l的注射器中，将硫酸锭 溶液（250mM，pH6. 5)载入五支5ml的注射器中，每支注射器1ml。通过导管将每支注射器 与7 口多支管（IDEXHealth&Sciences，part#P-150)的进口相连。通过注射器累，将注射 器中装载的脂质溶液和硫酸锭溶液累入多支管的混合室中。7 口多支管的孔径（直径）为 1. 0mm，且流量为20ml/min。脂质体溶液经由出口流出，并被收集到玻璃瓶中。
[015引 在肥阳S缓冲盐水（IOmM肥阳S，抑7.4,138mM化Cl)中通过MalvernZetasizer NanoZS确定Z-平均粒径和多分散性指数分别为60.Inm和0. 120。
[0156] 实施例4的脂质组成
[015引实施例5:用9口多支管制备脂质体
[0159] 将脂质溶于无水乙醇中。将一毫升的脂质溶液中载入5ml的注射器中，将硫酸锭 溶液（250mM，pH6. 5)载入屯支5ml的注射器中，每支注射器1ml。通过导管将每支注射器 与9 口多支管（IDEXHealth&Sciences，part#P-191)的进口相连。通过注射器累，将注射 器中装载的脂质溶液和硫酸锭溶液累入多支管的混合室中。9 口多支管的孔径为1.Ornm,且 流量为20ml/min。脂质体溶液经由出口流出，并被收集到玻璃瓶中。
[0160] 在肥阳S缓冲盐水（IOmM肥阳S，抑7.4,138mM化Cl)中通过Malvern Zetasizer Nano ZS确定Z-平均粒径和多分散性指数分别为63.Inm和0. 133。
[0161] 实施例5的脂质组成
[0163] 实施例6 :制备SiRNA脂质体
[0164] 脂质溶液：脂质溶液的组分如实施例6的表中所示。
[0165] RNA为61/791，054实施例6中所述的SiApoB-I序列。
[0166] 水性溶液1:siRNA:在巧樣酸盐缓冲液（20mM，pH5. 0)中0. 5mg/ml;水性溶液2 : 20mM巧樣酸盐，pH5. 0,IOOmM化Cl;水性溶液3 :与水性溶液2相同。
[0167] 将一毫升的上述四种溶液中的每种载入20ml注射器中；通过导管将每支注射器 与5 口多支管的进口相连。通过注射器累将载入注射器中的脂质溶液、SiRNA溶液和缓冲 水性溶液累入多支管的混合室中。脂质体溶液经由出口流出，并被收集到玻璃瓶中。5 口多 支管混合器的孔径为Imm或1. 6mm。流量为5ml/min、或lOml/min、或30ml/min、或40ml/ min、或 50ml/min。
[016引在肥阳S缓冲盐水（IOmM肥阳S，抑7.4,138mM化Cl)中通过Malvern Zetasizer Nano ZS确定siRNA脂质体的粒径和PDI。通过化yo-TEM使颗粒形态成像。结果示于图6 中。如图所示，脂质形成单层脂质体，其中多柔比星形成晶体。
[0169] 实施例6的于无水乙醇中的脂质溶液
[0171] 实施例7 :通过改变流量由相同制剂制备脂质体和盘状脂质
[0172] 将脂质溶于无水乙醇中。水性溶液1、2、3均为250mM的硫酸锭，P册.5。在实施 例7的表中说明了脂质溶液的组成。将一毫升的上述四种溶液中的每种都载入20ml的注 射器中；通过导管将每支注射器与5 口多支管的进口相连。通过注射器累，将注射器中的溶 液经由导管累入多支管的混合室中。多支管的孔径（直径）为1.Ornm,且流量为40ml/min 或5ml/min。脂质体溶液或盘状脂质溶液经由出口流出，并被收集到玻璃瓶中。通过透析将 缓冲液改变为肥阳S缓冲液（IOmM肥阳S，抑7.4,138mM化Cl)。使脂质体载入多柔比星。 化yo-TEM图像确认40ml/min的流量产生具有86.Inm的Z-平均粒径和0. 021的PDI的单 层脂质体（图7A)。5.OmVmin的流量主要产生直径为约60皿、脂质双层厚度为约6皿的盘 状脂质（图7B)。
[0173] 实施例7的脂质组成
[017引实施例8 :出口的数量和位置对脂质体粒径的影响
[0176] 将脂质溶于无水乙醇中。水性溶液1、2、3均为250mM的硫酸锭，P册.5。在实施例 7的表中说明了脂质溶液的组成。将一毫升的上述四种溶液中的每种都载入20ml的注射器 中；通过导管将每支注射器与7 口多支管的进口相连（分别如图8A至8D中所示）。通过 注射器累，将注射器中的溶液经由导管累入多支管的混合室中。多支管的孔径（直径）为 0. 5mm，且流量为35ml/min。剩余3个口（中间的一个与其他口和两个侧口垂直，参见图8) 中的一个（1)、或两个（2)或=个（3)被用作脂质体溶液的出口。脂质体溶液经由一个或多 个出口流出，并被收集到玻璃瓶中。出口的不同数量导致不同的脂质体粒径：3个出口时为 91nm(PDI0. 146)(图 8A)，2 个出 口时为 81nm(PDI0. 089)(图 8B);且 1 个出 口时为 74nm至 75nm(PDI0. 052至0. 088)(图8C和8D)。出口的位置对粒径无显著影响（图8C和8D)。 因此，可通过出口的数量控制脂质体粒径。 [0177] 实施例8的脂质组成
