、碱性或半碱性蛋白酶、中性及催 化机理未知的肤酶。适用于本发明中的蛋白酶的非限制性实例包括丝氨酸蛋白酶、苏氨酸 蛋白酶、半脫氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶（如，plasmepsin)金属蛋白酶和谷氨酸蛋白酶。 此外，适用于本发明中的蛋白酶的非限制性实例包括，但不限于，动物蛋白酶、细菌蛋白酶、 真菌蛋白酶（例如，蜂蜜曲霉（Aspergillusmelleus)蛋白酶）、植物蛋白酶，重组蛋白酶 (如，通过重组DNA技术由适当的宿主细胞生产的，所述宿主细胞选自培养中的细菌、酵母、 真菌、植物、昆虫或哺乳动物宿主细胞的任一种、或包含与天然存在的序列同源或基本上相 同的氨基酸序列的重组蛋白酶、由与天然存在的蛋白酶编码核酸同源或基本上相同的核酸 编码的蛋白酶等等）、化学修饰的蛋白酶及其混合物。
[0027]本发明的组合物的膜脂肪酶酶可W包括一种或更多种脂肪酶（即，一种脂肪酶、 或两种或更多种脂肪酶）、一种或更多种淀粉酶（即，一种淀粉酶、或两种或更多种淀粉 酶）、一种或更多种蛋白酶（即，一种蛋白酶、或两种或更多种蛋白酶），和是运些酶W不同 组合和比例的混合物。
[0028] 可用在本发明的组合物中的脂肪酶活性能够从约650到约100, 000IU扣SP方法）。 其能够从约675到约825IU、从约2, 500到约28, 000IU、从约2, 700到约3, 300IU、从约 4, 500 到约 5, 500IU、从约 8, 000 到约 11，000IU、从约 13, 500 到约 16, 500IU、及从约 18, 000 到约22, 000IU、从约22, 500到约27, 500IU、从约36, 000到约44, 000IU，及在运些之间的所 有范围和子范围。
[0029]本发明的组合物优选地包含每剂量单位至少约650IU扣SP方法）、至少约9, 000， 甚至更优选地它们包含约20, 000、约40, 000、约60, 000、约80, 000或约100, 000USP单位脂 肪酶。
[0030]根据本发明的HA-膜酶组合物可W为粉末形式或可W为压制的形式，如，片剂，或 可W包括多个包衣和/或无包衣的颗粒。所述颗粒可包含W至少一种肠溶包衣包衣的核 屯、，其中所述包衣包含肠溶聚合物。上述组合物除包衣颗粒外还可包含膜脂肪酶的无包衣 颗粒。具体来说，颗粒是小片剂、微片剂、微粒、微球、微胶囊、微丸。所述颗粒可W具有达约5 毫米的直径。它们可W具有任何合适的粒径或形状。例如，颗粒能够具有从约25-5, 000μπι 范围的粒径，例如，它们能够为"小片剂"的形式，所述小片剂具有在约2-5mm范围的标称 颗粒直径，或者它们可W是"微片剂"，所述微片剂具有小于约2mm的标称颗粒直径，例如约 l-2mm。颗粒可W具有小于约800μm的平均粒径，优选小于500μm，更优选小于200μm。颗 粒可具有不小于400μπι的体积直径（d(v，0. 1))(定义为其中体积分布的10%低于此值且 90%高于此值的直径）和不超过800μm的体积直径d(v，0. 9)(定义为其中90%的体积分 布低于此值且10 %高于此值的直径）。
[0031]在其中膜脂肪酶核屯、被肠溶包衣包围的实施方案中，包衣作为屏障保护药物免受 胃的酸性环境和实质防止药物在到达小肠之前的释放。肠溶包衣组合物同其他包衣组合物 的合适的组合能够用于提供对药物释放或治疗效果的所需类型的控制。肠溶包衣包含至少 一种肠溶聚合物和另外的赋形剂。短语"肠溶聚合物"是指保护消化酶免受胃内容物的聚 合物，例如，在酸性抑稳定但在较高的抑下能迅速分解的聚合物，或当它在胃中时其水合 或侵蚀速率足够慢W确保胃内容物与消化酶的接触相对较小，而在胃肠道的其余部分时与 此相反的聚合物。
