将样品以 200g离心5min，重新混悬于ImL FACS缓冲液（补充了 1% BSA的PBS)，即刻以200g离心 5min，重新混悬于400 μ L FACS缓冲液，转入具有圆底的96孔培养板（Nunc, Roskilde，DK)。 在冰上用人IgG阻断非特异性结合lOmin，然后将细胞在冰上在具有初级预缀合抗体或同 工型对照的100 μ L中温育60分钟，在4°C以500g离心5min，用200 μ L FACS缓冲液洗涤 2次。将细胞重新混悬于150 μ L FACS缓冲液，然后进行流式细胞检测分析，其可以使用BD FACSArray生物分析仪进行。基于掺入脂质体膜的DOPE-罗丹明B(RhB)的荧光测定脂质 体的细胞摄取量。使用在532nm处的激发和在564-606nm处的发射评估与细胞结合的脂 质体的总量（表示为'摄取量'且包括细胞膜结合的脂质体和已经摄入的脂质体）。基于 下列标记分析不同细胞群中的脂质体摄取量：CD14(单核细胞标记）、CD15(粒细胞标记）、 ⑶3 (T-淋巴细胞标记）、⑶19 (B-淋巴细胞标记）和⑶56 (天然杀伤细胞标记）。可以用 BD FACSDiva软件v5. 0.2分析数据。将未染色的细胞用作阴性对照，并且将具有高于对照 组细胞的荧光的细胞视为阳性。相同的门控用于分析每一实验中的所有细胞群。
[0114] 抗原
[0115] 抗原可以为、但不限于癌抗原、自体抗原或自身免疫抗原、微生物抗原、过敏原或 环境抗原。抗原实际上可以是肽、脂质或碳水化合物，但不限于此。
[0116] 癌抗原：癌抗原是优先由癌细胞表达的抗原（即它以高于在非癌细胞中的水平 在癌细胞中表达），在一些情况中，它仅由癌细胞表达。癌抗原可以在癌细胞中或在癌细 胞表面上表达。癌抗原可以是MART-1/Melan-A、gp100 、腺苷脱氨酶-结合蛋白（ADAbp)、 FAP、亲环蛋白b、结肠直肠关联蛋白（CRC) 0017-1A/GA733、癌胚抗原（CEA)、CAP-I、 CAP-2、etv6、AML 1、前列腺特异性抗原（PSA)、PSA-1、PSA-2、PSA-3、前列腺特异性膜抗 原（prostate-specific membrange antigen) (PSMA)、T 细胞受体/CD3_G 链和 MAGE-A1、 MAGE-A2、MAGE-A3、MAGE-A4、MAGE-A5、MAGE-A6、MAGE-A7, MAGE-A8、MAGE-A9, MAGE-A10、 MAGE-A11、MAGE-A12、MAGE-Xp2、（MAGE-B2)、MAGE-Xp3 (MAGE-B3)、MAGE-Xp4 (MAGE-B4)、 MAGE-Cl、MAGE-C2、MAGE-C3、MAGE-C4、MAGE-C5、GAGE-1、GAGE-2、GAGE-3, GAGE-4、GAGE-5、 GAGE-6、GAGE-7、GAGE-8、GAGE-9. BAGE、RAGE、LAGE-1、NAG、GnT-V、MUM-1、CDK4、酪氨酸酶、 p53、MUC家族、HER2/neu、p21ras、RCAS1、a-甲胎蛋白、E-钙黏着糖蛋白、a-连环蛋白、 β -连环蛋白、y-连环蛋白、pll20ctn、gplOO、PRAME、NY-ES0-1、cdc27、腺瘤状结肠息肉病 蛋白（APC)、胞衬蛋白、连接蛋白37、Ig-独特型、pl5、gp75、GM2神经节苷脂、⑶2神经节苷 月旨、人乳头瘤病毒蛋白、肿瘤抗原的Smad家族、Imp-1、P1A、EBV-编码的核抗原（EBNA)-U 脑糖原磷酸化酶（brain glycogen phosphorylase)、SSX-1、SSA-2(H0M-MEL_40)、SSX-1、 SSX-4、SSX-5、SCP-1 和 CT-7、CD20 和 c-erbB-2. (Amll:亲环蛋白 b)、B 细胞淋巴瘤（Ig-独特 型）；伯基特（非何杰金）淋巴瘤（⑶20):神经胶质瘤（E-钙黏着糖蛋白类：α -连环蛋白、 β-连环蛋白、-连环蛋白、pl20ctn)、膀胱癌（p21ras)、胆道癌（p21ras)、乳腺癌（MUC家 族；HER2/neu ;e_erbB2)、宫颈癌（p53 ;p21ras)、结肠癌（p21ras ;HER2/neu ;c_erbB_2 ;MUC 家族）、胃癌（HER2/neu ;c-erbB-2 ;ga733糖蛋白）、肝细胞癌、黑素瘤（pl5蛋白、gp75、癌胚 抗原、GM2和GD2神经节苷脂类）、骨髓瘤（MUC家族，p21ras)、非小细胞性肺癌（HER2/neU ; c-erbB-2)、鼻咽癌（lmp-1 ;EBNA_1)、卵巢癌（MUS 家族；Her2/neu ;c_erbB_2)、宫颈和食道 鳞状细胞癌（病毒产物，例如人乳头瘤病毒蛋白和非感染性颗粒）、睾丸癌（NY-ESO-I)、T细 胞白血病（HTLV-1表位）。
