嗜线虫致病杆菌拒食蛋白质及其基因序列和该拒食蛋白及其基因的用途的制作方法

专利名称：嗜线虫致病杆菌拒食蛋白质及其基因序列和该拒食蛋白及其基因的用途的制作方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域，特别涉及一种对农作物害虫有拒食作用的来自嗜线虫致病杆菌北京变种(Xenorhabdus nematophilus var.pekingensis)CB6菌株的蛋白质的氨基酸序列及编码该蛋白质的核苷酸序列。

背景技术：
致病杆菌属(Xenorhabdus)是存在于斯氏线虫属(Steinernema)的昆虫病原线虫肠道内的共生细菌，属革兰氏阴性菌。在自然条件下，共生菌与线虫共同作用，破坏寄主防御系统，最后杀死昆虫。在此过程中，共生菌能产生许多有应用潜力的代谢产物，如毒素蛋白质、抗生素、胞外酶等，因此从该类特异生境细菌中寻找具有新活性、新功能的有效物质已成为国内外科学家关注的热点。
目前，国内外已从嗜线虫致病杆菌(Xenorhabdus nematophilus)中分离到多种昆虫毒蛋白质或毒素，如英国科学家Morgan等利用柯斯质粒对X.nematophilus PMFI296菌株基因组文库进行研究，克隆了5个杀虫蛋白质基因(xptA1，xptA2，xptB1，xptC1，xptD1)(Morgan et al.，Appl Environ Microb，67(5)，2062-9，2001)，基因功能研究表明，xptA1编码的蛋白质对欧洲粉蝶(Pieris brassicae)有杀虫活性，而xptA2编码的蛋白质对烟芽夜蛾(Heliothis virescens)有杀虫活性(Sergeant et al.，Appl Environ Microb，69(6)，3344-9，2003；)；国内中山大学崔龙等从X.nematophilus BP品系的粘粒文库中筛选到含有杀虫蛋白质基因的阳性克隆并研究了其功能(崔龙等，中山大学学报(自然科学版)，42(3)，47-50，2003；崔龙等，微生物学报，43(6)，747-52，2003)；广东省昆虫研究所韩日畴等在嗜线虫致病杆菌的细菌培养液中也发现了对小菜蛾有拒食作用的物质(专利号ZL01130078.7)。所有已公开发表的文献表明，嗜线虫致病杆菌产生的蛋白质对昆虫有毒杀作用，或产生的培养液对昆虫有拒食作用，但未发现能抑制农作物害虫幼虫生长的蛋白质，更没有明确这类蛋白质或其编码蛋白质的基因序列。


发明内容
本发明的目的是提供一种抑制农作物害虫幼虫生长的嗜线虫致病杆菌拒食蛋白质及其基因序列和该拒食蛋白及其基因的用途。
为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案 一种嗜线虫致病杆菌拒食蛋白质，其中，其氨基酸序列如SEQ ID NO2所示。
本发明所述的嗜线虫致病杆菌拒食蛋白质在制备抑制农作物害虫幼虫生长药物中的应用。
本发明所述的嗜线虫致病杆菌拒食蛋白质在制备抑制农作物害虫幼虫生长药物中的应用，其中，所述的农作物害虫幼虫为棉铃虫、小菜蛾、玉米螟和甜菜夜蛾。
一种编码本发明所述的嗜线虫致病杆菌拒食蛋白质的基因，其中，其核苷酸序列如SEQID NO1所示。
本发明所述的嗜线虫致病杆菌拒食蛋白质基因用于转基因植物的培育。
本发明所述的嗜线虫致病杆菌拒食蛋白质基因用于转基因植物的培育，其中，所述的植物为烟草。
本发明的所述的嗜线虫致病杆菌拒食蛋白质，是指来自人工培养的嗜线虫致病杆菌北京变种(Xenorhabdus nematophilus var.pekingensis)CB6菌株的培养液、培养液的上清液或菌体的蛋白质。该菌种已经在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心进行了保藏，地址北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所，邮政编码100101，登记入册编号CGMCC No1173，分类命名为Xenorhabdus nematophilus var.pekingensis。
本发明的优点为，1、该种蛋白质可以明显的抑制农作物害虫幼虫的生长，浓度低起效快，而且对其发育成成虫的过程也产生影响，在农业生产上有广泛的应用前景。2、该蛋白质的基因可以作为目的基因导入植物，提高植物抗虫性，以改良植物品种。

具体实施例方式 下面通过具体实例进一步说明本发明特点。
实施例1嗜线虫致病杆菌的培养及发酵液的制备 将嗜线虫致病杆菌北京变种(Xenorhabdus nematophilus var.pekingensis)CB6菌株划线接种于NBTA营养琼脂45g(北京奥博星生物技术有限责任公司)，溴百里香酚蓝0.025g(天津市科密欧化学试剂开发中心，分析纯)，氯化三苯四氮唑0.04g(美国Amresco，分析纯)，加去离子水至1L平板，28℃培养48h，挑选蓝色单菌落接种于5mL盛有LB胰化蛋白质胨10g(Oxoid)，酵母提取物5g(Oxoid)，氯化钠10g(北京化工厂，分析纯)，加去离子水至1L液体培养基的试管中，28℃、180r/min振荡24h作为种子培养液；按1％比例将种子液接种于500mL的LB液体培养基中，相同条件下培养24～36h，得到CB6菌株的发酵液。
实施例2嗜线虫致病杆菌总蛋白质的提取及生物活性测定 取实施例1所得的嗜线虫致病杆菌北京变种CB6菌株的发酵液，在4℃、5000rpm条件下离心10分钟，收集菌体在冰浴下用超声波破碎仪(Sonics VCX500)破碎菌体细胞(振幅25％，破碎4s，间隔4s，破碎20min)，离心去除菌体碎片，取上清液，加入硫酸铵粉末，使所述上清液中硫酸铵终浓度为55％以沉淀目标蛋白质，4℃透析48h，最后将菌株的总蛋白质溶解到PBS缓冲液(pH7.0)中，蛋白质终浓度为50μg/mL。蛋白质含量用BCATM protein assaykit(Thermo Scientific)经GF-M2000型酶标仪(山东高密彩虹分析仪器有限公司)在波长590nm处测定。
总蛋白质生物活性测定以棉铃虫[Helicoverpa armigera(Hubner)]初孵幼虫为试虫，以PBS缓冲液为对照，将蛋白质样品和人工饲料(玉米粉120g，黄豆粉60g，啤酒酵母54g，白糖30g，对羟基苯甲酸甲酯1.1g，山梨酸1.1g，6％醋酸24mL，10％甲醛10mL，18％KOH 10mL，抗坏血酸3.75g，琼脂10g，自来水700mL，多种维生素营养液10mL。)按1∶10的比例混合均匀，分装于24孔生测板中，每孔放1头幼虫，覆盖一层保鲜膜和两层纸巾，盖上盖。每批处理24头幼虫，置于(26±1)℃、14h光照的生化培养箱中。120h时称量活虫体重，并按以下公式计算生长抑制率。
生长抑制率(％)＝[(对照组幼虫平均体重-处理组幼虫平均体重)/对照组幼虫平均体重]×100 实验表明，50μg/mL总蛋白质对棉铃虫初孵幼虫的生长抑制率为95％。
实施例3拒食蛋白质的分离纯化及生物活性测定 使用AKTA explore 10(GE Healthcare)蛋白质纯化仪对所得的总蛋白质进行进一步纯化，样品首先通过DEAE Sepharose FF离子交换柱(GE Healthcare)，用NaCl进行梯度洗脱(0，15，30，45，60和100％)，获得到5个蛋白质洗脱峰，并按实施例2所述方法进行生物测定，结果表明，第二个蛋白质峰对棉铃虫初孵幼虫具有较强的抑制作用；该蛋白质峰再通过Butyl FF疏水层析柱(GE Healthcare)和Sephacryl S-200凝胶层析柱(GEHealthcare)进一步纯化，得到有活性的单一蛋白质峰，该单一蛋白质峰经5％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(native-PAGE)(Sigma)检测为单一带，说明蛋白质纯度高。该蛋白质表观分子量为284kD(pI＝5.19)，在浓度范围为2-6μg/mL内对棉铃虫初孵幼虫的生长抑制率为85-95％。
以上结果说明，该纯化蛋白质对棉铃虫具有拒食活性，将此拒食蛋白质命名为XnAFP2(Xenorhabdus nematophilus antifeeding protein 2)。
以小菜蛾[Plutella xylostella(L.)]3龄幼虫、玉米螟[Ostrinia furnacalis(Guenee)]3-4龄幼虫和甜菜夜蛾[Spodoptera exigua(Hübner)]1龄幼虫为试虫，用上述同样方法测试XnAFP2纯化蛋白质的生物活性，结果表明，XnAFP2对以上3种试虫同样有拒食作用，数据如下。
XnAFP2对小菜蛾3龄幼虫生长的抑制率 XnAFP2对玉米螟3-4龄幼虫生长的抑制率 XnAFP2对甜菜夜蛾1龄幼虫生长的抑制率 实施例4XnAFP2对棉铃虫5龄幼虫的拒食作用 采用叶碟法测定蛋白质XnAFP2对棉铃虫的拒食作用取洗净的小白菜叶片(4.0cm×4.0cm)，将其浸泡在蛋白质溶液中60秒，取出并晾干，将其放入培养皿中；对照叶片浸泡pH7.0的PBS缓冲液。分选择性拒食和非选择性拒食两种方法测定 1.选择性测定在每个培养皿中加入4片叶片，2片浸泡蛋白质的叶片(相对方向放置)和另2片对照叶片(相对方向放置)，然后往每个培养皿接入5龄棉铃虫1头。每处理设5个重复。12小时和24小时后分别测量叶蝶被取食的面积，计算选择性拒食率。
选择性拒食率(％)＝(对照组取食面积-处理组取食面积)/(对照组取食面积+处理组取食面积)×100 结果如下表。

