本发明属于医药领域，具体涉及一种四联长效药物组合物及其在治疗疼痛中的应用。
背景技术：
高乌甲素又名拉巴乌头碱，是从毛茛科植物高乌头aconitumsinomontanumnakai根中提取的一种二萜类生物碱。高乌头又名穿心莲乌头，为毛茛科乌头属植物，其性温，味苦辛，具有祛风除湿、理气止痛、活血消肿等功效，主要用于风湿痹痛、关节肿痛、胃痛、跌打损伤等。高乌甲素作为高乌头镇痛的有效成分，为我国首创的非成瘾性镇痛药，药理研究已证明其具有较强的镇痛、抗炎、局麻及抗心律失常作用，对癌症疼痛及其他顽固性疼痛效果尤为显著。临床上常使用高乌甲素的氢溴酸盐，用于中度以上疼痛的治疗。延胡索乙素是从罂粟科植物延胡索corydalisyanhusuow.t.wangexz.y.suetc.y.wu的干燥块茎中提取的一种生物碱，其具有多重药理作用如镇痛、抗脑缺血、抗心律失常、抗心肌缺血等作用，长期以来一直广泛应用于临床实践中。延胡索酸又名富马酸、紫堇酸或地衣酸，即反丁烯二酸，是最简单的不饱和二元羧酸，最早从延胡索中发现。琥珀酸又名丁二酸，用于调味剂、酸味剂、缓冲剂，可以用做防腐剂，ph值调节剂，助溶剂，也是制备五元杂环化合物的重要化工原料。
中国专利(申请号：200910119610.2)中公开了一种抗炎镇痛的高乌甲素与延胡索乙素药物组合物，并且提供了该药物组合物的贴片剂及其制备方法。但是上述专利仅提供该药物组合物的一种剂型，即贴片剂，该药物组合物存在一定的毒副作用、水溶性差，而且其抗炎镇痛效果不如美洛昔康。因此，开发一种毒副作用小、溶解性好、镇痛效果佳的长效镇痛药物组合物成为医药领域急需解决的难题。
技术实现要素：
本发明提供一种四联长效药物组合物，该药物组合物包含治疗和/或预防有效量的高乌甲素、延胡索乙素、延胡索酸和琥珀酸作为有效成分。该药物组合物还可包括适量的药学上可接受的药用辅料(例如药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂，包括增溶剂、表面活性剂、成膜剂、抗氧剂、稳定剂、粘合剂、润滑剂等)
上述四联长效药物组合物，按重量份计，优选包含高乌甲素1-5份、延胡索乙素1-5份、延胡索酸2-7份、琥珀酸2-7份。
本发明所述的药物组合物的剂型可以是固体制剂、液体制剂或半固体制剂，优选片剂、胶囊、注射剂、膜制剂、乳膏或喷雾剂，包括缓释片剂、缓释胶囊、缓释注射剂。
本发明的另一实施方案提供上述药物组合物作为预防和/或治疗疼痛药物的应用，以及在制备预防和/或治疗疼痛药物中的应用。所述疼痛包括肿瘤疼痛、癌症患者化疗后产生的疼痛、关节疼痛、外伤疼痛、术后疼痛、炎性疼痛、戒毒或毒瘾引起的疼痛及不明原因的顽固性疼痛。
本发明的另一实施方案提供上述药物组合物在制备镇静、催眠、协同麻醉、抗心律失常药物中的应用。
本发明上述药物组合物中的高乌甲素包括高乌甲素以及药学上可接受的高乌甲素盐；延胡索乙素包括延胡索乙素以及药学上可接受的延胡索乙素盐。
本发明上述药物组合物的通用制备方法与应用，如下：
【有效成分】治疗和/或预防有效量的高乌甲素、延胡索乙素、延胡索酸和琥珀酸；按重量份计，优选高乌甲素1-5份、延胡索乙素1-5份、延胡索酸2-7份、琥珀酸2-7份。
【制剂】采用现有技术中(例如药典、教科书、工具书、期刊或专利等)公知的药用缓释、成膜、乳化、透皮吸收、赋形和增溶剂等辅料和通用诸如压片、胶囊填充、制膜和冷冻干燥等技术与方法，将上述有效成分按照治疗和/或预防有效量可分别制备成适于临床应用的四联长效组合物制剂，其制剂可以是固体制剂、液体制剂或半固体制剂，包括但不限于片剂、胶囊、注射剂、膜制剂、乳膏或喷雾剂等制剂，上述制剂可以是缓释、控释制剂。
