也可以采用文献报道的其他方法从天麻或者含有3,4_二羟基苯甲醛的植 物（如丹参）中提取3,4-二羟基苯甲醛；或者直接购买市售产品（CAS号：139-85-5)。
[0052] 动物处理：
[0053] 摘眼球处死小鼠同时收集血液，离心（4500rpm/min，5min)取血清，-80°C保存。取 小鼠胸主动脉。
[0054] 3, 4-二羟基苯甲醛对高脂饮食ApoE-/-小鼠血脂的影响：
[0055] 将血清解冻，使用甘油三脂、C反应蛋白、总胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白 检测试剂盒检测血清中以上各指标的含量，并做统计。
[0056] 3, 4-二羟基苯甲醛对高脂饮食ApoE-/-小鼠血管功能的影响：
[0057] 将实验所得胸主动脉完整放入事先配好的冰Krebs液里，于显微镜下小心剔除血 管周围脂肪。将剔好脂肪的血管剪成3-4mm长的小环，注意不要撕扯损坏血管内壁，随即 小心轻轻挂上血管环装置。将血管浸在37°C，充氧的krebs液中，开始平衡，平衡条件为张 力1.5g，时间间隔为lOmin。待到血管张力处于1.5g，加终浓度为10-6M的去氧肾上腺素 (PE)让血管开始预收缩。当张力曲线处于平台期时，洗去PE，并重新平衡血管。血管平衡 好后，加IOmLkrebs液，3min后加PE定终浓度为10-5,当张力曲线处于平台期时，开始加 Ach，浓度从10-9到10-3. 5开始递增。记录张力值，计算舒张率并作关系曲线，与对照组比 较。
[0058] 胸主动脉H&E染色：
[0059] 将实验所得胸主动脉用4%甲醛溶液固定（至少24h)。固定好后，取出组织，置于 包埋盒中，流水过夜洗涤，除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀。然后对组织进行脱水， 脱水使用梯度浓度的酒精，70 %、80 %、90 %、95 %、100 %共五缸，每缸1小时。脱完水后，将 组织连同包埋盒先后移入2个熔化的石蜡液（62°C)中，每缸浸渍2小时。浸蜡后的组织放 在装有蜡液的容器中（摆好在蜡中的位置一一竖放），待蜡液表层凝固即迅速放入冷水中 冷却，即做成含有组织块的蜡块。容器可用光亮且厚的纸折叠成纸盒或金属包埋框盒。并对 各个组织进行编号，以免差错。包埋好的蜡块用刀片修成规整的四棱台，夹在轮转式切片机 的蜡块钳内，使蜡块切面与切片刀刃平行，旋紧。切片厚度为6微米，切出一片接一片的蜡 带，用毛笔轻托轻放在水上（45°C)展开。捞至载玻片上铺正，将载玻片放在烤片机（45°C) 上干燥。干燥后的切片放入烘箱中进行脱蜡，2小时后，在二甲苯进行脱蜡，再逐级经纯酒精 及梯度酒精直至蒸馏水。将脱完蜡的载玻片按流程进行H&E染色。
[0060] 油红0染色：
[0061] 将完整胸主动脉小心纵向剖开，平整放在容器中。倒入油红0,浸没血管，静置30 分钟。时间到后，用75%乙醇洗2小时。最后拍照，统计。
[0062] 数据以均数土标准误（X土SEM)表示，两两比较采用t检验，组间比较采用单 因素方差分析进行数据统计。
[0063][实验结果]
[0064] 高剂量组、中剂量组、低剂量组分别与模型组比较，*P〈0. 05, **P〈0. 01， #*P〈0. 001。
[0065] 高脂饮食小鼠血清中甘油三酯的含量检测结果见图1。给予3, 4-二羟基苯甲醛的 小鼠血清中甘油三酯的含量低于仅高脂饮食未给予3, 4-二羟基苯甲醛小鼠血清中甘油三 酯的含量（差异有统计学意义）。
[0066] 高脂饮食小鼠血清中C反应蛋白的含量检测结果见图2。给予3, 4-二羟基苯甲 醛的小鼠血清中C反应蛋白的含量低于仅高脂饮食未给予3, 4-二羟基苯甲醛小鼠血清中C反应蛋白的含量（差异有统计学意义）。
