓缩后，加酸，PH=1~2，放置24小时，过滤，得析出物，制成干粉即为黄金茶提取物。
实施例：试制10000片抗流感免疫多糖含片
处方：ACPS 2~5.5KG
黄金茶提取物 0.8~2KG
辅料：糖粉、桉叶油、微晶纤维素、硬脂酸镁等
制法：采用粉末直接压片法。按处方取药粉，过60~80目筛，加入辅料混匀，干压成10000片。规格：每片重0.65克。用法与用量：含服，一次2片，一日10~20片，分次含服。本含片主要用于：流感的预防性含服及单纯型流感的治疗。
附图说明
图1是ACPS对小鼠感染流感病毒预防效果图。