2′－o－三取代的甲硅烷氧基甲基－核糖核苷衍生物及其制备方法

专利名称：2′－o－三取代的甲硅烷氧基甲基－核糖核苷衍生物及其制备方法
技术领域：
本发明属于核酸化学领域并且涉及具有新保护基的核糖核苷衍生物的制备方法和用途。本发明化合物尤其适于寡核糖核苷酸的自动化制备。
背景技术：
合成核酸具有许多应用并且是理解生物过程的关键。在这些应用中，通过细胞中合成寡核苷酸与mRNA的特异杂交从而使用合成寡核苷酸特异性下调蛋白质被公如为反义机理并且已经被广泛描述(1)。新近，一种使用dsRNA(称作siRNA)的RNA干涉技术已经成功地用于抑制哺乳动物mRNA翻译成其蛋白(2)。RNA技术的巨大前景已经造成对开发有效且成本合算的合成寡核糖核苷酸制剂的需求。
寡核糖核苷酸的合成较寡脱氧核苷酸的合成更具挑战性，这主要是因为核糖核苷酸中存在2’-OH，但脱氧核糖核苷酸中则不然。寡核糖核苷酸的化学合成通常是基于固定于固相上的受保护的核糖核苷衍生物，在一个合成周期的连续步骤中将其他受保护的核糖核苷酸衍生物偶联于其上，直到获得所需链长度。为了确保有效合成和避免制备过程中RNA降解，2’-OH基的保护基策略应该与其他保护基安全互不相关，并且在该过程中保护基应该尽可能晚地被除去。迄今为止，主要有以下类型的保护基已被用于保护2’-OH基2’-O-TBDMS化学是通常用于RNA合成的保护基(3)。其与其他保护基互不相关。然而，已有报导在寡核糖核苷酸合成期间2’-3’磷酰基发生迁移(4)。此外，与反应性亚磷酰胺接近的叔-丁基二甲基甲硅烷基的空间位阻也显著降低偶联效率。后一局限性可被降低，但代价是偶联时间更长以及使用更高摩尔过量的试剂和特别的亚磷酰胺激活剂如例如5-(苯甲基巯基)-1H-四唑(5)。
2’-O-ACE化学已经被Caruthers等人(6)描述为TBDMS化学的备选方案。其中，2’-OH由酸不稳定的原酸酯保护。与TBDMS相比，该保护基的更低位阻允许具有更高的偶联速度。2’-原酸酯的酸不稳定性要求对5’-OH进行非-酸不稳定性暂时保护。这通过三取代的甲硅烷基来实现，在每个偶联周期结束时通过含氟化物溶液除去三取代甲硅烷基。因此，制备2’-O-ACE结构单元的试剂必须特别地按比例增加。这种5’去保护在一些情况中可能存在问题其需要耐氟离子的专用合成器并且不可能使用通常使用的基于二氧化硅的支持体(如可控孔度玻璃)。Pitsch等人(6)已经报导了2’-O-TOM化学。如对于2’-OTBDMS保护基策略，经用氟离子处理而除去2’-O-TOM保护基。最初开发它是用于合成长RNA而没有使用2’-OTBDMS所观察到的2’-3’磷酰基迁移。在该情况下，由于核苷和保护基之间键的缩醛性质，保护基向核糖核苷衍生物中不同位置、尤其邻近的3’-O-位置的迁移不可能发生。这种异构化是合成常规2’-O-甲硅烷基-取代的RNA单位中的熟知问题。该保护基的另一重要优点是由于2’-氧和大体积的三异丙基甲硅烷基之间的缩醛间隔区使得保护基的位阻较低。
2′-O-TBDMS RNA-U 2’-O-TOM RNA-U 2′-O-ACE RNA-U2’-O-TOM和2’-O-ACE提供的偶联产率都接近于寡脱氧核苷酸合成中观察到的产率。用2’-O-TBDMS化学也可以得到令人满意的偶联产率，但代价是使用不常用的激活剂或者更高摩尔过量的结构单元。在所有情况下，所提到的结构单元在很大程度上影响寡核糖核苷酸的生产成本。其次，寡核糖核苷酸的合成后加工与寡脱氧核糖核苷酸的加工相比要求更加苛刻。当必须满足高通量需求时，该后一方面尤其重要。
需要改进的RNA结构单元，其更廉价并且合成后加工更容易。
