专利名称：岩白菜素异戊烯基衍生物及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明属于药物合成领域，具体涉及一种岩白菜素异戊烯基衍生物及其制备方法 和应用。
背景技术：
岩白菜素(bergenin)又称矮地茶素、矮茶素、虎耳草素、佛手配质等。在虎耳草科 和紫金牛科许多植物中有广泛的分布，而且含量较高，《中华人民共和国药典》1990版一部 即收载岩白菜素为镇咳药，用于慢性支气管炎的治疗。近年来有报道岩白菜素有抗炎、护 肝、抗HIV病毒及提高免疫作用，但现代药理实验也表明岩白菜素也有药效作用不强，口服 吸收差(口服1小时后尿中可见原形药物)，抗感染能力弱等缺点(王刚等，安徽中医学院 学报，2002，6，59-62.)。
发明内容
本发明针对岩白菜素的抗病毒作用不强及口服吸收差的缺点，提供一种岩白菜素 异戊烯基衍生物，它以岩白菜素为先导化合物，利用醚化反应，封闭部分母体的羟基，使其 亲脂性增强，由于改变了油水分配系数，有利于肠道吸收，因而提高疗效。本发明还公开了该岩白菜素异戊烯基衍生物的制备方法。本发明的岩白菜素异戊烯基衍生物具有下述结构式I或II 本发明的岩白菜素异戊烯基衍生物的制备方法是按下述步骤操作的将1份摩尔 量的先导化合物岩白菜素与2 5份摩尔量的溴代异戊烯和3 4份摩尔量的碳酸钾溶于 反应溶剂无水丙酮中，利用取代反应，于40 80°C加热搅拌，反应12 48小时。待反应完 全后回收溶剂，样品经硅胶层析分离，分别以体积比为95 5的氯仿-甲醇洗脱液和体积 比为90 10的氯仿-甲醇洗脱液，收集洗脱液，减压浓缩得到岩白菜素异戊烯基衍生物化合物I (5、7_ 二异戊烯基岩白菜素)和化合物II (5-异戊烯基岩白菜素)。本发明的制备方法中减压浓缩可以采用本领域中常规的减压浓缩方法，采用减压 泵进行减压；反应溶剂无水丙酮用量为本领域常规使用的剂量，其中溶剂丙酮的使用量不 影响本发明技术方案的实施效果，亦可以采用其它有机溶剂代替丙酮。具体反应结构式如下 R1 =异戊烯基，R2 = H，5-异戊烯基岩白菜素Rl = R2 =异戊烯基，5，7_ 二异戊烯基岩白菜素本发明还公开了岩白菜素异戊烯基衍生物在制备抗乙肝病毒药物中的应用。本发 明得到的岩白菜素异戊烯基衍生物的抗乙肝病毒用途，与空白组相比，药理体外实验表明 具有显著的抑制2. 2. 15分泌HBsAg、HBeAg的作用。本发明以岩白菜素为先导化合物，利用醚化反应，封闭母体上5位和7位上的羟 基，使其亲脂性增强，由于改变了油水分配系数，有利于肠道吸收，因而提高疗效。
具体实施例方式实施例1称取岩白菜素330mg(0. 001摩尔)置于150mL反应瓶中，加入碳酸钾 500mg(0. 0036摩尔)、溴代异戊烯600mg(0. 004摩尔)、无水丙酮30mL，加热至50°C后保温 回流反应18小时，待反应结束后减压回收溶剂。样品经硅胶层析分离，用体积比为95 5 的氯仿-甲醇洗脱，得到化合物I (5、7_ 二异戊烯基岩白菜素)的洗脱液，用体积比为 90 10的氯仿-甲醇洗脱，得到化合物II (5-异戊烯基岩白菜素)的洗脱液。洗脱液经薄 层层析检测，合并相同组分后再减压浓缩得到两个岩白菜素异戊烯基衍生物I (5、7_ 二异 戊烯基岩白菜素，约190mg)和II (5-异戊烯基岩白菜素，约lOOmg)。实施例2称取岩白菜素1. 6g (0. 005摩尔)置于250mL反应瓶中，加入碳酸钾2. 