【应用】本发明药物组合物在临床适用于预防、治疗、缓解、减轻各种疼痛，包括但不限于肿瘤疼痛、癌症患者化疗后产生的疼痛、关节疼痛、外伤疼痛、术后疼痛、炎性疼痛、戒毒或毒瘾引起的疼痛及不明原因的顽固性疼痛；亦可用于镇静、催眠、协同麻醉、心律失常等的治疗。
【制备方法】
药物制剂制备过程中所涉及的辅料、药物制剂的检测方法均依据《中国药典》(2015年版四部中国医药出版社出版)相关制剂指导原则的规定。
与现有技术相比，本发明的优点在于：(1)本发明四联长效药物组合物原料药延胡索酸、琥珀酸与高乌甲素、延胡索乙素之间形成盐或其他络合物或通过其他分子间作用提高了高乌甲素与延胡索乙素在水中的溶解度、同时降低了毒副作用；(2)本发明四联长效药物组合物间存在某种协同作用使其镇痛效果优于单一组分、两种组分或三种组分形成的组合物；(3)本发明四联长效药物组合物不仅具有更好的镇痛效果，同时具有镇静、催眠、协同麻醉、抗心律失常等作用。
具体实施方式
为了便于对本发明的进一步理解，下面提供的实施例对其做了更详细的说明。但是这些实施例仅供更好的理解发明而并非用来限定本发明的范围或实施原则，本发明的实施方式不限于以下内容。
实施例1缓释制剂、注射制剂、膜制剂、喷雾制剂、片剂、胶囊等的制备例
缓释制剂
【有效成分】治疗和/或预防有效量的高乌甲素、延胡索乙素、延胡索酸和琥珀酸；按重量份计，优选高乌甲素1-5份、延胡索乙素1-5份、延胡索酸2-7份、琥珀酸2-7份。
【主要辅料】缓释材料、粘合剂、润滑剂、常用载体辅料等。
【概念与原理】缓释制剂系指在规定的释放介质中，按要求缓慢地非恒速释放一物，与相应的普通制剂比较，给药频率比普通制剂减少一倍或有所减少，且能显著增加患者依从性的制剂；以无机材料作为壁材包裹主效药物成分，经溶解、乳化、吸附等一系列反应得到有效药物成分为芯材，无机盐为囊材的纳米胶囊缓释原料，并按照设计要求可分别压片或灌装成胶囊制剂。
【制备实例】按【有效成分】含量，分别称取各有效成分，与主要辅料中的行业规定允许添加量以下量的增溶剂(如吐温-80等)混合、加适量水使充分溶解后，依次加入乳化剂和正硅酸乙酯，充分搅拌混合均匀形成混合溶液a，然后将a溶液加入反应装置(装有电磁搅拌器、温度计、冷凝回流装置和滴液漏斗)，高速(500转/分)搅拌剪切10分钟，形成透明油状的初乳.在室温条件下(25℃)，将明胶溶液逐步滴加进入反应装置，主效成分在搅拌作用下形成o/w型小液滴，包裹在乳化剂胶束里面，反应2h，待正硅酸乙酯充分水解后滴加氯化钙溶液，经乳化剂胶束表面反应沉淀、包裹、固化后形成有效成分纳米胶囊，反应完全后得到有效成分为囊芯、硅酸钙为囊壁的纳米胶囊，通过调节加入正硅酸乙酯与氯化钙的量，制备不同芯壁比的有效成分纳米胶囊缓释制剂，即得。
注射制剂
【有效成分】治疗和/或预防有效量的高乌甲素、延胡索乙素、延胡索酸和琥珀酸；按重量份计，优选高乌甲素1-5份、延胡索乙素1-5份、延胡索酸2-7份、琥珀酸2-7份。
【主要辅料】增溶剂、赋形剂、表面活性剂等。
【概念与原理】注射剂系指有效成分或与适宜的辅料制成的供注入体内的无菌制剂；注射剂可以依据实际需要制备成注射液、注射用无菌粉末等。
【制备实例】按【有效成分】含量，分别称取各有效成分，与主要辅料中的行业规定允许添加量以下量的增溶剂、赋形剂、表面活性剂等，混合、加适量水使充分溶解后，滤过，除菌，分装，冷冻干燥，即得注射用无菌粉末。
膜制剂
【有效成分】治疗和/或预防有效量的高乌甲素、延胡索乙素、延胡索酸和琥珀酸；按重量份计，优选高乌甲素1-5份、延胡索乙素1-5份、延胡索酸2-7份、琥珀酸2-7份。