在过去，取代的甲硅烷氧基甲基已经被用作羟基的保护基(7，8)。Si原子上取代基的空间位阻调节保护基的稳定性和除去条件。例如，已经报导了携带位于Si原子邻位的叔碳的甲硅烷氧基甲基(7)，在这些情况中，除去保护基的产率与用TBDMS保护通常观察到的相比并非最佳，并且显然不适于固相寡核糖核苷酸的合成。
本发明现在提供了用于保护核糖核苷衍生物的2’位OH的新颖且改进的基团，这些衍生物尤其适于自动化寡核糖核苷酸固相合成。还提供了制备这些结构单元的新方法。最后，公开了这些结构单元在RNA固相合成中的用途。
发明概述一方面，本发明提供了下式的核糖核苷衍生物， 其中R1为嘌呤-或嘧啶-家族的碱基或者这种碱基的衍生物或者用作核碱基替代物的任一其他残基，R2为质子或膦酸的取代衍生物，R3为质子或5’-位氧原子的保护基，R4、R5和R6独立地为烷基或芳基或烷基和芳基的组合或杂原子，R4、R5或R6也可以相互环状连接；并且其中至少R4、R5或R6取代基之一含有位于Si原子邻位的叔碳原子或杂原子。
在优选的方面，含有位于Si原子邻位的叔碳原子的取代基含有4至24个碳原子、更优选5至24个碳原子、仍更优选6至24个碳原子。在更优选的方面，含有位于Si原子邻位的叔碳原子的取代基为烷基取代基，选自叔丁基、叔戊基、叔己基、叔庚基、叔辛基、叔壬基、叔癸基、叔十一烷基、叔十二烷基。在另一优选的方面，含有位于Si原子邻位的叔碳原子的取代基选自1，1-二甲基-乙基、1，1-二甲基-丙基、1，1-二甲基-丁基、1，1-二甲基-戊基、1，1-二甲基-己基、thexyl(1，1，2-三甲基-丙基)、1，1，2-三甲基-丁基、1，1，2-三甲基-戊基、1，1，2-三甲基-己基、1，1，2，2-四甲基-丙基、1，1，2，2-四甲基-丁基。在更优选的实施方案中，以上取代基基团含有至少5个碳原子、更优选至少6个碳原子。
在相关方面，本发明提供了核糖核苷衍生物，其中位于Si原子邻位的取代基含有取代的杂原子。在优选的方面，位于Si原子邻位的取代基含有取代的二价杂原子，在更优选的方面，该取代基为氧。
在另一方面，本发明提供了制备核糖核苷衍生物的方法，该方法包括使下式的核苷 其中R1和R3如上所定义，与下式的甲硅烷氧基甲基衍生物反应， 其中Y为适宜的离去基团并且其中R4、R5和R6独立地为烷基或芳基或烷基和芳基的组合或杂原子，R4、R5或R6也可以相互环状连接。在优选的实施方案中，Y为卤素。在另一优选实施方案中，R4、R5和R6一起含有6至30个碳原子。在另一优选的实施方案中，R4、R5和R6含有至少一个取代的杂原子位于Si原子邻位，该杂原子优选为二价原子、更优选为氧。该核糖核苷衍生物可以进一步在3’-位的氧上被由膦酸衍生物组成的基团取代。
本发明的另一方面提供了制备核糖核苷衍生物的方法，该方法包括使下式的核苷衍生物 经亲电活化与下式化合物反应 其中R1如上所定义，R7为烷基或芳基，或者烷基-芳基基团，其中R2为保护基，其中R3为保护基，其中R4、R5和R6如上所定义。
在优选实施方案中，该核糖核苷衍生物进一步在3’-位的氧上被由膦酸衍生物组成的基团取代。
发明详述缩写TBDMS 叔丁基二甲基甲硅烷基ACE二[2-(乙酰氧基)乙氧基]甲基TOM(三异丙基甲硅烷基)氧甲基THEX [((1，1，2-三甲基-丙基)-二甲基甲硅烷基)]-氧甲基DCA二氯乙酸dsRNA 双链RNAsiRNA 小的干涉RNA
本发明涉及用于含有D-或L-核糖单位的核糖核酸的化学合成中的2’-O-甲硅烷氧基甲基核糖核苷酸衍生物，其具有以下结构通式的 其中R1为嘌呤-或嘧啶-家族的碱基或者这种碱基的衍生物或者用作核碱基替代物的任一其他残基，R2为质子或膦酸的取代衍生物，R3为质子或5’-位氧原子的保护基，R4、R5和R6独立地为烷基或芳基或烷基-芳基基团。R4、R5或R6也可以相互环状连接。