*表中不同字母表示在ρ＜0.01水平时的差异显著性。
2.非选择性测定在培养皿中加入1片浸泡蛋白质的小白菜叶片(6cm)，另1片同样大小的对照叶片放入另一培养皿中，然后往每个培养皿接入5龄棉铃虫1头。每处理设5个重复。测量实验12小时和24小时后叶片被取食的面积。计算非选择性拒食率。
非选择性拒食率(％)＝(对照组取食面积-处理组取食面积)/对照组取食面积×100 结果如下表。

*表中不同字母表示在ρ＜0.05水平时的差异显著性。
实验证明，无论是在选择性测定还是在非选择性测定中，XnAFP2蛋白质对棉铃虫都具有强烈的拒食作用。
实施例5XnAFP2对棉铃虫幼虫生长发育的影响 实施例4所述的XnAFP2对棉铃虫的拒食作用，导致幼虫不生长，甚至部分幼虫死亡；即使幼虫存活也表现发育不良，发育历期延长，难以化蛹；即使幼虫化蛹，其蛹多为畸形发育，蛹重偏低，难以羽化或成虫致畸展翅不良。
实施例6拒食蛋白质XnAFP2肽段序列的获得 纯化的XnAFP2蛋白质经变性聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)检测，切取蛋白质单带分别经10ng/μl测序级修饰胰蛋白质酶(Sequencing Grade Modified Trypsin，Promega)30℃、pH7.5酶解30min～1h，10ng/μl凝乳蛋白质酶(Sigma)37℃、pH8.0酶解2h，10ng/μl V8酶(Roche)25℃、pH7.5酶解2～12h后，采用基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)(Autoflex II，Bruker)获得该蛋白质的多个肽段序列，总计近1000个氨基酸长度，这些序列和质谱库中Xenorhabdus nematophilus的序列相匹配，覆盖了其40％的序列。以下用黑体(下划线)表示的为一致的肽段序列 1

ISPTR
51

KNN RLLEARIFTR ANPQLSGAIR LGIERDSVSR
101

EAK

RPDLADLTL 151 SQSNMDTEIS TLTLSNELLL EPITR
201

NPEVMGQA EGASLLAILA NISPELYNIL 251 TEEITEK
301

LEAY KITRVKTDDY DKHVNYFDLM 351 YEGNNQFFIC ANFKISREFG ATLRKNSGTS GIVGSLSGPL VANTNFKSNY 401 LSNISDNEYR NGVKIYAYR

LNK 451 AIR

SDNAQGIIND SVLTK

YALSF 501 DDAQVLNGSV INQYADDDSV SHFNRLFNTP PLKGK
551

SAL MRGLGINSGE LYQLGKLAGV LDTQNILTLS VPVISSLYRL 601 TLLARAHQLT VNELCMLYGF SPFNGKTTAS LSSGELSRLV IWLYQVTQWL 651 TEAEITTEAI WLLCTPEFSG NISPEISNLL NTLRPRISED MAQSSDR
701

YILLWTDNL RPGGLNIAGF MMLVLKETLS 751 DEETTQLVQF CHVMAQLSLS VQTLRLSEAE LSVLVISDFV VLGARSQPPD 801 NTILILCSHS TDSTSGLMGW EIPALTRWIC CAKQTLTGDR LGLRDGAGHQ 851 YGNAGHGSAG VNQLQCWQDI NPVLQWIHVA SALITMPSVI RTLVNIRYVT 901 ALNKAESNLP AWDKWQTLAE NMAAGLSTQQ AQTLADYTAE RLSSVLCNWF 951 LANIQPEGVS LHSRDDLYSY FLIDNQVSSA IKTTR

A 1001 LNRIEPNARA DVSTR

I 1051 GQTRMMDELL ENISQSQLSR DTVEEAFKTY LTRFETVADL K
1101

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1151

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1201

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1301

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1451

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1601
1651

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1701

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1751

NIKKYKGFL NVSIATGYSA PMDFNSASAL 1801 YYWELFYYTP MMCFQRLLQE KQFDEATQWI NYVYNPAGYI VNGEIAPWIW 1851 NCRPLEETTS WNANPLDAID PDAVAQYDPT HYKVATFMR

