所述皮肤与有效量的组合物接触，所 述组合物包含具有包含如本文所公开的肤的皮肤渗透增强剂和包括本文所公开的真皮填 充剂的活性剂。
[0052] 本发明的方法可用于任何合适的受试者。合适的受试者包括动物，诸如人类、非人 灵长类、晒齿类、狗、猫、马、猪、绵羊、山羊或牛。本发明的组合物可通过任何适宜的方法(诸 如通过喷雾、浸溃、刷涂、滴落、擦入或W贴片形式粘附)施用到皮肤或粘膜组织。 巧05引实施例
[0054] 实施例1为一种包含肤的皮肤渗透增强剂，其中所述肤所包含的氨基酸序列包含： 如569 ID ^:1、2、3或6中所示的十个连续氨基酸残基;如569 ID ^:7或8中所示的^^一个 连续氨基酸残基;如SEQ ID N0:4或5中所示的十二个连续氨基酸残基;或它们的类似物。
[0055] 实施例2为实施例1的皮肤渗透增强剂，其中所述肤包含30个或更少的总氨基酸残 基或氨基酸类似物。
[0056] 实施例3为实施例1的皮肤渗透增强剂，其中所述肤的氨基酸序列的至少50%包含 选自沈Q ID N0:l、2、3、4、5、6、7或8的连续氨基酸序列。
[0057] 实施例4为实施例1的皮肤渗透增强剂，其中所述肤具有如SEQ ID NO: 1、2、3、4、5、 6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16 或17中所示的氨基酸序列。
[0058] 实施例5为实施例1的皮肤渗透增强剂，其中所述肤的N-末端包含SHS的连续氨基 酸序列。
[0059] 实施例6为实施例1的皮肤渗透增强剂，其中所述肤的C-末端包含选自GGGS、G和 WPA的连续氨基酸序列。
[0060] 实施例7为实施例1-6中任一项的皮肤渗透增强剂，其中所述肤具有如SEQ ID NO: 10中所示的氨基酸序列。
[0061] 实施例8为实施例1-6中任一项的皮肤渗透增强剂，其中所述肤具有如SEQ ID NO: 14中所示的氨基酸序列。
[0062] 实施例9为实施例1-6中任一项的皮肤渗透增强剂，其中所述肤具有如SEQ ID NO: 15中所示的氨基酸序列。
[0063] 实施例10为实施例1-2或5-6中任一项的皮肤渗透增强剂，其中所述肤包含氨基酸 序列的类似物，所述氨基酸序列包含:如SEQ ID NO: 1、2、3或6中所示的十个连续氨基酸残 基;如56〇 ID ^):7或8中所示的^^一个连续氨基酸残基;或如SEQ ID N0:4或5中所示的十 二个连续氨基酸残基;其中所述类似物具有不超过=个保守氨基酸取代。
[0064] 实施例11为实施例10的皮肤渗透增强剂，其中所述类似物具有不超过两个保守氨 基酸取代。
[0065] 实施例12为实施例10的皮肤渗透增强剂，其中所述类似物具有不超过一个保守氨 基酸取代。
[0066] 实施例13为实施例1-2或5-6中任一项的皮肤渗透增强剂，其中所述肤为具有如 沈Q ID ^:1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16或17中所示的氨基酸序列的肤的 类似物;其中所述类似物具有不超过=个保守氨基酸取代。
[0067] 实施例14为实施例13的皮肤渗透增强剂，其中所述类似物具有不超过两个保守氨 基酸取代。
[0068] 实施例15为实施例13的皮肤渗透增强剂，其中所述类似物具有不超过一个保守氨 基酸取代。
[0069] 实施例16为实施例13-15中任一项的皮肤渗透增强剂，其中所述肤为具有如SEQ ID NO: 10中所示的氨基酸序列的肤的类似物。
[0070] 实施例17为实施例13-15中任一项的皮肤渗透增强剂，其中所述肤为具有如SEQ ID NO: 14中所示的氨基酸序列的肤的类似物。
[0071] 实施例18为实施例13-15中任一项的皮肤渗透增强剂，其中所述肤为具有如SEQ ID NO: 15中所示的氨基酸序列的肤的类似物。
[0072] 实施例19为一种包含实施例1-18中任一项的皮肤渗透增强剂和活性剂的组合物， 其中所述活性剂选自药物活性剂、疫苗、美容剂和营养补充剂。
[0073] 实施例20为实施例19的组合物，其中所述活性剂为抗体、降脂化合物、治疗性蛋白 质、促进或刺激毛发生长的药剂、毛发去除化合物或维生素。
[0074] 实施例21为实施例19的组合物，其中所述活性剂为包含带电小分子或蛋白质的药 物活性剂。
[0075] 实施例22为实施例21的组合物，其中所述药物活性剂选自膜岛素、促黄体生成激 素释放激素或脱氧胆酸钢。
[0076] 实施例23为实施例19的组合物，其中所述活性剂为真皮填充剂。
[OOW]实施例24为实施例23的组合物，其中所述真皮填充剂选自透明质酸化A)、胶原、胶 原模拟物、弹性蛋白、纤维蛋白、纤连蛋白、腫生蛋白、维生素 A、多糖、氨基酸同型共聚物、黑 色素、黑色素衍生物、天然或合成的颜料、W及它们的组合。
[0078] 实施例25为实施例24的组合物，其中所述多糖为脱乙酷壳多糖、软骨素、糖胺聚 糖、蛋白聚糖、或它们的组合。
[0079] 实施例26为实施例24的组合物，其中所述氨基酸同型共聚物为聚赖氨酸、聚丙締 酷胺、聚乙二醇、聚乳酸、或它们的组合。