5’-O-位的保护基R3为例如单甲氧基三苯甲基或二甲氧基三苯甲基或者不同的适宜基团，其在链增长期间从增长的序列中被除去，从而释放结合位置以用于偶联将被加入链的下一单位。
核糖核苷衍生物的碱基组分R1优选为嘌呤或嘧啶家族的碱基，例如5种核碱基腺嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、尿嘧啶、鸟嘌呤之一或其衍生物，或者为用作核碱基替代物的任一其他碱基。其可以被酰基取代基保护，该取代基可于链产生后除去。
在3’-O-位，R2为膦酸衍生物，如N，N-和O-取代的亚磷酰胺基团，其中N-取代基为烷基或芳基，其可以被进一步取代和/或相互环状连接。通过活化二取代氨基的氮原子，将磷中心活化以将该单位偶联至增长链。
本发明现在提供了新颖且有优势的2’-O-甲硅烷氧基甲基保护基，其中R4、R5或R6独立地为烷基或芳基取代基，或烷基-芳基或芳基-烷基或取代的杂原子取代基，且其中至少R4、R5或R6取代基之一含有杂原子或叔碳原子，该叔碳原子可由下式表示
其中R’、R”和R为烷基或芳基，或者烷基-芳基取代基或者芳基-烷基或者取代的杂原子，并且其中R’、R”和R不为H。R’、R”和R可以相同或不同，优选为含有1至12个碳原子、优选1至6个碳原子、更优选1至4个碳原子的取代基。R’、R”和R还可以相互环状连接，例如R’可以环状连接到R”或R，或者R”可以环状连接到R。在优选实施方案中，这些取代基中的两个是相同的并且含有1至6个碳原子、优选1至4个碳原子。第三个取代基含有优选至少3个碳原子、优选3至12个碳原子、更优选3至6个碳原子。
因此，在一个实施方案中，至少取代基R4、R5和/或R6之一为(C4至C24)-叔烷基和/或芳基、优选(C5至C18)-叔烷基和/或芳基、更优选(C6至C12)-叔烷基和/或芳基，其中叔碳原子在Si原子的邻位。不旨在限于这些基团，这些取代基的实例可以包括例如叔丁基、叔戊基、叔己基、叔庚基、叔辛基、叔壬基、叔癸基、叔十一烷基、叔十二烷基、1，1，2-三甲基-丙基、1，1，2-三甲基-丁基、1，1，2-三甲基-戊基、1，1，2-三甲基-己基、1，1，2，2-四甲基-丙基、1，1，2，2-四甲基-丁基。在优选的实施方案中，取代基为叔戊基或更高级的取代基；在更优选的实施方案中，取代基为叔己基或更高级的取代基。更优选的实例包括例如1，1-二甲基-乙基、1，1-二甲基-丙基、1，1-二甲基-丁基、1，1-二甲基-戊基、1，1-二甲基-己基、1，1，2-三甲基-丙基、1，1，2-三甲基-丁基、1，1，2-三甲基-戊基、1，1，2-三甲基-己基、1，1，2，2-四甲基-丙基、1，1，2，2-四甲基-丁基。在另一实施方案中，R4、R5和/或R6含有杂原子。
不含有叔碳原子的取代基可以是相同或不同的取代基。这些取代基优选为烷基或芳基取代基，或者烷基-芳基取代基。优选含有1至12个碳原子、优选1至8个碳原子、更优选1至4个碳原子的取代基。不旨在限于这些基团，这些取代基的实例可以包括例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基、仲丁基、异丁基、仲戊基。
在另一实施方案中，R4、R5和/或R6含有取代的杂原子，如例如硅、锗、锡、铅、氮、氧、硫，如例如可通过下式代表的“四价“杂原子
其中X为Si或Ge、Sn或Pb，并且其中R’、R”和R如对式2所定义，R4和R6如上所定义。取代基R4、R5或R6的任一个可以含有位于Si-原子邻位的杂原子，优选如式3中所示例的仅含一个杂原子。对于“二价”杂原子如氧或者三价杂原子如氮，可以相应地修改式3，这是本领域技术人员将容易认识到的。在本发明的优选实施方案中，X为氧。