【主要辅料】成膜剂、促渗剂和增溶剂等。
【概念与原理】膜剂系指有效成分与适宜的成膜材料经加工制成的膜状制剂，可供口服或黏膜应用。
【制备实例】按【有效成分】含量，分别称取各有效成分，与主要辅料中的行业规定允许添加量以下量的增溶剂混合、加适量水使充分溶解后，依次加入成膜剂如聚乙烯醇、丙烯酸树脂类、纤维素等高分子材料中的一种或几种组合、促渗剂如氮酮、丙二醇等中的一种或几种组合，混合均匀，成膜，即得。
喷雾制剂
【有效成分】治疗和/或预防有效量的高乌甲素、延胡索乙素、延胡索酸和琥珀酸；按重量份计，优选高乌甲素1-5份、延胡索乙素1-5份、延胡索酸2-7份、琥珀酸2-7份。
【主要辅料】溶剂、助溶剂、抗氧剂、抑菌剂、表面活性剂和增溶剂等附加剂。
【概念与原理】喷雾剂系指有效成分或与适宜辅料填充于特制的装置中，使用时借助手动泵的压力、高压气体、超声振动或其他方法将内容物呈雾状物释出，用于肺部吸入或直接喷至腔道。
【制备实例】按【有效成分】含量，分别称取各有效成分，与主要辅料中的行业规定允许添加量以下量的增溶剂混合，分别加入溶剂、助溶剂、抗氧剂、抑菌剂、表面活性剂，混合均匀，灌装，即得。
亚微乳剂
【有效成分】治疗和/或预防有效量的高乌甲素、延胡索乙素、延胡索酸和琥珀酸；按重量份计，优选高乌甲素1-5份、延胡索乙素1-5份、延胡索酸2-7份、琥珀酸2-7份。
【主要辅料】油、乳化剂、稳定剂、抗氧化剂、渗透压调节剂、水。
【概念与原理】亚微乳(submicroemulsion)是以植物油为基质，由油相、乳化剂(磷脂)、水相制成粒径在100-1000nm范围的稳定的o/w型分散体系。药物可包封于油相和磷脂界面膜中，外观呈不透明的浑浊或乳状。作为一种新型药物转运系统，它可选择性地蓄积于靶部位，使治疗药物在靶区浓度超出传统制剂的数倍至数百倍，明显提高疗效。同时能够延长药物的半衰期，减少药物在正常组织分布量，减轻不良反应，达到高效低毒的效果。
【制备实例】按【有效成分】含量，分别称取各有效成分与乳化剂一起加入油中，搅拌使其溶解，作为油相；将稳定剂、渗透压调节剂和抗氧化剂加入到水中，搅拌使其溶解，作为水相；将油相加入水相中，高速剪切分散，形成初乳；初乳调ph至6.0-7.5，高压匀化，得精乳，即得亚微乳剂。
片剂
【有效成分】治疗和/或预防有效量的高乌甲素、延胡索乙素、延胡索酸和琥珀酸；按重量份计，优选高乌甲素1-5份、延胡索乙素1-5份、延胡索酸2-7份、琥珀酸2-7份。
【主要辅料】填充剂或稀释剂，包括淀粉、糖粉、糊精、乳精、可压性淀粉、微晶纤维素、无机盐类；黏合剂和润滑和剂，包括蒸馏水、乙醇、淀粉浆、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、甲基纤维素和乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素；崩解剂，包括干淀粉、羧甲基淀粉钠、低取代基羟丙基纤维素；润滑剂，包括硬脂酸镁、微粉硅胶、滑石粉、氢化植物油、聚乙二醇类和月桂醇硫酸镁。
【制备实例】按【有效成分】含量，分别称取各有效成分与主要辅料中的一种或几种混匀，按照常规工艺制成片剂。
实施例2
原料药：高乌甲素1份、延胡索乙素1份、延胡索酸2份、琥珀酸2份
按上述重量份，取高乌甲素10g，延胡索乙素10g、延胡索酸20g、琥珀酸20g，按照实施例1中记载的制备例方法，可制备得纳米胶囊缓释制剂。
实施例3
原料药：高乌甲素1份、延胡索乙素1份、延胡索酸2份、琥珀酸7份
