la=脂肪酶活性（IUUS巧；A=丙酬；E=乙醇；S=悬浮液；SN=上清液；P=小 团；Theor.=理论。
[0234]表 20
[0235]
[023引 LSA=脂肪酶比活性师USP/mg);A=丙酬。E=乙醇；SN=上清液；邸=富集 系数=在步骤曰2的小团中的LSA(IUUSP/mg)/在步骤al中的理论脂肪酶活性（IUUSP/mg)。
[0237] 运种现有技术方法提供低的产量，酶失活显著且因而没有获得脂肪酶的富集。
[02測连施例9纯化的HA-膜酶的表征（样品20)
[0239] 测试HA材料的消化能力并将其同起始膜脂肪酶比较。将20mgHA-膜酶和50mg 起始膜脂肪酶（对应2300IUUSP脂肪酶）分别悬浮于ImL去离子水中并在37°C将其加入 到50血肠内制剂Peptamen?化ηior1. 0中，并在100巧m揽拌60、120和240分钟。在1、 2和4小时后进行消化测试。对每个膜脂肪酶样品重复测试6次。
[0240] 通过测量Ξ油精的消化（Ξ油精峰的降低）监测脂类营养物。通过化a壯ord方 法监测总蛋白质的消化。通过测量短链糖的形成监测淀粉水解过程。通过在4小时的消化 后比较天然和HA材料的消化表现获得消化程度的差异。
[0241]表 21
[0242]
[024引Η=HA-膜酶；N=天然膜酶；W=重量（mg)
[0244] 使用W下公式计算活性差异：
[0245](天然膜酶活性-HA-膜酶活性）/天然膜脂肪酶活性
[0246] 使用W下公式计算消化差异：
[0247](天然膜酶消化的％ -HA-膜酶消化的％ )
[024引运一体外测试允许对HA-膜酶的脂肪酶、蛋白质和碳水化合物消化的分析。脂肪 酶消化对反应容器中存在的酶活性的差异极其敏感，因此活性中达10%的差异对应于消化 量中10%的差异。消化动力学显示相似的趋势。运些结果显示，天然和HA-膜酶具有相似 的脂类消化模式。
[0249]蛋白质消化曲线也几乎重叠，显示HA-膜酶的蛋白酶活性支持同天然膜脂肪酶水 平相同的消化。蛋白酶活性上约60%的差异没有对蛋白质的消化程度产生任何影响。
[0巧0] 因麦芽糖产生在HA-膜酶中较低，碳水化合物的消化曲线是有差异的。在淀粉酶 活性的差异和消化产物的量上的比较显示，在HA-膜酶中也发生淀粉水解。
【主权项】
1. 一种高活性胰酶（HA-胰酶），其中所述胰脂肪酶具有至少约120USPIU/mg的脂肪 酶比活性。2. 根据权利要求1所述的胰酶，其中所述胰酶具有至少约150USPIU/mg的脂肪酶比活 性。3. 根据权利要求1所述的胰酶，其中所述胰酶具有至少约200USPIU/mg的脂肪酶比活 性。4. 根据权利要求1所述的胰酶，其中所述胰酶具有至少约500USPIU/mg的脂肪酶比活 性。5. -种高效的药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1、2、3或4所述的 HA-胰酶。6. 根据权利要求1、2、3、4或5所述的组合物，其中所述胰酶是源自猪的。7. 根据权利要求5或6所述的组合物，所述组合物包含每剂量单位至少约9, 000、约 20, 000、约 40, 000、约 60, 000、约 80, 000 或约 100, 000USPIU脂肪酶。8. 根据权利要求7所述的组合物，所述组合物包含多个HA胰酶的包衣的颗粒，所述颗 粒包含用至少一种肠溶聚合物包衣的核心。9. 根据权利要求5、6、7或8所述的组合物，所述组合物为粉末、丸剂、微球、胶囊、袋剂、 片剂、液体悬浮剂或液体溶液的形式。10. -种用于制备HA-胰酶的方法，所述HA-胰酶具有至少约120USPIU/mg的脂肪酶 比活性，所述方法包括用具有包含在28和45 (MPa) °·5之间的Hildebrand溶解度参数的溶 剂处理胰酶，其中所述溶剂是一种有机溶剂或有机溶剂的混合物或至少一种有机溶剂和水 性溶剂的混合物，且所述方法的温度低于室温。11. 