可通过本领域中公知的方法如通过有机金属途径制备化合物。该途径在例如WO99/09044(6)中描述。反应4→5a/5b→6显示了通过有机金属途径制备本发明化合物的一个实例。简言之，在适宜的有机金属盐如例如二氯化二丁基锡或氧化二丁基锡存在下使5’-O受保护的核糖核苷与例如氯甲基[二甲基-(1，1，2-三甲基丙基)甲硅烷基]醚(或THEX-Cl)反应。THEX-Cl本身以类似于TOM-Cl的方式、根据公开的方法(7)制备。然而，与TOM-Cl不同，THEX-Cl的制备不需要在与核糖核苷反应前进行最后的试剂蒸馏步骤，这代表了明显的简化。在THEX-Cl与5’-O-保护的核糖核苷的反应中，得到2’-和3’-保护的核糖核苷混合物，从中通过例如色谱方法纯化2’-取代的核糖核苷。在随后的步骤中，根据本领域中公知的方法(Sinha，N.D.等人，Tetrahedron Lett.1983，24，5843；Sinha，N.D.等人，Nucleic Acid Res.1984，12，4539)将纯化的化合物5a的3’-OH转化成亚磷酰胺。
该方法需要使用取代的甲硅烷氧基甲基醚，其中取代基含有烷基、芳基或芳基烷基，并且取代基可被环状连接。在另一实施方案中，该方法可应用于甲硅烷氧基甲基醚，其中至少一个取代基含有至少一个被取代的杂原子，如例如硅、锗、锡、铅、氮、氧、硫。
该反应可在溶液中或固相上或者通过使用聚合物支持的试剂进行。溶剂可以为烃溶剂、醚溶剂、腈溶剂、氯化了的溶剂、杂环溶剂、亚砜溶剂等。适宜的溶剂的特定实例包括吡啶、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、四氢呋喃(THF)、二甲亚砜(DMSO)、乙腈、二氯乙烷和二氯甲烷。优选地，使用二氯乙烷。
尽管反应可以在室温下进行，但是也可以在温度范围为0至150℃、优选10至100℃下进行。
在本发明的另一方面，通过一种新颖而且更优的方法制备本发明化合物，该方法通过反应7→8→9→10→6示例。
该方法通过首先引入2’-O-烷硫基甲基、芳硫基甲基、烷基芳硫基甲基或芳基烷硫基甲基而允许选择性引入2’-OH保护基团。该方法还避免了有机金属途径中描述的无选择性步骤。该新方法通常可应用于选择性地在核糖核苷的2’-OH基团引入氧甲基衍生物并且不限于引入如上所述的保护基。本领域中当前公知的制备受保护的核糖核苷酸的方法如有机金属途径，在引入保护基方面对2’-3’没有选择性。该方法允许在2’位选择性引入甲硫基甲基，从而防止合成方案后期的无选择性步骤。
在该新途径中，使可由下式代表的2’-O-烷硫基甲基-核糖核苷与通式HOSiR4R5R6的硅烷醇反应， 其中R7为烷基或芳基或烷基和芳基的组合。在优选的实施方案中，R7为(C1至C20)-、更优选(C1至C10)-烷基和/或芳基。在另一优选的实施方案中，R7为例如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基、仲丁基、异丁基、仲戊基。硅烷醇的取代基R4、R5和R6是相同或不同的烷基或芳基或烷基和芳基取代基的组合，或者为取代的杂原子，并且这些取代基也可以相互环状连接。在优选实施方案中，三个取代基一起含有3至30个碳原子。
在另一优选实施方案中，在本领域中公知的适宜条件下，使化合物11与其中取代基R4、R5、R6如上所定义的通式HOSiR4R5R6的硅烷醇反应。这些条件包括亲电激活试剂或试剂组合，如但不限于例如N-卤代琥珀酰亚胺和催化量的酸。反应可以在溶液中或固相上或者通过使用聚合物支持的试剂进行。溶剂可以是烃溶剂、醚溶剂、腈溶剂、氯化了的溶剂、杂环溶剂、亚砜溶剂等。适宜溶剂的具体实例包括吡啶、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、四氢呋喃(THF)、二甲亚砜(DMSO)、乙腈、二氯乙烷和二氯甲烷。优选地，使用二氯甲烷。尽管反应可以在室温下进行，但是也可以在温度范围为-78℃至100℃、优选0至50℃下进行。