[0117] 微生物抗原：微生物抗原是来源于微生物种类的抗原，例如、但不限于细菌、病 毒、真菌、寄生虫和分支杆菌种类。照此，微生物抗原包括细菌抗原、病毒抗原、真菌抗原、 寄生虫抗原和分支杆菌抗原。细菌、病毒、真菌、寄生虫和分支杆菌种类的实例如本文所 提供。微生物抗原可以是微生物种类的组成部分或可以是整个微生物。在一个实施方案 中，细菌可以来源于细菌种类，其选自大肠杆菌（E.coli)、葡萄球菌属（Staphylococcal)、 衣原体属（Chlamydia)、链球菌（Streptococcal)、假单胞菌属（Pseudomonas)、难辨 梭菌（Clostridium difficile)、军团病杆菌属（Legionella)、Pnetanococcus、嗜血 菌属（Haemophilus)、克雷伯菌属（Klebsiella)、肠杆菌属（Enterobacter)、梓樣酸 杆菌属（Citrobacter)、奈瑟球菌属（Neisseria)、脑膜炎球菌 B (Meningococcus B)、 志贺菌属（Shigella)、沙门菌属（Salmonella)、利斯特菌属（Listeria)、巴斯德菌 属（Pasteurella)、链杆菌属（Streptobacillus)、螺旋菌属（Spirillum)、密螺旋 体属（Treponema)、放线菌属（Actinomyces)、疏螺旋体属（Borrelia)、棒杆菌属 (Corynebacterium)、肺结核（Tuberculosis)、诺卡氏菌属（Norcardia)、加德那菌属 (Gardnerella)、弯曲杆菌属（Campylobacter)、螺旋体属（Spirochaeta)、变形杆菌属 (Proteus)、类杆菌（Bacteriodes)、鼠疫耶尔森氏菌（Yersenia pestis)、幽门螺杆菌 (H. pylori)和炭疽D
[0118] 在另一个实施方案中，病毒抗原来源于病毒种类，其选自HIV、冠状病毒属 (Coronavirus)、单纯疱疫病毒 1 型（Herpes simples virus 1)、单纯疱疫病毒 2 型（Herpes simplex virus 2)、巨细胞病毒（cytomegalovirus)、登革热病毒（Dengue virus)、埃博 拉病毒（Ebola virus)、甲型肝炎病毒（hepatits A virus)、乙型肝炎病毒（hepatits B virus)、丙型肝炎病毒（hepatits C virus)、戊型肝炎病毒（hepatits E virus)、人乳 头瘤病毒（human papilloma virus)、人偏月市病毒（human Metapneumoniavirus)、EB 病 毒（Epstein Barr virus)、轮状病毒属（rotavirus)、腺病毒（adenovirus)、流感病毒 (influenza virus)(普通、HINlv、H7N1、H9N2)、肺炎球菌（Pneumococcus)、副流感病毒 (Para influenza virus)、呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus) (RSV)、水痕带 状疱疫病毒（varicella-zoster virus)、天花（small pox)、猴痕（monkey pox)、西尼罗病 毒（West Nile virus)、SARS。
[0119] 在另一个实施方案中，真菌抗原来源于导致感染的真菌种类，其选自念珠 菌病（candidiasis)、钱癣（ringworm)、组织胞楽菌病（histoplasmosis)、芽生菌病 (blastomycosis)、虽球抱子菌病（paracoccidioidomycosis)、隐球菌病（crytococcosis)、 曲霉菌病（aspergillosis)、产色霉菌病（chromomycosis)、足分支菌病感染（mycetoma infections)、假性阿利什利菌病（pseudallescheriasis)、花斑癣（tinea versicolor)感 染。