[0032] 肠溶聚合物的非限制性实例为纤维素乙酸邻苯二甲酸醋、径丙基甲基纤维素邻苯 二甲酸醋、径丙基甲基纤维素醋酸班巧酸醋、聚醋酸乙締邻苯二甲酸醋、甲基丙締酸共聚 物、甲基丙締酸甲醋的醋、甲基丙締酸甲醋共聚物、和甲基丙締酸/甲基丙締酸甲醋共聚 物、甲基丙締酸-丙締酸乙醋共聚物（1 :1)、虫胶和乙基纤维素。运些聚合物可不同商 标名称市售获得，诸如：Cellace化te(纤维素乙酸邻苯二甲酸醋）、Eudragit"L100、S100、 L30D、FS30D、L100-55、L30D55 (甲基丙締酸的共聚物）、Aqua化ric胃（纤维素乙酸邻苯二甲 酸醋）、Aqoat?(径丙基甲基纤维素醋酸班巧酸醋）及HP55"'(径丙基甲基纤维素邻苯二 甲酸醋）。肠溶包衣还可W包括其它赋形剂如滑石。优选地肠溶包衣包括：l〇-2〇wt.%的至 少一种肠溶聚合物，其中每个所述wt.%是基于包衣颗粒的总重量。包衣还可包括亲脂剂， 诸如C6-C30的亲脂性低分子量分子，选自脂肪族簇酸和醇，优选地C14-C18的簇酸和醇， 诸如硬脂酸、肉豆違酸、肉豆違醇、或硬脂醇。包衣的其它可选成分是增塑剂、抗结剂（诸如 滑石、硬脂酸儀、胶体二氧化娃及其组合；还任选地低粘度乙基纤维素）。适合的增塑剂的 非限制性实例包括Ξ醋精、巧樣酸Ξ下醋、巧樣酸Ξ乙醋、乙酷基巧樣酸Ξ正下醋（acetyl tri-n-bu切1citrate)、邻苯二甲酸二乙醋、癸二酸二下醋、聚乙二醇、聚丙二醇、藍麻油、 乙酷化的单和双甘油醋、嫁蜡醇，及其混合物。优选的增塑剂是非邻苯二甲酸醋增塑剂或其 混合物。
[003引包衣或无包衣的HA-膜酶颗粒可W根据已知的方法制备。例如，可W通过添加适 当的粘合剂到HA-膜酶，随后在合适的溶剂存在下挤压并随后滚圆W制备微丸核屯、。可W 施加控制的滚圆W生成小尺寸的HA-膜酶颗粒。可W将喷涂包衣、粉末分层和流化床技术 用于通过包衣惰性核屯、制备珠剂。凝聚方法也可用于包衣的脂肪酶颗粒的制备。
[0034]直接压片法可用于制备无赋形剂的压制片剂。在某些情况下，片剂可能显示胃耐 受性，运是由于在与胃液的接触原位形成疏水包衣层。
[0035]包括HA-膜酶的组合物可W为适合于含有消化酶的治疗剂的给药的任何形式，诸 如例如，它们可W为粉末、丸剂（pellet)、微球、胶囊、袋剂、片剂、液体悬浮剂和液体溶液的 形式。
[003引在本发明的一个实施方案中，可W制备包含HA-膜酶的剂型，尤其是包含HA-膜酶 的更小和/或单剂型。HA-膜酶的可利用性允许胶囊尺寸的减少和/或甚至相比于20, 000 单位强度ZenpepK规格0的胶囊的典型制剂组合物递送每餐减少数量的胶囊剂量，所述典 型制剂组合物填充有250-275mg的API。成年患者每餐可W摄取从4到10个运样的胶囊。 为了 200, 000USPU的脂肪酶的总体每日剂量，患者现在摄取10个胶囊且药物制品的摄入 量是2, 500-2, 750mg。至少2倍的纯化构成有意义的改善，且更高程度的纯化更加如此。事 实上，HA-膜酶药物剂型，其采用口服胶囊的形式，其可具有约lOO-llOmgAPI含量（对比 250-275mg)，因此为了 200, 000USPU的脂肪酶的总体每日剂量，患者的药物制品摄入量是 约1，000-1，100111邑（对比2,500-2,750111邑）。此外，使用齡-膜酶胶囊，可^使用规格2(对比 规格0)，从而也大大减少施用的胶囊的总数量，或替代地保持规格0的胶囊并适当地调整 其内容物，从而显著减少每日摄入。EPI的治疗是长期治疗，其往往始于婴儿期。配制膜脂 肪酶从而使其能够被包含在更小的剂量单位内和/或W减少量的每餐剂量单位摄入的能 力构成对患者的显著益处。
[0037] 本发明的新颖剂型还可W包括小颗粒剂型。具有每单位体积提高的效力的膜脂肪 酶产品将克服关于珠剂尺寸减少的重要问题。大部分商业膜脂肪酶剂型是胶囊，其被用膜 脂肪酶珠剂填充，所述珠剂W肠溶聚合物包衣。施加包衣是因为膜腺脂肪酶在酸性介质中 被不可逆地失活。可W将胶囊打开，并将珠剂撒在某些食物上，运对于年幼患者或那些吞咽 困难的人或应对高药物负担是重要的选择。然而由于珠剂具有可感知的直径，可达2mm，此 选择不解决所有患者的需要。运意味着，对于婴儿或需要管喂的患者，珠剂不能容易地悬浮 在液体中。减少珠剂尺寸的尝试导致总表面积大大增加并因此需要多得多的肠溶聚合物W 有效地包衣颗粒的增加的表面积。运大大增加了剂型的体积和摄入的聚合物的量到临界 点，在该临界点剂型的体积进一步增加了药物负担，且包衣赋形剂的水平可能超过为其每 天摄入设立的限量。