[0080] 实施例27为实施例23的组合物，其中所述真皮填充剂选自透明质酸化A)、胶原、胶 原模拟物、或它们的组合。
[0081] 实施例28为实施例19-27中任一项的组合物，所述组合物包含药学上可接受的赋 形剂，其中所述药学上可接受的赋形剂W洗剂、霜膏或贴片的形式提供组合物。
[0082] 实施例29为一种透皮递送药物活性剂、疫苗、美容剂或营养补充剂的方法，所述方 法包括向对其有需要的受试者的皮肤施用组合物，所述组合物包含：
[0083] 载体，其选自药学上可接受的载体、美容上可接受的载体或营养上可接受的载体；
[0084] 活性剂，其选自药物活性剂、疫苗、美容剂或营养补充剂;和 [008引实施例1-18中任一项的皮肤渗透增强剂。
[0086] 实施例30为一种令对其有需要的受试者的皮肤光滑的方法，所述方法包括使所述 皮肤与有效量的实施例19-28中任一项的组合物接触。
[0087] 实施例31为一种治疗对其有需要的受试者的皱纹的方法，所述方法包括使所述皱 纹与有效量的实施例19-28中任一项的组合物接触。
[0088] 实施例32为一种用于对其有需要的受试者丰唇的方法，所述方法包括使所述唇与 有效量的实施例19-28中任一项的组合物接触。
[0089] W下实例进一步说明了本发明的目的和优点，但运些实例中引用的具体材料及其 量W及其他条件和细节不应被理解为是对本发明的不当限制。
[0090] ^ I^lJ
[0091] 材料
[009引从 Dr.Brian Kay(芝加哥的伊利诺伊大学（University of Illinois at 化icago))获得二十九个随机M13隧菌体展示肤文库A化1-ANL29(描述于"大集合隧菌体展 示文库的有效构建"，《组合化学和高通量筛选》，2005,第8卷，第545-551页（"Efficient Construction of 曰 Lsrge Collection of Phsge-Displsyed Libr曰ries''， Combinatorial Chemistry and High Throughput Screening,2005,vol.8,pp.545-551))。从 Dr.George P.Smith(密苏里哥伦比亚大学（University of Missouri-Columbia))获得五个随机M13隧菌体展示肤文库(表1)。从马萨诸塞州伊普斯威奇的新英格 兰生物实验室公司（New England BioLabsJnc. (Ipswich,MA))获得S个随机M13隧菌体展 示肤文库化.0严-12、？11.0严-〔7(：和陆.0严-7。
[0096] 从马萨诸塞州伊普斯威奇的新英格兰生物实验室（New England Biolabs (Ipswich,MA))获得大肠杆菌化.coli)菌株ER 2738(基因型：F'proA+B+lacIq A (IacZ) M15zzf::TnlO(TetR)/扣uA2glnV A(lac-p;roAB)thi-lA 化sdS-mcrB)5)。
[0097]肤是由新泽西州皮斯卡塔韦的金斯瑞美国公司（GenScript USA Inc. (Piscataway，NJ))使用逐步固相肤合成（SPPS)方法化学合成的。通过HPLC将该肤纯化至 95 %纯度并通过高分辨质谱鉴定。
[009引卢里亚-贝尔塔尼化uria Bertani，LB)肉汤粉末；卢里亚-贝尔塔尼化uria Bertani,LB)琼脂粉末;异丙基-P-D-硫代半乳糖巧（IPTG);5-漠-4-氯-3-吗I噪基-P-D-半乳 糖巧(X-gal);聚乙二醇-8000;化is-HCl;四环素；异硫氯酸巧光素(FITC)钢盐;琼脂糖；卵 白蛋白（产品编号A2512)和氯化儀均是从密苏里州圣路易斯的西格玛奥瑞奇（Sigma-Al 化 ich( St. Louis, MO))获得的。
[0099] 根据化i，M等人于"通过指导共有工程而创建新型巧光蛋白"，《蛋白质工程、设计 和选择》，2007,第20(2)卷，第69-79页（"Hie Creation of a Novel Fluorescent Protein by Guided Consensus Engineering''，Protein Engineering,Design&SeIection,2007, vol. 20(2)，pp. 69-79)中所描述的程序表达并纯化绿色巧光蛋白（GFP)。
[0100] LB肉汤培养基:循序地将LB肉汤粉末重建于一升去离子水中、高压灭菌并于室溫 下储存。
[0101] 四环素原液(悬浮液）：W20mg/ml的浓度向乙醇:水（1:1)添加四环素并于-20°c下 储存在黑暗中。在使用之前，将所述原液悬浮液縱满振荡。
[0102] LB/IPTG/X-gal/四环素倍替平板:对IL LB培养基中包含15g LB琼脂的溶液进行 高压灭菌并随后冷却至巧〇°C。向所述LB培养基添加一毫升包含IPTG( 1.25g)和x-gal (1. Og 于DMF(25mU中）的溶液，之后添力日ImL四环素原液。将溶液的等分部分（15mU倒入倍替平板 中，并且将所述平板于4°C下储存在黑暗中。
[01