2’-OH基团处的烷硫基甲基取代基优选含有(C1至C12)烷基和/或芳基基团、优选(C1至C6)-烷基和/或芳基。优选的取代基的实例包括甲硫基甲基、乙硫基甲基、丙硫基甲基、异丙硫基甲基或丁硫基甲基。
以下实施例阐明本发明，但是绝不限制本发明的范围。
实施例1.通过有机金属途径制备THEX结构单元方案1描绘了在5’-O-DMTr尿苷上引入THEX保护基并随后亚磷酸酯化(phosphitylation)的合成方案。
(1，1，2-三甲基-丙基)-二甲基甲硅烷氧基甲基氯(THEX-Cl)的制备将11.1ml(0.15mol)乙硫醇和4.5g(0.15mol)低聚甲醛的悬浮液用2滴NaOMe/MeOH(30％)处理并在40℃搅拌1小时。冷却后，加入150mlCH2Cl2和22.66g(0.333mol)咪唑。10分钟后，滴加32.66g(0.167mol)(1，1，2-三甲基-丙基)二甲基甲硅烷基氯。将所得悬浮液在室温搅拌24小时并用300ml正己烷稀释。加入200ml 2M NaH2PO4溶液后，搅拌(15分钟)并进行相分离，将有机相用Na2SO4干燥并蒸发。将残余物溶于100ml CH2Cl2，用50ml CH2Cl2中的12.3ml(20.4g，0.152mol)磺酰氯逐滴处理。1小时后，蒸发混合物。得到蜡状产物(31.5g)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)0.5(s，6H，SiMe2)；0.65(12H，CH3)；1.40(七重峰，lH，CH)；5.43(s，2H，CH2)。
1-[5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-O-[((1，1，2-三甲基-丙基)-二甲基甲硅烷基)]-氧甲基-β-D-呋喃核糖基]-尿嘧啶(5a)的制备将9.5g(17.4mmol)5’-O-二甲氧基三苯甲基化尿苷(1)于200ml 1，2-二氯乙烷中的溶液用11.23g(87mmol)Huenig氏碱处理，然后用5.81g(19.2mmol)二氯化二丁基锡处理。30分钟后，将混合物加热到80℃，用50ml二氯乙烷中的4.2g(22.6mmol)(1，1，2-三甲基-丙基)-二甲基甲硅烷氧基甲基氯(THEX-Cl)处理并在80℃搅拌2小时。冷却后，用400ml CH2Cl2稀释混合物并加入350ml饱和NaHCO3水溶液。搅拌30分钟后，分离各层并蒸发有机层。用含有0.1％N-甲基吗啉的乙酸乙酯/己烷(3∶1)将残余物在硅胶上层析。得到固态泡沫状产物(4.52g)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)0.1(s，6H，CH3)；0.6-0.8(s和d，12H，CH3)；1.45(m，1H，CH)；3.15(d，2H，CH2)；3.64(s，6H，OCH3)；3.85(q，2H，CH2)；4.05(m，1H，CH)；4.15(m，1H，CH)；4.80(q，2H，CH2)；5.12(d，1H，OH)；5.30(q，1H，CH)；5.78(d，1H，CH)；6.8-5.3(m，13H)；7.6(d.1H)。