[0067] 高脂饮食小鼠血清中总胆固醇的含量检测结果见图3。给予3, 4-二羟基苯甲醛的 小鼠血清中总胆固醇的含量低于仅高脂饮食未给予3, 4-二羟基苯甲醛小鼠血清中总胆固 醇的含量（差异有统计学意义）。
[0068] 高脂饮食小鼠血清中低密度脂蛋白的含量检测结果见图4。给予3, 4-二羟基苯甲 醛的小鼠血清中低密度脂蛋白的含量低于仅高脂饮食未给予3, 4-二羟基苯甲醛小鼠血清 中低密度脂蛋白的含量（差异有统计学意义）。
[0069] 3, 4-二羟基苯甲醛对高脂饮食小鼠内皮依赖性血管舒张功能的影响见图5。给予 3, 4-二羟基苯甲醛的小鼠血管较仅高脂饮食未给予3, 4-二羟基苯甲醛小鼠血管具有更强 的内皮依赖性舒张率。
[0070] 3, 4-二羟基苯甲醛对高脂饮食小鼠血管增生的影响见图6。可观察到给予3, 4-二 羟基苯甲醛的小鼠血管增生较仅高脂饮食未给予3, 4-二羟基苯甲醛小鼠明显减小。
[0071] 3, 4-二羟基苯甲醛对高脂饮食小鼠血管粥样硬化的影响见图7。可观察到给予3， 4-二羟基苯甲醛的小鼠血管较仅高脂饮食未给予3, 4-二羟基苯甲醛小鼠血管红色斑块明 显数量更少、颜色更淡。
[0072][结论]
[0073] 以上的实验证明3,4_二羟基苯甲醛可以降低高脂饮食小鼠血清中甘油三酯、C反 应蛋白、总胆固醇、低密度脂蛋白含量，提高内皮依赖性血管舒张率、抑制血管增生以及减 少动脉粥样斑块形成。
【主权项】
1. 3,4-二羟基苯甲醛作为制备降血脂药物的用途。 2. 3,4_二羟基苯甲醛作为制备治疗或/和预防高脂血症的药物中的用途。3. 根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述的药物是治疗或/和预防血管 内皮损伤的药物。4. 根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述的药物是治疗或/和预防血管 增生的药物。5. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的药物是治疗或/和预防动脉粥样 硬化的药物。6. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的药物是降低血清中甘油三酯、C反 应蛋白、总胆固醇、低密度脂蛋白中一种或几种含量的药物。7. 根据权利要求1-6任意一项所述的用途，其特征在于：所述的药物是由有效量的3， 4-二羟基苯甲醛为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。8. 根据权利要求7所述的用途，其特征在于：所述的制剂是口服制剂、注射制剂。9. 一种降血脂药物组合物，其特征在于：由有效量的3,4-二羟基苯甲醛为活性成分， 加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。10. 根据权利要求9所述的药物组合物，其特征在于：所述的制剂是口服制剂、注射制 剂。
【专利摘要】本发明公开了3，4-二羟基苯甲醛用于制备降血脂、治疗或/和预防与血脂偏高有关的血管内皮损伤、血管增生或动脉粥样硬化药物的用途。与目前临床上常用的同类药物相比，3，4-二羟基苯甲醛价格低廉、来源广泛，具有明显的优势。
【IPC分类】A61P3/06, A61K31/11, A61P9/00, A61P9/10
【公开号】CN105078939
【申请号】CN201510546751
【发明人】代蓉, 林青, 李秀芳, 周宁娜
【申请人】云南中医学院
【公开日】2015年11月25日
【申请日】2015年8月31日