GDM 1901 AYRELTRDAL NEAKMWYVRA LELLGDEPED YGSQQWAAPS LSVAASHTVQ 1951 AAYQQDLTAL DNGEVATQPR

LRLFN 2001 LR

ALLPSM VQASQGGSAV LPGTLSLYR
2051

ARNL VAQLTQFGTS LLSMAEHDDA DELTTLLLQQ GMELATQSIR 2101 IQQRTVDEVD ADIAVLAESR RSAQNRLEK

AMSLFD 2151 AAAGQSLAGQ ALSVAEGVAD LVPNVFGFAC GGSRWGAALR
2201

I SRSEAYRR

DNA DGEVK

IRR
2251

KFTNK

GKLS AIYYQFFDLT 2301 QSFCLMAQEA LRR

GGAWNG TTAGLMAGET LLLNLAEMEK 2351 VWLERDERAL EVTR

LTQFL R
2401

LSNR

LSDL KIFSDYPESF GNTRQLK
2451

GCS AIALSHGVND SGQFMLDFND SRYLPFEGIS 2501 VNDSGSLTLS FPDATDRQK

YTIRS 实施例7拒食蛋白质XnAFP2编码基因的克隆 根据质谱测序结果和密码子的简并性设计26对引物，经筛选试验最终选定引物XnAFP2-ES-P15’-CGGAATTCATGTATAGCACGGCTGTATTACTCA-3’和XnAFP2-ES-P25’-ACGTCGACTTAAGAACGAATGGTATAGCGGATA-3’，并以CB6菌株总DNA为模板，进行PCR(94℃3min；94℃30s，55℃30s，72℃8min，35cycles；72℃10min；4℃∝)，扩增出7591bp的DNA片段，其中包括7575bp的完整开放阅读框，将其命名为xnAFP2基因，该基因的顺序如SEQ ID NO1所示。
实施例8转拒食蛋白质基因xnAFP2烟草的培育 设计拒食蛋白质基因xnAFP2的特异性引物，引入酶切位点和酶切保护碱基，正向引物5’-CGGAATTCATGTATAGCACGGCTGTATTACTCA-3’(下划线为Eco RI的酶切序列)，反向引物5’-ACGTCGACTTAAGAACGAATGGTATAGCGGATA-3’(下划线为Sal I的酶切序列)，扩增全长xnAFP2基因(94℃3min；94℃30s，55℃30s，72℃8min，35cycles；72℃10min)。先将xnAFP2基因目的片段克隆到pEASY-T1 simple载体，经Eco RI和Sal I酶切后，将xnAFP2片段克隆到pET28a载体的Eco RI/Sal I位点，再用Bam HI和Sal I将xnAFP2片段切下，克隆到pCAMBIA2300-35S-OCS载体的Bam HI/Sal I位点，得到用于转化的植物表达载体pCAMBIA2300-xnAFP2。通过冻融法将pCAMBIA2300-xnAFP2转化根癌农杆菌(Agrobactrium tumefaciens)菌株LBA4404。
以烟草(三生烟Nicotiana tobacum cv.Samsun NN)叶盘为外植体诱导愈伤组织用于根癌农杆菌LBA4404浸染，经共培养，分化，得到具卡那霉素(100μg/ml)抗性的转化子。通过PCR检测确认了阳性烟草转化子，用Southern杂交进一步证实了xnAFP2基因已整合到受体烟草基因组，用RT-PCR和Northern杂交验证了xnAFP2基因在烟草中的转录，用Western杂交证实了xnAFP2基因的表达。
生物活性测定采用实施例4中非选择性方法测定转基因烟草对棉铃虫的拒食效果，并计算拒食率。
结果如下。

