凤眼莲水提液的制备方法及其新用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种凤眼莲水提液的制备方法及其新用途，属于人体保健应用技术领 域。
【背景技术】
[0002] -种污染物或其他因素（如温度、湿度、光照、辐射）使得动物一种行为改变超过 正常变化的范围，这种影响称为行为毒性。低温雨雪冰冻天气过程具有低温、高湿、寡照气 候特征，低温雨雪冰冻气候事件是由温度、湿度、光照等多种气候因子异常所致的极端气候 事件，低温雨雪冰冻环境暴露势必给暴露主体的行为造成影响，而低温雨雪冰冻气候暴露 产生的行为毒性势必给暴露主体的生存能力和作业能力带来显著影响。近十年来，气候变 暖背景下低温雨雪冰冻天气事件反而变多，一旦发生多为持续性大范围极端气候事件，这 种低温雨雪冰冻天气事件一旦发生后由于救援应急作业任务，急需派遣应急救援队伍，而 低温雨雪冰冻天气事件发生后其湿冷环境（低温高湿）依然存在，这与其他自然灾害有很 大不同，因而，必须关注低温雨雪冰冻环境下暴露主体（受灾人群）和运动主体（应急救援 人群）行为毒性的防护，但目前针对低温雨雪冰冻事件的保护多凭借服装装备的改善，机 体内在的调控剂开发严重不足，目前的应急救援物资的配置尚不能满足低温雨雪冰冻环境 下暴露主体特别作业主体的实际需求。从应急救援角度看，亟待提供对低温雨雪冰冻环境 下暴露主体运动行为有调控作用的应激保护剂。
[0003] 摄氧行为与摄食行为一样，属刚性行为，特别是在低温雨雪冰冻极端环境下，食物 短缺、水源断绝等情况极有可能出现，该情况下摄氧行为对维持机体的生理功能显得更为 重要。耗氧量（摄氧量）是指单位时间机体摄取并被实际消耗或利用的氧量，是评价代谢 强度的间接指标，在极端环境下的适应研究中被广泛应用，耗氧量已成为衡量动物对环境 的适应能力的经典指标，因而，耗氧量在低温雨雪冰冻环境暴露生物响应评价中更具应用 价值。极端环境暴露往往会对暴露主体的氧代谢造成很大的扰动作用，因而，提供一种对低 温雨雪冰冻环境暴露氧代谢有调控作用的保护剂有很大的应用空间。
[0004] 凤眼莲又名水萌芦，原产于南美洲，凤眼莲有惊人的生长速度，现已广泛分布在亚 洲、美洲、大洋洲和非洲，在我国南北方也有广泛分布。凤眼莲惊人的生长速度使得水体中 原有的水生动植物无法进行有效的光合作用，由此破坏了水体中原有的生态平衡，凤眼莲 已成为我国主要恶性杂草之一，如何将凤眼莲变废为宝一直是环境领域亟待解决的热点问 题。然而，凤眼莲虽被视为恶性杂草，但因凤眼莲是一种各种营养成分较为齐全的植物， 含人类食品营养所需的七大营养素（碳水化合物、蛋白质、脂肪、维生素、矿物质和膳食纤 维），此外，还含有很多有机活性物质（有机酸、黄酮类、酚类化合物），凤眼莲的药用价值、 保健价值有十分广阔的应用前景，是目前开发的热点植物。
[0005] 在凤眼莲活性物质的提取过程中存在的问题主要集中在3方面：（1)凤眼莲水份 大，不易保存，目前的方法多阴干，但阴干过程中易霉烂，极易对提取物的质量造成潜在影 响。（2)目前有关凤眼莲的提取多用有机溶剂提取，该方法可能存在有机溶剂残留问题。 (3)有关凤眼莲水提法中用热提法，而凤眼莲中所含的活性物质很可能会在加热过程中被 破坏。如能用低温水提法（常温下）获得新鲜凤眼莲中活性物质，可能会在一定程度上克 服上述问题，由此将减少提取环节、进而大幅度降低凤眼莲的提取成本。
【发明内容】
[0006] 针对上述现有技术的不足，本发明提供了一种凤眼莲水提液的制备方法及其新用 途。
[0007] 为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：凤眼莲水提液的制备方法，具体步骤 如下：
[0008] (1)选取原料；
[0009] (2)新鲜凤眼莲水浸液制备：
[0010] 取新鲜凤眼莲茎叶称重一自来水冲洗一置于蔬菜脱水机中脱水一将凤眼莲移至 豆浆机一加纯净水打磨成汁一倒入容器中浸泡5小时。
[0011] (3)凤眼莲水提液提取过程：
[0012] 将凤眼莲水浸液置于超声波细胞粉碎机专用盒中一超声粉碎一震荡一离心一取 上清液置于瓶中备用。
[0013] 优选的，所述的选取原料中，筛选大小基本相同的凤眼莲作为试验材料。采后在实 验室用静置过夜的自来水净养2周，留取质地优良的植株备用。
[0014] 优选的，所述的超声粉碎每次5秒，连续粉碎5次。
[0015] 优选的，所述的震荡其时间为10分钟。
[0016] 优选的，所述的离心的转数为35000r/min，离心时间为10分钟。
[0017] 凤眼莲水提液的新用途，是凤眼莲水提液对低温雨雪冰冻环境下暴露主体的行为 毒性有调控作用的新用途。
