一种蝙蝠蛾拟青霉活性物质的制备方法和该方法制备得到活性物质及其用途与流程

文档序号:14760196发布日期:2018-06-22 23:22阅读:356来源:国知局

本发明涉及一种蝙蝠蛾拟青霉活性物质的制备方法,该制备方法制备得到的活性物质及该活性物质的用途,涉及药物或保健品技术领域。



背景技术:

近年来,随着人们生活水平的提高及饮食结构的改变,我国高尿酸血症和痛风的发病率呈逐年上升趋势。高尿酸血症,是由于嘌呤代谢紊乱和/或尿酸排泄障碍而导致血尿酸超过正常值的疾病,临床上不表现任何症状。人体长期处于高尿酸血症的情况下,体内尿酸以钠盐的形式沉淀在关节、软组织、软骨和肾脏中,引起人体器官和组织病变,导致痛风,引发严重的并发症,如痛风性关节炎、痛风性肾脏病变、痛风性肾结石、痛风性心脏病、痛风性高血压病等。

因此,如何有效降低尿酸,延缓诱发痛风病症进程,并改善由高尿酸血症引起的肾损伤是目前临床治疗的主要问题。

目前治疗高尿酸血症和痛风的药物主要包括有非布索坦、别嘌醇、秋水仙碱、苯溴马隆、丙磺舒等。痛风分为急性和慢性两种。临床上治疗急性痛风通常采用抗炎药、秋水仙素及促肾上腺皮质激素等药物,通过抑制炎症因子治疗。对于慢性痛风,有效控制血液尿酸水平是关键,用来降低人体内尿酸浓度的药物主要有:别嘌呤醇、非布索坦(抑制尿酸合成),苯溴马隆、丙磺舒(促尿酸排泄)等。临床证实,以上药物对肝、肾代谢器官有较强副作用,并容易引发胃肠道和心血管病,限制着以上药物在临床上的应用。

因此,从丰富的天然资源中开发安全、有效的降尿酸药物或食品,提高对高尿酸血症、痛风患者的治疗质量,降低的治疗负担,显得至关重要。

越来越多研究采用中草药或食品原料制备并开发降尿酸药物或功能产品,具有良好的前景。专利公开号为CN104758920A的文本中公开了一种以海洋鱼低聚肽粉、茯苓和淡竹叶为原料,通过合理配比制备有效抑制高尿酸、去除痛风石及增强免疫力的保健品;专利公开号为CN201510529008.1的文本中公布了一包括种紫苏叶提取物或紫苏、薏米仁、葛根、槐米和玉米须等的组合物,能有效抑制尿酸合成及促进尿酸排泄,可作为高尿酸血症患者食疗用途;专利公开号为CN103637105A的文本中以樱桃果粉和樱桃浸膏为原料制成的降尿酸胶囊产品,对风湿腰腿疼痛有良效,适用于高尿酸和痛风患者。

但是,目前现有技术的研究大都重点在于如何抑制尿酸合成、促进排泄,降低体内尿酸水平,但较少涉及研究如何改善长期处于高尿酸血症或服用降尿酸药物导致肾脏损伤的问题。

食用菌(灵芝、虫草等)作为我国重要的天然资源,拥有悠久的食用历史,并被现代医学用于临床治疗肿瘤、糖尿病、高血脂等疾病,功效显著。发明人通过制备蛹虫草活性物质,并发现其具有良好防治高尿酸血症功效,对肾损伤也有良好的保护作用(CN201410660797.8)。

而,蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali)是天然冬虫夏草中普遍存在的一种虫草的无性型,功效成分与冬虫夏草相似,其发酵菌丝体可以作为天然冬虫夏草的替代品,并已实现规模化的生产。现代药理研究表明,蝙蝠蛾拟青霉含有虫草多糖、虫草素、虫草酸等活性物质,具有抗肿瘤、抗炎、调节免疫、抗疲劳等功能,2001年被列为《可用于保健食品的真菌菌种名单》中开发调节免疫力等功能保健食品,研究已证实蝙蝠蛾拟青霉安全无毒副作用。

目前,现有技术中还没有报道蝙蝠蛾拟青霉及其制剂具有降低血尿酸和治疗痛风的用途。



技术实现要素:

