本发明涉及医药制剂技术领域，具体涉及的是一种铁钉菜提取物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用。
背景技术：
糖尿病是一种常见的以慢性血糖水平增高为特征的代谢病群，长期的血糖增高，易使血管受损并危及心、脑、肾、眼等器官，严重影响人体生命安全。为此，人们致力于研究抑制血糖升高的药物。目前，α-葡萄糖苷酶抑制剂如阿卡波糖等，由于具有抑制淀粉类分解为葡萄糖的速率，减缓肠道对碳水化合物的吸取等效用，被认为是首选的口服降糖药物。但临床用药也发现阿卡波糖片等新型口服降糖药，可能会造成胀气、腹泻、腹痛等副作用。因此，从可食用、药用植物中寻找更为安全高效的新型α-葡萄糖苷酶抑制剂一直受到广泛学者的青睐。
分布在我国东南沿海中、高潮带岩礁的褐藻铁钉菜(Ishige okamurae)系北太平洋西部特有的可食海藻，其甲醇提取物具有较高含量的多酚含量，甲醇提取物的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇和水等五个萃取部分均具有一定的抗氧化活性与α-葡萄糖苷酶抑制活性，80％甲醇提取物可通过改变肝葡萄糖代谢酶活性、改善胰岛素抵抗起到降血糖的作用，具有重要的营养价值和潜在的保健功能。而铁钉菜提取物对α-葡萄糖苷酶活性抑制作用的相关研究尚未被报道。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种铁钉菜提取物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用。
为了达成上述目的，本发明的解决方案是：
铁钉菜提取物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用。
所述铁钉菜提取物是由下列方法制备的：
(1)先取去杂的新鲜铁钉菜洗净沥干后，经组织粉碎机粉碎成铁钉菜粉末；
(2)然后取粉碎后的铁钉菜粉末，按照铁钉菜粉末:蒸馏水＝1g:30mL的比例混匀，90～100℃下水浴提取两次，每次1～2h，抽滤取滤液；
(3)然后将所得滤液减压浓缩至滤液原体积的23％～43％，加入无水乙醇使混合体系中无水乙醇的体积分数为75％，在4℃下醇沉24h后，离心，得上清液与醇沉物；
(4)取上清液减压浓缩后，经真空冷冻干燥，得铁钉菜水提醇沉上清部分，即本发明所述铁钉菜提取物。
所述减压浓缩在65℃、–0.09MPa的条件下进行。
所述离心的转速为4000r/min，所述离心的时间为5min。
所述真空冷冻干燥的温度为–80℃。
所述铁钉菜提取物的剂型为铁钉菜冲剂，所述铁钉菜冲剂的制备过程是：将所述铁钉菜提取物、可溶性淀粉、甜蜜素、β-环状糊精按照20～40:50～70:0.5～2:6.5～8.5的质量配比混合后，加适量95％乙醇，制成捏可成团、压可散开的软材，过40目药筛制粒，制粒后经80℃干燥、整粒、紫外灭菌、密封包装，即得所述铁钉菜冲剂。
采用上述技术方案后，本发明铁钉菜提取物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用，研究表明，铁钉菜提取物对α-葡萄糖苷酶活性具有一定的抑制作用，开发铁钉菜提取物作为α-葡萄糖苷酶抑制剂具有可行性。
附图说明
图1为铁钉菜冲剂对α-葡萄糖苷酶活性抑制的结果示意图。
具体实施方式
为了进一步解释本发明的技术方案，下面通过具体实施例来对本发明进行详细阐述。
实施例
1、铁钉菜提取物的制备
(1)先取去杂的新鲜铁钉菜洗净沥干后，经组织粉碎机粉碎成铁钉菜粉末；
(2)然后取粉碎后的铁钉菜粉末，按照铁钉菜粉末:蒸馏水＝1g:30mL的比例混匀，90～100℃下水浴提取两次，每次1～2h，抽滤取滤液；
(3)然后在65℃、–0.09MPa下，将所得滤液减压浓缩至滤液原体积的33％，加入无水乙醇使混合体系中无水乙醇的体积分数为75％，在4℃下醇沉24h后，然后以4000r/min的转速离心5min，得上清液与醇沉物；
(4)在65℃、–0.09MPa下，取上清液减压浓缩后，经–80℃真空冷冻干燥，得铁钉菜水提醇沉上清部分，即本发明的铁钉菜提取物。
2、铁钉菜冲剂的制备
将得到的铁钉菜提取物、可溶性淀粉、甜蜜素、β-环状糊精按照30:60:1:7.5的质量配比混合后，加适量95％乙醇，制成捏可成团、压可散开的软材，过40目药筛制粒，制粒后经80℃干燥、整粒、紫外灭菌、密封包装，即得铁钉菜冲剂。
3、铁钉菜冲剂对α-葡萄糖苷酶活性抑制的测定
3.1测定方法