1-[5’-O-(4，4’-二甲氧基三苯甲基)-2’-O-[((1，1，2-三甲基-丙基)-二甲基甲硅烷基)]-氧甲基-β-D-呋喃核糖基]-尿嘧啶-3’-(2-氰乙基二异丙基)亚磷酰胺(6)的制备将4.0g(5.56mmol)受保护的尿苷(2)、1.14g(6.68mmol)二异丙基氨基四唑烷(tetrazolid)和2.01g(6.68mmol)二(N，N-二异丙基氨基)-2-氰乙氧基膦于150ml CH2Cl2中的溶液在室温下搅拌24小时。用100ml CHCl2稀释混合物并用50ml饱和NaHCO3水溶液洗涤两次。蒸发经干燥(Na2SO4)的有机相并对残余物进行柱层析(乙酸乙酯/己烷3∶2，以及另外的0.1％N-甲基吗啉)。得到固态泡沫状产物(4.12g)。
31P-NMR(400MHz，CDCl3)151.183(s)和151.537(s)。
2.通过2’-O-甲硫基甲基途径制备THEX结构单元3’，5’-O-二乙酰基-2’-O-甲硫基甲基-尿苷(8)将4.53g(14.8mmol)2’-甲硫基甲基尿苷7(8)于50ml吡啶中的溶液用3.04g(29.7mmol)Ac2O处理。搅拌24小时后，蒸发溶液。将残余物溶于40ml EtOAc、用水洗涤并用Na2SO4干燥。蒸发后，得到纯的标题化合物(5.05g)。
3’，5’-O-二乙酰基-2’-O-[((1，1，2-三甲基-丙基)-二甲基甲硅烷基)-氧甲基]-尿苷(9)将3ml THF中的0.33g(1.47mmol)N-碘代琥珀酰亚胺加入到0.5g(1.287mmol)8、0.978g(6.1mmol)(1，1，2-三甲基-丙基)-二甲基硅烷醇、10mlCH2Cl2和1滴MeOSO3H的溶液中。搅拌2小时后，加入2ml NaHSO3(37％)，然后加入100ml CH2Cl2。分离有机层并用Na2SO4干燥。过滤后，蒸发溶液，得到552mg纯的标题化合物。
2’-O-[((1，1，2-三甲基-丙基)-二甲基甲硅烷基)-氧甲基]-尿苷(10)将187mg(0.37mmol)9、20ml MeOH和0.135ml(0.74mmol)NaOMe/MeOH(30％)的溶液在0℃搅拌30分钟。蒸发后，将残余物通过小硅胶柱(EtOAc/MeOH 4∶1)过滤，得到140mg粉末状10。
3.通过亚磷酰胺化学将6掺入寡脱氧核苷酸中及其快速去保护的方法通常在AB1394自动化DNA合成仪(Applied Biosystems)上进行寡核苷酸合成。将DNA亚磷酰胺、THEX保护的尿苷亚磷酰胺(6)或TOM保护的尿苷亚磷酰胺(Xeragon，Inc.)以5％w/v浓度溶于干燥乙腈中，通过使用三氟甲磺酸苯并咪唑鎓盐(9)于乙腈中的0.2M溶液活化亚磷酰胺以进行偶联。偶联时间为1-5分钟。用标准帽化试剂进行第一次帽化。用THF/水/吡啶(1∶1∶1)中的0.1M碘溶液进行氧化。氧化后进行第二次帽化。用二氯乙烷中的2％二氯乙酸实现下一次偶联前的脱三苯甲基反应。
寡核苷酸链延长完成后，将固相支持体转移到Eppendorf管。
当使用THEX保护的尿苷亚磷酰胺(6)制备时，如下从支持体裂除寡核苷酸并对其去保护1.32％氨水/EtOH 3∶1(250μl，对于0.2μmol级)，室温，冻干2小时至干燥。
2.THF中的1M四丁基氟化铵(250μl，对于0.2μmol级)，室温30分钟。
3.1M Tris.HCl，pH＝7.4(250μl，对于0.2μmol级)。
当用TOM保护的尿苷亚磷酰胺制备时，如下从支持体裂除寡核苷酸并对其去保护
1.32％氨水/EtOH 3∶1(250μl，对于0.2μmol级)，室温，冻干2小时至干燥。
2.THF中的1M四丁基氟化铵(250μl，对于0.2μmol级)，室温6小时。
3.1M Tris.HCl，pH＝7.4(250μl，对于0.2μmol级)。