序列表
<110>中国农业科学院植物保护研究所
<120>嗜线虫致病杆菌拒食作用蛋白质及基因序列
<150>CN200810134596.9
<151>2008年7月30日
<160>2
<170>PatentIn version 3.1
<210>SEQ ID NO1
<211>7575
<212>DNA
<213>嗜线虫致病杆菌北京变种(Xenorhabdus nematophilus var.pekingensis)CB6菌株
<400>1
ATGTATAGCA CGGCTGTATT ACTCAATAAA ATCAGTCCCA CTCGCGACGG TCAGACGATG 60
ACTCTTGCGG ATCTGCAATA TTTATCCTTC AGTGAACTGA GAAAAATCTT TGATGACCAG120
CTCAGTTGGG GAGAGGCTCG CCATCTCTAT CATGAAACTA TAGAGCAGAA AAAAAATAAT180
CGCTTGCTGG AAGCGCGTAT TTTTACCCGT GCCAACCCAC AATTATCCGG TGCTATCCGA240
CTCGGTATTG AACGAGACAG CGTTTCACGC AGTTATGATG AAATGTTTGG TGCCCGTTCT300
TCTTCCTTTG TGAAACCGGG TTCAGTGGCT TCCATGTTTT CACCGGCTGG CTATCTCACC360
GAATTGTACC GTGAAGCGAA GGACTTACAT TTTTCAAGCT CTGCTTATCA TCTTGATAAT420
CGCCGTCCGG ATCTGGCTGA TCTGACTCTG AGCCAGAGTA ATATGGATAC AGAAATTTCC480
ACCCTGACAC TGTCTAACGA ACTGTTGCTG GAGCATATTA CCCGCAAGAC CGGAGGTGAT 540
TCGGACGCAT TGATGGAGAG CCTGTCAACT TACCGTCAGG CCATTGATAC CCCTTACCAT 600
CAGCCTTACG AGACTATCCG TCAGGTCATT ATGACCCATG ACAGTACACT GTCAGCGCTG 660
TCCCGTAATC CTGAGGTGAT GGGGCAGGCG GAAGGGGCTT CATTACTGGC GATTCTGGCC 720
AATATTTCTC CGGAGCTTTA TAACATTTTG ACCGAAGAGA TTACGGAAAA GAACGCTGAT 780
GCTTTATTTG CGCAAAACTT CAGTGAAAAT ATCACGCCCG AAAATTTCGC GTCACAATCA 840
TGGATAGCCA AGTATTATGG TCTTGAACTT TCTGAGGTGC AAAAATACCT CGGGATGTTG 900
CAGAATGGCT ATTCTGACAG CACCTCTGCT TATGTGGATA ATATCTCAAC GGGTTTAGTG 960
GTCAATAATG AAAGTAAACT CGAAGCTTAC AAAATAACAC GTGTAAAAAC AGATGATTAT1020
GATAAAAATA TAAATTACTT TGATTTGATG TATGAAGGAA ATAATCAGTT CTTTATACGT1080
GCTAATTTTA AGGTATCAAG AGAATTTGGG GCTACTCTTA GAAAAAACGC AGGGCCAAGT1140
GGCATTGTCG GCAGCCTTTC CGGTCCTCTA ATAGCCAATA CGAATTTTAA AAGTAATTAT1200
CTAAGTAACA TATCTGACTC TGAATACAAA AACGGTGTAA AGATATACGC CTATCGCTAT1260
ACGTCTTCCA CCAGCGCCAC AAATCAGGGC GGCGGAATAT TCACTTTTGA GTCTTATCCC1320
CTGACTATAT TTGCGCTCAA ACTGAATAAA GCCATTCGCT TGTGCCTGAC TAGCGGGCTT1380
TCACCGAATG AACTGCAAAC TATCGTACGC AGTGACAATG CACAAGGCAT CATCAACGAC1440
TCCGTTCTGA CCAAAGTTTT CTATACTCTG TTCTACAGTC ACCGTTATGC ACTGAGCTTT1500
GATGATGCAC AGGTACTGAA CGGATCGGTC ATTAATCAAT ATGCCGACGA TGACAGTGTC1560
AGTCATTTTA ACCGTCTCTT TAATACACCG CCGCTGAAAG GGAAAATCTT TGAAGCCGAC1620
GGCAACACGG TCAGCATTGA TCCGGATGAA GAGCAATCTA CCTTTGCCCG TTCAGTCCTG1680
ATGCGTGGTC TGGGGGTCAA CAGTGGTGAA CTGTATCAGT TAGGCAAACT GGCGGGTGTG1740
CTGGACGCCC AAAATACCAT CACACTTTCT GTCTTCGTTA TCTCTTCACT GTATCGCCTC1800
ACGTCACTGG CCCGTGTCCA TCAGCTGACG GTCAATGAAC TGTGTATGCT TTATGGTCTT1860
TCGCCGTTCA ATGGCAAAAC AACGGCTTCT TTGTCTTCCG GGGAGTTGCC ACGGCTGGTT1920
ATCTGGCTGT ATCAGGTGAC GCAGTGGCTG ACTGAGGCGG AAATCACCAC TGAAGCGATC1980
TGGTTATTAT GTACGCCAGA GTTTAGCGGG AATATTTCAC CGGAAATCAG TAATCTGCTC2040
AATAACCTCC GACCGAGTAT TAGTGAAGAT ATGGCACAGA GTCACAATCG GGAGCTGCAG2100
GCTGAAATTC TCGCGCCGTT TATTGCTGCA ACGCTGCATC TGGCGTCACC GGATATGGCA2160
CGGTATATCC TGTTGTGGAC CGATAACCTG CGGCCGGGTG GCTTAGATAT TGCCGGGTTT2220
ATGACACTGG TATTGAAAGA GTCGTTAAAT GCCAATGAAA CCACCCAATT GGTACAATTC2280
TGCCATGTGA TGGCACAGTT ATCGCTTTCC GTACAGACAC TGCGCCTCAG TGAAGCGGAG2340
CTATCCGTGC TGGTCATCTC CGGATTCGCC GTGCTGGGGG CAAAAAATCA ACCTGCCGGA2400
CAGCACAATA TTGATACGCT ATTCTCACTC TACCGATTCC ACCAGTGGAT TAATGGGCTG2460
GGCAATCCCG GCTCTGACAC GCTGGATATG CTGCGCCAGC AGACACTCAC GGCCGACAGA2520
CTGGCCTCCG TGATGGGGCT GGACATCAGT ATGGTAACGC AGGCCATGGT TTCCGCCGGC2580
GTGAACCAGC TTCAGTGTTG GCAGGATATC AACACCGTGT TGCAGTGGAT AGATGTGGCA2640
TCAGCACTGC ACACGATGCC GTCGGTTATC CGTACGCTGG TGAATATCCG TTACGTGACT2700
GCATTAAACA AAGCCGAGTC GAATCTGCCT TCCTGGGATG AGTGGCAGAC ACTGGCAGAA2760
AATATGGAAG CCGGACTCAG TACACAACAG GCTCAGACGC TGGCGGATTA TACCGCGGAG2820
CGCCTGAGTA GCGTGCTGTG CAATTGGTTT CTGGCGAATA TCCAGCCAGA AGGGGTGTCC2880
CTGCAAAGTC GGGATGACCT GTACAGCTAT TTCCTGATCG ATAATCAGGT TTCTTCTGCC2940
GTGAAAACCA CTCGACTGGC AGAGGCGATT GCCGGTATTC AACTTTACAT CAACCGGGCG3000
CTGAACCGGA TAGAGCCTAA TGCCCGTGCC GATGTGTCAA CCCGCCAGTT TTTTACCGAC3060
TGGACGGTGA ATAACCGTTA CAACACCTGG GGCGGGGTGT CGCGGCTGGT TTATTATCCG3120
GAAAACTACA TTGACCCAAC CCAGCGTATC GGGCAGACCC GGATGATGGA TGAACTGCTG3180
GAAAATATCA GCCAGAGTAA ACTTAGCCGG GACACAGTGG AGGATGCCTT TAAAACTTAC 3240
CTGACCCGCT TTGAAACCGT GGCGGATCTG AAAGTAGTCA GTGCCTATCA CGACAACGTC 3300
AACAGTAACA CCGGGCTAAC CTGGTTTATC GGCCAAACGC GGGAGAACCT GCCGGAGTAC 3360
TACTGGCGTA ACGTGGATAT ATCACGGATG CTGGCGGGTA AACTGGCCGC CAATGCCTGG 3420
AAAGAGTGGA CGAAGATTGA TACGGCGGTT AATTCCTACA AGGATGCAAT ACGTCCGGTC 3480
ATATTCAGGG AACGCTTGCA CCTTATATGG GTAGAGAAAG ATGAAGTGGC GGAAAACGGC 3540
ACTAACCCAG TGAAAACCTA TGACCGTTTT ACCCTGAAAC TGGCGTTTTT GCGTCATGAT 3600