针对以上不足,本发明提供一种蝙蝠蛾拟青霉活性物质的制备方法和该方法制备得到活性物质及其在降低尿酸、治疗痛风方面的用途。

本发明通过以下方案达到上述目的:

发明人研究发现,制备得到的蝙蝠蛾拟青霉活性物质,通过体内高尿酸血症动物模型评价,首次发现其具有良好抑制尿酸合成、促进尿酸排泄,发挥降尿酸功效,并对肾损伤有较强的保护作用。

在此基础上,发明人提供一种蝙蝠蛾拟青霉活性物质的制备方法,并将制备得到的活性物质用于临床高尿酸血症或相关疾病方面的治疗或高尿酸人群的食疗等。

在本发明的第一方面,提供一种蝙蝠蛾拟青霉活性物质的制备方法。

一种蝙蝠蛾拟青霉活性物质的制备方法,所述方法包括以下步骤:

(1)将干燥的发酵蝙蝠蛾拟青霉菌丝体粉碎,优选超微粉碎得到蝙蝠蛾拟青霉超微粉;

(2)将粉碎后的蝙蝠蛾拟青霉菌丝体,置于提取溶剂中,在60~100℃下提取1~3小时,提取1~3次,滤液过滤,优选用200~400目滤网过滤,合并滤液;

(3)将步骤(2)所得的滤液进行浓缩,经干燥得到蝙蝠蛾拟青霉提取物,所述得到的蝙蝠蛾拟青霉超微粉或得到蝙蝠蛾拟青霉提取物或所述多种提取物的混合物(复配物)为蝙蝠蛾拟青霉活性物质。

在上述制备方法中,所述提取溶剂对应得到所述的蝙蝠蛾拟青霉提取物,该蝙蝠蛾拟青霉提取物作为蝙蝠蛾拟青霉活性物质;或者将多种提取溶剂分别制备得到的多种蝙蝠蛾拟青霉提取物,多种蝙蝠蛾拟青霉提取物的复合物(复配物),作为蝙蝠蛾拟青霉活性物质。

优选的,所述步骤(1)将干燥的蝙蝠蛾拟青霉菌丝体粉经过超微粉碎,得到蝙蝠蛾拟青霉超微粉。

优选的,所述超微粉碎时间每次为5~30分钟,进一步优选为8~20分钟。

优选的,所述超微粉碎的次数为1~3次,进一步优选为2次。

优选的,所述的超微粉碎为磨介式粉碎、或机械剪切式超微粉碎或气流式超微粉碎。

优选的,所述蝙蝠蛾拟青霉超微粉的粉体粒径为1~50μm,进一步优选为5~20μm。

优选的,所述提取溶剂为水或含水乙醇,所述提取溶剂与蝙蝠蛾拟青霉菌丝体的重量比为6~40:1。

优选的,所述含水乙醇为体积百分含量为12~90%的含水乙醇,进一步优选为30~65%的体积百分含量。

优选的,所述溶剂为含水乙醇时,所述含水乙醇与蝙蝠蛾拟青霉菌丝体的重量比为8~30:1。

进一步优选的,所述乙醇为食用级的乙醇。

优选,所述步骤(2)的提取方式为加热回流、微波提取或超声辅助提取。

优选的,所述提取时间每次为2小时;

优选的,所述提取次数为2次。

优选的,所述步骤(3)的干燥为鼓风干燥、或冷冻干燥或喷雾干燥,进一步优选为喷雾干燥。

一种蝙蝠蛾拟青霉活性物质的制备方法,所述方法包括以下步骤:

(1)将干燥的发酵蝙蝠蛾拟青霉菌丝体经过超微粉碎,所述的超微粉碎为磨介式粉碎、或机械剪切式超微粉碎或气流式超微粉碎,所述超微粉碎时间每次为5~30分钟,优选为8~20分钟,所述超微粉碎的次数为1~3次,优选为2次,得到蝙蝠蛾拟青霉超微粉,所述蝙蝠蛾拟青霉超微粉的粉体粒径为1~50μm,优选为5~20μm;

(2)将粉碎后的蝙蝠蛾拟青霉菌丝体,置于提取溶剂中,所述提取溶剂为水或含水乙醇,所述提取溶剂与蝙蝠蛾拟青霉菌丝体的重量比为6~40:1,在60~100℃下提取1~3小时,优选为提取2小时,所述提取方式为加热回流、微波提取或超声辅助提取,提取1~3次,优选为提取2次,滤液过滤,优选用200~400目滤网过滤,合并滤液;

