用于位点特异性uPAR靶向的177-Lu标记肽的制作方法
【专利说明】用于位点特异性uPAR靶向的177-Lu标记肽 发明领域
[0001] 本发明涉及用于位点特异性靶向尿激酶纤溶酶原激活物受体（uPAR)的177-Lu标 记肽。更具体而言本发明涉及对与高uPAR表达相关的任何癌症疾病的治疗。特别是本发 明针对但不限于通过向患者施用有效量的177-Lu标记肽对前列腺、乳腺和结肠直肠癌的 治疗。
[0002] 发明背景
[0003] 多种放射性标记肽组合物已被开发或正处于开发之中用于治疗性放射性核素的 位点特异性靶向。总原则涉及将所选放射性核素附着到对特定器官或组织具有高特异性的 肽从而使得所述器官或组织能被治疗性放射性同位素治疗。这一研宄领域已显示出特别适 用于肿瘤显像和治疗。特别理想的生物学位点包括但不限于神经内分泌肿瘤如腹部肿瘤和 小细胞肺癌、脑肿瘤、前列腺肿瘤、乳腺肿瘤、结肠肿瘤和卵巢肿瘤。
[0004] D0TA(1，4,7, 10-四（羧甲基）-1，4,7, 10四氮杂环十二烷）及其衍生物构成用于 生物医学应用的重要螯合剂类别，因为其非常稳定地容纳多种二价和三价金属离子。一个 新兴领域是在诊断和治疗性核肿瘤学的不同领域中使用螯合剂缀合的生物活性肽用放射 性金属进行标记。NODAGA及其衍生物构成用于生物医学应用的另一类重要螯合剂。
[0005] mLu-标记肽用于核素靶向疗法被成功引入对神经内分泌肿瘤的治疗，且目前正 在临床前癌症模型中评价若干新靶，包括整联蛋白、Her-2、胃泌素释放肽（GRP)和血管内 皮生长因子（VEGF)。
[0006] uPAR PET显像已在几种人类癌症异种移植物模型中开发，使用小的线性DOTA-缀 合肽，D0TA-AE105,用 64Cu (Persson et al, 2011)和 68Ga (Persson 等人，2012)作放射性标 记。
[0007] 恶性肿瘤能够降解周围的胞外基质，导致局部侵袭或转移。尿激酶型纤溶酶原激 活物（uPA)及其细胞表面受体（uPAR)在体外和体内都是细胞表面关联的纤溶酶原激活的 中枢分子。在许多类型的人类癌症中uPA和uPAR的高表达与恶性肿瘤生长相关且伴有差 预后，可能表明uPA/uPAR系统在癌症进展和转移中的因果作用。免疫组化和原位杂交研宄 表明，来自uPA系统组分的表达水平通常在正常组织和良性病变中非常低。还已报道uPA/ uPAR系统通过充当玻连蛋白的粘附受体和通过调节整联蛋白功能而涉及调节细胞-胞外 基质相互作用。基于这些特性，因此认为uPA/uPAR系统是引人注目的癌症治疗靶。
[0008] WO 01/25410描述了诊断或治疗性标记的uPAR靶向蛋白质和肽。所述肽或蛋白质 包含至少38个氨基酸残基，包括uPA的uPAR结合位点的残基13-30。
[0009] US 6, 277, 818描述了可与诊断标记缀合的uPAR靶向环肽化合物。所述肽基于uPA 的氨基酸残基20-30。
[0010] US 6, 514, 710也涉及对uPAR具有亲和性的环肽。所述肽可携带可检测标记。所 述肽包含由连接单元相连的11个氨基酸。
[0011] Ploug等人在Biochemistry 2001，40, 12457-12168描述了 uPAR祀向肽，但不是在 显像情境中，其包括本文件中描述的氨基酸序列。类似公开内容提供在US 7, 026, 282中。
[0012] DADACHOVA, E. (''Cancer Therapy with Alpha-Emitters Labe led Peptides"，Seminars In Nuclear Medicine (2010)，Vol. 40,Issue 3,Pages 204-208)公 开了 213-Bi标记的uPAR结合肽缀合物，其中肽通过DOTA与213-Bi偶联。所述肽用于治 疗癌症。
[0013] GUHA，A. C.等人（"Tumor Biology-Guided Radiotherapy Treatment Planning:Gross Tumor Volume Versus Functional Tumor Volume"，Seminars In Nuclear Medicine(2008), Vol. 38, Issue 2, Pages 105-113)公开了放射性金属如 177-Lu 用于标记 抗体来用于放射免疫疗法。该文件还描述了放射性金属可通过金属螯合剂与功能性结合剂 如uPAR结合肽缀合。
