木脂素类化合物(7s,8r)-二氢脱氢二松柏醇在制备抗补体药物中的用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药领域，涉及一种从药用植物山芝麻中分离得到的木脂素类化合物 (7S，8R)-二氢脱氢二松柏醇在制备抗补体药物中的用途。
【背景技术】
[0002] 研究显示，补体系统的过度激活会引发系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、急性呼 吸窘迫综合征等多种重大疾病，然而目前对此类疾病尚缺乏较为理想的治疗药物，因此临 床上急需高效、低毒、专一的新型补体抑制剂。从天然产物中研究开发补体抑制剂是近年来 一个受到越来越多关注的重要研究领域，其具有成本低、毒性小等特点。国内外学者已从包 括海洋生物在内的多种天然产物中分离得到多种具有补体系统抑制作用的单体化合物，为 抗补体药物的研究与开发提供了广阔的前景。
[0003] 山芝麻为梧桐科植物山芝麻（Helicteres angustifolia L.)的干燥根或全株，味 苦、性寒，归肺、大肠经，可解表清热、解毒消肿，用于治疗感冒发热、痄腮、乳娥、麻疹、咳嗽、 泄泻痢疾、痈肿。现代药理研究表明山芝麻具有抗菌、抗炎、抗病毒及抗肿瘤等活性。研究 发现，木脂素类化合物还具有多种生物活性，如抗肿瘤、抗氧化、抗病毒等，
[0004] 迄今为止，尚未见有关木脂素类化合物（7S，8R)-二氢脱氢二松柏醇抗补体活性 的报道。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的是提供木脂素类化合物（7S，8R)-二氢脱氢二松柏醇在制备抗补体 药物中的用途。
[0006] 本发明所述的木脂素类化合物具有以下化学结构：
[0007]
[0008] 本发明所述的化合物从山芝麻中分离得到，通过下述方法制备：
[0009] 取山芝麻干燥根25kg，粉碎，用95 %乙醇回流提取3次（50LX 3)，每次2h，合 并提取液并浓缩得浸膏〇.95kg，加水（4L)混悬，分别以等体积石油醚、乙酸乙酯和正 丁醇萃取5次，合并萃取液并浓缩至干，得乙酸乙酯萃取物200g。将乙酸乙酯萃取部 位经硅胶（200-300目）柱色谱分离，依次以二氯甲烷-甲醇（50:1-0:1)梯度洗脱， 得到11个流份（Fr.l-ΙΙ)，其中流份Fr.3(32g)再经硅胶柱色谱（二氯甲烷-甲醇， 30: 1，20: 1，10: 1，5: 1，3: 1，I: I)、MPLC (甲醇-水，20:80-80:20 梯度洗脱）和 s印hadex LH-20柱色谱等手段纯化，分离得到化合物（7S，8R)-二氢脱氢二松柏醇[(7S，8R) -dihydro dehydrodiconiferyl alcohol]〇
[0010] 本发明从山芝麻属植物山芝麻（H. angustifolia)干燥根的乙醇提取物乙酸乙酯 萃取部位中分离得到1个木脂素类化合物，并应用现代药理研究方法，对分离得到的单体 化合物进行抗补体活性评价，实验证实其对补体系统经典途径和旁路途径补体激活均有较 强的抑制作用。
[0011] 本发明所述的化合物可用作制备抗补体药物。
【附图说明】
[0012] 图1是山芝麻根中化合物（7S，8R)-二氢脱氢二松柏醇的提取分离流程图。
【具体实施方式】
[0013] 实施例1制备（7S，8R)_二氢脱氢二松柏醇