(3)将步骤(2)所得的滤液进行浓缩,经干燥优选喷雾干燥得到蝙蝠蛾拟青霉提取物,所述提取物或所述多种提取物的混合物(复配物)为蝙蝠蛾拟青霉活性物质。

在上述制备方法中,所述提取溶剂对应得到所述的蝙蝠蛾拟青霉提取物,该蝙蝠蛾拟青霉提取物作为蝙蝠蛾拟青霉活性物质;或者将多种提取溶剂分别制备得到的多种蝙蝠蛾拟青霉提取物,多种蝙蝠蛾拟青霉提取物的复合物(复配物),作为蝙蝠蛾拟青霉活性物质。

一种蝙蝠蛾拟青霉活性物质的制备方法,蝙蝠蛾拟青霉超微粉,所述方法包括以下步骤:将干燥的发酵蝙蝠蛾拟青霉菌丝体经过超微粉碎,所述超微粉碎为磨介式粉碎、或机械剪切式超微粉碎或气流式超微粉碎,所述超微粉碎时间每次为5~30分钟,优选为8~20分钟,所述超微粉碎的次数为1~3次,优选为2次,所述蝙蝠蛾拟青霉超微粉的粉体粒径为1~50μm,优选为5~20μm,得到蝙蝠蛾拟青霉超微粉。

一种蝙蝠蛾拟青霉活性物质的制备方法,该蝙蝠蛾拟青霉活性物质为蝙蝠蛾拟青霉水提取物,所述方法包括以下步骤:

(1)将干燥的发酵蝙蝠蛾拟青霉菌丝体粉碎;

(2)将粉碎后的蝙蝠蛾拟青霉菌丝体,置于水中,水与蝙蝠蛾拟青霉菌丝体的重量比为6~40:1,在60~100℃下提取1~3小时,滤液过滤,优选用200~400目滤网过滤,提取1~3次,合并滤液;

(3)将步骤(2)所得的滤液进行浓缩,经干燥得到蝙蝠蛾拟青霉水提取物,该水提取物就是蝙蝠蛾拟青霉活性物质。

一种蝙蝠蛾拟青霉活性物质的制备方法,该蝙蝠蛾拟青霉活性物质为蝙蝠蛾拟青霉含水乙醇提取物,所述方法包括以下步骤:

(1)将干燥的发酵蝙蝠蛾拟青霉菌丝体粉碎;

(2)将粉碎后的蝙蝠蛾拟青霉菌丝体,置于体积百分含量为12~90%的含水乙醇中,优选为30~65%的体积百分含量的含水乙醇,含水乙醇与蝙蝠蛾拟青霉菌丝体的重量比为8~30:1,在60~100℃下提取1~3小时,滤液过滤,优选用200~400目滤网过滤,提取1~3次,合并滤液;

(3)将步骤(2)所得的滤液进行浓缩,经干燥得到蝙蝠蛾拟青霉含水乙醇提取物,所述得到蝙蝠蛾拟青霉含水乙醇提取物为蝙蝠蛾拟青霉活性物质。

进一步优选的,一种蝙蝠蛾拟青霉活性物质的制备方法,包括将蝠蛾拟青霉超微粉、蝙蝠蛾拟青霉水提取物、蝙蝠蛾拟青霉含水乙醇提取物中的任意两种或三种混合得到。

优选的,在上述制备方法中,按照重量百分含量计,所述活性物质包含蝙蝠蛾拟青霉水提取物0~100%,蝙蝠蛾拟青霉含水乙醇提取物0~100%,蝙蝠蛾拟青霉超微粉为0~100%。

优选的,在上述制备方法中,按照重量百分含量计,所述活性物质包含蝙蝠蛾拟青霉水提取物12~48%,蝙蝠蛾拟青霉超微粉为20~62%。

优选的,在上述制备方法中,按照重量百分含量计,所述活性物质包含蝙蝠蛾拟青霉含水乙醇提取物5~32%,蝙蝠蛾拟青霉超微粉为30~74%。

优选的,在上述制备方法中,按照重量百分含量计,所述活性物质包含蝙蝠蛾拟青霉水提取物7~30%,蝙蝠蛾拟青霉含水乙醇提取物5~35%,蝙蝠蛾拟青霉超微粉为45~88%。