【主权项】
1. 一种用于制备脂质纳米颗粒（LNP)的方法，所述方法包含： a)i)通过多支管的第一组一个或多个进口引入一股或多股脂质溶液流，和ii)通过多 支管的第二组一个或多个进口引入一股或多股水性溶液流，从而将所述脂质溶液与所述水 性溶液混合以产生LNP溶液；和 b) 通过所述多支管的一个或多个出口回收LNP溶液； 其中至少一个脂质溶液进口与一个水性溶液进口之间的角度不为180°或基本相似的 角度。2. 根据权利要求1所述的方法，其中至少一个脂质溶液进口与一个水性溶液进口之间 的角度为约120°或更小。3. 根据权利要求1所述的方法，其中通过至少两个进口引入步骤ii)中的所述水性溶 液。4. 根据权利要求3所述的方法，其中通过至少3个但不多于11个进口引入步骤ii)中 的所述水性溶液。5. 根据权利要求3所述的方法，其中至少两个水性溶液进口和至少一个脂质溶液进口 在同一平面内。6. 根据权利要求5所述的方法，其中至少一个出口与进口的平面基本垂直。7. 根据权利要求5所述的方法，其中至少一个出口与进口的平面基本不垂直。8. 根据权利要求3所述的方法，其中至少两个水性溶液进口和至少一个脂质溶液进口 不在同一平面内。9. 根据权利要求1所述的方法，其中以约lml/min至6,OOOml/min的流量引入所述脂 质溶液和/或所述水性溶液。10. 根据权利要求9所述的方法，其中以约lml/min至约2, 500ml/min的流量通过 0.Imm至5mm的口径引入所述脂质溶液和/或所述水性溶液。11. 根据权利要求1所述的方法，其中所述脂质溶液和/或所述水性溶液的流速为约 0? 002m/s至约 10m/s。12. 根据权利要求1所述的方法，其中所述LNP溶液主要包含盘状脂质。13. 根据权利要求1所述的方法，其中所述LNP溶液主要包含脂质体。14. 根据权利要求1所述的方法，其中LNP的平均粒径为约IOnm至约2,OOOnm。15. 根据权利要求1所述的方法，其中所述LNP具有约0. 0005至约0. 5的多分散性指 数。16. 根据权利要求1所述的方法，其中所述脂质溶液包含溶于有机溶剂中的脂质体。17. 根据权利要求1所述的方法，其中所述有机溶剂为浓度为约70%或更大的乙醇。18. 根据权利要求16所述的方法，其中全部脂质在所述脂质溶液中的浓度在约lmg/ml 至约200mg/ml的范围内。19. 根据权利要求1所述的方法，其中所述脂质溶液中的一种脂质选自阴离子脂质、阳 离子脂质或中性脂质。20. 根据权利要求3所述的方法，其中被引入至少一个所述进口的所述水性溶液与被 引入另一个进口的第二水性溶液不同。21. 根据权利要求1所述的方法，其中所述水性溶液和/或所述脂质溶液包含活性药物 成分（API)。22. 根据权利要求1所述的方法，其中步骤a)进一步包含iii)通过所述多支管的一个 或多个进口引入一股或多股非水性溶液流。23. 根据权利要求1所述的方法，进一步包含步骤c)将API载入到从LNP溶液中回收 的LNP024. 根据权利要求21或23所述的方法，其中所述API为小分子、肽、蛋白质、RNA或DNA。25. 根据权利要求21或23所述的方法，其中所述API为抗癌药物、抗生素、抗病毒药 物、抗真菌剂或止痛剂。26. 根据权利要求25所述的方法，其中所述抗癌药物选自柔红霉素、多柔比星、紫杉 醇、多西紫杉醇、顺铂、卡铂、阿糖胞苷、氟脲嘧啶脱氧核苷、氟达拉滨、氟尿嘧啶、异丙铂、醋 酸亮丙瑞林和甲氨蝶呤。27. 由权利要求1所述的方法制备的LNP溶液。28. 使用权利要求26所述的LNP溶液制备的药物组合物。29. 用于进行权利要求1所述的方法的装置。
【专利摘要】本发明提供了使用多口多支管制备脂质体、盘状脂质和其它脂质纳米颗粒的方法，其中含有有机溶剂的脂质溶液流与两股或更多股水性溶液(如缓冲液)流混合。在一些方面，至少一些脂质溶液流和水性溶液流的方向不彼此直接相反。因而，所述方法不要求稀释有机溶剂作为额外步骤。在一些实施方式中，所述溶液中的一种还可含有活性药物成分(API)。本发明提供了具有不同脂质配方和不同有效载荷的稳健的脂质体加工方法。可通过改变多支管口的口径和数量并通过选择脂质溶液和水性溶液的流量或流速来控制粒径、形态和制造规模。
【IPC分类】A61K9/51
【公开号】CN105188685
【申请号】CN201480012955
【发明人】D-M.朱
【申请人】奎尔波特股份有限公司
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2014年3月14日
【公告号】CA2898047A1, EP2968193A1, EP2968193A4, US20140348900, WO2014152200A1, WO2014152200A4