方法包括：(a)测量在受试者变得体 力活动不足之前或当天取自受试者的生物样品中的选自IGFBP-2、瘦素和C-肤的一种或多 种生物标志物的水平；化）给所述受试者施用干预，其中在体力活动不足阶段开始之前或 当时第一次将所述干预施用给所述受试者；（C)在受试者变得体力活动不足W后3天或更 多天得自受试者的生物样品中，测量在步骤（a)中测量的一种或多种生物标志物的水平； (d)计算在（a)中测量的一种或多种生物标志物的水平和在（C)中测量的一种或多种生物 标志物的水平之间的差异；（e)将在（d)中计算的一种或多种差异与一种或多种对照值进 行对比，所述对照值基于在可比较时间点得自未治疗的对照受试者的可比较生物样品中的 一种或多种生物标志物的水平的差异；和（f)如果在（d)中计算的一种或多种差异小于一 种或多种对照值，则将所述干预表征为有效的。
[0046] 在某些实施方案中，所述方法采用C-肤作为一种或多种生物标志物之一。如在下 面表1中所示，在已经经历10天的邸床休息的未治疗的对照受试者中，C-肤的循环水平增 加。使该增加减轻统计上显著的量的干预被表征为有效的。
[0047] 在某些实施方案中，所述方法采用瘦素作为一种或多种生物标志物之一。如在下 面表1中所示，在已经经历10天的邸床休息的未治疗的对照受试者中，瘦素的循环水平增 加。使该增加减轻统计上显著的量的干预被表征为有效的。
[0048] 在某些实施方案中，所述方法采用IGFBP-2作为一种或多种生物标志物之一。如 在下面表1中所示，在已经经历10天的邸床休息的未治疗的对照受试者中，IGFBP-2的循 环水平下降。使该下降减弱统计上显著的量的干预被表征为有效的。
[0049] 在某些实施方案中，在体力活动不足阶段开始时，即，在体力活动不足阶段开始当 天，第一次将干预施用给受试者。在其它实施方案中，在体力活动不足阶段开始之前，例如， 在体力活动不足阶段开始之前1或2天或数周，第一次将干预施用给受试者。在某些实施 方案中，贯穿试验阶段连续施用干预。在某些实施方案中，贯穿整个体力活动不足阶段和在 体力活动不足阶段结束W后，将干预施用给受试者。因而，将干预施用给受试者的时间段可 W长于体力活动不足阶段。
[0050] 将第一种生物样品用于确定一种或多种生物标志物的基线值。因而，可W在体力 活动不足阶段开始之前或当时从所述受试者取所述第一种生物样品。在体力活动不足阶段 已经开始W后3天或更多天和在干预已经开始W后3天或更多天，从所述受试者取第一种 可比较的生物样品。在某些实施方案中，在活动不足阶段已经开始W后10天或更多天，从 所述受试者取可比较的生物样品。在某些实施方案中，在活动不足阶段已经开始W后3-7 天，从所述受试者得到可比较的生物样品。在某些实施方案中，在活动不足阶段已经开始W 后和/或干预开始W后1-4周，从所述受试者得到可比较的生物样品。在某些实施方案中， 在活动不足阶段已经开始W后1-3个月，从所述受试者得到可比较的生物样品。在某些实 施方案中，从所述受试者取超过一种比较样品。
[0051] 在另一个实施方案中，评价干预对与长期体力活动不足有关的膜岛素抗性的效力 的方法包括：(a)给所述受试者施用干预，其中在体力活动不足开始之前或当时第一次将 所述干预施用给所述受试者；化）测量在体力活动不足开始W后3天或更多天取自所述受 试者的生物样品的、选自C-肤和IGFBP-2的一种或多种生物标志物的水平；（C)将在化）中 测量的水平与在体力活动不足阶段开始之前或当时得自受试者的生物样品的一种或多种 生物标志物的一种或多种基线水平进行对比；和（d)如果在步骤化）中测量的一种或多种 生物标志物的水平与所述一种或多种生物标志物的一种或多种基线水平相当，则将所述干 预表征为有效的。