在本发明的第二方面,提供一种上述制备方法制备得到的蝙蝠蛾拟青霉活性物质。

一种蝙蝠蛾拟青霉活性物质,所述活性物质包括蝙蝠蛾拟青霉水提取物或含水乙醇提取物或蝙蝠蛾拟青霉超微粉中的一种或两种或三种的混合物。

优选的,按照重量百分含量计,所述活性物质包含蝙蝠蛾拟青霉水提取物0~100%,蝙蝠蛾拟青霉含水乙醇提取物0~100%,蝙蝠蛾拟青霉超微粉为0~100%。

进一步优选的,按照重量百分含量计,所述活性物质包含蝙蝠蛾拟青霉水提取物12~48%,蝙蝠蛾拟青霉超微粉为20~62%。

进一步优选的,按照重量百分含量计,所述活性物质包含蝙蝠蛾拟青霉含水乙醇提取物5~32%,蝙蝠蛾拟青霉超微粉为30~74%。

进一步优选的,按照重量百分含量计,所述活性物质包含蝙蝠蛾拟青霉水提取物7~30%,蝙蝠蛾拟青霉含水乙醇提取物5~35%,蝙蝠蛾拟青霉超微粉为45~88%。

在一个优选的实施例中,按照重量百分含量计,所述活性物质由以下组分组成:14%蝙蝠蛾拟青霉含水乙醇提取物、86%蝙蝠蛾拟青霉超微粉。

在一个优选的实施例中,按照重量百分含量计,所述活性物质由以下组分组成:35%蝙蝠蛾拟青霉含水提取物、65%蝙蝠蛾拟青霉超微粉。

在一个优选的实施例中,按照重量百分含量计,所述活性物质由以下组分组成:28%蝙蝠蛾拟青霉含水提取物、22%蝙蝠蛾拟青霉含水乙醇提取物、50%蝙蝠蛾拟青霉超微粉。

通过复配,能够提高活性物质中的有效物质含量,例如多糖含量和腺苷含量,提高活性物质的降尿酸等功效。

在本发明的第三方面,提供一种包括上述蝙蝠蛾拟青霉活性物质的药物或食品。

优选的,所述食品包括普通的食品、保健食品以及特殊医学用途配方食品等。

优选的,所述药物包括上述蝙蝠蛾拟青霉活性物质或药学上可接受的辅料。

优选的,所述药物包括片剂、颗粒剂、粉剂、胶囊、口服液。

在本发明的第四方面,提供一种上述蝙蝠蛾拟青霉活性物质或上述药物或食品的用途。

其中,所述用途包括在降尿酸方面的用途。

进一步地,所述用途包括治疗或预防高尿酸血症或痛风或相关并发症,还包括改善长期处于高尿酸血症或服用降尿酸药物导致肾脏损伤的问题。

进一步地,所述痛风包括但不限于痛风性关节炎、痛风性肾脏病变、痛风性肾结石、痛风性心脏病、痛风性高血压病等。

本发明通过体内高尿酸血症动物模型评价证实,本发明所制备的蝙蝠蛾拟青霉活性物质具有显著降低小鼠体内血尿酸合成、促进尿酸排泄的药理活性,并进一步发现其对由高尿酸血症及降尿酸药物引起的肾损伤具有良好的保护作用。

本发明的有益效果在于:

(1)本发明所述蝙蝠蛾拟青霉活性物质的制备工艺提取率高、活性物质含量高而成本低;

(2)本发明蝙蝠蛾拟青霉活性物质具有显著的降尿酸作用,能够用于制备缓解高尿酸血症或痛风病症的药物或食品,并对由高尿酸血症及降尿酸药物引起的肾损伤具有良好的保护作用,具有显著的治疗效果而产生低的副作用;

(3)本发明采用已实现规模化生产的发酵蝙蝠蛾拟青霉菌丝体,解决天然虫草资源稀缺问题,并能推动蝙蝠蛾拟青霉精深加工水平发展。

附图说明

图1为实施例6中所述测定的活性物质的腺苷色谱图;

其中,A为腺苷标准品;B、C为蝙蝠娥拟青霉活性物质。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明进行进一步说明。