[0120] 在另一个实施方案中，寄生虫抗原来源于寄生虫种类，其选自阿米巴病 (amebiasis)、热带南美洲维虫（trypanosome cruzi)、片形属（Fasciolia)、利什曼 原虫属（Leishmania)、疱原虫属（Plasmodium)、盘尾丝虫属（Onchocercia)、并殖 属（Paragonimia)、维虫（Trypanosoma brucei)、肺囊虫（Pneumocystis)、阴道毛滴 虫（Trichomonas vaginalis)、绦虫属（Taenia)、膜壳绦虫（Hymenolepsis)、棘球属 (Echinococcus)、血吸虫属（Schistosoma)、神经囊尾蝴病（neurocysticercosis)、美洲板 口线虫（Necator americanus)和鞭虫（Trichuris trichuria) 〇
[0121] 分支杆菌抗原可以来源于分支杆菌的种类，例如结核分支杆菌（M. tuberculosis) 和麻风分枝杆菌（M. leprae)，但不限于此。
[0122] 过敏原：过敏原是可以诱导受试者中的过敏性或哮喘性应答的抗原。过敏原包 括、但不限于花粉、昆虫毒液、动物毛皮垢肩粉尘、真菌孢子和药物（例如青霉素）。天 然、动物和植物过敏原的实例包括、但不限于对下列属具有特异性的蛋白质：犬（家犬 (Canis familiaris));表皮螨属（Dermatophagoides)(例如，粉尘螨（Dermatophagoides farinae));猫属（Felis)(猫（Felis domesticus));豕草属（Ambrosia) (Ambrosia artemi isfolia;黑麦草属（Lolium)(例如黑麦草（Lolium perenne)或多花黑麦草（Lolium multiflorum));柳杉属（Cryptomeria)(日本柳杉（Cryptomeria japonica)):链格抱 属（Alternaria)(链格孢菌（Alternaria alternate));赤杨；棺木属（Alnus)(欧洲丰岂 木（Alnus gultinoasa));桦木属（Betula) (Betula verrucosa);栎树属（Quercus)(白 栎（Quercus alba));木庫榄属（Olea)(油橄榄（Olea Europa));蒿属（Artemisia)(艾蒿 (Artemisia vulgaris)):车前属（Plantago)(例如长叶车前（Plantago Ianceolata)); 墙草属（Parietaria)(例如 Parietaria officinalis of Parietaria judaica);蜚 蠊（Blattella)(例如德国小蠊（Blattella germanica));蜜蜂属（Apis)(例如 Apis multiflorum);桕属（Cupressus)(例如地中海桕木（Cupressus sempervires)，绿干桕 (Cupressus arizonica)和大果桕木（Cupressus macrocarpa));刺桕属(Juniperus) (例如 Juniperus sabinoides、Juniperus virginiana、欧洲朿Ij桕（Juniperus communis) 和阿希刺桕（Juniperus ashei));金钟桕（Thuya)(例如 Thuya orientalis);红桧 (Chamaecyparis)(例如 Chamaecyparis obtuse);大臟属（Periplaneta)(例如美洲大臟 (Periplaneta Americana));冰草属（Agropyron)(例如偃麦草（Agropyron repens));黑 麦属（Secale)(例如黑麦（Secale cereal));小麦属（Triticum)(例如小麦（Triticum aestivum));鸭茅属（Dactylis)(例如鸭茅（Dactylis