GGCAGTTGGA GTGCCCCTTG GTCTTACGAT ATCACAACGC AGGTGGAGGC GGTCACTGAC 3660
AAAAAACCTG ACACTGAACG GCTGGCGCTG GCCGCATCCG GCTTTCAGGG CGAGGACACT 3720
CTGCTGGTGT TTGTCTACAA AACCGGGAAG AGTTACTCGG ATTTTGGCGG CAGCAATAAA 3780
AATGTGGCAG GCATGACCAT TTACGGCGAT GGCTCCTTGA AAAAGATGGA GAACACAGCA 3840
CTAAGCCGCT ACAGCCAACT GAAAAATACC TTTGATGTCA TTAATCCTCA AGACAACGAC 3900
TTGGTAAGAA AGGCCAGCTA TCGTTTCTCG CAGGATTTTG AAGTACCTGC CTCGTTGAAT 3960
ATGGGTTTTG CCATCGGTGA TTATAGTCTG ACGGTGATGG AAAACGGGAA TATTCCGCAG 4020
ATAACCGGTA AATACTCCAG CGATAACCTT GCTATTACGC TACATAACGC CGCTTTTACT 4080
GTCAGATATG ATGGTGGTGG CAATGTCATC AGAAACAAAC AAATCAGCGC CATGAAACTT 4140
ACTGGTGTAG ACGGAAAATC ACAATACGGC AATGCATTTA TTATAGCAAA TACCCTTAAG 4200
CATTATGGTG GTTACTCTGA TCTTGGCGGG CCAATTGCCG TTTATAATAA GACGAAAAAC 4260
TATATTGCAT CAGTACAAGA TCGTCTTTAC AACCCAGACT ATAGAAGGCG TTTGATTCTG 4320
ACACCGGTTG AAAATAATTA TTATGCCAAA TTGTTCGAGT TTCCATTTTC TCCAAACACT 4380
ATCCGAAATA CAGTTTTCAA GGTTGGCAGC AATAGAACCA GTGAGTTTAA AAAATGTAAT 4440
TATGCTGAGG ATGGTAATAA TGATGCTGGC TTCCAGGTAT TTAGTTCTTA TCAATCATCC 4500
GGCTGGCTGG ATATTGATAC AGGCATTAAC AATACCGATA TCAAAATTAC GGTGATGGCT 4560
GGCAGTAAAA CCCACACCTT TACGGCCAGT GACCATATTG CTTCCTTGCC GGCAAACAGT4620
TTTGATGCTA TGCCGTACAC CTTTAAGCCA CTGGAAATCG ATGCTTCATC GTTGTCCTTT4680
ACCAATAATA TTGCTCCGCT GGATATCGTT TTTGAGACCA AAGCCAAAGA CGGGCGAGTG4740
CTGGGTAAAA TCAAGCAAAC ATTATCAGTG AAACGGGTAA ATTATAATCC GGAAGATATT4800
CTGCTTCTGC GTGAAACTCA TTCTGGTGCC CAATATATGC AGCTCGGGGT GTATCGCATT4860
CGTCTGAATA CCCTGCTGGC CTCCCAACTG GTATCCAGAG CAAACACGGG CATTGATACT4920
ATCCTGACTA TGGAAACCCA GCAGCTGCCT GAGCCTCAAT TGGGTAAAGG TTTCTATGCT4980
ACTTTCACCC TGCCACCTTA CAATTCCGCG ACACATGGCA CCAGCCGGGC ATTCCAGCTC5040
AACCTCAAAC ATGTGGTTGA TGATAAAGTA CATGCTATTC GCTCAGGGCT GCTGCAGGAT5100
ACTGAATTTG CTGTTCGTCT CTTTATTCCC CTGGATGATA CACCACTTCA TGATGAATAT5160
ATTGCTAAGG TGTTTTTAAC CACCCAGAAG AACAGAAATG ACGTTCCAAA TGTCGGTGCT5220
CACTTTAAAT ATGATAAGAG TAATAACAAT AGAATCGTTA TCAATGATGA TATTTCGGAT5280
ATCAGTATGT TCGCTGGTAT ACAAATACAT AACGGCGAAA CTACCGAACC ACTGGATTTC5340
AACAGCGCCT GTGCATTGTA TTACTGGGAA CTGTTCTACT ACACCCCGAT GATGTGCTTC5400
CAGCGTCTGC TACAGGAAAA ACAATTCGAC GAAGCCACAC AATGGATAAA CTACGTCTAT5460
AATCCCGCCG GCTATATCGT TAACGGAGAA ATCGCCCCCT GGATCTGGAA CTGCCGGCCG5520
CTGGAAGAGA CCACCTCCTG GAATGCCAAT CCGTTGGATG CCATTGATCC GGATGCCGTC5580
GCACAATATG ACCCGACACA CTATAAAGTT GCCACCTTTA TGCGCCTGTT GGATCAACTT5640
ATTCTGCGCG GCGATATGGC CTATCGCGAA CTGACCCGCG ATGCGTTGAA TGAAGCCAAG5700
ATGTGGTATG TGCGTGCTTT GGAATTGCTG GGTGATGAGC CGGAGGATTA CGGCAGCCAA5760
CAGTGGGCCG CACCGTCTCT TTCCGTGGCG GCCAGCCACA CTGTGCAGGC GGCCTATCAG5820
CAGGACCTTA CGGCGCTAGA CAACGGAGAG GTTGCCACTC AGCCCCGCAC CGCTAACTCG5880
TTGGTGGGTT TGTTCCTGCC GGAATATAAC CCGGCACTCA CCGATTACTG GCAAACCCTG5940
CGTTTGCGCC TGTTTAACCT GCGCCATAAT CTTTCCATTG ACGGACAGCC GTTATCGCTG6000
GCGATTTACG CCGAGCCTAC CGATCCGAAA GCGCTGCTCA CCAGTATGGT ACAGGCCTCT6060
CAGGGCGGTA GTGCAGTGCT GCCCGGCACA TTGTCGTTAT ACCGCTTCCC GGTGATGCTG6120
GAGCGGACCC GCAATCTGGT AGCGCAGTTA ACCCAGTTCG GCACCTCTCT GCTCAGTATG6180
GCAGAGCATG ATGATGCCGA TGAACTCACC ACGCTGCTAC TACAGCAGGG TATGGAACTG6240
GCGACACAGA GCATCCGTAT TCAGCAACGA ACTGTCGATG CAGTGGATGC TGATATTGCT6300
GTATTGGCAG AGAGCCGCCG CAGTGCACAA AATCGTCTGG AAAAATACCA GCAGCTGTAT6360
GACGAGGATA TCAACCACGG AGAACAGCGG GCAATGTCAC TGCTTGATGC AGCGGCAGGT6420
CAGTCTCTGG CCGGGCAGGT GCTTTCAATA GCGGAAGGGG TGGCCGATTT AGTGCCAAAC6480
GTGTTCGGTT TAGCTTGTGG CGGCAGTCGT TGGGGGGCAG CACTGCGTGC TTCCGCCTCC6540
GTGATGTCGC TTTCTGCCAC AGCTTCCCAA TATTCCGCAG ACAAAATCAG CCGTTCGGAA6600
GCCTACCGCC GCCGCCGTCA GGAGTGGGAA ATTCAGCGTG ATAATGCTGA CGGTGAAGTC6660
AAACAAATGG ATGCCCAGCT GGAAAGCCTG AAAATACGCC GCGAAGCAGC ACAGATGCAG6720
GTGGAATATC AGGAGACCCA GCAGGCCCAT ACTCAGGCTC AGTTAGAGCT GTTACAGCGT6780
AAATTCACAA ACAAAGCGCT TTACAGTTGG ATGCGCGGCA AGCTGAGTGC TATCTATTAC6840
CAGTTCTTTG ACCTGACCCA GTCCTTCTGC CTGATGGCAC AGGAAGCGCT GCGCCGCGAG6900
CTGACCGACA ACGGTGTTAC CTTTATCCGG GGTGGGGCCT GGAACGGTAC GACTGCGGGT6960
TTGATGGCGG GTGAAACGTT GCTGCTGAAT CTGGCAGAAA TGGAAAAAGT CTGGCTGGAG7020
CGTGATGAGC GGGCACTGGA AGTGACCCGT ACCGTCTCGT TGGCACAGTT CTATCAGGCC7080
TTATCATCAG ACAACTTTAA TCTGACCGAA AAACTCACGC AATTCCTGCG TGAAGGGAAA7140
GGCAACGTAG GAGCTTCCGG CAATGAATTA AAACTCAGTA ACCGTCAGAT AGAAGCCTCA7200
GTGCGATTGT CTGATTTGAA AATTTTCAGC GACTACCCCG AAAGCCTTGG CAATACCCGT7260
CAGTTGAAAC AGGTGAGTGT CACCTTGCCG GCGCTGGTTG GTCCGTATGA AGATATCCGG 7320
GCGGTGCTGA ATTACGGCGG CAGCATCGTC ATGCCCCGCG GTTGCAGTGC CATTGCCCTC 7380