实施例1

取蝙蝠蛾拟青霉菌丝体100g,使用粉碎机粉碎后加入锥形瓶中,并加入1000mL蒸馏水混合,在100℃下回流提取2小时后,使用400目滤网过滤。按上述工艺重复提取一次,将所得滤液合并后减压蒸馏浓缩,经喷雾干燥得到蝙蝠蛾拟青霉水提取物,即得蝙蝠蛾拟青霉活性物质。

将蝙蝠蛾拟青霉水提取物与填充剂(微晶纤维素与异麦芽酮糖醇重量百分比为1:2)按重量百分比1:1进行预混合,添加润滑剂与助流剂等量递加稀释均匀混合,经粉末直接压片工艺,得到蝙蝠蛾拟青霉片剂。

实施例2

取蝙蝠蛾拟青霉菌丝体100g,使用粉碎机粉碎后加入圆底烧瓶中,并加入2000mL的60%乙醇水混合,在80℃下回流提取3小时后,使用200目滤网过滤。按上述工艺重复提取一次,将所得滤液合并后减压蒸馏浓缩,经冷冻干燥得到蝙蝠蛾拟青霉含水乙醇提取物。

取蝙蝠蛾拟青霉菌丝体100g,使用粉碎机粉碎后,经机械剪切式超微粉碎15分钟,并重复超微粉碎1次,即得粉体粒径为5~20μm的蝙蝠蛾拟青霉超微粉。

将蝙蝠蛾拟青霉含水乙醇提取物与蝙蝠蛾拟青霉超微粉分别按重量百分含量14%、86%混合,即得蝙蝠蛾拟青霉活性物质,添加填充剂、润滑剂及助流剂混合均匀,装硬胶囊,得到蝙蝠蛾拟青霉胶囊。

实施例3

取蝙蝠蛾拟青霉菌丝体100g,使用粉碎机粉碎后,经机械剪切式超微粉碎15分钟,并重复超微粉碎1次,得到粉体粒径为6~18μm的蝙蝠蛾拟青霉超微粉,即为蝙蝠蛾拟青霉活性物质,经定量包装,即得蝙蝠蛾拟青霉粉剂。

实施例4

取蝙蝠蛾拟青霉菌丝体100g,使用粉碎机粉碎后加入锥形瓶中,并加入1500mL蒸馏水混合,在100℃下回流提取3小时后,使用200目滤网过滤。按上述工艺重复提取一次,将所得滤液合并后减压蒸馏浓缩,经喷雾干燥得到蝙蝠蛾拟青霉水提取物。

取蝙蝠蛾拟青霉菌丝体100g,使用粉碎机粉碎后,经机械剪切式超微粉碎15分钟,并重复超微粉碎1次,即得粉体粒径为5~18μm的蝙蝠蛾拟青霉超微粉。

将蝙蝠蛾拟青霉含水提取物与蝙蝠蛾拟青霉超微粉分别按重量百分含量35%、65%混合,即得蝙蝠蛾拟青霉活性物质,添加填充剂、润滑剂及助流剂混合均匀,装硬胶囊,得到蝙蝠蛾拟青霉胶囊。

实施例5

取蝙蝠蛾拟青霉菌丝体100g,使用粉碎机粉碎后加入锥形瓶中,并加入800mL蒸馏水混合,在100℃下回流提取2小时后,使用400目滤网过滤。按上述工艺重复提取一次,将所得滤液合并后减压蒸馏浓缩,经喷雾干燥得到蝙蝠蛾拟青霉水提取物。

取蝙蝠蛾拟青霉菌丝体100g,使用粉碎机粉碎后加入圆底烧瓶中,并加入2500mL的40%乙醇水混合,在80℃下回流提取3小时后,使用400目滤网过滤。按上述工艺重复提取一次,将所得滤液合并后减压蒸馏浓缩,经冷冻干燥得到蝙蝠蛾拟青霉含水乙醇提取物。

取蝙蝠蛾拟青霉菌丝体100g,使用粉碎机粉碎后,经机械剪切式超微粉碎8分钟,并重复超微粉碎3次,即得粉体粒径为8~16μm的蝙蝠蛾拟青霉超微粉。

将蝙蝠蛾拟青霉含水提取物、蝙蝠蛾拟青霉含水乙醇提取物与蝙蝠蛾拟青霉超微粉分别按重量百分含量28%、22%、50%混合,即得蝙蝠蛾拟青霉活性物质,经定量包装,即得蝙蝠蛾拟青霉粉剂。

实施例6

蝙蝠娥拟青霉活性物质定性-定量分析

1.测定依据:

(1)腺苷:NY/T 2116-2012虫草制品中虫草素和腺苷的测定高效液相色谱法

(2)粗多糖:何照范,张迪清等.分光光度法测定枸杞子多糖含量.《保健食品化学及其检测技术》[M].中国轻工业出版社,1998.

