具有包含在28和45 (MPa)°'5之间的Hildebrand溶解度参数 (SP)，且所述溶剂是一种有机溶剂或有机溶剂的混合物，或至少一种有机溶剂和水性溶剂 的混合物，且在低溫，优选在低于室溫的溫度下进行该方法。
[0048] 在一个实施方案中，具有至少约120USPlU/mg的脂肪酶比活性的HA-膜酶使 用包括用溶剂处理膜酶的方法制备，其中所述溶剂具有包含在28和38 (ΜΡ3)°·5之间的 Hildebrand溶解度参数（S巧，且所述溶剂是一种有机溶剂或有机溶剂的混合物，或至少一 种有机溶剂和水性溶剂的混合物，且在低溫，优选在低于室溫的溫度下进行该方法。
[0049] 在一个具体实施方案中，具有至少约120USPlU/mg的脂肪酶比活性的HA-膜酶 使用包括用溶剂处理膜酶的方法制备，其中所述溶剂具有包含在28和34(MPa)之间的 Hildebrand溶解度参数（S巧，且所述溶剂是一种有机溶剂或有机溶剂的混合物，或至少一 种有机溶剂和水性溶剂的混合物，且在低溫，优选在低于室溫的溫度下进行该方法。
[0050] 在另一个具体实施方案中，具有至少约120USPlU/mg的脂肪酶比活性的HA-膜 酶使用包括用溶剂处理膜酶的方法制备，其中所述溶剂具有包含在34和38 (MPa)之间的 Hildebrand溶解度参数（S巧，且所述溶剂是一种有机溶剂或有机溶剂的混合物，或至少一 种有机溶剂和水性溶剂的混合物，且在低溫，优选在低于室溫的溫度下进行该方法。
[0051] 在另一个实施方案中，具有至少约120USPlU/mg的脂肪酶比活性的HA-膜酶 使用包括用溶剂处理膜酶的方法制备，其中所述溶剂具有包含在34和45 (MPa)°·5之间的Hildebrand溶解度参数（S巧，且所述溶剂是一种有机溶剂或有机溶剂的混合物，或至少一 种有机溶剂和水性溶剂的混合物，且在低溫，优选在低于室溫的溫度下进行该方法。
[0052] 在一个具体实施方案中，具有至少约120USPlU/mg的脂肪酶比活性的HA-膜酶 使用包括用溶剂处理膜酶的方法制备，其中所述溶剂具有包含在38和45 (MPa)之间的 Hildebrand溶解度参数（S巧，且所述溶剂是一种有机溶剂或有机溶剂的混合物，或至少一 种有机溶剂和水性溶剂的混合物，且在低溫，优选在低于室溫的溫度下进行该方法。
[0053]HA-膜酶可具有至少约120、或至少约150、或至少约200、或至少约400、或至少约 500USPlU/mg的脂肪酶比活性。
[0054]Hildebrand溶解度参数是指示特定溶剂的相对溶解性能的数值。它来自于溶剂 的内聚能密度，而内聚能密度又是来自于汽化热。Hildebrand值可从文献来源获得，如从 BartonHanclbookofSolubilityParameters,CRCPress, 1983。方法溶剂是一种有机溶 剂或多种有机溶剂的混合物或至少一种有机溶剂和水性溶剂的混合物；有机溶剂和水性溶 剂的混合物可W包括一种或更多种有机溶剂和一种或更多种水性溶剂。溶剂可具有W下溶 解度值：45、42、40、38、36、35、34 和 28。
[00巧]有机溶剂可选自包括正戊烧、正己烧、正庚烧、乙酸、环己烧、四氯化碳、乙酸乙醋、 四氨巧喃、氯仿、Ξ氯乙締、丙酬、二甲基甲酯胺、正丙醇、异丙醇、乙醇、dimethylsul化xide but^alcohol、甲醇、乙腊、二嗯烧和meth^enchloride的溶剂的组。优选的有机溶剂是丙 酬、异丙醇和乙醇。
[0056] 水性溶剂可选自由W下组成的组：水或缓冲溶液。优选的缓冲剂具有抑=7或pH =4,它们可W分别为抑=7 :10mM憐酸盐缓冲剂和抑=4 :10mM乙酸盐缓冲剂。
