质体的结果。图C显示了在5ml/min的流量下，脂质体具有约150nm的平均直径。 当流量增至lOml/min时该尺寸减小至约90nm。流量的进一步增加并没有导致纳米颗粒尺 寸的大幅变化。图D显示了在5至50ml/min范围内的流量下，PDI为约0.1至0.2。图E 显示了SiRNA脂质体的化yo-TEM图像。如图所示，颗粒尺寸是均匀的，而其形态并非单层 或多层。
[0044]图7A至7B显示了流量对脂质颗粒的形态的影响。图7A显示在40[004引ml/min的流量下产生的单层脂质体的化yo-TEM图像（孔径Imm;5 口多支管），其 中产生直径为81.Inm和PDI为0. 021的颗粒。脂质体内部的晶体为所负载的多柔比星。图 7B显示了在5ml/min的流量下产生的盘状脂质的化yo-TEM图像（孔径Imm;5 口多支管）， 其中主要产生直径为约60nm且脂质双分子层厚度为约6nm的盘状脂质。
[0046] 图8A至8D显示了就本发明的7 口多支管中进口和出口的数量和方向而言的替代 的示例性实施方式，将其用于实施例8中。箭头指示口中流动的方向，而纯化线指示在预制 多支管中密封的未使用的口。
[0047] 用于制备卦装活忡药物成分的胎质体的装晉
[0048] 本发明提供了用于进行本发明的方法的装置，如本文所述的多支管系统。
[0049] 在一些方面中，本技术提供了用于制备封装API的LNP的装置，所述装置包括多支 管，所述多支管可具有混合室、与混合室相连的至少一个脂质溶液进口；和与所述室相连的 多个水性溶液出口。
[0050] 在优选的实施方式中，该装置可包括与所述室相连的LNP溶液出口。
[0051] 优选地，该装置可包括通过脂质溶液导管与脂质溶液进口相连的脂质溶液胆液器 和通过水性溶液导管与水性溶液进口相连的水性溶液胆液器。
[0052] 脂质溶液与水性溶液的进口W及脂质体溶液的出口可具有相同或不同的内径。优 选地，进口和出口可具有约0.Imm至约IOmm的内径。更优选地，所述口具有约0. 15mm至约 5mm的内径。
[0053] 在一些实施方式中，混合室位于导管的转换点，并且其自身可由两条W上彼此穿 过或相交的导管形成，而并不对导管的形状做出任何改变。例如，可通过在固体材料中钻出 两条W上全部在转换点相交的贯通型导管。此外，可密封一条或多条导管，W使流体不能流 过导管。该密封可位于相交点之前不远处或远离相交点。例如，在图8A、8C和8D中说明了 密封的导管。
[0054] 在一些实施方式中，一个多支管可含有一个或更多的混合室。例如，一组进口在一 个室相交，另一组进口在另一室相交，且两室通过导管与第=混合室相连，所述第=混合室 连接至出口。
[0055] 优选地，使用累W向脂质溶液和水性溶液引入正流。所述累可为管道累或注射累。 [005引典型地，混合室可连接至2至约20个水性溶液进日。优选地，可存在3至约11个 该口、3至约12个该口。更优选地，存在3至约10个、或3至约7个水性溶液进入口。混合 室也可连接至1至约5个脂质溶液进口。优选地，存在1至约3个脂质溶液进口。最优选 地，存在I或2个脂质溶液进口。在优选的实施方式中，混合溶液连接至少I个（如I、2、3、 4或 5个）脂质溶液口和至少 2个（如 2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、 19或20个）水性溶液进口。
[0057] 混合室进一步连接至1至约3个用于控制颗粒尺寸的脂质体溶液出口，优选地，存 在1个（如1、2或3个）出口。
[0058] 在某些方面，脂质溶液进口和水性溶液的进口之间的角度为约18°至约180°。 优选地，所述角度为约24。至约180°，更优选约30。至约180°。在一些实施方式中，至少 一个脂质溶液进口与一个水性溶液进口之间的角度不是180°或基本相似的角度。例如，至 少一个脂质溶液进口与一个水性溶液进口之间的角度为约120°或更小、约90°或更小， 例如图8A至8D中所示。口之间的角度为将各溶液流引导到混合室中的角度。
[0059] 脂质溶液和水性溶液可具有相同的穿过多支管的流量。或者，所述溶液可具有不 同的流量。脂质溶液和水性溶液的流量可为Iml/min至约6,OOOml/min，如约Iml/min至约 1, 500ml/min。优选地，流量可为约 5ml/min至约 1,OOOml/min，如约 5ml/min至约 400ml/ min。更优选地，所述流量可为约20ml/min至约600ml/min的流量或约lOml/min至约 SOOml/min的流量。在一些实施方式中，根据进口的尺寸调节流量W获得所需的LNP尺寸、 形态、PDI和制造规模。
[0060] 制备LNP的方法
[0061] 本发明提供了一种用于制备脂质纳米颗粒（LNP)的方法，所述方法包含：