如本文中所述，如果生物标志物的基线水平与在步骤化）中测量的水平 之间的差异是20%或更小，则所述水平是相当的。 阳0。]牛物样品 适合用在本发明的方法中的生物样品包括、但不限于全血样品、血液级分(包括、但不 限于血清和血浆）的样品。所述样品可W是新鲜血液或储存的血液（梦/妨在血库中）或血 液级分。所述样品可W是为了本发明的测定而特别得到的血液样品或为了另一种目的而得 到的血液样品，其可W为了本发明的测定而二次取样。
[0053] 在一个实施方案中，所述血液样品是全血。使用标准的临床操作，可W从受试者得 到全血。在另一个实施方案中，所述血液样品是血浆。通过抗凝血液的离屯、，可W从全血样 品得到血浆。运样的过程会提供白细胞组分的血沉栋黄层和血浆的上清液。在另一个实施 方案中，所述血液样品是血清。通过离屯、已经收集在试管中的不含抗凝剂的全血样品，可W 得到血清。在离屯、之前，允许血液凝结。通过离屯、得到的微黄色-淡红色流体是血清。
[0054] 可W将样品在必要时通过在适当缓冲溶液中稀释进行预处理，肝素化，如果需要 的话浓缩，或通过任意数目的方法分级分离，包括、但不限于超速离屯、，通过快速高效液相 色谱法（FHX)分级分离。可W使用许多标准水性缓冲溶液中的任一种，其采用生理抑的 多种缓冲剂(诸如憐酸盐、Tris等）之一。 阳化5] 可W用在本发明的方法中的其它生物样品包括、但不限于尿和唾液。
[0056] 测量牛物梳虎物的水平 通过多种方法，诸如通过使用可与各种生物标志物发生免疫反应的多克隆或单克隆抗 体，或通过使用适合于结合来自隧菌体展示文库的祀标的其它结合剂(诸如适体或蛋白结 构域)，可W确定受试者的血液样品中的每种生物标志物的水平。例如，使用标准操作，可W 制备和标记对IGFBP-2免疫特异性的抗体，然后用在免疫测定中W检测IGFBP-2在样品中 的存在。作为例子，合适的免疫测定包括、放射免疫测定（固体和液相)、巧光-连接的测定、 竞争性免疫测定或酶联免疫吸附测定。在某些实施方案中，所述免疫测定也用于定量存在 于样品中的生物标志物的量。
[0057] 每种生物标志物可W用作免疫原W产生对氧化的蛋白或肤片段免疫特异性的抗 体。术语"免疫特异性的"是指，所述抗体对该免疫原的亲和力实质上大于对其它蛋白的亲 和力。运样的抗体可W包括、但不限于多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体和Fab 片段。
[0058] 根据既定操作，生产针对选定的生物标志物物质的抗体。通常，使用生物标志物来 免疫宿主动物。合适的宿主动物包括、但不限于兔、小鼠、大鼠、山羊和豚鼠。可W使用多种 佐剂增加在宿主动物中的免疫学应答。使用的佐剂至少部分地依赖于宿主物种。运样的动 物产生非均一的抗体分子群体，其被称作多克隆抗体且其可W衍生自免疫的动物的血清。
[0059] 通过将生物标志物施用给宿主动物，使用常规技术制备多克隆抗体。取决于宿主 物种，可W使用多种佐剂来增加免疫学应答。在用于人类的佐剂中，卡介苗度CG)和小棒杆 菌（Corynebacteriumparvum)是特别优选的。还使用常规方案从免疫的动物收集血液和 从血液分离血清和/或IgG级分。
[0060] 为了制备单克隆抗体，使用常规杂交瘤技术。通过连续细胞系培养生产运样的抗 体。用于制备单克隆抗体的合适技术包括、但不限于杂交瘤技术、人B-细胞杂交瘤技术和 EBV杂交瘤技术。
[0061] 可W使用多种免疫测定进行筛选W鉴别具有期望的特异性的抗体。运些包括运样 的方案：其设及竞争性结合或免疫放射测定，且通常设及各种生物标志物和抗体之间的复 合物形成的测量。