按上述重量份，取高乌甲素10g，延胡索乙素10g、延胡索酸20g、琥珀酸70g，与适量的常规药用辅料(优选羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁)，混匀，按照常规工艺制成片剂。
实施例4
原料药：高乌甲素1份、延胡索乙素1份、延胡索酸7份、琥珀酸2份
按上述重量份，取高乌甲素10g，延胡索乙素10g、延胡索酸70g、琥珀酸20g，与适量的常规药用辅料(优选1％吐温-80、聚乙二醇400)，混匀，加适量水使充分溶解后，滤过，除菌，分装，冷冻干燥，即得注射用无菌粉末。
实施例5
原料药：高乌甲素1份、延胡索乙素1份、延胡索酸7份、琥珀酸7份
按上述重量份，取高乌甲素10g，延胡索乙素10g、延胡索酸70g、琥珀酸70g，按照实施例1中记载的制备例方法，可制备得膜制剂。
实施例6
原料药：高乌甲素1份、延胡索乙素5份、延胡索酸2份、琥珀酸2份
按上述重量份，取高乌甲素10g，延胡索乙素50g、延胡索酸20g、琥珀酸20g，按照实施例1中记载的制备例方法，可制备得喷雾制剂。
实施例7
原料药：高乌甲素1份、延胡索乙素5份、延胡索酸2份、琥珀酸7份
按上述重量份，取高乌甲素10g，延胡索乙素50g、延胡索酸20g、琥珀酸70g，按照实施例1中记载的制备例方法，可制备得亚微乳剂。
实施例8
原料药：高乌甲素1份、延胡索乙素5份、延胡索酸7份、琥珀酸7份
按上述重量份，取高乌甲素10g，延胡索乙素50g、延胡索酸70g、琥珀酸70g，按照实施例1中记载的制备例方法，可制备得纳米胶囊缓释制剂。
实施例9
原料药：高乌甲素1份、延胡索乙素5份、延胡索酸7份、琥珀酸2份
按上述重量份，取高乌甲素10g，延胡索乙素50g、延胡索酸70g、琥珀酸20g，按照实施例1中记载的制备例方法，可制备得亚微乳剂。
实施例10
原料药：高乌甲素5份、延胡索乙素5份、延胡索酸2份、琥珀酸2份
按上述重量份，取高乌甲素50g，延胡索乙素50g、延胡索酸20g、琥珀酸20g，按照实施例1中记载的制备例方法，可制备得喷雾制剂。
实施例11
原料药：高乌甲素5份、延胡索乙素5份、延胡索酸7份、琥珀酸7份
按上述重量份，取高乌甲素50g，延胡索乙素50g、延胡索酸70g、琥珀酸70g，按照实施例1中记载的制备例方法，可制备得注射液体制剂。
实施例12
原料药：高乌甲素5份、延胡索乙素5份、延胡索酸2份、琥珀酸7份
按上述重量份，取高乌甲素50g，延胡索乙素50g、延胡索酸20g、琥珀酸70g，按照实施例1中记载的制备例方法，可制备得膜制剂。
实施例13
原料药：高乌甲素5份、延胡索乙素5份、延胡索酸7份、琥珀酸2份
按上述重量份，取高乌甲素50g，延胡索乙素50g、延胡索酸70g、琥珀酸20g，按照实施例1中记载的制备例方法，可制备得片剂。
实施例14
原料药：高乌甲素5份、延胡索乙素1份、延胡索酸2份、琥珀酸2份
按上述重量份，取高乌甲素50g，延胡索乙素10g、延胡索酸20g、琥珀酸20g，按照实施例1中记载的制备例方法，可制备得注射液体制剂。
实施例15
原料药：高乌甲素5份、延胡索乙素1份、延胡索酸7份、琥珀酸7份
按上述重量份，取高乌甲素50g，延胡索乙素10g、延胡索酸70g、琥珀酸70g，按照实施例1中记载的制备例方法，可制备得胶囊缓释制剂。
实施例16
原料药：高乌甲素5份、延胡索乙素1份、延胡索酸2份、琥珀酸7份
按上述重量份，取高乌甲素50g，延胡索乙素10g、延胡索酸20g、琥珀酸70g，按照实施例1中记载的制备例方法，可制备得膜剂。
实施例17