TCCCACGGCG TGAATGACAG TGGTCAATTT ATGCTGGATT TCAACGATTC CCGTTATCTG 7440
CCGTTTGAAG GTATTTCCGT GAATGACAGC GGTAGCCTGA CGTTGAGTTT CCTGGATGCG 7500
ACTGATCGAC AGAAAGCGCT GCTGGAGAGC CTGAGCGATA TCATTCTGCA TATCCGCTAT 7560
ACCATTCGTT CTTAA 7575
<210>SEQ ID NO2
<211>2524
<212>PRT
<213>嗜线虫致病杆菌北京变种(Xenorhabdus nematophilus var.pekingensis)CB6菌株
<400>2
Met Tyr Ser Thr Ala Val Leu Leu Asn Lys Ile Ser Pro Thr Arg Asp
1 5 10 15
Gly Gln Thr Met Thr Leu Ala Asp Leu Gln Tyr Leu Ser Phe Ser Glu
20 25 30
Leu Arg Lys Ile Phe Asp Asp Gln Leu Ser Trp Gly Glu Ala Arg His
35 40 45
Leu Tyr His Glu Thr Ile Glu Gln Lys Lys Asn Asn Arg Leu Leu Glu
50 55 60
Ala Arg Ile Phe Thr Arg Ala Asn Pro Gln Leu Ser Gly Ala Ile Arg
65 70 75 80
Leu Gly Ile Glu Arg Asp Ser Val Ser Arg Ser Tyr Asp Glu Met Phe
85 90 95
Gly Ala Arg Ser Ser Ser Phe Val Lys Pro Gly Ser Val Ala Ser Met
100 105 110
Phe Ser Pro Ala Gly Tyr Leu Thr Glu Leu Tyr Arg Glu Ala Lys Asp
115 120 125
Leu His Phe Ser Ser Ser Ala Tyr His Leu Asp Asn Arg Arg Pro Asp
130 135 140
Leu Ala Asp Leu Thr Leu Ser Gln Ser Asn Met Asp Thr Glu Ile Ser
145 150 155 160
Thr Leu Thr Leu Ser Asn Glu Leu Leu Leu Glu His Ile Thr Arg Lys
165 170 175
Thr Gly Gly Asp Ser Asp Ala Leu Met Glu Ser Leu Ser Thr Tyr Arg
180 185 190
Gln Ala Ile Asp Thr Pro Tyr His Gln Pro Tyr Glu Thr Ile Arg Gln
195 200 205
Val Ile Met Thr His Asp Ser Thr Leu Ser Ala Leu Ser Arg Asn Pro
210 215 220
Glu Val Met Gly Gln Ala Glu Gly Ala Ser Leu Leu Ala Ile Leu Ala
225 230 235 240
Asn Ile Ser Pro Glu Leu Tyr Asn Ile Leu Thr Glu Glu Ile Thr Glu
245 250 255
Lys Asn Ala Asp Ala Leu Phe Ala Gln Asn Phe Ser Glu Asn Ile Thr
260 265 270
Pro Glu Asn Phe Ala Ser Gln Ser Trp Ile Ala Lys Tyr Tyr Gly Leu
275 280 285
Glu Leu Ser Glu Val Gln Lys Tyr Leu Gly Met Leu Gln Asn Gly Tyr
290 295 300
Ser Asp Ser Thr Ser Ala Tyr Val Asp Asn Ile Ser Thr Gly Leu Val
305 310 315 320
Val Asn Asn Glu Ser Lys Leu Glu Ala Tyr Lys Ile Thr Arg Val Lys
325 330 335
Thr Asp Asp Tyr Asp Lys Asn Ile Asn Tyr Phe Asp Leu Met Tyr Glu
340 345 350
Gly Asn Asn Gln Phe Phe Ile Arg Ala Asn Phe Lys Val Ser Arg Glu
355 360 365
Phe Gly Ala Thr Leu Arg Lys Asn Ala Gly Pro Ser Gly Ile Val Gly
370 375 380
Ser Leu Ser Gly Pro Leu Ile Ala Asn Thr Asn Phe Lys Ser Asn Tyr
385 390 395 400
Leu Ser Asn Ile Ser Asp Ser Glu Tyr Lys Asn Gly Val Lys Ile Tyr
405 410 415
Ala Tyr Arg Tyr Thr Ser Ser Thr Ser Ala Thr Asn Gln Gly Gly Gly
420 425 430
Ile Phe Thr Phe Glu Ser Tyr Pro Leu Thr Ile Phe Ala Leu Lys Leu
435 440 445
Asn Lys Ala Ile Arg Leu Cys Leu Thr Ser Gly Leu Ser Pro Asn Glu
450 455 460
Leu Gln Thr Ile Val Arg Ser Asp Asn Ala Gln Gly Ile Ile Asn Asp
465 470 475 480
Ser Val Leu Thr Lys Val Phe Tyr Thr Leu Phe Tyr Ser His Arg Tyr
485 490 495
Ala Leu Ser Phe Asp Asp Ala Gln Val Leu Asn Gly Ser Val Ile Asn
500 505 510
Gln Tyr Ala Asp Asp Asp Ser Val Ser His Phe Asn Arg Leu Phe Asn
515 520 525
Thr Pro Pro Leu Lys Gly Lys Ile Phe Glu Ala Asp Gly Asn Thr Val
530 535 540
Ser Ile Asp Pro Asp Glu Glu Gln Ser Thr Phe Ala Arg Ser Val Leu
545 550 555 560
Met Arg Gly Leu Gly Val Asn Ser Gly Glu Leu Tyr Gln Leu Gly Lys
565 570 575
Leu Ala Gly Val Leu Asp Ala Gln Asn Thr Ile Thr Leu Ser Val Phe
580 585 590
Val Ile Ser Ser Leu Tyr Arg Leu Thr Ser Leu Ala Arg Val His Gln
595 600 605
Leu Thr Val Asn Glu Leu Cys Met Leu Tyr Gly Leu Ser Pro Phe Asn
610 615 620
Gly Lys Thr Thr Ala Ser Leu Ser Ser Gly Glu Leu Pro Arg Leu Val
625 630 635 640
Ile Trp Leu Tyr Gln Val Thr Gln Trp Leu Thr Glu Ala Glu Ile Thr
645 650 655
Thr Glu Ala Ile Trp Leu Leu Cys Thr Pro Glu Phe Ser Gly Asn Ile
660 665 670
Ser Pro Glu Ile Ser Asn Leu Leu Asn Asn Leu Arg Pro Ser Ile Ser
675 680 685
Glu Asp Met Ala Gln Ser His Asn Arg Glu Leu Gln Ala Glu Ile Leu
690 695 700
Ala Pro Phe Ile Ala Ala Thr Leu His Leu Ala Ser Pro Asp Met Ala
705 710 715 720
Arg Tyr Ile Leu Leu Trp Thr Asp Asn Leu Arg Pro Gly Gly Leu Asp
725 730 735
Ile Ala Gly Phe Met Thr Leu Val Leu Lys Glu Ser Leu Asn Ala Asn
740 745 750
Glu Thr Thr Gln Leu Val Gln Phe Cys His Val Met Ala Gln Leu Ser
755 760 765
Leu Ser Val Gln Thr Leu Arg Leu Ser Glu Ala Glu Leu Ser Val Leu
770 775 780
Val Ile Ser Gly Phe Ala Val Leu Gly Ala Lys Asn Gln Pro Ala Gly
785 790 795 800
Gln His Asn Ile Asp Thr Leu Phe Ser Leu Tyr Arg Phe His Gln Trp
805 810 815
Ile Asn Gly Leu Gly Asn Pro Gly Ser Asp Thr Leu Asp Met Leu Arg
820 825 830
Gln Gln Thr Leu Thr Ala Asp Arg Leu Ala Ser Val Met Gly Leu Asp
835 840 845
Ile Ser Met Val Thr Gln Ala Met Val Ser Ala Gly Val Asn Gln Leu