参照Li T等[LI T,ZHANG XD,SONG YW,et al.A microplate-based screening method for alpha-glucosidase inhibitors[J].Chin.J.Clin.Pharm.Ther.,2005,10(10):1129-1134.]的方法，在96孔酶标板上依次加入112μL 0.1mol/L PBS(pH＝6.8)，20μL 0.2U/mLα-葡萄糖苷酶，8μL样液(以二甲亚砜(DMSO)配制)，37℃恒温15min后加入2.5mmol/L 4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG)20μL，经反应15min后加入80μL 0.2mol/L的Na2CO3溶液终止反应，酶标仪405nm波长下测吸光度值，重复实验3次，取平均值。酶活性抑制率的公式：I％＝[1－(A1－A2)/(A3－A4)]×100﹪；式中：A1为样液组的吸光度值，A2为以PBS代替酶溶液测得的样液组背景吸光度值，A3为以DMSO代替样液测得的空白对照组吸光度值，A4为以DMSO代替样液与PBS代替酶溶液测得的空白对照组背景吸光度值。
3.2结果与分析
铁钉菜冲剂对α-葡萄糖苷酶图活性的影响结果如图1。由图1可知，铁钉菜冲剂对α-葡萄糖苷酶活性表现为较强的抑制作用，样液浓度0.50mg/mL时，酶活抑制率可达87.95％，在0.17～0.50mg/mL的施测浓度范围内，量效满足线性回归方程y＝269.04x－50.185(R2＝0.977，P<0.01)，呈现极显著的正相关(P<0.01)，半抑制浓度IC50为0.37mg/mL，表明该铁钉菜冲剂具有较强的α-葡萄糖苷酶抑制活性。
4、铁钉菜冲剂对四氧嘧啶致糖尿病小鼠模型的的降糖作用
4.1测试方法
雄性、体重22±1g的SPF级健康KM小鼠(上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，许可证号为SCXK(沪)2012-0002)于鼠房适应性喂养3天，食量适当，饮水充足，保持鼠房温度18～20℃。3天后禁食不禁水12h，按200mg/kg剂量腹腔注射2％四氧嘧啶溶液(无菌生理盐水配制)，随机选取10只小鼠作为正常组(NC)腹腔注射等体积的生理盐水。1h后恢复正常饮食，3d后断尾取血(取血前小鼠禁食不禁水12h)，血糖仪(三诺安稳YZBI湘004-2012，长沙三诺生物传感技术股份有限公司)测血糖值，隔天再测一次血糖，以血糖值稳定并且大于11.1mmol/L且出现多饮、多食、多尿现象的小鼠视为建模成功。
将建模成功的糖尿病小鼠按体重、血糖分为5组，各组动物血糖平均差值不大于0.5mmol/L，每组10只，分别记为糖尿病模型对照组(MC)、阳性对照盐酸二甲双胍组(MH，500mg/kg)、铁钉菜冲剂低剂量组(LI，350mg/kg)、铁钉菜冲剂中剂量组(MI，700mg/kg)、铁钉菜冲剂高剂量组(HI，1400mg/kg)。给药组每天下午5时按剂量灌胃给药一次，正常组和模型对照组每天给予等量的生理盐水，连续14d。每7d测一次空腹血糖(晚餐后禁食不禁水12h，次日早晨7～8点钟之间测定血糖值)。实验末，测空腹血糖值后按剂量灌胃1次，20min后灌胃葡萄糖2.0g/kg，测定给葡萄糖后0.5h、1h、2h的血糖值。
4.2结果与分析
以四氧嘧啶致糖尿病小鼠模型研究铁钉菜冲剂的降糖作用，实验结果如表1。由表1可知，与模型组比较，钉钉菜冲剂各剂量组在观测时程7d与14d内均有一定的降血糖作用，差异具有极显著的统计学意义(P<0.01)，并且各剂量组降糖作用与盐酸二甲双胍组的降糖作用差异不具有统计学意义(P>0.05)，14d时各剂量组间降糖作用差异也不具有统计学意义(P>0.05)，说明铁钉菜冲剂在350mg/kg的使用剂量时已能有效发挥降血糖效果。
表1铁钉菜冲剂对四氧嘧啶致糖尿病小鼠模型血糖值的影响(n＝10；##P<0.01)
一般来讲，在口服葡萄糖后，0.5～1h时血清葡萄糖水平升高达峰值，2h后恢复至空腹血糖值。由表2可看出，铁钉菜冲剂各剂量组中小鼠在口服葡萄糖后，每一个时间点的血糖值均显著低于模型对照组(MC)的血糖值(P<0.01)，说明铁钉菜冲剂可以在短时间内降低餐后血糖，并且其降糖效果与阳性药物二甲双胍相近(P>0.05)。
综上研究表明：铁钉菜提取物对α-葡萄糖苷酶活性具有一定的抑制作用，开发铁钉菜提取物作为α-葡萄糖苷酶抑制剂具有可行性。
表2铁钉菜冲剂对四氧嘧啶致糖尿病小鼠模型糖耐量的影响(n＝10；##P<0.01)
上述实施例和图式并非限定本发明的产品形态和式样，任何所属技术领域的普通技术人员对其所做的适当变化或修饰，皆应视为不脱离本发明的专利范畴。