原料药：高乌甲素5份、延胡索乙素1份、延胡索酸7份、琥珀酸2份
按上述重量份，取高乌甲素50g，延胡索乙素10g、延胡索酸70g、琥珀酸20g，按照实施例1中记载的制备例方法，可制备得片剂。
实施例18
原料药：高乌甲素1份、延胡索乙素1份、延胡索酸1份、琥珀酸2份
按上述重量份，取高乌甲素10g，延胡索乙素10g、延胡索酸10g、琥珀酸20g，按照实施例1中记载的制备例方法，可制备得纳米胶囊缓释制剂。
实施例19
原料药：高乌甲素1份、延胡索乙素1份、延胡索酸2份、琥珀酸1份
按上述重量份，取高乌甲素10g，延胡索乙素10g、延胡索酸20g、琥珀酸10g，按照实施例1中记载的制备例方法，可制备得纳米胶囊缓释制剂。
实施例20
原料药：高乌甲素5份、延胡索乙素5份、延胡索酸8份、琥珀酸2份
按上述重量份，取高乌甲素50g，延胡索乙素50g、延胡索酸80g、琥珀酸20g，按照实施例1中记载的制备例方法，可制备得片剂。
实施例21
原料药：高乌甲素5份、延胡索乙素5份、延胡索酸2份、琥珀酸8份
按上述重量份，取高乌甲素50g，延胡索乙素50g、延胡索酸20g、琥珀酸80g，按照实施例1中记载的制备例方法，可制备得片剂。
实施例22
原料药：高乌甲素1份、延胡索乙素1份、延胡索酸1份
按上述重量份，取高乌甲素10g，延胡索乙素10g、延胡索酸10g，按照实施例1中记载的制备例方法，可制备得纳米胶囊缓释制剂。
实施例23
原料药：高乌甲素1份、延胡索乙素1份、琥珀酸1份
按上述重量份，取高乌甲素10g，延胡索乙素10g、琥珀酸10g，按照实施例1中记载的制备例方法，可制备得纳米胶囊缓释制剂。
实施例24
原料药：高乌甲素1份、延胡索酸1份、琥珀酸1份
按上述重量份，取高乌甲素10g，延胡索酸10g、琥珀酸10g，按照实施例1中记载的制备例方法，可制备得纳米胶囊缓释制剂。
实施例25
原料药：高乌甲素1份、延胡索乙素1份
按上述重量份，取高乌甲素10g，延胡索乙素10g，按照实施例1中记载的制备例方法，可制备得片剂。
实施例26
按照中国专利(申请号：200910119610.2)中实施例3记载的方法(原料药：高乌甲素1.8kg、延胡索乙素0.5kg，辅料：丙二醇1.8kg，聚硅氧烷压敏胶4kg)制备高乌甲素和延胡索乙素组合物透皮贴片。
按照本发明实施例1记载的方法，将上述原料药：高乌甲素1.8kg、延胡索乙素0.5kg，与适量的常规药用辅料(优选羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁)，混匀，按照常规工艺制成片剂。
实施例27本发明四联长效药物组合物镇痛、镇静催眠的药理活性实验
材料与方法
1、动物：昆明小鼠1400只，雄性，6周龄，体重20-24g；由第四军医大学实验动物中心提供，生产合格证号：scxk(军)字第2012-0007号。
2、试剂和仪器：高乌甲素(含量98.7％，批号201611022)、延胡索乙素(含量99.1％，批号201611011)、延胡索酸(含量98.9％，批号201610012)、琥珀酸(含量99.2％，批号201610021)均购自陕西省宝鸡市辰光生物科技有限公司；盐酸吗啡注射液(沈阳第一制药厂)，规格：10mg/ml，批号：20161102；0.6％醋酸溶液(临用前取冰醋酸1.2ml加蒸馏水至200ml)；吐温-80(含量98.5％，批号2016051701)购自江苏省海安石油化工厂；艾司唑仑片(天津太平洋制药有限公司)，规格：1mg/片，批号：20160304；戊巴比妥钠(上海试剂二厂)，用前以生理盐水配成6mg/ml。