根据权利要求10所述的方法，其中所述溶剂具有包含在28和38 (MPa) °·5之间的 Hildebrand溶解度参数。12. 根据权利要求10所述的方法，其中所述溶剂具有包含在28和34(MPa) α5之间的 Hildebrand溶解度参数。13. 根据权利要求10所述的方法，其中所述溶剂具有包含在34和38 (MPa) α5之间的 Hildebrand溶解度参数。14. 根据权利要求10所述的方法，其中所述溶剂具有包含在34和45 (MPa) °·5之间的 Hildebrand溶解度参数。15. 根据权利要求10所述的方法，其中所述溶剂具有包含在38和45 (MPa) α5之间的 Hildebrand溶解度参数。16. 根据权利要求10、11、12、13、14或15所述的方法，所述方法用于制备具有至少约 150USPIU/mg的脂肪酶比活性的胰酶。17. 根据权利要求10、11、12、13、14或15所述的方法，所述方法用于制备具有至少约 200USPIU/mg的脂肪酶比活性的胰酶。18. 根据权利要求10、11、12、13、14或15所述的方法，所述方法用于制备具有至少约 250USPIU/mg的脂肪酶比活性的胰酶。19. 根据权利要求10所述的方法，所述方法包括以下步骤： al)在溶剂中悬浮胰酶，所述溶剂具有包含在34和45 (MPa)α5之间的Hildebrand溶解 度参数，其中所述溶剂是一种有机溶剂或多种有机溶剂的混合物、或至少一种有机溶剂和 水性溶剂的混合物； a2)从步骤al的混合物的可溶部分分离不可溶部分；a3)干燥步骤a2中获得的所述不可溶部分；且 其中所述方法的温度低于室温。20. 权利要求19所述的方法，其中步骤la)进行约30分钟，且方法温度为4°C。21. 根据权利要求10、19或20所述的方法，其中所述溶剂是至少一种有机溶剂和水性 溶剂的混合物且其中步骤al包括以下步骤： al. 1)在搅拌下在水性溶剂中悬浮胰酶； al. 2)向步骤la的悬浮液添加一种有机溶剂或其混合物；且 其中所述方法的温度低于室温。22. 根据权利要求21所述的方法，其中所述溶剂是至少一种有机溶剂和水性溶剂的混 合物且其中步骤al包括以下步骤： al. 1)在搅拌下在所述水性溶剂中悬浮胰酶； al. 2)将步骤al. 1的可溶部分从不可溶部分分离； al. 3)向步骤al. 2的所述可溶部分添加一种有机溶剂或其混合物； 且其中所述方法的温度低于室温。23. 根据权利要求22所述的方法，其中步骤al. 3进行约30分钟，且方法温度是4°C。24. 根据权利要求21、22或23所述的方法，其中所述步骤al. 1的胰酶是以包含在0. 05 和0. 3mg/mL之间的量。25. 根据权利要求 10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23 或 24 所述的方法， 其中所述溶剂具有38 (MPa)°·5的Hildebrand溶解度参数。26. 根据权利要求 10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24 或 25 所述 的方法，其中所述有机溶剂选自以下的组：正戊烷、正己烷、正庚烷、乙醚、环己烷、四氯 化碳、乙酸乙酯、四氢呋喃、氯仿、三氯乙烯、丙酮、二甲基甲酰胺、正丙醇、异丙醇、乙醇、 dimethylsulfoxidebutylalcohol、甲醇、乙臆、二噁烧和methylenchloride。27. 根据权利要求26所述的方法，其中所述有机溶剂选自丙酮、异丙醇和乙醇的组。28. 根据权利要求 10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25 或 26所述的 方法，其中所述水性溶剂是缓冲溶液。29. 根据权利要求 10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26 或 28 所 述的方法，其中所述缓冲溶液具有pH= 7或pH= 4。