[0057] 在本发明的一个实施方案中，溶剂是包括一种或更多种有机溶剂和一种水性溶剂 的混合物，所述混合物具有范围从28至45 (MPa) °·5的化Idebrand溶解度参数。在本发明的 实施方案中，溶剂是包括一种或更多种有机溶剂和一种水性溶剂的混合物，所述混合物具 有范围从28至38 (MPa) °·5的化Idebrand溶解度参数。在一个具体实施方案中，溶剂是包括 一种或更多种有机溶剂和一种水性溶剂的混合物，所述混合物具有范围从28至34 (MPa)°'5 的化Idebrand溶解度参数。在一个具体实施方案中，溶剂是包括一种或更多种有机溶剂和 一种水性溶剂的混合物，所述混合物具有范围从34至38 (MPa) 的Hildebrand溶解度参 数。在另一个实施方案中，溶剂是包括一种或更多种有机溶剂和一种水性溶剂的混合物， 所述混合物具有范围从34至45 (MPa) °·5的Hildebrand溶解度参数。在一个具体实施方案 中，溶剂是包括一种或更多种有机溶剂和一种水性溶剂的混合物，所述混合物具有范围从 38至45 (MPa) °·5的Hildebrand溶解度参数。溶剂混合物的SP使用Hildebrand溶解度参 数计算。
[0058] 在一个实施方案中，溶剂具有38 (MPa) 0'5的SP并且是有机溶剂与水性溶剂的混合 物。运样的具有SP= 38的二元溶剂的几个实例是：
[005引丙酬-缓冲剂巧酬与抑=7的缓冲剂的体积比为35:65巧酬与抑=4. 0的缓 冲剂的体积比为35:65 ;其中：SP(丙酬）=20. 2,SP(缓冲剂）=47. 9 ;
[0060] 乙醇-缓冲剂：乙醇与抑=7的缓冲剂的体积比为45:55;乙醇与抑=4.0的缓 冲剂的体积比为45:55 ;其中SP(乙醇）=26. 0,SP(缓冲剂）=47. 9 ;
[0061] 在另一个实施方案中，SP= 34(MPa)°'5的二元溶剂是：丙酬-缓冲剂：丙酬与抑 =7的缓冲剂的体积比为50:50 ;其中SP(丙酬）=20. 2,SP(缓冲剂）=47. 9。
[0062] 在还另一个实施方案中，SP= 35 (MPa) 5的二元溶剂是丙酬-缓冲剂：丙酬与抑 =7的缓冲剂的体积比为45 :55 ;其中SP(丙酬）=20. 2,SP(缓冲剂）=47. 9。
[006引在本发明的一个实施方案（单步法）中，用具有28-45 (MPa)n'5的SP的溶剂处理 膜酶包括W下步骤：曰1)在溶剂中在揽拌下悬浮膜酶；曰2)从步骤曰2的混合物的可溶部分 (上清液）分离不可溶部分（小团（pellet));曰3)干燥在步骤曰1中得到的不可溶部分；且 其中步骤al-a3在低于室溫的溫度下进行。适于执行方法的溫度为4°C。
[0064] 在本发明的一个实施方案（单步法）中，用具有34-38(MPa)°·5的SP的溶剂处理 膜酶包括W下步骤：曰1)在溶剂中在揽拌下悬浮膜酶；曰2)从步骤曰2的混合物的可溶部分 (上清液）分离不可溶部分（小团）；曰3)干燥在步骤曰1中得到的不可溶部分；且其中步骤 al-a3在低于室溫的溫度下进行。适于执行方法的溫度为4°C。
[0065] 优选执行步骤la约60分钟；优选溫度是4°C。可W通过不同方法执行分离步骤 (步骤a2)，诸如离屯、、沉降或过滤。干燥步骤（a3)可W在W下机器中执行，例如高效烘干 机、真空累、或冷冻干燥机；也可W使用其它方法。在步骤al中溶剂中的膜酶浓度优选W包 含在0. 050和0. 3mg/mL之间的量，优选在0. 065和0.Img/mL之间，优选为0. 065或0.Img/ mLo
[0066] 在单步法的一个具体实施方案中，溶剂具有38 (MPa) 5的SP且是丙酬和抑7的 缓冲剂（如lOmM憐酸盐）的混合物，且在步骤al中的膜酶的浓度为lOg/mL。