3、方法与结果
(1)本发明组合物中有效成分(即原料药)的小鼠灌胃急性毒性试验
受试品：实施例2-6原料药、实施例25原料药，临用前用0.5％cmc制成溶液或混悬液供试。
实验方法：取健康昆明小鼠456只，雌雄各半，依性别体重分为38组，各组小鼠以0.4ml/10g体重灌胃上述受试品,给药后严密观察各组动物反应，连续观察7天小鼠的行为活动、皮毛光泽、饮食、体重和死亡情况，观察期间死亡小鼠解剖未发现有主要脏器肉眼观察到的病理性改变。主要脏器病理切片未见明显改变。各组动物死亡之情况如表1所示。
表1各组动物的死亡情况
由表1中的实验结果可以看出，本发明实施例2-6药物组合物原料药的小鼠灌胃急性毒性ld50均大于或等于250mg/kg，而实施例25原料药(高乌甲素：延胡乙素＝1∶1，各10g)的ld50小于150mg/kg，可见，本发明药物组合物中原料药的毒副作用小于高乌甲素与延胡索乙素(1∶1)两种组分的构成的原料药。原因可能是本发明药物组合物中的延胡索酸、琥珀酸与高乌甲素、延胡索乙素之间形成盐或其他络合物或通过其他分子间作用降低了高乌甲素与延胡索乙素的毒性。
(2)本发明组合物中有效成分(即原料药)及有效成分中单一组分的镇痛试验
扭体法：按照现有技术(例如chenq.thebookoftechnologyonpharmcologyofmateriamedica[m].beijing:people’smedicalpublishinghouse,1996:360)中的方法，372只小鼠随机分成吗啡组(剂量50mg/kg，腹腔注射即ip)、实施例2-26组(剂量100mg/kg，灌胃即ig)、高乌甲素组(剂量100mg/kg，灌胃即ig)、延胡索乙素组(剂量100mg/kg，灌胃即ig)、延胡索酸组(剂量100mg/kg，灌胃即ig)、琥珀酸组(剂量100mg/kg，灌胃即ig)、对照组(等体积生理盐水，ig)，每组12只；小鼠连续给药3天，末次给药后30分钟各组小鼠ip0.6％醋酸溶液10ml/kg，观察ip后出现扭体的时间(潜伏期)和15分钟内出现扭体(伸展后肢，腹部收缩内凹，臀部抬高)次数；结果见表2。
热板法：小鼠372只，实验前在55℃的热板上测定小鼠疼痛反应时间(小鼠放上热板到开始舔后足时间)，选择疼痛反应时间在13～30秒的小鼠，按照疼痛反应时间随机分成31组(具体分组、剂量和给药方法均同扭体法)。末次给药后30分钟将各组小鼠再次放上热板，观察小鼠的疼痛反应时间，超过60秒的按60秒计；结果见表3。
表2本发明组合物实施例2-26中有效成分(即原料药)、高乌甲素组、延胡索乙素组、延胡索酸组、琥珀酸组、对照组及吗啡组对小鼠的镇痛作用(扭体法)
与对照组比较：*p<0.05，**p<0.01；与实施例26和25比较：δp<0.05，δδp<0.01；与吗啡组比较：δp<0.05，δδp<0.01。
表3本发明组合物实施例2-26中有效成分(即原料药)、高乌甲素组、延胡索乙素组、延胡索酸组、琥珀酸组、对照组及吗啡组对小鼠的镇痛作用(热板法)
与对照组比较：*p<0.05，**p<0.01；与实施例26和25比较：δp<0.05，δδp<0.01；与吗啡组比较：δp<0.05，δδp<0.01。