所得粗溶液通过毛细管凝胶电泳分析。
结果在表1中概述。
如表1和

图1-4中所示，用THEX保护的尿苷亚磷酰胺6和TOM保护的尿苷亚磷酰胺所得粗物质的量非常类似。
2’-O-THEX保护基策略的使用使得2’去保护从35℃6小时(如参考文献6中所报导)降低至室温30分钟。
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权利要求
1.下式的核糖核苷衍生物， 其中R1为嘌呤-或嘧啶-家族的碱基或者这种碱基的衍生物或者用作核碱基替代物的任一其他残基，R2为质子或膦酸的取代衍生物，R3为质子或5’-位氧原子的保护基，R4、R5和R6独立地为烷基或芳基或烷基和芳基的组合或杂原子，R4、R5或R6也可以相互环状连接；并且其中至少R4、R5或R6取代基之一含有位于Si原子邻位的叔碳原子或杂原子。
2.根据权利要求1的核糖核苷衍生物，其中含有位于Si原子邻位的叔碳原子的取代基含有4至24个碳原子。
3.根据权利要求1或2的核糖核苷衍生物，其中含有位于Si原子邻位的叔碳原子的取代基为选自叔丁基、叔戊基、叔己基、叔庚基、叔辛基、叔壬基、叔癸基、叔十一烷基、叔十二烷基的烷基取代基。
4.根据权利要求1、2或3的核糖核苷衍生物，其中含有位于Si原子邻位的叔碳原子的取代基选自1，1-二甲基-乙基、1，1-二甲基-丙基、1，1-二甲基-丁基、1，1-二甲基-戊基、1，1-二甲基-己基、1，1，2-三甲基-丙基、1，1，2-三甲基-丁基、1，1，2-三甲基-戊基、1，1，2-三甲基-己基、1，1，2，2-四甲基-丙基、1，1，2，2-四甲基-丁基。
5.根据权利要求1的核糖核苷衍生物，其中位于Si原子邻位的取代基含有被取代的杂原子。
6.根据权利要求5的核糖核苷衍生物，其中位于Si原子邻位的取代基含有被取代的二价杂原子。
7.根据权利要求6的核糖核苷衍生物，其中杂原子为氧。
8.制备根据权利要求1的核糖核苷衍生物的方法，该方法包括使下式的核苷 其中R1和R3如权利要求1中所定义，与下式的甲硅烷氧基甲基衍生物反应， 其中Y为适宜的离去基团，并且其中R4、R5和R6独立地为烷基或芳基或烷基和芳基的组合或杂原子，R4、R5或R6也可以相互环状连接。
9.权利要求8的方法，其中Y为卤素。
10.权利要求8或9的方法，其中R4、R5和R6一起含有3至30个碳原子。
11.权利要求8或9的方法，其中R4、R5或R6含有至少一个位于Si原子邻位的取代杂原子。
12.权利要求11的方法，其中杂原子为二价原子。
13.权利要求12的方法，其中杂原子为氧。
14.权利要求11、12或13的方法，其中核糖核苷衍生物进一步在3’-位的氧上被由膦酸衍生物组成的基团取代。
15.制备核糖核苷衍生物的方法，该方法包括使下式的核糖核苷衍生物 经亲电活化与下式化合物反应， 其中R1如权利要求1所定义且R7为烷基或芳基或烷基-芳基基团，其中R2为保护基，其中R3为保护基，其中R4、R5和R6为相同或不同的烷基或芳基或烷基和芳基的组合，其可进一步被杂原子取代且可相互环状连接。
16.权利要求15的方法，其中R4、R5和R6如权利要求1至7所定义。
17.权利要求15或16的方法，其中核糖核苷衍生物进一步在3’-位的氧上被由膦酸衍生物组成的基团取代。
全文摘要
本发明提供了具有新保护基的核糖核苷衍生物和制备这些核糖核苷衍生物的方法。该核糖核苷衍生物的通式(I)为其中R
文档编号C07F7/00GK1714097SQ200380103820
公开日2005年12月28日 申请日期2003年11月21日 优先权日2002年11月22日
发明者F·J-C·纳特, J·亨齐克, J·哈尔, P·马丁 申请人:诺瓦提斯公司