[0018] 本发明的提供凤眼莲水提物在最大程度上保留了新鲜凤眼莲水溶性营养物质，不 用阴干（简便、省事），无有机溶剂残留问题，无需加热，在常温下即可获得新鲜凤眼莲水提 物，具有安全、简便、成本低、高效等特征。由于凤眼莲产量高，鲜品极易获得，本发明具有很 大应用空间。凤眼莲对环境适应强，在某些地区被称为害草，本发明可借助这一技术特征将 凤眼莲变废为宝，因而，本发明还具有环境意义，而本发明的核心技术旨在提供凤眼莲水提 物对低温雨雪冰冻环境下暴露主体的行为毒性有调控作用，因而，本发明具有双重环境意 义。
【附图说明】
[0019] 图1是暴露箱的结构示意图。
【具体实施方式】
[0020] (一）凤眼莲水提物的制备、器材、动物准备和模型制备
[0021] 1.凤眼莲水提物的制备
[0022] (1)原料来源：凤眼莲采自辽宁沈阳蒲河边，分别筛选大小基本相同的凤眼莲和 大作为试验材料。采后在实验室用静置过夜的自来水净养2周，留取质地优良的植株备用。
[0023] (2)新鲜凤眼莲水浸液制备过程：
[0024] 取新鲜凤眼莲茎叶称重一自来水冲洗一置于蔬菜脱水机中脱水一将凤眼莲移至 豆浆机一加纯净水打磨成汁一倒入容器中浸泡5小时。
[0025] (4)凤眼莲水提液提取过程
[0026] 将凤眼莲水浸液置于超声波细胞粉碎机专用盒中一超声粉碎（每次5s ;连续粉碎 5次）一震荡（lOmin)-离心（3500r，lOmin)-取上清液置于瓶中每用。
[0027] 本发明提供的凤眼莲水提液色泽好，有清香感，口感细腻，人和动物均易接受。最 后将上清液置于旋转蒸发仪中制取干粉，再用超低温冻干机中制成冻干粉备用。实验前按 0. 5g (鲜重）.kg 1和1. 5g (鲜重）.kg 1配制溶液待用。
[0028] 2、动物准备和分组
[0029] 选取8周龄健康、反应灵敏的昆明雄性种小鼠，平均体重在20. 56±1. 50克，购置 沈阳医学院动物实验中心（SCXK (辽）2010-0001)。适应性喂养1周后进行一次适应性游泳， 剔除不会游泳的小鼠，将符合标准的小鼠按体重随机分为4组，正常对照组、模型对照组、 凤眼莲低剂量组和凤眼莲高剂量组，每组10只。分组完成后将动物饲养在安静、无噪音、温 度在21 ± 1 °C、相对湿度在45-50 %的环境中，饲养笼选用塑料制品，配有不锈钢笼罩、塑料 吸水瓶和铝吸水管，用国家标准固体饲料喂养，自由饮食饮水，且每天更换垫料，清洗饲养 笼。
[0030] 3、实验器材
[0031] 实验器材见表1。
[0032] 表1实验器材一览表
[0033]
[0034]
[0035] 4、模型制备
[0036] 每天上午8点分别将模型对照组、凤眼莲低剂量组和凤眼莲高剂量组实验动物置 于自主研发的暴露箱中，所述的暴露箱如图1所不，包括储冰室1和动物暴露室2。动物暴 露室2处于储冰室1的上端，两者之间设有带孔隔板4。动物暴露2室内设有温湿度传感 器7和摄像头8。动物暴露室2通过外接口 8与气体采集、检测装置10连接。所述储冰室 1的两侧设有聚苯乙烯泡沫保温板3。所述储冰室1上设有冰雪入口 9。所述动物暴露室2 上设有动物入舱口 5。所述储冰室1的下面设有散热降温室11，其顶部设有导热层。
[0037] 将小鼠放入动物暴露室内，动物暴露室覆冰，厚度在20-25cm之间，温度始终保持 在0°C以下，相对湿度80-95%之间，关闭动物入舱口，侧面外接口连接U型压力计，连续暴 露3小时。每天1次，连续暴露7天。
[0038] 每天上午8点将正常对照组小鼠置于自制暴露箱中，动物暴露室中无冰，温度保 持在20-25°C之间，相对湿度40-45%之间，关闭动物入舱口，侧面外接口连接U型压力计， 连续暴露3小时。每天1次，连续暴露7天。
[0039] 凤眼莲低剂量组按0. 5g. kg 1灌胃，每天1次，连续灌胃7天，凤眼莲高剂量组按 1. 5g. kg 1灌胃，每天1次，连续灌胃7天，正常对照组和模型对照组灌胃等量纯净水。
[0040] 5、一般状态观察
[0041] 观察各组小鼠每天的一般情况，包括体重、饮食、饮水、毛色等，另观察各组小鼠在 密闭容器内的行为活动状况。
[0042] 6、检测指标
[0043] (1)耗氧量：暴露期间利用U型压力计测量记录各组小鼠3h累计耗氧量。
[0044] (2)静止张力：暴露结束后进行倾斜板试验，测定小鼠的静止张力。
[0045] (3)游泳速度：暴露结束后1小时游泳30min,测定小鼠的平均游泳速度。
[0046] (4)游泳时间：末次暴露后1小时进行无负重力竭游泳实验，记录每只小鼠的游泳 时间。