2.测试样品:由实施例1~实施例5制备所得的蝙蝠娥拟青霉菌活性物质

3.仪器与试剂:Agilent100高效液相色谱仪(美国Agilent公司)、UV-1750紫外-可见光分光光度计(日本岛津公司)等;腺苷对照品、葡萄糖等

4.试验方法

4.1腺苷

(1)色谱条件:Agilent prep-C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),柱温30℃,紫外检测器,波长260nm,流动相10%甲醇-水溶液,流速1mL/min,进样量20μL。

(2)标准曲线的制作:准确称取10mg(精确至0.0001g)腺苷标品,用超纯水溶解于25mL容量瓶,分别配置2.00μg/mL,4.00μg/mL,10.0μg/mL,20.0μg/mL和60.0μg/mL的腺苷标准溶液,在给定的仪器条件下进行液相色谱分析,以出峰时间定性分析,以试样峰面积对标准液浓度制作标准曲线,计算线性回归方程为y=44.607x-1.174,R2=0.9999。线性范围为2.0μg/mL-60μg/mL。

(3)样品检测:以纯水作为提取溶剂,准确称取0.2g蝙蝠娥拟青霉菌活性物质,倒入25mL容量瓶中,先加入约20mL纯水,超声60min(300W,40kHz),放冷后补水至满刻度,充分摇匀,8000r/min离心5min,取适量上清液经0.22μm的微孔滤膜过滤后,进样,检测,计算含量。

测定得到的不同样品的腺苷色谱图如图1所示。

4.2粗多糖

(1)标准曲线的制作:准确称取分析纯葡萄糖50mg(105℃干燥至恒重),用蒸馏水溶解定容至500ml,得到标准葡萄糖溶液100μg/mL。分别吸取0.00mL,0.20mL,0.40mL,0.60mL,0.80mL,1.00mL于6支比色管内,依次加入1.00mL,0.80mL,0.60mL,0.40mL,0.20mL,0.00mL去离子水,并各加5%苯酚溶液1.5mL、浓硫酸7.0mL摇匀后室温静置半小时,冷却后在488nm波长条件下,以试剂空白调零,分别测定A488值。按浓度与吸光值的比绘制葡萄糖标准曲线为y=15.608x+0.0005,R2=0.9999。

(2)样品检测:精确称取蝙蝠娥拟青霉菌活性物质0.25g,加入10mL蒸馏水,摇匀后沸水浴2小时,冷却后补水至10mL,4000r/min离心15min后取上清液,沉淀物再次加水摇匀,在沸水中水浴1小时,4000r/min离心15min同样取上清液,沉淀物再加水5mL洗涤,4000r/min离心15min,三次上清液混合定容至25ml,准确量取1.0mL加无水乙醇5mL,振荡均匀后沉淀过夜,4000r/min离心15min,弃去上清液,取沉淀物再加无水乙醇5mL,洗涤二次,之后沉淀物用去离子水溶解定容于10mL,吸取1mL溶解液于10ml比色管,加苯酚1.5mL、浓硫酸7.0ml摇匀后反应半小时,冷却后在488nm波长条件下,以试剂空白调零,分别测定A488值。与葡萄糖标样作对照,求出粗多糖含量。

测定得到的不同样品的腺苷和多糖含量结果如表1所示。

表1.蝙蝠娥拟青霉活性物质中腺苷、粗多糖活性成分的含量

注:表中1为实施例1制备所得蝙蝠娥拟青霉活性物质;2为实施例2制备所得蝙蝠娥拟青霉含水乙醇提取物;3为实施例3制备所得蝙蝠娥拟青霉超微粉;4为实施例2制备所得蝙蝠娥拟青霉活性物质;5为实施例4制备所得蝙蝠娥拟青霉活性物质;6为实施例5制备所得蝙蝠娥拟青霉活性物质。其中1-6的样品的测定质量相同。

