本发明涉及一种香豆素纳米探针的制备方法。
背景技术：
眼部特殊的解剖生理学特征，使得一般的眼用制剂难以透过角膜一房水和血一视网膜所组成的屏障，最终只有不到5％的药物分布于眼组织内。纳米技术在药物领域的应用，改变了药物的电性、磁性、光学、粉体和化学等性质，并构造了活性化合物在物理、化学和生物学等方面新的特定功能。纳米药物传递系统在眼部的应用，能减小液滴与角膜的接触角，增加铺展系数，延长载药体系在角膜前的滞留时间，以增加药物向眼内甚至体内的输送。因此，经眼给药使药物直接吸收进入体循环，进而治疗全身性疾病也成为近年来的研究热点。香豆素类化合物以其合适的最大激发、发射波长，可降低细胞组分和生理液体背景荧光干扰的特性，广泛用于生物体通路的探讨。其中，香豆素有足够大的Stokes位移可避免激发光谱和发射光谱的重叠，进而产生较高的荧光量子产率，灵敏度达到探讨给药通路中低浓度的检测要求。
技术实现要素：
本发明提出一种香豆素纳米探针的制备方法。
一种香豆素纳米探针的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）取PLGA，乳酸／羟基乙酸(LA／GA)比例=75：25、50：50和90：10，相对分子量10000；聚乙烯醇；葡聚糖凝胶G一50；备用，以上原料均为市售；
（2）取PLGA200mg和15mg，溶于有机溶液中，再将其分散到2-6％PVA的水溶液25ml中；
（3）用超声波细胞破碎仪间断超声1 0 min，然后磁力搅拌3-4h，挥去有机溶剂，离心(357．8×g)10 min，所得上清液即为纳米探针溶液。
优选地，由5ml丙酮和乙醇混合液组成，其中丙酮和乙醇的比例为8：2。
优选地，超声波细胞破碎仪的功率为150w，其工作时间为3s，间隔3s。
优选地，超声波细胞破碎仪的功率为120w，其工作时间为1.5，间隔2s。
优选地，所述乳酸／羟基乙酸的比例为75：25。
优选地，所述乳酸／羟基乙酸的比例为90：10。
本发明所述方法制备香豆素纳米探针，受试角膜结构完好，上皮组织、基质未出现异角膜、结膜均不产生刺激性,本发明步骤简单，实用性强，可工业化生产。
具体实施方式
实施例1。
一种香豆素纳米探针的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）取PLGA，乳酸／羟基乙酸(LA／GA)比例=75：25、50：50和90：10，相对分子量10000；聚乙烯醇；葡聚糖凝胶G一50；备用，以上原料均为市售；
（2）取PLGA200mg和15mg，溶于有机溶液中，再将其分散到2-6％PVA的水溶液25ml中；
（3）用超声波细胞破碎仪间断超声1 0 min，然后磁力搅拌3-4h，挥去有机溶剂，离心(357．8×g)10 min，所得上清液即为纳米探针溶液。
优选地，由5ml丙酮和乙醇混合液组成，其中丙酮和乙醇的比例为8：2。
实施例2
一种香豆素纳米探针的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）取PLGA，乳酸／羟基乙酸(LA／GA)比例=75：25、50：50和90：10，相对分子量10000；聚乙烯醇；葡聚糖凝胶G一50；备用，以上原料均为市售；
（2）取PLGA200mg和15mg，溶于有机溶液中，再将其分散到2-6％PVA的水溶液25ml中；
（3）用超声波细胞破碎仪间断超声1 0 min，然后磁力搅拌3-4h，挥去有机溶剂，离心(357．8×g)10 min，所得上清液即为纳米探针溶液。
优选地，由5ml丙酮和乙醇混合液组成，其中丙酮和乙醇的比例为8：2。
优选地，超声波细胞破碎仪的功率为150w，其工作时间为3s，间隔3s。
实施例3
一种香豆素纳米探针的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）取PLGA，乳酸／羟基乙酸(LA／GA)比例=75：25、50：50和90：10，相对分子量10000；聚乙烯醇；葡聚糖凝胶G一50；备用，以上原料均为市售；
（2）取PLGA200mg和15mg，溶于有机溶液中，再将其分散到2-6％PVA的水溶液25ml中；
（3）用超声波细胞破碎仪间断超声1 0 min，然后磁力搅拌3-4h，挥去有机溶剂，离心(357．8×g)10 min，所得上清液即为纳米探针溶液；
（4）由5ml丙酮和乙醇混合液组成，其中丙酮和乙醇的比例为8：2；
（5）超声波细胞破碎仪的功率为120w，其工作时间为1.5，间隔2s。
实施例4
一种香豆素纳米探针的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）取PLGA，乳酸／羟基乙酸(LA／GA)比例=75：25、50：50和90：10，相对分子量10000；聚乙烯醇；葡聚糖凝胶G一50；备用，以上原料均为市售；
（2）取PLGA200mg和15mg，溶于有机溶液中，再将其分散到2-6％PVA的水溶液25ml中；
（3）用超声波细胞破碎仪间断超声1 0 min，然后磁力搅拌3-4h，挥去有机溶剂，离心(357．8×g)10 min，所得上清液即为纳米探针溶液；
（4）由5ml丙酮和乙醇混合液组成，其中丙酮和乙醇的比例为8：2；
（5）超声波细胞破碎仪的功率为150w，其工作时间为3s，间隔3s；
（6）所述乳酸／羟基乙酸的比例为90：10。