30. 根据权利要求 10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26 或 28 所 述的方法，其中所述有机溶剂是丙酮且所述水性溶剂是pH= 7的缓冲溶液。31. 根据权利要求 10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27 或 28 所述的方法，其中所述有机溶剂是乙醇且所述水性溶剂是pH= 7的缓冲溶液。32. 根据权利要求 10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27 或 28 所述的方法，其中所述有机溶剂是丙酮且所述水性溶剂是pH= 4的缓冲溶液。33. 根据权利要求 10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、28 或 24 所述的方法，其中所述有机溶剂是乙醇且所述水性溶剂是pH= 4的缓冲溶液。34. 根据权利要求19或21所述的方法，其中所述溶剂具有38 (MPa) °·5的Hildebrand 溶解度参数，且其中所述溶剂是丙酮和pH= 7的缓冲溶液的混合物，及步骤la中的胰酶是 以0·lmg/mL的浓度。35. 根据权利要求22所述的方法，其中所述溶剂具有38 (MPa) α5的Hildebrand溶解 度参数，且其中所述溶剂是丙酮和pH= 4的缓冲溶液的混合物，及步骤al中的胰酶是以 0·lmg/mL的浓度。36. 根据权利要求22所述的方法，其中所述溶剂具有38 (MPa) α5的Hildebrand溶解 度参数，且其中所述溶剂是乙醇和pH= 4的缓冲溶液的混合物，及步骤al中的胰酶是以 0·lmg/mL的浓度。37. 根据权利要求22所述的方法，其中所述溶剂具有38 (MPa) α5的Hildebrand溶解 度参数，且其中所述溶剂是丙酮和pH= 7的缓冲溶液的混合物，及步骤al中的胰酶是以 0· 3mg/mL的浓度。38. 根据权利要求23所述的方法，其中所述溶剂具有38 (MPa) α5的Hildebrand溶解 度参数，且其中所述溶剂是丙酮和pH= 4的缓冲溶液的混合物，及步骤al中的胰酶是以 0· 3mg/mL的浓度。39. 根据权利要求23所述的方法，其中所述溶剂具有38 (MPa) α5的Hildebrand溶解 度参数，且其中所述溶剂是乙醇和pH= 4的缓冲溶液的混合物，及步骤al中的胰酶是以 0· 3mg/mL的浓度。40. 根据权利要求 10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、 29、30、31、32、33、34、35、36、37、38或39所述的方法，所述方法包括微生物和/或病毒负载 减少的步骤。41. 根据权利要求40所述的方法，其中所述细菌和/或病毒负载减少通过过滤、加热、 离子辐射、高压或通过烷基化进行。42. 治疗患有与胰腺酶不足相关的生理状况的患者的方法，所述方法包括对患者施用 药学上可接受量的根据权利要求5、6、7、8或9所述的组合物。
【专利摘要】本发明提供高效的药物组合物，所述药物组合物包含高活性的胰酶。本发明还涉及生产HA-胰酶及其组合物或剂型的方法，以及它们的使用方法。
【IPC分类】A61K38/46, A61K38/48, C12N9/94, A61P1/18
【公开号】CN105392496
【申请号】CN201480041135
【发明人】温琴扎·皮隆蒂, 罗伯特·贝克尔, 路易吉·波尔特里, 路易吉·吉多斯, 保拉·阿尔祖菲
【申请人】阿普塔利斯制药有限公司
【公开日】2016年3月9日
【申请日】2014年7月15日
【公告号】CA2919114A1, EP3024479A2, US20160152968, WO2015019198A2, WO2015019198A3