表2-3结果表明，本发明四联长效药物组合物(实施例2-21原料药)连续给药3天，均能显著减少ip醋酸所致的小鼠扭体次数、显著延长疼痛反应时间(秒)，表明本发明四联长效药物组合物可以用于预防和/或治疗疼痛相关疾病。其中，实施例2-17的有效成分(原料药)的镇痛作用最强，实施例18-21次之，实施例22-26的镇痛作用相对实施例2-21稍弱；本发明四联长效药物组合物的镇痛作用明显强于组合物中单一组分(例如高乌甲素组、延胡索乙素组、延胡索酸组、琥珀酸组)、两种组分或三种组分的组合(实施例22-26)，原因可能是高乌甲素-延胡索乙素-延胡索酸-琥珀酸四联组合物之间可能存在某种协同作用，显著增强组合物的镇痛作用。
(3)本发明组合物不同剂型对小鼠的镇痛作用
扭体法：按照现有技术中的方法，48只小鼠随机分成吗啡组(剂量为50mg/kg，ip)、组合物片剂组(剂量150mg/kg，ig，以实施例3制备的片剂为例)、组合物注射剂组(剂量50mg/kg，ip，以实施例11制备的注射剂为例)和对照组(灌胃等体积生理盐水)，连续给药3天，末次给药后30分钟各组小鼠腹腔注射(ip)0.6％醋酸溶液10ml/kg，观察ip后出现扭体的时间(潜伏期)和15分钟内出现扭体(伸展后肢，腹部收缩内凹，臀部抬高)次数；结果见表4。
表4组合物不同剂型对小鼠的镇痛作用(醋酸扭体法)
与对照组比较：**p<0.01。
热板法：小鼠48只，实验前在55℃的热板上测定小鼠疼痛反应时间(小鼠放上热板到开始舔后足时间)，选择疼痛反应时间在13～30秒的小鼠，按照疼痛反应时间随机分成4组(具体分组、剂量和给药方法均同扭体法)。末次给药后30分钟将各组小鼠再次放上热板，观察小鼠的疼痛反应时间，超过60秒的按60秒计；结果见表5。
表5组合物不同剂型对小鼠的镇痛作用(热板法)
与对照组比较：**p<0.01。
结果证实，本发明组合物不同剂型连续给药3天，能显著减少ip醋酸所致的小鼠扭体次数、延长小鼠疼痛反应时间(秒)，说明本发明组合物的片剂及注射剂均有显著镇痛作用，镇痛效果与阳性对照药吗啡相当。
(4)本发明组合物对戊巴比妥钠麻醉的协同作用：小鼠70只随机分成对照组、艾司唑仑片组(剂量2mg/kg，ig)、组合物注射剂组(剂量50mg/kg，ip，以实施例4制备的注射剂为例)和组合物片剂组(剂量150mg/kg，ig，以实施例17制备的片剂为例)，每组15只，余下10只用于戊巴比妥钠的睡眠时间剂量的预试。各组小鼠连续ig3天，对照组ig同体积生理盐水。麻醉实验前，先进行戊巴比妥钠麻醉时间预试，选取麻醉时间(翻正反射消失的时间)在30秒左右的戊巴比妥钠剂量。本实验条件下经预试，ip戊巴比妥钠的合适剂量为47mg/kg。末次给药后30分钟ip4.8mg/ml戊巴比妥钠生理盐水溶液10ml/kg，观察小鼠翻正反射消失1min以上后开始计时(包括1min)，到翻正反射恢复的时间；结果见表6。结果表明，本发明组合物注射剂和片剂给药3天具有显著延长戊巴比妥钠的睡眠时间，说明本发明组合物具有镇静催眠作用。
表6组合物不同剂型对戊巴比妥钠麻醉的协同作用
与对照组比较：**p<0.01。
实施例28本发明四联长效药物组合物有效成分(原料药)的溶解度测试
按照现有技术中的方法(例如“静态法与动态法测定药物水中溶解度的探讨”，袁飞，等，广东药学院学报，2010年第26卷第5期第462-465页中记载的动态法)测定本发明实施例2-17、22、23、25原料药的溶解度，结果表明，实施例25原料药(高乌甲素：延胡乙素＝1∶1，各10g)的溶解度(100g水中)小于10mg，实施例22、23原料药的溶解度(100g水中)小于100mg，实施例2-17原料药的溶解度大于1g，相对于实施例25原料药的溶解度，提高100倍以上，原因可能是本发明药物组合物中的延胡索酸、琥珀酸与高乌甲素、延胡索乙素之间形成盐或其他络合物或通过其他分子间作用提高了高乌甲素与延胡索乙素在水中的溶解度。