5g (0. 018摩 尔)、溴代异戊烯3. 6g(0. 024摩尔)、无水丙酮150mL，加热至60°C并保温回流反应24小时 后，待反应结束后减压回收溶剂。样品经硅胶层析分离，用体积比为95 5的氯仿-甲醇洗 脱，得到化合物I (5、7_ 二异戊烯基岩白菜素)的洗脱液，用体积比为90 10的氯仿-甲 醇洗脱，得到化合物II (5-异戊烯基岩白菜素)的洗脱液。洗脱液经薄层层析检测，合并相 同组分后再减压浓缩得到两个岩白菜素异戊烯基衍生物I (5、7_ 二异戊烯基岩白菜素，约 800mg)和II (5-异戊烯基岩白菜素，约450mg)。实施例3
称取岩白菜素3. 3g (0.01摩尔)置于500mL反应瓶中，加入碳酸钾5. Og (0.036摩 尔)、溴代异戊烯7. 5g(0. 05摩尔)、无水丙酮300mL，加热至70°C并保温回流反应36小时 后，待反应结束后减压回收溶剂。样品经硅胶层析分离，用体积比为95 5的氯仿-甲醇洗 脱，得到化合物I (5、7_ 二异戊烯基岩白菜素)的洗脱液，用体积比为90 10的氯仿-甲 醇洗脱，得到化合物II (5-异戊烯基岩白菜素)的洗脱液。洗脱液经薄层层析检测，合并相 同组分后再减压浓缩得到两个岩白菜素异戊烯基衍生物I (5、7_ 二异戊烯基岩白菜素，约 1450mg)和II (5-异戊烯基岩白菜素，约920mg)。实施例4称取岩白菜素6. 6g (0. 02摩尔)置于IOOOmL反应瓶中，加入碳酸钾9. Og (0. 065摩 尔)、溴代异戊烯14. Og (0. 09摩尔)、无水丙酮600mL，加热至80°C并保温回流反应48小时 后，待反应结束后减压回收溶剂。样品经硅胶层析分离，用体积比为95 5的氯仿-甲醇洗 脱，得到化合物I (5、7_ 二异戊烯基岩白菜素)的洗脱液，用体积比为90 10的氯仿-甲 醇洗脱，得到化合物II (5-异戊烯基岩白菜素)的洗脱液。洗脱液经薄层层析检测，合并相 同组分后再减压浓缩得到两个岩白菜素异戊烯基衍生物I (5、7_ 二异戊烯基岩白菜素，约 2. Ig)和II (5-异戊烯基岩白菜素，约1.6g)。实施例5称取岩白菜素6. 6g(0. 02摩尔)置于IOOOmL反应瓶中，加入碳酸钾8. 28g(0. 06 摩尔)、溴代异戊烯6. 22g(0. 06摩尔)、无水丙酮600mL，加热至40°C并保温回流反应48小 时后，待反应结束后减压回收溶剂。样品经硅胶层析分离，用体积比为95 5的氯仿-甲 醇洗脱，得到化合物I (5、7_ 二异戊烯基岩白菜素)的洗脱液，用体积比为90 10的氯 仿-甲醇洗脱，得到化合物II (5-异戊烯基岩白菜素)的洗脱液。洗脱液经薄层层析检测， 合并相同组分后再减压浓缩得到两个岩白菜素异戊烯基衍生物I (5、7_ 二异戊烯基岩白 菜素，1.8g)和II (5-异戊烯基岩白菜素，1.4g)。实施例6称取岩白菜素6. 6g(0.02摩尔)置于IOOOmL反应瓶中，加入碳酸钾11. 04g(0. 08 摩尔)、溴代异戊烯7. 77g(0. 05摩尔)、无水丙酮600mL，加热至80°C并保温回流反应12小 时后，待反应结束后减压回收溶剂。样品经硅胶层析分离，用体积比为95 5的氯仿-甲 醇洗脱，得到化合物I (5、7_ 二异戊烯基岩白菜素)的洗脱液，用体积比为90 10的氯 仿-甲醇洗脱，得到化合物II (5-异戊烯基岩白菜素)的洗脱液。