850 855 860
Gln Cys Trp Gln Asp Ile Asn Thr Val Leu Gln Trp Ile Asp Val Ala
865 870 875 880
Ser Ala Leu His Thr Met Pro Ser Val Ile Arg Thr Leu Val Asn Ile
885 890 895
Arg Tyr Val Thr Ala Leu Asn Lys Ala Glu Ser Asn Leu Pro Ser Trp
900 905 910
Asp Glu Trp Gln Thr Leu Ala Glu Asn Met Glu Ala Gly Leu Ser Thr
915 920 925
Gln Gln Ala Gln Thr Leu Ala Asp Tyr Thr Ala Glu Arg Leu Ser Ser
930 935 940
Val Leu Cys Asn Trp Phe Leu Ala Asn Ile Gln Pro Glu Gly Val Ser
945 950 955 960
Leu Gln Ser Arg Asp Asp Leu Tyr Ser Tyr Phe Leu Ile Asp Asn Gln
965 970 975
Val Ser Ser Ala Val Lys Thr Thr Arg Leu Ala Glu Ala Ile Ala Gly
980 985 990
Ile Gln Leu Tyr Ile Asn Arg Ala Leu Asn Arg Ile Glu Pro Asn Ala
995 10001005
Arg Ala Asp Val Ser Thr Arg Gln Phe Phe Thr Asp Trp Thr Val Asn
101010151020
Asn Arg Tyr Asn Thr Trp Gly Gly Val Ser Arg Leu Val Tyr Tyr Pro
1025103010351040
Glu Asn Tyr Ile Asp Pro Thr Gln Arg Ile Gly Gln Thr Arg Met Met
104510501055
Asp Glu Leu Leu Glu Asn Ile Ser Gln Ser Lys Leu Ser Arg Asp Thr
106010651070
Val Glu Asp Ala Phe Lys Thr Tyr Leu Thr Arg Phe Glu Thr Val Ala
107510801085
Asp Leu Lys Val Val Ser Ala Tyr His Asp Asn Val Asn Ser Asn Thr
109010951100
Gly Leu Thr Trp Phe Ile Gly Gln Thr Arg Glu Asn Leu Pro Glu Tyr
1105111011151120
Tyr Trp Arg Asn Val Asp Ile Ser Arg Met Leu Ala Gly Lys Leu Ala
112511301135
Ala Asn Ala Trp Lys Glu Trp Thr Lys Ile Asp Thr Ala Val Asn Ser
114011451150
Tyr Lys Asp Ala Ile Arg Pro Val Ile Phe Arg Glu Arg Leu His Leu
115511601165
Ile Trp Val Glu Lys Asp Glu Val Ala Glu Asn Gly Thr Asn Pro Val
117011751180
Lys Thr Tyr Asp Arg Phe Thr Leu Lys Leu Ala Phe Leu Arg His Asp
1185119011951200
Gly Ser Trp Ser Ala Pro Trp Ser Tyr Asp Ile Thr Thr Gln Val Glu
120512101215
Ala Val Thr Asp Lys Lys Pro Asp Thr Glu Arg Leu Ala Leu Ala Ala
122012251230
Ser Gly Phe Gln Gly Glu Asp Thr Leu Leu Val Phe Val Tyr Lys Thr
123512401245
Gly Lys Ser Tyr Ser Asp Phe Gly Gly Ser Asn Lys Asn Val Ala Gly
125012551260
Met Thr Ile Tyr Gly Asp Gly Ser Leu Lys Lys Met Glu Asn Thr Ala
1265127012751280
Leu Ser Arg Tyr Ser Gln Leu Lys Asn Thr Phe Asp Val Ile Asn Pro
128512901295
Gln Asp Asn Asp Leu Val Arg Lys Ala Ser Tyr Arg Phe Ser Gln Asp
130013051310
Phe Glu Val Pro Ala Ser Leu Asn Met Gly Phe Ala Ile Gly Asp Tyr
131513201325
Ser Leu Thr Val Met Glu Asn Gly Asn Ile Pro Gln Ile Thr Gly Lys
133013351340
Tyr Ser Ser Asp Asn Leu Ala Ile Thr Leu His Asn Ala Ala Phe Thr
1345135013551360
Val Arg Tyr Asp Gly Gly Gly Asn Val Ile Arg Asn Lys Gln Ile Ser
136513701375
Ala Met Lys Leu Thr Gly Val Asp Gly Lys Ser Gln Tyr Gly Asn Ala
138013851390
Phe Ile Ile Ala Asn Thr Leu Lys His Tyr Gly Gly Tyr Ser Asp Leu
139514001405
Gly Gly Pro Ile Ala Val Tyr Asn Lys Thr Lys Asn Tyr Ile Ala Ser
141014151420
Val Gln Asp Arg Leu Tyr Asn Pro Asp Tyr Arg Arg Arg Leu Ile Leu
1425143014351440
Thr Pro Val Glu Asn Asn Tyr Tyr Ala Lys Leu Phe Glu Phe Pro Phe
144514501455
Ser Pro Asn Thr Ile Arg Asn Thr Val Phe Lys Val Gly Ser Asn Arg
146014651470
Thr Ser Glu Phe Lys Lys Cys Asn Tyr Ala Glu Asp Gly Asn Asn Asp
147514801485
Ala Gly Phe Gln Val Phe Ser Ser Tyr Gln Ser Ser Gly Trp Leu Asp
149014951500
Ile Asp Thr Gly Ile Asn Asn Thr Asp Ile Lys Ile Thr Val Met Ala
1505151015151520
Gly Ser Lys Thr His Thr Phe Thr Ala Ser Asp His Ile Ala Ser Leu
152515301535
Pro Ala Asn Ser Phe Asp Ala Met Pro Tyr Thr Phe Lys Pro Leu Glu
154015451550
Ile Asp Ala Ser Ser Leu Ser Phe Thr Asn Asn Ile Ala Pro Leu Asp
155515601565
Ile Val Phe Glu Thr Lys Ala Lys Asp Gly Arg Val Leu Gly Lys Ile
157015751580
Lys Gln Thr Leu Ser Val Lys Arg Val Asn Tyr Asn Pro Glu Asp Ile
1585159015951600
Leu Leu Leu Arg Glu Thr His Ser Gly Ala Gln Tyr Met Gln Leu Gly
160516101615
Val Tyr Arg Ile Arg Leu Asn Thr Leu Leu Ala Ser Gln Leu Val Ser
162016251630
Arg Ala Asn Thr Gly Ile Asp Thr Ile Leu Thr Met Glu Thr Gln Gln
163516401645
Leu Pro Glu Pro Gln Leu Gly Lys Gly Phe Tyr Ala Thr Phe Thr Leu
165016551660
Pro Pro Tyr Asn Ser Ala Thr His Gly Thr Ser Arg Ala Phe Gln Leu
1665167016751680
Asn Leu Lys His Val Val Asp Asp Lys Val His Ala Ile Arg Ser Gly
168516901695
Leu Leu Gln Asp Thr Glu Phe Ala Val Arg Leu Phe Ile Pro Leu Asp
170017051710
Asp Thr Pro Leu His Asp Glu Tyr Ile Ala Lys Val Phe Leu Thr Thr
171517201725
Gln Lys Asn Arg Asn Asp Val Pro Asn Val Gly Ala His Phe Lys Tyr
173017351740
Asp Lys Ser Asn Asn Asn Arg Ile Val Ile Asn Asp Asp Ile Ser Asp
1745175017551760
Ile Ser Met Phe Ala Gly Ile Gln Ile His Asn Gly Glu Thr Thr Glu