[0014] 取山芝麻干燥根25kg，粉碎，用95 %乙醇回流提取3次（50LX 3)，每次2h，合 并提取液并浓缩得浸膏〇.95kg，加水（4L)混悬，分别以等体积石油醚、乙酸乙酯和正 丁醇萃取5次，合并萃取液并浓缩至干，得乙酸乙酯萃取物200g。将乙酸乙酯萃取部 位经硅胶（200-300目）柱色谱分离，依次以二氯甲烷-甲醇（50:1-0:1)梯度洗脱， 得到11个流份（Fr.l-ΙΙ)，其中流份Fr.3(32g)再经硅胶柱色谱（二氯甲烷-甲醇， 30: 1，20: 1，10: 1，5: 1，3: 1，I: I)、MPLC (甲醇-水，20:80-80:20 梯度洗脱）和 s印hadex LH-20柱色谱等手段纯化，分离得到化合物（7S，8R)-二氢脱氢二松柏醇[(7S，8R) -dihydro dehydrodiconiferyl alcohol]〇
[0015] 所得化合物为黄色油状物，分子式C2qH24O6，三氯化铁反应呈阳性，提示有酚羟 基。 |>廣-7. 8 (cl. 34, MeOH) ;IR(KBr) : unax (cm 3 :3456, 3225, 2920, 1615, 1522, 1458， 1268, Π 22, 1〇38 ；UV: (MeOH) Anax nm(log ε ) ： 206. 6 (3. 26), 238. 4 (2. 12), 282. 3 (I. 44)； ESI-MS m/z: 383 [M+Na]+。1H-NMR (600MHz, CD3OD) δ H: 6· 97 (1H, d, J = I. 8Hz)，6· 84 (1H, dd, J =1.8,7. 8Hz) ,6.79 (lH，d, J = 7·8Ηζ) ,6.74 (2H，s) ,5.51 (lH，d, J = 6·6Ηζ) ,3.86 (3Η ,s), 3. 82(3Η, s), 3. 59(2Η, t, J = 6. 5Ηζ), 2. 64(2Η, m), L 84(2Η, tt, J = 13. 2, 6. 5Ηζ) 〇 13C-匪R(150MHz, CD3OD) δ c: 134. 8(01)，110. 5(02)，149. 0(03)，147. 4(04)，116. 1 (C-5), 119. 7(C-6), 89. 0(C-7), 55. 4(C-8), 64. 9(C-9), 136. 9(C-1'），114. 0(C-2'），14 5. 2 (C-3,），147. 5 (C-4,），129. 9 (C-5,），117. 9 (C-6,），35. 8 (C-7,），32. 9 (C-8,），62. 2 ( C-9'），56. 7, 56. 3。
[0016] 实施例2体外抗补体经典途径激活试验
[0017] 取补体（豚鼠血清）0. 04ml，加入巴比妥缓冲液（BBS)配制成1:10的溶液，用BBS 对倍稀释成 1:20、1:40、1:80、1:160、1:320、1:640和 1:1280 的溶液。取 1:1000溶血素、2% 羊红细胞（SRBC)各0.1 ml及各浓度补体0. 2ml溶于0. 2ml BBS中，混匀，37°C水浴30min 后放入低温高速离心机，在4000rpm、4°C条件下离心5min。分别取每管上清0. 2ml于96孔 板，在405nm测定其吸光度。实验同时设置全溶血组（0.1 ml 2% SRBC、0.1 ml溶血素溶于 0.4ml三蒸水）。以三蒸水溶血管的吸光度作为全溶血标准，计算溶血率。以补体稀释度为 X轴，溶血百分率为Y轴作图。选择达到相似高溶血率的最低补体浓度作为确保体系能正常 溶血所需的临界补体浓度。取临界浓度的补体与供试品混匀，按上述方法于405nm下测定 吸光度。实验同时设置供试品对照组、补体组和全溶血组。将供试品吸光度值扣除相应供 试品对照组吸光度值后计算溶血率。以供试品浓度作为X轴，溶血抑制率作为Y轴作图，计 算50%抑制溶血所需供试品的浓度（CH 5q)。
[0018] 实施例3体外抗补体旁路途径激活试验
