0067] 在一个优选的实施方案中，可W使疑似含有标志物的试验或生物样品同时或依次 与至少一种第一捕获抗体（或抗体）和至少一种第二检测抗体接触。在夹屯、测定形式中， 首先在允许形成第一抗体-标志物复合物的条件下使疑似含有标志物的试验样品与至少 一种第一捕获抗体接触，所述第一捕获抗体特异性地结合特定表位。如果使用超过一种捕 获抗体，形成第一多个捕获抗体-标志物复合物。在夹屯、测定中，W超过在试验样品中预见 到的标志物的最大量的摩尔过量的量使用抗体，优选至少一种捕获抗体。
[0068] 任选地，在使试验样品与至少一种第一捕获抗体接触之前，可W使至少一种第一 捕获抗体结合至固体支持物，所述固体支持物促进第一抗体-标志物复合物从试验样品的 分离。可W使用本领域已知的任何固体支持物，包括、但不限于，由聚合材料制成的呈孔、管 或珠子形式的固体支持物。所述抗体可W通过吸附、通过共价键合(使用化学偶联剂）或通 过本领域已知的其它方式结合至固体支持物，前提条件是，运样的结合不会干扰抗体的结 合标志物的能力。此外，如果必要的话，可W将固体支持物衍生化W允许与抗体上的不同官 能团的反应性。运样的衍生化需要使用某些偶联剂，例如，但不限于，马来酸酢、N-径基班 巧酷亚胺和1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺。
[0069] 使疑似含有标志物的试验样品与至少一种第一捕获抗体接触W后，将试验样品溫 育W便允许第一捕获抗体（或多个抗体）-标志物复合物的形成。所述溫育可W在约4. 5至 约10. 0的抑、在约2°C至约45°C的溫度进行至少约一（1)分钟至约十八（18)小时、约2-6 分钟或约3-4分钟的时段。
[0070] 形成第一 /多个捕获抗体-标志物复合物W后，然后使所述复合物与至少一种第 二检测抗体接触（在允许形成第一/多个抗体-标志物第二抗体复合物的条件下）。如果 使第一抗体-标志物复合物与超过一种检测抗体接触，那么形成第一 /多个捕获抗体-标 志物-多个抗体检测复合物。与第一抗体一样，当使至少第二（和随后的）抗体与第一抗 体-标志物复合物接触时，第一 /多个抗体-标志物-第二/多个抗体复合物的形成需要在 与上述那些类似的条件下的溫育时段。优选地，至少一种第二抗体含有可检测标记物。可 W在第一 /多个抗体-标志物-第二/多个抗体复合物形成之前、同时或之后，使可检测标 记物结合至至少一种第二抗体。可W使用本领域已知的任何可检测标记物。
[0071] 用于执行所沐方法的试剂念 本文提供了试剂盒，其可W用于执行上述的方法。所述试剂盒可W提供：（1)试剂，其 能够特异性地结合分离自受试者的生物样品中的标志物W定量所述标志物的水平；(2)参 比标准，其指示所述标志物的参比水平，其中至少一种试剂包含至少一种能够特异性地结 合所述标志物的抗体；和（3)参比标准。所述试剂盒可W进一步包含：至少一种试剂，其能 够特异性地结合（钱7,抗体）至少一种另外的生物标志物；和参比标准，其指示正在评估的 病症的至少一种另外的生物标志物(如果存在的话）的参比水平。
[0072] 所述试剂盒可W包含抗体和用于施用所述抗体的装置。所述试剂盒可W进一步包 含关于使用所述试剂盒和进行分析、监测或治疗的说明书。
[0073] 所述试剂盒还可W包含一个或多个容器，诸如管形瓶或瓶子，其中每个容器含有 单独的试剂。所述试剂盒可W进一步包含书面说明，其可W描述如何执行或解释本文描述 的分析、监测、治疗或方法。