[0062] a)i)通过多支管的第一组一个或多个进口引入一股或多股脂质溶液流，和ii)通 过多支管的第二组一个或多个进口引入一股或多股水性溶液流，从而将所述脂质溶液与所 述水性溶液混合W产生LNP溶液；和
[0063] b)通过所述多支管的一个或多个出口回收LNP溶液；
[0064] 其中至少一个脂质溶液进口与至少一个水性溶液进口之间的角度不为180°或基 本相似的角度。在一些方面，至少一股脂质溶液流与至少一股水性溶液流W小于约180°的 角度相撞。因而，在一些方面，所述方法不包括T型连接器。
[0065] 在一些实施方式中，至少一个脂质溶液与一个水性溶液进口之间的角度为约 120°或更小，如115°或更小，100。或更小，90°或更小，80°或更小，72°或更小，60°或 更小，45°或更小，30°或更小，18°或更小。
[0066] 在一些实施方式中，通过至少两个进口引入步骤ii)中的水性溶液，如至少3个、4 个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19 个、20个或更多个进口。在一些实施方式中，通过至少3个但不多于11个进口引入步骤ii) 中的水性溶液，例如至少3个但不多于7个、至少3个但不多于5个、至少4个但不多于11 个、至少5个但不多于11个、至少6个但不多于11个进口。
[0067] 在一些实施方式中，至少两个（如3个、4个、5个、6个、7个等）水性溶液进口和 至少一个（如2个、3个、4个、5个等）脂质溶液进口在同一平面内。
[0068] 在一些实施方式中，至少一个（如2个）出口与进口的平面基本垂直。在其它实 施方式中，至少一个（如2个、3个、4个、5个等）出口与进口的平面基本不垂直。
[0069] 在一些实施方式中，至少两个（如3个、4个、5个、6个、7个等）水性溶液进口和 至少一个（如2个、3个、4个、5个等）脂质溶液进口不在同一平面内。
[0070] 在一些实施方式中，被引入至少一个进口的水性溶液与被引入另一进口的第二水 性溶液不同。
[0071] 在一些实施方式中，水性溶液和/或脂质溶液包含活性药物成分（API)。
[0072] 在一些实施方式中，步骤a)进一步包含通过多支管的一个或多个进口引入iii) 一股或多股非水性溶液流。
[0073] 本发明的另一个实施方式提供了用于制备封装活性药物成分（API)的LNP的方 法，所述方法可包括（i)在脂质溶液胆液器中提供可包括有机溶剂和脂质的脂质溶液、和 (ii)在水性溶液胆液器中提供包含水和缓冲剂的水性溶液的步骤；和提供可包括（i)混合 室；（ii)与所述室相连的至少一个脂质溶液进口；和（iii)与所述室相连的多个水性溶液 进口的多支管的步骤；随着每种溶液流都被引入混合室中，将脂质溶液与水性溶液混合W 产生LNP的步骤；和将活性药物成分封装进LNP中的步骤。
[0074] 在该方法的一个实施方式中，脂质溶液可包括待被封装的API。在另一个实施方式 中，水性溶液可包括API。
[0075] 将药物封装进脂质体中的步骤可与混合步骤同时发生，此时药物被溶解于脂质溶 液或水性溶液中。不受理论束缚，据信当水性溶液和脂质溶液接触时立即形成LNP。由脂质 溶液或水性溶液携带的API可通过API与脂质之间的亲脂性相互作用、或静电相互作用、或 两者皆有而被封装进LNP中。
[0076] 或者，可通过扩散或其它负载方法将API加入空LNP中，如图2所示。
[0077] W上描述了该方法的示例性多支管，并在图1中示出。
[0078] 胎质溶液巧水忡溶液
[0079] 本发明使用了脂质溶液和水性溶液。脂质溶液可包含有机溶剂。有机溶剂可为水 混溶性溶剂。优选地，水混溶性溶剂选自乙醇、甲醇、DMSO和异丙醇。最优选地，有机溶剂 为乙醇。
[0080] 脂质溶液可包括脂质混合物。脂质混合物优选包括胆固醇。
[0081] 脂质混合物可还包括阳离子脂质。阳离子脂质可为但不限于，N，N-二油 基-N，N-二甲基氯化锭（"D0DAC") ;N-化3-二油締氧基）丙基）-N，N，N-S甲基氯化 锭（"D0TMA") ;N-化3-二油締氧基）丙基）-N，N-二甲基氯化锭（"D0DMA") ;N，N-二 硬脂基-N，N-二甲基漠化锭（"孤AB") ;N-化3-二油酷氧基）丙基）-N，N，N-S甲基 氯化锭（"D0TAP") ;N-化3-二油酷氧基）丙基）-N，N-二甲基氯化锭（"D0DAP"); 3-(N-(N'，N' -二甲基氨基乙烧）氨甲酯基）胆固醇（"DC-Chol") ;N-(1，2-二肉豆違基 氧基丙-3-基）-N，N-二甲基-N-径乙基漠化锭（"DMRIE") ;1，2-二亚油氧基-N，N-二甲 基-3-氨基丙烷值LinDMA) ; 1,2-二硬脂氧基-N，N-二甲基-3-氨基丙烷值SDMA) ; 1,2-二 亚麻基氧基-N，N-二甲基-3-氨基丙烷值LenDMA) ;2-{4-[(3b)-胆酱-5-締-3-基氧基] 下氧基}-N，N-二甲基-3-[巧Z，12