专利名称：扁藻胞内活性物质的集成提取方法
技术领域：
本发明属于生物化工领域，涉及扁藻胞内活性物质的集成提取。
背景技术：
海洋微藻因其不同于陆地的生长环境而具有许多特异的生物活性物质，目前，许多国家和地区对其进行了有关培养、营养价值分析及开发利用研究，从中生产出了大量用途广泛的产品，如食品添加剂、保健食品、杀虫剂、植物生长调节剂以及抗菌、抗病毒和抗癌物质。在从微藻提取各种物质的过程中，一般只注重目标产物的提取和纯化，而对微藻中其它的活性物质往往因为提取工艺不适合而被破坏，或当作废物被忽略，这大大地浪费了宝贵的生物资源；而有些提取过程比较繁琐、耗时，增加了能源消耗，提高了产品的成本。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从新鲜的海洋亚心型扁藻细胞中提取活性物质的集成提取方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是提供一种扁藻胞内活性物质的集成提取方法，是以新鲜的海洋亚心型扁藻为原料，经浸提、萃取、凝析、离心分离和干燥过程提取制得色素、粗蛋白和扁藻糖蛋白；包括如下步骤A、将用海水培养至平衡期后的扁藻培养液于3000-3500rpm离心3-5分钟，得原藻泥；B、将原藻泥分别用1倍体积的去离子水反复清洗3遍，得清洗液和一级藻泥；
C、将一级藻泥循环冻融3次后，再分别与去离子水按1∶4和1∶2的体积比例搅拌混匀，离心2次，收集上清液得一级清液和二级藻泥；D、一级清液中加入饱和(NH4)2SO4溶液得蛋白质沉淀和二级清液；蛋白质沉淀用去离子水复溶后，透析去除(NH4)2SO4，溶液减压干燥得蛋白质；E、合并步骤B、D中的清洗液和二级清液，按1∶1的体积比例加入乙酸乙酯，萃取色素，分离得有机层和三级清液，将有机层减压干燥，得副产物色素；F、将步骤E三级清液与步骤C二级藻泥混合均匀，在60-80℃加热2小时后离心，得四级清液和沉淀，沉淀作为副产物用于农作物生长的促进剂和肥料；G、将四级清液加热浓缩至原体积的1/4，冷却至室温，再加入无水乙醇于4℃过夜使沉淀老化，离心分别获取乙醇浓度为0-50％和50-75％的两种级分的扁藻粗糖蛋白；剩余的上清液按步骤E提取色素；H、两种粗糖蛋白沉淀重新溶于去离子水后，再用无水乙醇重沉淀1次，洗2次，最后用丙酮冲洗2次，通过水浴加热、干燥，得淡乳白色粉末，即为扁藻糖蛋白。
用乙醇浓度为0-50％级分的扁藻粗糖蛋白提纯得到的扁藻糖蛋白，呈淡乳白色粉末，易溶于水，不溶于有机溶剂，对体外培养的QGY-7701肝癌细胞、红白血病K562细胞的抑制率为60-75％；对纯系小鼠BL/C57体内黑色素瘤的抑制率为34％，并可促使小鼠的生长。所提取的副产物蛋白质和色素可用于食品添加剂和化妆品，藻泥用于农作物生长的促进剂和肥料。
本制备工艺充分利用海洋扁藻资源，特别是利用用作海珍品幼体培养的优良饵料亚心型扁藻(Platymonas subcordiformis))，在提取扁藻糖蛋白的过程中结合其他副产物的特点，同时提取了蛋白质、色素，而剩下的藻泥用于农作物生长的促进剂和肥料。工艺简洁，提高了原料的利用率，降低了能源消耗，缩短了生产过程，降低了生产成本。
具体实施例方式
下面的实施例可以帮助本专业技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1.
A、将用海水培养至平衡期后的扁藻培养液于3000-3500rpm离心3-5分钟，得原藻泥；B、将原藻泥分别用1倍体积的去离子水反复清洗3遍，得清洗液和一级藻泥；C、将一级藻泥循环冻融3次后，再分别与去离子水按1∶4和1∶2的体积比例搅拌混匀，离心2次，收集上清液得一级清液和二级藻泥；D、一级清液中加入饱和(NH4)2SO4溶液得粗蛋白质沉淀和二级清液；粗蛋白质沉淀用去离子水复溶后，透析去除(NH4)2SO4，溶液减压干燥得蛋白质；E、合并步骤B、D中的清洗液和二级清液，按1∶1的体积比例加入乙酸乙酯，萃取色素，分离得有机层和三级清液，将有机层减压干燥，得副产物色素；F、将步骤E三级清液与步骤C二级藻泥混合均匀，在60-80℃加热2小时后离心，得四级清液和沉淀，沉淀作为副产物用于农作物生长的促进剂和肥料；G、将四级清液加热浓缩至原体积的1/4，冷却至室温，再加入无水乙醇于4℃过夜使沉淀老化，离心分别获取乙醇浓度为0-50％和50-75％的两种级分的扁藻粗糖蛋白；剩余的上清液按步骤E提取色素；H、两种扁藻粗糖蛋白沉淀重新溶于去离子水后，按1∶1的体积比例再用无水乙醇重沉淀1次，洗2次，最后用丙酮冲洗2次，通过水浴加热、干燥，得淡乳白色粉末，即为扁藻糖蛋白。
权利要求
1.一种扁藻胞内活性物质的集成提取方法，其特征是以新鲜的海洋亚心型扁藻为原料，经浸提、萃取、凝析、离心分离和干燥过程制得色素、粗蛋白和扁藻糖蛋白；包括如下步骤A、将用海水培养至平衡期后的扁藻培养液于3000-3500rpm离心3-5分钟，得原藻泥；B、将原藻泥分别用1倍体积的去离子水反复清洗3遍，得清洗液和一级藻泥；C、将一级藻泥循环冻融3次后，再分别与去离子水按1∶4和1∶2的体积比例搅拌混匀，离心2次，收集上清液得一级清液和二级藻泥；D、一级清液中加入饱和(NH4)2SO4溶液得粗蛋白质沉淀和二级清液；粗蛋白质沉淀用去离子水复溶后，透析去除(NH4)2SO4，溶液减压干燥得蛋白质；E、合并步骤B、D中的清洗液和二级清液，按1∶1的体积比例加入乙酸乙酯，萃取色素，分离得有机层和三级清液，将有机层减压干燥，得副产物色素；F、将步骤E三级清液与步骤C二级藻泥混合均匀，在60-80℃加热2小时后离心，得四级清液和沉淀，沉淀作为副产物用于农作物生长的促进剂和肥料；G、将四级清液加热浓缩至原体积的1/4，冷却至室温，再加入无水乙醇于4℃过夜使沉淀老化，离心分别获取乙醇浓度为0-50％和50-75％的两种级分的扁藻粗糖蛋白；剩余的上清液按步骤E提取色素；H、两种粗糖蛋白沉淀重新溶于去离子水后，再用无水乙醇重沉淀1次，洗2次，最后用丙酮冲洗2次，通过水浴加热、干燥，得淡乳白色粉末，即为扁藻糖蛋白。
全文摘要
本发明属于生物化工领域，涉及扁藻胞内活性物质的集成提取方法，是利用乙酸己酯提取扁藻细胞中的色素、用饱和(NH
文档编号A61Q1/00GK1844259SQ200610046500
公开日2006年10月11日 申请日期2006年4月29日 优先权日2006年4月29日
发明者杨海波, 刘艳, 于媛, 赵莲华, 吕玉瑶, 王晓红 申请人:大连大学