洗脱液经薄层层析检测， 合并相同组分后再减压浓缩得到两个岩白菜素异戊烯基衍生物I (5、7_ 二异戊烯基岩白 菜素，1.8g)和II (5-异戊烯基岩白菜素，约1.4g)。岩白菜素异戊烯基衍生物I (5、7_ 二异戊烯基岩白菜素)的光谱数据FAB二MS 463 (100) [M+-H]，395 (45) [M+-H-C5H8]，327 (21) [M+-H-C5H8-C5H8]。1H-WR(MeODJOOMHz) :7· 44 (1H，s，H—4)，5. 57 (1H，t，J = 15. 4，H—2”)，5. 56 (1H， t, J = 14·6，Η-2”，)，3· 90 (3Η, s, OCH3), 3. 30 (1Η, s，H_l，), 1. 86 (9H, s，3XCH3)，1· 64 (3H， s, CH3)。13C-NMR(MeOD, 125MHz) 13C-NMR(MeOD, 125MHz) :165· 9(s，C_2)，154. 0(s, C_5)， 151. 2 (s，C-7)，150. 6 (s, C_6)，139. 9 (s, C_3” )，139. 3 (s, C_3”，)，127. 9 (s, C_8)，121. 7 (d, C-2”)，120. 3 (d, C-2”，)，120. 2 (s, C_3)，112. 5(d, C_4)，82. 5(d，C_5，) ,81. 7(d, C_2，)，75. 9 (d, C-3，) ,73. 4(d, C-1，) ,71. 9(d, C_4，)，71· 3(t，C_l”，)，66· 9(t，C_l”)，62. 3 (t， C-6，)，61. 6 (s，OCH3)，25. 9 (CH3)，25. 8 (CH3)，18. 3 (CH3)，18. 1 (CH3)。岩白菜素异戊烯基衍生物II (5-异戊烯基岩白菜素)的光谱数据FAB二MS 395 (100) [M+-H]，327 (25) [M+-H-C5H8]。1H-WR(MeODJOOMHz) :7· 33 (1H，s，H-4)，5. 46 (1H，t，J = 15. 4，H-2”)，3. 85 (3H， s, OCH3), 3. 31 (1H, s，H-l，), 1. 79 (3H, s，CH3)，1. 78 (3H，s，CH3)。13C-NMR (MeOD，125MHz) 165. 8(s, C_2)，153. 9 (s，C_5)，149. 5 (s，C_7)，143. 8 (s， C-6)，139. 8(s，C-3”)，120. 4(d，C_2”)，119. 2(s，C_8)，119. 1 (s, C-3)，108. 6 (d, C_4)， 82. 9 (d, C-5，) ,81. 7(d, C_2，) ,75. 5(d, C_3，) ,74. 0(d, C-Γ ) ,71. 8(d, C_4，) ,66. 9(t, C-1”)，62. 6 (t，C-6，) ,61. 1 (s, OCH3)，25. 9 (CH3)，18. 3 (CH3)岩白菜素异戊烯基衍生物在抗乙肝病毒方面的作用是通过体外药理实验得到证 实的。实验岩白菜素异戊烯基衍生物体外抗乙肝病毒活性研究仪器培养板(美国Coming公司)、二氧化碳培养箱(美国Shel-lab公司)、超净 工作台(上海精密仪器仪表有限公司)。