[0062] 本发明的抗体可W用于检测生物标志物在得自受试者的生物样品中的存在或测 量其量。所述方法包括：使取自个体的样品与一种或多种本发明的抗体接触；和测定所述 抗体与样品中的生物标志物之间的复合物的形成。为了容易检测，可W将抗体连接至基底 诸如柱、塑料盘、基体或膜，优选硝酸纤维素。在某些实施方案中，所述方法采用酶联免疫吸 附测定巧LISA)或蛋白免疫印迹操作。
[0063] 使用特异性地结合每种标志物W及任何另外生物标志物巧日果使用运样的另外生 物标志物的话)的抗体，可W确定一种或多种生物标志物的存在或量。可W使用的抗体的例 子包括多克隆抗体、单克隆抗体、人抗体、免疫球蛋白分子、二硫键连接的Fv、单克隆抗体、 亲和力成熟的抗体、scFv、嵌合抗体、单结构域抗体、CDR-移植抗体、双体、人源化抗体、多 特异性抗体、F油、双重特异性抗体、DVD、F油'、双特异性抗体、F(油'）2、Fv和它们的组合。 例如，免疫学方法可W包括：(a)如下测量生物标志物的水平：（i)使试验样品与至少一种 捕获抗体接触，其中所述捕获抗体结合生物标志物或其片段上的表位W形成捕获抗体-抗 原复合物；（ii)使所述捕获抗体-抗原复合物与至少一种包含可检测标记物的检测抗体接 触，其中所述检测抗体结合至没有被捕获抗体结合的生物标志物（抗原）上的表位并形成 捕获抗体-抗原-检测抗体复合物；和（iii)基于在（a) (ii)中形成的捕获抗体-抗原-检 测抗体复合物的可检测标记物所产生的信号，确定试验样品中的生物标志物水平。可W利 用任何免疫测定。所述免疫测定可W是酶联免疫测定巧LISA)、放射免疫测定巧IA)、竞争 性抑制测定，诸如正向或反向竞争性抑制测定、巧光偏振测定或竞争性结合测定，例如。所 述化ISA可W是夹屯、化ISA。经由直接标记，诸如巧光或发光标签、金属和连接至抗体的放 射性核素，或经由间接标记，诸如碱性憐酸酶或辣根过氧化物酶，可W检测抗体与标志物的 特异性免疫结合。
[0064] 可W将固定化的抗体或其片段的应用渗入免疫测定中。所述抗体可W固定化在多 种支持物上，诸如磁性颗粒或色谱基体颗粒、测定板的表面（诸如微量滴定孔）、固体基底 材料块等。通过将抗体或阵列中的多个抗体包被在固体支持物上，可W制备测定条。然后 可W将该条浸入试验生物样品中，然后通过洗涂和检测步骤快速地加工W产生可测量的信 号，诸如有色的斑点。
[0065] 夹屯、化ISA测量两层抗体（歡捕获抗体和检测抗体（其可W用可检测标记物标 记））之间的抗原的量。要测量的标志物可W含有至少2个能够结合抗体的抗原位点。单 克隆或多克隆抗体可W用作夹屯、化ISA中的捕获和检测抗体。
[0066] 通常，采用至少两种抗体来分离和定量试验或生物样品中的目标标志物（W及任 何另外的生物标志物）。更具体地，所述至少两种抗体结合至标志物的某些表位，从而形成 被称作"夹屯、"的免疫复合物。可W使用一种或多种抗体来捕获试验样品中的标志物（运 些抗体经常被称作"捕获"抗体），并使用一种或多种抗体来使可检测的（即，可计量的）标 记结合至夹屯、（运些抗体经常被称作"检测"抗体）。在夹屯、测定中，测定中的任意其它抗 体与它的各自表位的结合不会减少两种抗体与它们的表位的结合。换而言之，可W选择抗 体，使得与疑似含有标志物的试验样品接触的一种或多种第一抗体不会结合被第二抗体或 后续抗体识别的表位的全部或部分，由此干扰一种或多种第二检测抗体的结合标志物的能 力。
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