由图1表明,采用该色谱条件可以准确地检测出蝙蝠娥拟青霉菌活性物质中的腺苷。

由表1可知,蝙蝠娥拟青霉菌经过不同工艺制备及合理复配,得到蝙蝠娥拟青霉菌活性物质的活性成分腺苷与粗多糖含量更高,提示可能具有更好的功效。

实施例7

蝙蝠蛾拟青霉的体内降尿酸功能评价试验

1.实验材料

试验动物:SPF级KM小鼠80只,雄性,体重18±5g,广东省医学动物实验中心提供,许可证号:SYXK(粤2012-0122)

2.试验样品:表1中所测定的6组蝙蝠蛾拟青霉活性物质;阳性对照:别嘌呤醇。

3.仪器与试剂:日立7220全自动生化分析仪;氧嗪酸钾、次黄嘌呤。

4.给药溶液的配制

供试样品配制:将实施例1~5的蝙蝠蛾拟青霉活性物质共6组(分别对应实施例6中含量测定1~6组样品),给药剂量设为500mg/kg,并按剂量用蒸馏水溶解配制,即得。

阳性对照品溶液:别嘌醇5mg/kg,用蒸馏水配制,即得。

5.实验方法

取90只雄性昆明小鼠,随机分9组(n=10):正常对照组、高尿酸模型组、阳性组、蝙蝠娥拟青霉活性物质6组(500mg/kg,分别为表1中测定的6组)。

除正常组外,其他组每天灌胃次黄嘌呤+腹腔注射氧嗪酸钾盐造模,造模前一个小时禁食不禁水;l小时后各组灌胃给药:正常对照组和模型组灌胃等体积的无菌蒸馏水、受试样品按低设定剂量分别灌胃给药、阳药组按5mg/(kg.d)的别嘌呤醇灌胃给药,连续7天。最后一天灌胃给药后l小时动物摘眼球取血,4000rpm离心10min分离得血清,检测血清中尿酸、肌酐与尿素氮的含量。

血清尿酸含量测定:采用钨酸法并严格按照试剂盒说明进行操作和测定,肌酐与尿素氮的含量测定严格按照试剂盒说明进行操作和测定。

统计学处理:所有数据均以表示,采用spss20.0统计软件处理。结果表1、2、3所示(*表示与正常对照组相比,差异显著(P<0.01);#表示与模型对照组相比,差异显著(P<0.01))。

蝙蝠蛾拟青霉活性物质对高尿酸血症小鼠的血清中尿酸、肌酐与尿素氮的含量影响结果如表2、表3、表4所示。

表2 蝙蝠蛾拟青霉活性物质对高尿酸血症小鼠血清尿酸含量的影响

注:(1)与正常对照组相比,*p<0.05,**p<0.01;与模型组相比,#p<0.05,##p<0.01.

(2)表中1~6组蝙蝠娥拟青霉活性物质分别对应实施例6中含量测定1~6组样品。

表3 蝙蝠蛾拟青霉活性物质对高尿酸血症小鼠尿素氮(BUN)的影响

注:与正常对照组相比,*p<0.05,**p<0.01;与模型组相比,#p<0.05,##p<0.01.

表4 蝙蝠蛾拟青霉活性物质对高尿酸血症小鼠肌酐(Cr)的影响

注:与正常对照组相比,*p<0.05,**p<0.01;与模型组相比,#p<0.05,##p<0.01.

从表2可知,本发明蝙蝠蛾拟青酶活性物质具有良好的降尿酸效果,其降尿酸效果可以使高尿酸模型组血液尿酸浓度降低到正常小鼠尿酸水平。尿素氮及肌酐水平作为衡量肾功能的指标,若二者含量高,则提示出现肾损伤。

由表3、4可知,高尿酸血症及降尿酸药物别嘌呤醇存在肾损伤的危害,而蝙蝠蛾拟青霉活性物质则能有效降低尿素氮及肌酐至正常水平,提示对肾损伤有一定的保护作用,可以用于制备降尿酸、改善痛风的药物或食品中。

以上所述,仅为本发明的较佳的具体实施例,但本发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,根据本发明的技术方案及其构思加以等同替换或改变,都应涵盖在本发明的保护范围内。

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