[0067] 在本发明的另一个实施方案中（两步法），其中溶剂是有机溶剂和水性溶剂的混 合物，首先将膜酶分散在水性溶剂中并随后向其加入有机溶剂。在运个实施方案中，步骤al 包括W下步骤：al. 1 (悬浮）在揽拌下在水性溶剂中悬浮膜酶；al. 2 (沉淀）对步骤la的悬 浮液添加有机溶剂或其混合物。将步骤al.l的混合物保持在静止条件下。取决于规模和 设备，步骤al. 1的持续时间是从约10到约30分钟；步骤al. 2的持续时间是约30分钟。 [006引在水性溶剂中的膜酶优选地W包含在0. 050和0. 3mg/mL之间的量，优选在0. 1和 0. 3mg/血之间，优选为0. 1或0. 3mg/mL，有机溶剂优选为乙醇或丙酬，且水性溶剂优选抑 =4. 0的缓冲剂（诸如lOmM乙酸盐缓冲剂）或抑7缓冲剂（诸如lOmM憐酸盐）。
[0069] 在单步法的一个具体实施方案中，溶剂具有38 (MPa) 的SP，且是丙酬和抑7的 缓冲剂（诸如lOmM憐酸盐）的混合物，且步骤al中的膜酶浓度为0.Img/mL。
[0070] 在单步法的另一个具体实施方案中，溶剂具有38 (MPa) 的SP，且是丙酬和抑4 的缓冲剂（诸如lOmM乙酸盐缓冲剂）的混合物，且步骤al中的膜酶浓度为0.Img/mL。
[0071] 在本发明的还另一实施方案中（多步法），当溶剂是有机溶剂和水性溶剂的混合 物时，膜脂肪酶首先分散在水性溶剂中，并随后将有机溶剂添加到运个水性分散液的可溶 部分。在运个实施方案中，该方法步骤al包括W下步骤：al. 1)(悬浮）在揽拌下在水性溶 剂中悬浮膜酶；al. 2)(分离）将步骤al. 1的可溶部分（上清液）从不可溶部分（小团）分 离；al. 3)(沉淀）对步骤al. 2的可溶部分添加有机溶剂或其混合物。
[0072] 优选执行步骤al. 1约30分钟。将步骤al. 3的混合物在静止条件下保持约15分 钟；对运些步骤的优选溫度为4°C。
[0073] 在水性溶剂中的膜酶优选地W包含在0. 05和0. 3mg/mL之间的量，优选在0. 1和 0. 3mg/mL之间，优选为0. 1或0. 3mg/mL。使用的溶剂的SP优选为38。有机溶剂优选为乙 醇或丙酬，且水性溶剂优选抑=4. 0的缓冲剂（诸如lOmM乙酸盐缓冲剂）或抑7缓冲剂 (诸如lOmM憐酸盐）。
[0074] 在多步法的一个具体实施方案中，溶剂具有38 (MPa) 的SP，且其是丙酬和抑 4. 0的缓冲剂（诸如lOmM乙酸盐缓冲剂）的混合物，且步骤曰1中的膜酶浓度为0. 3mg/mL。 [00巧]在多步法的还另一个实施方案中，溶剂具有38 (MPa) °·5的SP，且其是乙醇和抑 4. 0的缓冲剂（诸如lOmM乙酸盐缓冲剂）的混合物，且步骤曰1中的膜酶浓度为0. 3mg/mL。
[0076] 在多步法的还另一个实施方案中，溶剂具有38 (MPa) °·5的SP，且其是乙醇和抑 4. 0的缓冲剂（诸如lOmM乙酸盐缓冲剂）的混合物，且步骤曰1中的膜酶浓度为0.Img/mL。
[0077] 在多步法的还另一个实施方案中，溶剂具有38(MPa)°·5的SP，且其是丙酬和抑7 的缓冲剂（诸如lOmM憐酸盐）的混合物，且步骤曰1中的膜酶浓度为0. 3mg/mL。
[0078] 分离步骤（步骤a2和al. 2)可W通过不同的方法执行，诸如离屯、或过滤。HA-膜 酶制备方法的所有方法步骤在溫度控制下执行，其总是低于室溫，优选约4°C;也可控制湿 度。
[0079] 本发明的方法还可W包括HA-膜酶的灭菌和病毒灭活或减少病毒负载，其可W通 过W下被执行：例如，过滤、加热、福射（紫外线、X射线、β射线和丫射线），高压处理和/ 或核酸的烷基化，诸如使用β-propriolactone度PL)。在诸如85°CW上的溫度加热，优选 在85°C和100°C之间持续适当的时间段，诸如18小时W上，及优选在18和48小时之间，甚 至更优选在18和30小时之间也有效地减少病毒污染物。在较低的溫度下加热（84°C，优选 80°C)可在具有0. 5重量％或更少的剩余水分的固体HA-膜酶上进行。
[0080]从W上清楚的是，本发明中公开的方法具有很多优势。它保留了消化液中存在的 消化酶的天然谱和天然来源，并保持起始材料的消化