[0014] JIANG L.等人（"Preliminary evaluation of(177)Lu-labeled knottin peptides for integrin receptor-targeted radionuclide therapy^, Eur. J. NucI. Med. Mol. Imaging(2011), Vol. 38, Issue 4, pages 13-22)公开了经改造以结合整联蛋白受体的 半胱氨酸结肽，其经由放射性金属螯合剂DOTA而用177-Lu作放射性标记，和使用这种肽对 整联蛋白阳性肿瘤进行放射疗法。
[0015] W02007134274A2公开了通过使用与177-Lu缀合的结合uPAR的配体来杀伤癌症干 细胞的方法。
[0016] 由于化学和生理学不确定性，在特定缀合系统中选择特定放射性核素并非无关重 要。例如用177-Lu替换213-Bi并非显而易见，因为213-Bi是α粒子发射体并因此在临 床上与β粒子发射体177-Lu关系疏远。
[0017] 对uPAR的有效祀向需要在化学上牢固和稳定的选择性高亲和载体。
[0018] 发明概述
[0019] 本发明提供具有对uPAR的高亲和性、在细胞结合系统中的高效力和经证实的生 物学稳定性的177-Lu标记肽。更具体而言本发明涉及对与高uPAR表达相关的癌症疾病的 治疗。特别是本发明针对但不限于通过向患者施用有效量的177-Lu标记肽对前列腺、乳腺 和结肠直肠癌的治疗。
[0020] 在第一方面本发明涉及177-Lu标记的uPAR结合肽缀合物，其中所述肽通过螯合 剂与177-Lu偶联。
[0021] 在一个优选的实施方案中，本发明涉及177-LU标记的肽缀合物，其中所述肽通过 螯合剂与177-Lu偶联，所述肽选自下组：
[0022] (D-Asp) - ([ β ]-环己基-L-丙氨酸）-(Phe) - (D-Ser) - (D-Arg) - (Tyr) - (Leu) - (Tr p)-(Ser),
[0023] (Ser) - (Leu) _([ β ]_ 环己基-L-丙氨酸）-(Phe) - (D-Ser) - (Gln) - (Tyr) (Leu) - (Trp) - (Ser),
[0024] (D-Glu) - ([ β ]-环己基-L-丙氨酸）-(Phe) - (D-Ser) - (D-Tyr) - (Tyr) - (Leu) - (Tr p)-(Ser),
[0025] (Asp) - ([ β ]-环己基-L-丙氨酸）-(Phe) - (D-Ser) - (D-Arg) - (Tyr) - (Leu) - (Trp) -(Ser),
[0026] (Asp) - ([ β ]-环己基-L-丙氨酸）-(Phe) - (Ser) - (D-Arg) - (Tyr) -Leu) - (Trp) - (S er),
[0027] (D-Asp) - ([ β ]-环己基-L-丙氨酸）-(Phe) - (Ser) - (D-Arg) - (Tyr) -Leu) - (Trp) -(Ser),
[0028] (D-Thr) - ([ β ]-环己基-L-丙氨酸）-(Phe) - (D-Ser) - (D-Arg) - (Tyr) - (Leu) - (Tr p)-(Ser),
[0029] (D-Asp) - ([ β ]-环己基-L-丙氨酸）-(Phe) - (D-Ser) - (D-Arg) - (Tyr) - (Leu)-([ β ]-2-萘基-L-丙氨酸）-(Ser)，
[0030] (Asp) - ([ β ]-环己基-L-丙氨酸）-(Phe) - (D-Ser) - (Arg) - (Tyr) - (Leu) - (Trp)-( Ser),
[0031] (Asp) - ([ β ]_ 环己基-L-丙氨酸）-(Phe) - (D-Se