[0038] 具有大大减少的体积的HA-膜酶的可利用性不仅允许将全部剂量包含在单个剂 量单位或减少数量的剂量单位中，而且还使得膜脂肪酶与其它化合物的组合成为可能。例 如，抗酸缓冲剂，诸如碳酸氨钢和HA-膜酶可W在单个剂量单位中组合，而使用现有的膜脂 肪酶不可能考虑膜腺酶和增加胃抑的剂的运样的组合，因为运会大大增加已经非常高的 药物负担，因为将需要另外的胶囊/片剂和/或胶囊/片剂的尺寸将会过大。
[0039]HA-膜酶还提供了无需肠溶包衣提供可分散的剂型的选择，因为缓冲剂将防止膜 酶的脂肪酶成分的酸失活。此外，补充的碳酸氨盐还可W提供治疗益处，因为在患有EPI的 患者中碳酸氨盐分泌通常降低。可将运种新颖的剂型配制用于立即或延后释放并在液体介 质中分散。运后一性质为需要液体喂食的患者提供了显著的优势，因为可W方便地将成分 分散在食物或另一便利的介质中。运些组合可多种便利的形式递送，如胶囊、片剂、袋 剂、珠剂和液体。如上所述，需要使用肠溶聚合物包衣膜脂肪酶剂型是由于脂肪酶在酸性介 质中不稳定；但是，如果通过使用质子累抑制剂使胃的抑升高，那么已经证明脂肪酶保持 活性，运大概是因为其不暴露于足够低W灭活酶的抑水平。运种方法不方便，也不一定是 医学上可取的，因为它增加了药物负担，并使用额外的慢性药物来克服另一个的缺点。使用 简单的抗酸剂诸如碳酸氨钢，可暂时中和胃pH，运已被证明可有效保护酸不稳定的药物，诸 如PPI奥美拉挫，其是药物Zegerid?的成分。运种药物中的碳酸氨钢水平是1.Ig及奥美 拉挫的水平是20mg或40mg，且运些成分都被包含在硬壳胶囊内。
[0040] 含有HA-膜酶和至少一种其它活性化合物，诸如电括抗剂、质子累抑制剂或胆盐 的组合的单个剂型，也在本发明中公开。
[0041] 本发明获得了产品改进。事实上，制备HA-膜酶使得生物负担减少，仅仅是由于携 带运一生物负担的材料的量的减少。然而，此外，用于制备过程的方法也能够减少生物负 担，并将因此生产出显著较少拖累的产品。进一步讲，从产品中去除大量的非活性材料使无 菌技术的使用成为可能，所述无菌技术用于将施用的可注射的生物制品，如，过滤、紫外线 0JV)照射。再次，运代表产品特性中显著且未预料到的改进。
[0042] 存在于本发明的组合物或口服剂型中的HA-膜酶根据W下方法制备。
[0043] 起始材料是膜酶。在本发明中我们还可W用术语"API"、或"起始膜酶"、或"起始 膜腺酶"、或"天然膜酶"、"起始膜脂肪酶"、或"天然膜脂肪酶"指代膜酶。
[0044] -种方便的起始材料是猪源性膜脂肪酶，如从NordmarkArzneimittelGmbH、或 ScientificProteinL油oratoriesLLC市售的。也可W使用来自牛或其他哺乳动物来源 的类似提取物。优选的起始材料是猪源性膜脂肪酶。用于生产粗提取物的提取程序可W概 括为包括W下步骤：猪腺体湿润研磨；添加膜脂肪酶1 敦活剂'；用冷和热的异丙醇处理"粗 酶浆液"W沉淀蛋白质并去除脂质；离屯、和过滤步骤W去除纤维并压缩和浓缩；真空干燥 "湿饼"；为体积密度和粒径破坏结块并粉碎"湿饼"。运种干燥的产品是在现有产品中使用 的膜酶。
[0045] 本发明的HA-膜酶通过进一步处理起始膜酶制备；它保留对于基于膜腺酶的产品 的功效关键的那些要素，并去除不必要的那些要素。
[0046] 由本发明的方法所得到的材料是HA-膜酶。
[0047] 具有至少约120USPlU/mg的脂肪酶比活性的HA-膜酶，使用包括用溶剂处理膜 酶的方法制备，其中所述溶剂