176517701775
Pro Leu Asp Phe Asn Ser Ala Cys Ala Leu Tyr Tyr Trp Glu Leu Phe
178017851790
Tyr Tyr Thr Pro Met Met Cys Phe Gln Arg Leu Leu Gln Glu Lys Gln
179518001805
Phe Asp Glu Ala Thr Gln Trp Ile Asn Tyr Val Tyr Asn Pro Ala Gly
181018151820
Tyr Ile Val Asn Gly Glu Ile Ala Pro Trp Ile Trp Asn Cys Arg Pro
1825183018351840
Leu Glu Glu Thr Thr Ser Trp Asn Ala Asn Pro Leu Asp Ala Ile Asp
184518501855
Pro Asp Ala Val Ala Gln Tyr Asp Pro Thr His Tyr Lys Val Ala Thr
186018651870
Phe Met Arg Leu Leu Asp Gln Leu Ile Leu Arg Gly Asp Met Ala Tyr
187518801885
Arg Glu Leu Thr Arg Asp Ala Leu Asn Glu Ala Lys Met Trp Tyr Val
189018951900
Arg Ala Leu Glu Leu Leu Gly Asp Glu Pro Glu Asp Tyr Gly Ser Gln
1905191019151920
Gln Trp Ala Ala Pro Ser Leu Ser Val Ala Ala Ser His Thr Val Gln
192519301935
Ala Ala Tyr Gln Gln Asp Leu Thr Ala Leu Asp Asn Gly Glu Val Ala
194019451950
Thr Gln Pro Arg Thr Ala Asn Ser Leu Val Gly Leu Phe Leu Pro Glu
195519601965
Tyr Asn Pro Ala Leu Thr Asp Tyr Trp Gln Thr Leu Arg Leu Arg Leu
197019751980
Phe Asn Leu Arg His Asn Leu Ser Ile Asp Gly Gln Pro Leu Ser Leu
1985199019952000
Ala Ile Tyr Ala Glu Pro Thr Asp Pro Lys Ala Leu Leu Thr Ser Met
200520102015
Val Gln Ala Ser Gln Gly Gly Ser Ala Val Leu Pro Gly Thr Leu Ser
202020252030
Leu Tyr Arg Phe Pro Val Met Leu Glu Arg Thr Arg Asn Leu Val Ala
203520402045
Gln Leu Thr Gln Phe Gly Thr Ser Leu Leu Ser Met Ala Glu His Asp
205020552060
Asp Ala Asp Glu Leu Thr Thr Leu Leu Leu Gln Gln Gly Met Glu Leu
2065207020752080
Ala Thr Gln Ser Ile Arg Ile Gln Gln Arg Thr Val Asp Ala Val Asp
208520902095
Ala Asp Ile Ala Val Leu Ala Glu Ser Arg Arg Ser Ala Gln Asn Arg
210021052110
Leu Glu Lys Tyr Gln Gln Leu Tyr Asp Glu Asp Ile Asn His Gly Glu
211521202125
Gln Arg Ala Met Ser Leu Leu Asp Ala Ala Ala Gly Gln Ser Leu Ala
213021352140
Gly Gln Val Leu Ser Ile Ala Glu Gly Val Ala Asp Leu Val Pro Asn
2145215021552160
Val Phe Gly Leu Ala Cys Gly Gly Ser Arg Trp Gly Ala Ala Leu Arg
216521702175
Ala Ser Ala Ser Val Met Ser Leu Ser Ala Thr Ala Ser Gln Tyr Ser
218021852190
Ala Asp Lys Ile Ser Arg Ser Glu Ala Tyr Arg Arg Arg Arg Gln Glu
219522002205
Trp Glu Ile Gln Arg Asp Asn Ala Asp Gly Glu Val Lys Gln Met Asp
221022152220
Ala Gln Leu Glu Ser Leu Lys Ile Arg Arg Glu Ala Ala Gln Met Gln
2225223022352240
Val Glu Tyr Gln Glu Thr Gln Gln Ala His Thr Gln Ala Gln Leu Glu
224522502255
Leu Leu Gln Arg Lys Phe Thr Asn Lys Ala Leu Tyr Ser Trp Met Arg
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Gly Lys Leu Ser Ala Ile Tyr Tyr Gln Phe Phe Asp Leu Thr Gln Ser
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Phe Cys Leu Met Ala Gln Glu Ala Leu Arg Arg Glu Leu Thr Asp Asn
229022952300
Gly Val Thr Phe Ile Arg Gly Gly Ala Trp Asn Gly Thr Thr Ala Gly
2305231023152320
Leu Met Ala Gly Glu Thr Leu Leu Leu Asn Leu Ala Glu Met Glu Lys
232523302335
Val Trp Leu Glu Arg Asp Glu Arg Ala Leu Glu Val Thr Arg Thr Val
234023452350
Ser Leu Ala Gln Phe Tyr Gln Ala Leu Ser Ser Asp Asn Phe Asn Leu
235523602365
Thr Glu Lys Leu Thr Gln Phe Leu Arg Glu Gly Lys Gly Asn Val Gly
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240524102415
Gly Asn Thr Arg Gln Leu Lys Gln Val Ser Val Thr Leu Pro Ala Leu
242024252430
Val Gly Pro Tyr Glu Asp Ile Arg Ala Val Leu Asn Tyr Gly Gly Ser
243524402445
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Asn Asp Ser Gly Gln Phe Met Leu Asp Phe Asn Asp Ser Arg Tyr Leu
2465247024752480
Pro Phe Glu Gly Ile Ser Val Asn Asp Ser Gly Ser Leu Thr Leu Ser
248524902495
Phe Leu Asp Ala Thr Asp Arg Gln Lys Ala Leu Leu Glu Ser Leu Ser
250025052510
Asp Ile Ile Leu His Ile Arg Tyr Thr Ile Arg Ser ***
25152520
权利要求
1.一种嗜线虫致病杆菌拒食蛋白质，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO2所示。
2.根据权利要求1所述的嗜线虫致病杆菌拒食蛋白质在制备抑制农作物害虫幼虫生长的药物中的应用。
3.根据权利要求2所述的嗜线虫致病杆菌拒食蛋白质在制备抑制农作物害虫幼虫生长的药物中的应用，其特征在于，所述的农作物害虫幼虫为棉铃虫、小菜蛾、玉米螟和甜菜夜蛾。
4.一种编码如权利要求1所述的嗜线虫致病杆菌拒食蛋白质的基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO1所示。
5.根据权利要求4所述的嗜线虫致病杆菌拒食蛋白质基因用于转基因植物的培育。
6.根据权利要求5所述的嗜线虫致病杆菌拒食蛋白质基因用于转基因植物的培育，其特征在于，所述的植物为烟草。
全文摘要
一种嗜线虫致病杆菌拒食蛋白质，其中，其氨基酸序列如SEQ ID NO2所示。本发明所述的嗜线虫致病杆菌拒食蛋白质在制备抑制农作物害虫幼虫生长的药物中的应用。一种编码如本发明所述的嗜线虫致病杆菌拒食蛋白质的基因，其中，其核苷酸序列如SEQ IDNO1所示。本发明所述的嗜线虫致病杆菌拒食蛋白质基因用于转基因植物的培育。本发明的优点为，该种蛋白质可以明显的抑制农作物害虫的幼虫的生长，浓度低起效快，而且对其发育成成虫的过程也产生影响，在农业生产上有广泛的应用前景。该蛋白质的基因可以作为目的基因导入植物，提高植物抗虫性，以改良植物品种。
文档编号C07K14/195GK101638434SQ20091015747
公开日2010年2月3日 申请日期2009年7月30日 优先权日2008年7月30日
发明者邱德文, 杨怀文, 杨秀芬, 曾洪梅, 张雨良, 袁京京, 毛建军, 尹富仕 申请人:中国农业科学院植物保护研究所