[0019] 取补体（人血清）0· 2ml，加入AP稀释液（巴比妥缓冲液，pH = 7. 4,含5mMMg2+，8mM EGTA)配制成1:5的溶液，并对倍稀释成1:10、1:20、1:40、1:80、1:160、1:320和1:640的溶 液。取各浓度补体〇. 15ml、AP稀释液0. 15ml及0. 5%兔红细胞（RE)O. 20ml，混匀，37°C水 浴30min后置于低温高速离心机，在4000rpm、4°C条件下离心5min。分别取每管上清0. 2ml 于96孔板，在405nm测定吸光度。实验同时设置全溶血组（0. 20ml 0. 5% RE溶于0. 3ml三 蒸水）。以三蒸水溶血管的吸光度作为全溶血标准，计算溶血率。以补体稀释度为X轴，溶 血百分率为Y轴作图。选择达到相似高溶血率的最低补体浓度作为确保体系能正常溶血所 需的临界补体浓度。取确定的临界浓度的补体与供试品混匀，按上述方法于405nm下测定 其吸光度。实验同时设置供试品对照组、补体组和全溶血组。将供试品吸光度值扣除相应 供试品对照组吸光度值后计算溶血率。以供试品浓度作为X轴，溶血抑制率作为Y轴作图， 计算50%抑制溶血所需供试品的浓度（AP50)。
[0020] 上述木脂素类化合物经过体外抗补体活性试验测定，结果表明其对补体系统的经 典途径和旁路途径补体激活均有较强的抑制作用，50%溶血所需最小供试品浓度如表1所 示。所述化合物可用于制备补体抑制剂。
[0021] 表1. (7S，8R)-二氢脱氢二松柏醇对经典途径和旁路途径的补体抑制作用
[0023] 本发明中实验采用的试剂均为本领域公知技术，可市购。
【主权项】
1. 如下式的木脂素类化合物（7S，8R)-二氢脱氢二松柏醇在制备抗补体药物中的用 途，2. 按权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的木脂素类化合物（7S，8R)_二氢脱氢 二松柏醇通过下述方法制备： 取山芝麻干燥根，粉碎，用95%乙醇回流提取3次，每次2h，合并提取液并浓缩得浸膏， 加水混悬，分别以等体积石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取5次，合并萃取液并浓缩至干，得 乙酸乙酯萃取物；将乙酸乙酯萃取部位经硅胶200-300目柱色谱分离，依次以二氯甲烷-甲 醇50:1-0:1梯度洗脱，得到11个流份为Fr. 1-11，其中流份Fr. 3再经硅胶柱色谱，其中： 二氯甲烷-甲醇，30:1,20:1, 10:1,5:1,3:1，1:1、MPLC，其中：甲醇-水，20:80-80:20 梯度 洗脱和sephadex LH-20柱色谱纯化，分离得到化合物（7S，8R)_二氢脱氢二松柏醇。3. 按权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的化合物抑制补体系统经典途径和旁 路途径的补体激活。
【专利摘要】本发明属于医药领域，涉及一种木脂素类化合物(7S,8R)-二氢脱氢二松柏醇在制备抗补体药物中的用途。本发明从山芝麻属植物山芝麻(Helicteres？angustifolia？L.)的干燥根中分离得到1个木脂素类化合物(7S,8R)-二氢脱氢二松柏醇，并采用现代药理研究方法证实其对补体系统经典途径和旁路途径的补体激活均有较强的抑制作用，其CH50值为0.0032mg/ml，AP50值为0.0077mg/ml,可作为活性成分用于制备抗补体药物。
【IPC分类】C07D307/80, A61K31/343, A61P37/02
【公开号】CN105520926
【申请号】CN201410505707
【发明人】陈道峰, 殷翔, 卢燕
【申请人】复旦大学
【公开日】2016年4月27日
【申请日】2014年9月28日