[0074] 例如，所述试剂盒可W包含关于通过免疫测定(例如，化学发光的微粒免疫测定） 来测定试验样品的一种或多种生物标志物的说明书。所述说明书可W呈纸形式或计算机可 读的形式，诸如磁盘、CD、DVD等。所述抗体可W是检测抗体（是指用可检测标记物标记的 抗体）。例如，所述试剂盒可W含有至少一种特异性地结合目标抗原或生物标志物的捕获 抗体。所述试剂盒还可W含有每种捕获抗体的缀合物抗体（诸如用可检测标记物标记的抗 体）。可替换地或额外地，所述试剂盒可W包含校准物或对照物(例如，纯化的和任选地低 压冻干的)和/或至少一个用于进行测定的容器（梦/^化试管、微孔滴定板或条带，其可W已 经用抗-生物标志物单克隆抗体包被）和/或缓冲液(诸如测定缓冲液或洗涂缓冲液，其中 任一种可W提供为浓缩的溶液)、可检测标记物（例如，酶标记物）的底物溶液或停止溶液。 优选地，所述试剂盒包含执行测定必需的所有组分，即试剂、标准物、缓冲液、稀释剂等。所 述说明书也可W包括关于制备用于定量目标生物标志物的目的的标准曲线或参比标准的 说明书。
[0075] 如上面所提及的，任何抗体(其提供在试剂盒中，诸如对生物标志物特异性的重组 抗体)可W包含可检测标记物，诸如巧光团、放射性部分、酶、生物素/抗生物素蛋白标记、生 色团、化学发光标记等，或所述试剂盒可W包括用于标记抗体的试剂、或用于检测抗体（例 如，检测抗体）和/或用于标记分析物的试剂、或用于检测分析物的试剂。抗体、校准物和 /或对照物可W提供在单独的容器中，或预分配进适当的测定形式(例如，微孔滴定板）中。
[0076] 任选地，所述试剂盒包括质量控制组分（例如，灵敏度实验对象组、校准物和阳性 对照）。质量控制试剂的制备是本领域众所周知的，且描述在多种免疫诊断产品的插页上。 灵敏度实验对象组成员任选地用于确立测定性能特征，且进一步任选地是免疫测定试剂盒 试剂的完整性和测定的标准化的有用指标。
[0077] 所述试剂盒还可W任选地包括进行诊断测定或便利质量控制评价所需的其它试 剂，诸如缓冲液、盐、酶、酶辅因子、底物、检测试剂等。用于分离和/或处理试验样品的其它 组分（诸如缓冲液和溶液）（例如，预处理试剂）也可W包括在试剂盒中。所述试剂盒可W 另外包括一种或多种其它对照物。试剂盒的一种或多种组分可W被低压冻干，在该情况下， 试剂盒可W进一步包含适合用于重构低压冻干的组分的试剂。
[0078] 试剂盒的各种组分任选地根据需要提供在合适的容器(例如微孔滴定板)中。试剂 盒可W进一步包括用于容纳或储存样品的容器（例如，用于血液样品的容器或筒）。在适当 的情况下，试剂盒任选地也可W含有反应容器、混合容器和促进试剂或试验样品的制备的 其它组分。试剂盒也可W包括一种或多种用于辅助获得试验样品的仪器，诸如注射器、移液 器、綴子、测量匙等。
[0079] 如果所述可检测标记物是至少一种叮晚鐵化合物，所述试剂盒可W包含至少一种 叮晚鐵-9-甲酯胺、至少一种叮晚鐵-9-甲酸芳基醋或它们的任意组合。如果可检测标记 物是至少一种叮晚鐵化合物，那么所述试剂盒也可W包含过氧化氨来源，诸如缓冲液、溶液 和/或至少一种碱性溶液。
[0080] 如果需要的话，所述试剂盒可W含有固相，诸如磁性颗粒、珠子、试管、微孔滴定 板、比色皿、膜、支架分子、薄膜、滤纸、石英晶体、圆盘或忍片。所述试剂盒还可W包括可检 测标记物，其可W是或缀合至抗体，诸如作为检测抗体起作用的抗体。所述可检测标记物可 W是例如直接标记物，其可W是酶、寡核巧酸、纳米颗粒、化学发光体、巧光团、巧光巧灭剂、 化学发光巧灭剂或生物素。试剂盒可W任选地包括检测所述标记物所需的任何另外的试 剂。