glomerata));羊茅属（Festuca) (例如牛尾草（Festuca elatior));早熟禾属（Poa)(例如草地早熟禾或加拿大早熟禾（Poa pratensis of Poa compressa));燕麦属（Avena)(例如燕麦（Avena sativa));绒毛草属 (Holcus)(例如Holcus Ianatus);黄花茅属（Anthoxanthum)(例如燕麦（Avena sativa)); 绒毛草属（Holcus)(例如绒毛草（Holcus Ianatus));黄花茅属（Anthoxanthum)(例如黄花 茅（Anthoxanthum odoratum));燕麦草属（Arrhenatherum)(例如燕麦草（Arrhenatherum elatius));剪股颖属（Agrostis)(例如小糠草（Agrostis alba));梯牧草属（Phleum)(例 如梯牧草（Phleum pretense));草芦属（Phalaris)(例如草芦（Phalaris arundinacea)); 雀稗属（Paspalum)(例如百喜草（Paspalum notatum));高梁属（Sorghum)(例如石茅高粱 (Sorghum halepensis));和桕木（Bomus)(例如无芒雀麦（Bromus inermis)) D
[0123] 例如，在如下任意一种或多种的自身免疫疾病或障碍中涉及的抗原可以用于本 发明；糖尿病、糖尿病、关节炎（包括类风湿性关节炎、幼年型类风湿性关节炎、骨关节炎、 牛皮癣性关节炎）、多发性硬化、重症肌无力、系统性红斑狼疮、自身免疫性甲状腺炎、皮炎 (包括特应性皮炎和湿瘆性皮炎）、银肩病、斯耶格伦综合征包括斯耶格伦综合征继发性干 燥性角结膜炎、斑秃、因节肢动物叮咬反应导致的过敏反应、克罗恩病、口疮性溃疡、虹膜 炎、结膜炎、角结膜炎、溃疡性结肠炎、哮喘、过敏性哮喘、皮肤红斑狼疮、硬皮病、阴道炎、直 肠炎、药瘆、麻风病逆转反应、麻风结节性红斑、自身免疫性葡萄膜炎、变应性脑脊髓炎、过 敏性鼻炎、急性坏死性出血性脑病、特发性双侧进行性感音神经性听觉丧失、再生障碍性贫 血、纯红细胞再生障碍性贫血（pure red cellanemia)、特发性血小板减少症、多软骨炎、韦 格纳肉芽肿、慢性活动性肝炎（chronic active pepatitis)、斯-约二氏综合征、特发性口 炎性腹泻、扁平苔癣、克罗恩病、格雷夫斯眼病、结节病、原发性胆汁性肝硬变、后葡萄膜炎 和间质性肺纤维化。自身免疫疾病中涉及的抗原的实例包括谷氨酸脱羧酶65(GAD 65)、天 然DNA、髓磷脂碱蛋白、髓磷脂蛋白脂质蛋白质、乙酰胆碱受体成分、甲状腺球蛋白和促甲状 腺激素（TSH)受体。
[0124] 本发明同样关注的其他病症的特征为全身炎症和/或感染且可能与如下疾病相 关：创伤、烧伤、手术、冠状动脉病、冠状动脉动脉粥样硬化、动脉粥样硬化、心肌梗死后梗死 炎症和修复、心脏缺血-再灌注损伤、心肌炎症、心肌缺血、心血管疾病、脑梗死、出血性休 克、再灌注损害、透析、休克和/或细菌或病毒感染、体外膜式氧合（ECMO)、休克、系统性炎 症反应综合征（SIRS)、脓毒症、多器官衰竭、移植物例如器官和/或假体排斥、心肺搭桥手 术、慢性炎症、哮喘和/或肺中的应激相关疾病、细菌感染、坏疽、软组织感染和伤口感染。
[0125] 本发_的药物组合物
[0126] 如上所述，本发明的脂质体用作本发明药物制剂的成分。关注适合于静脉内施用 于哺乳动物的任意这种制剂形式。
[0127] 本发明的药物制剂优选是溶液、分散液、混悬液、冻干物形式或冷冻形式。
[0128] 治疗用涂或方法
[0129] 本发明的另一个部分是用作药物的本发明的脂质体或基于脂质的递药系统或药 物组合物。特别地，本发明的这些方面可以用于预防或治疗或改善单核细胞相关疾病，例 如：
[0130] 脓毒症：