试药按照本发明的制备方法制得5-异戊烯基岩白菜素和5、7_ 二异戊烯基岩 白菜素，实验时药物用细胞培养液配成所需浓度；HBsAg、HBeAg检测试剂盒由厦门英科新 创科技有限公司提供(批号20080632)；阳性对照药拉夫米定购自葛兰素威康制药公司； 2. 2. 15细胞株购自中国医学科学院医药生物技术研究所。方法将2. 2. 15细胞计数并调整为1 X IO5个mL—1细胞，接种于24孔板，每孔lmL， 于37°C，5% CO2培养。培养24小时后加5-异戊烯基岩白菜素和5、7_ 二异戊烯基岩白菜 素及阳性对照药拉夫米定于24孔板，每浓度3孔，第四天换相同浓度的药物，继续培养4 天。加药后第8天分别收集细胞上清液及2. 2. 15细胞，采用酶联免疫法检测细胞上清液中 HBsAg、HBeAg的吸光度(0D值)。抗原抑制率按下式计数药物对抗原的抑制率=[(细胞 组OD-给药组0D) /细胞组0D] X 100 %。实验数据均以x±s表达。采用组间比较的t检验方法进行显著性检验。统计软 件采用Excel分析处理。结果5_异戊烯基岩白菜素和5、7_ 二异戊烯基岩白菜素都显著性地抑制2. 2. 15 细胞HBsAg、HBeAg的分泌量(P < 0. 05或P < 0. 01，与空白组对比)，略低于阳性对照药 拉夫米定，而母体化合物岩白菜素只有微弱的类似作用。2. 2. 15细胞株系国内最为常用的 体外抗乙肝病毒实验模型，是一个产生高水平HBsAg、HBeAg的细胞克隆。HBsAg是乙肝病 毒的外壳部分，是乙肝病毒早期诊断的指标之一，人感染乙肝病毒后，人外周血中就会出现 HBsAg。HBeAg是乙肝病毒核心成分之一，是乙肝病毒复制的重要指标，它的大小可以判断传 染性大小。从实验结果来看，5-异戊烯基岩白菜素和5、7_ 二异戊烯基岩白菜素具有成为治 疗乙型肝炎药物的潜力。具体实验数据见下表(与空白组比较*P < 0. 05，< 0. 01)
权利要求
一种岩白菜素异戊烯基衍生物，其特征在于化合物具有下述结构式Ⅰ或ⅡF2009100647260C0000011.tif
2.权利要求ι所述的岩白菜素异戊烯基衍生物的制备方法，其特征在于该方法包括 以下步骤以干燥后的无水丙酮为反应溶剂，加入一定量的岩白菜素、碳酸钾、溴代异戊烯， 加热回流反应，待反应完全后回收溶剂，样品经硅胶层析分离，氯仿-甲醇梯度洗脱得到两 个新的岩白菜素异戊烯基衍生物I和II。
3.根据利要求2所述的岩白菜素异戊烯基衍生物的制备方法，其特征在于该方法是 按下述步骤操作的以无水丙酮为反应溶剂，加入1份摩尔量的岩白菜素、2 5份摩尔量 的溴代异戊烯、3 4份摩尔量的碳酸钾，加热至40°C 80°C并保温回流12 48小时；待 反应完全后回收溶剂，样品经硅胶层析分离，分别以体积比为95 5的氯仿-甲醇洗脱液 和体积比为90 10的氯仿-甲醇洗脱液，收集洗脱液，减压浓缩得到岩白菜素异戊烯基衍 生物化合物I和化合物II。
4.权利要求1所述的岩白菜素异戊烯基衍生物在制备抗乙肝病毒药物中的应用。
全文摘要
一种岩白菜素异戊烯基衍生物及其制备方法和应用。化合物具有下述结构式Ⅰ或Ⅱ其合成方法为为先导化合物岩白菜素在无水丙酮中与溴代异戊烯发生醚化反应，然后经硅胶层析分离得到产品化合物。本发明的岩白菜素异戊烯基衍生物Ⅰ和Ⅱ具有抗乙型肝炎病毒的作用。
文档编号C07D493/04GK101870701SQ20091006472
公开日2010年10月27日 申请日期2009年4月27日 优先权日2009年4月27日
发明者余海尤, 申进文, 阮元, 麻兵继 申请人:河南农业大学