[0081] 如果需要的话，所述试剂盒可W进一步包含一种或多种组分，所述组分是单独的 或与说明书进一步组合，所述组分用于测定试验样品的另一种分析物，所述分析物可W是 生物标志物，诸如另一种目标病症的生物标志物。还可W使用TOF-MS和内部标准品测定样 品(诸如血清样品）的另外生物标志物。
[0082] 所述试剂盒（或其组分）、W及通过如本文中所述的免疫测定确定试验样品中的 生物标志物的浓度的方法可W改进W用于多种自动化的和半自动化的系统(包括其中固相 包含微粒的那些）中，如在例如美国专利号5, 089, 424和5, 006, 309中所述，和如例如作为 AROnTECT? 由AbbottL油oratories(AbbottPark,IL)商业销售的。
[0083]自动化的或半自动化的系统与非自动化的系统（例如，ELISA)相比的一些差异包 括第一特异性结合配偶体（例如，分析物抗体或捕获抗体）所附着的基质（其可影响夹屯、 形成和分析物反应性）、W及捕获、检测和/或任何任选的洗涂步骤的时长和时机。尽管非 自动化的形式(诸如化ISA)可能需要相对较长的与样品和捕获试剂一起的溫育时间（例 如，约2小时），自动化的或半自动化的形式（例如，AROnTECT?和任何后继平台，Abbott Uboratories)可能具有相对较短的溫育时间（例如，对于AROnTECT?，大约18分钟）。类 似地，尽管非自动化的形式(诸如化ISA)可能溫育检测抗体(诸如缀合物试剂）相对较长的 溫育时间（例如，约2小时），自动化的或半自动化的形式（例如，AROnTECT?和任何后继 平台）可能具有相对较短的溫育时间（例如，对于AROnTECT?和任何后继平台，大约4分 钟）。
[0084] 可W从AbbottL油oratories获得的其它平台包括、但不限于AxSYM?、IMx? (参 见，例如，美国专利号5, 294, 404,其特此通过引用整体并入）、PRISM?、EIA(珠子）和 如antum?II、W及其它平台。另外，可WW其它形式采用所述测定、试剂盒和试剂盒组分， 例如，在电化学或其它手提式或照护现场测定系统上。本公开内容例如适用于执行夹屯、 免疫测定的商业AbbottPointofCare(i-STAT?,AbbottL油oratories)电化学免疫 测定系统。在例如下述文献中描述了在一次性使用的试验装置中的免疫传感器及其制备 和操作方法：美国专利号5, 063, 081，美国专利申请公开号2003/0170881，美国专利申 请公开号2004/0018577，美国专利申请公开号2005/0054078,和美国专利申请公开号 2006/0160164,针对它们关于相同内容的教导，它们都通过引用整体并入。
[00化]具体地，关于测定对I-STAT?系统的适应，下述构型是优选的。用一对金电流计工 作电极和银-氯化银参比电极制造微制造的娃片。在工作电极之一上，将具有固定化的捕 获抗体的聚苯乙締珠子（0.2mm直径）附着于电极上的图案化聚乙締醇的聚合物涂层。将 该忍片装配成具有适合于免疫测定的流控技术形式的I-STAT?筒。在筒的样品保留腔室的 壁的一部分上，存在包含用碱性憐酸酶（或其它标记物）标记的检测抗体的层。在筒的流 体袋内是包括对氨基苯酪憐酸醋的水性试剂。
[0086] 在运行中，将疑似含有生物标志物的样品加入试验筒的保留腔室中，且将该筒插 入I-STAT?读数器中。在第二抗体（检测抗体）已经溶解在样品中W后，在该筒内的累元 件迫使样品进入含有忍片的导管中。在运里，它被振荡W促进第一捕获抗体、生物标志物和 标记的第二检测抗体之间的夹屯、的形成。在测定的倒数第二个步骤中，将流体驱出袋并进 入导管中W将样品洗出忍片和进入废物腔室