[0131] 脓毒性休克是重症监护病房中最常见的死亡原因且死亡率为25-50% (Kumar, V， 等人（2007).Robbins Basic Pathology (第 8版）.Saunders Elsevier.第 102-103 页）。 活化单核细胞在患者存活方面起重要作用，其中单核细胞是对于疾病发展而言关键的分 泌的细胞因子的主要来源，主要涉及ILie、IL-6和TNFa。存活或脓毒症患者与来自脓毒 症发作后前48h的这些患者的血清中观察到的IL-6水平相关。对于具有在诊断后前48h 内测定的高IL-6的患者（>1000pg/mL)，死亡率为50%，而低IL-6(〈1000pg/mL)与良好 的存活率相关（在第28天时存活率为100% ) (Spittler A.等人Clinical Infections Diseases, 2000、31 ;1338-42)。施用低剂量的糖皮质激素降低了患有脓毒症的患者中的死 亡率（Djillali A.，等人JAMA 2002, 288、n〇7, 862-872)，表明糖皮质激素治疗且特别是如 本申请中所公开的靶向的脂质体糖皮质激素治疗靶向脓毒症中的住院效应细胞之一；单核 细胞可以是富有希望的治疗机会，特别是在诊断和/或发作后前48h施用于具有高IL-6水 平（>1000pg/mL)的患者时。
[0132] 川崎病：
[0133] 川崎病（KD)是中等大小动脉的自身免疫炎症。它影响许多器官系统，主要是包 括血管、皮肤、粘膜和淋巴结的那些；最严重的作用是针对心脏，其中它可以导致未治疗的 儿童中发生致命性冠状动脉瘤。KD主要是儿科疾病，其可能由早期感染诱发。炎症完全 弥漫在动脉周围；作为结果，动脉的结构成分发生强烈损伤；动脉随后开始膨胀。炎症细 胞浸润持续直至大约该病的第25天，此后炎症细胞数量逐步减少。KD动脉炎的特征在 于由单核细胞/巨噬细胞严重蓄积组成的肉芽肿性炎症（Matsubara T.等人Clin Exp Immunol，141:381-387)。认为单核细胞/巨噬细胞异常活化牵连形成血管损害。KD进行至 多3-4周且涉及具有诱导的TNFa、IL-2R、IL-I、IL-6和NO-合酶增加的单核细胞/巨噬细 胞活化（Furukawa S 等人 Nihon Rinsho. 2008Feb ;66 (2) :258-64) 〇
[0134] 冠状动脉炎
[0135] 冠状动脉炎在 KD 发作后 6-8 天开始（Takahashi K, Clin Exp Immunol. 2011 年 5 月；164增刊1:20-2)。静脉内免疫球蛋白（IVIG)是川崎病的标准疗法，通常补充使用施用 阿司匹林至多2个月。使用皮质类固醇也取得了成功且与IVIG在降低细胞因子水平方面 相差无几或略高于它，尤其是在其他治疗无效或症状复发时，但是可能产生另外的副作用 (Miura M 等人 Eur J Pediatr. 20080ct; 167 (10) :1119-23)。因此，使用免疫抑制脂质体的 脂质体靶向KD中的单核细胞可以改善免疫抑制作用和疾病进展，同时减少因施用游离皮 质类固醇观察到的全身副作用。
[0136] 结节病
[0137] 结节病是未知原因的疾病，其中慢性炎症细胞的异常集合（肉芽肿）在多个器官 中作为结节形成。30-70%的患者无需治疗。 1皮质类固醇、最常见的是泼尼松龙成为治疗 标准已经许多年了。在一些患者中，这种治疗可以减缓或逆转疾病过程，而另外的患者对类 固醇疗法无应答。大约10%发生严重的残疾。肺瘢痕形成或感染可以导致呼吸衰竭和死 亡（Chen ES.等人，Nat Rev Rheumatol. 2011 年 7 月 12 日；7 (8) :457-67)。来自合并 TLR2 和N0D2刺激后的结节病患者的血单核细胞中的促炎细胞因子的TLR表达增加和分泌增强 可能与结节病的病原体相关。因此，与靶向结节病患者中的单核细胞的免疫抑制性化合物 如皮质类固醇一起配制的阳离子脂质体可以改善许多结节病的严重性病例中的疾病发展 (Wik6n M.等人.J Clin Immunol. 2009 年 1 月；29 (1):78-89) 〇
[0138] 本发明同样关注的其他疾病的特征为全身炎症和/或感染，且可能与创伤、烧伤、 手术、透析、休克和/或细菌或病毒感染相关。在本发明的一个优选的实施方案中，全身性 疾病与选自如下疾病的相关：体外膜式氧合（ECMO)、休克、冠状动脉病、冠状动脉动脉粥样 硬化、动脉粥样硬化、心肌梗死后梗死炎症和修复、心脏缺血-再灌注损伤、心肌炎症、心 肌缺血、心血管疾病、脑梗死、出血性休克、再灌注损害、全身性炎性反应综合征（systemic inflammatiory response syndrome) (SIRS)、脓毒症、多器官衰竭、移植物例如器官和/或 假体排斥、心